ГОСТ Р 72676-2026. Национальный стандарт Российской Федерации. Гидролизат сывороточных белков сухой. Технические условия
Актуально на 02.11.2026.
Как цитировать: "ГОСТ Р 72676-2026. Национальный стандарт Российской Федерации. Гидролизат сывороточных белков сухой. Технические условия". ГОСТ Р 72676-2026. https://bukva.ai/docs/standart-gost-r-72676-2026
(утв. и введен в действие Приказом Росстандарта от 26.05.2026 № 540-ст)
Примечание
Документ вводится в действие с 01.01.2027 с правом досрочного применения.
Утвержден и введен в действие Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 26 мая 2026 г. № 540-ст
НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
ГИДРОЛИЗАТ СЫВОРОТОЧНЫХ БЕЛКОВ СУХОЙ
Dry whey protein hydrolysate. Specifications
Дата введения 1 января 2027 года с правом досрочного применения
Предисловие
1 РАЗРАБОТАН Федеральным государственным автономным научным учреждением «Всероссийский научно-исследовательский институт молочной промышленности» (ФГАНУ «ВНИМИ»)
2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 470 «Молоко и продукты переработки молока»
3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 26 мая 2026 г. № 540-ст
Правила применения настоящего стандарта установлены в статье 26 Федерального закона от 29 июня 2015 г. № 162-ФЗ «О стандартизации в Российской Федерации». Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном (по состоянию на 1 января текущего года) информационном указателе «Национальные стандарты», а официальный текст изменений и поправок — в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ближайшем выпуске ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (www.rst.gov.ru)
1 Область применения
Настоящий стандарт распространяется на сухой гидролизат сывороточных белков (далее — продукт), изготовленный из молочной сыворотки, нативной сыворотки путем ферментативного гидролиза белка выделения пептидной фракции методами ультра- и/или нанофильтрации с последующей сушкой и предназначенный для применения в пищевой промышленности, в том числе для изготовления продуктов детского и специализированного питания.
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ 8.579-2019 Государственная система обеспечения единства измерений. Требования к количеству фасованных товаров при их производстве, фасовании, продаже и импорте
ГОСТ 12.1.004 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования
ГОСТ 12.1.005 Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны
ГОСТ 12.1.007 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности
ГОСТ 12.1.019 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты
ГОСТ 12.4.009 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание
ГОСТ 12.4.021 Система стандартов безопасности труда. Системы вентиляционные. Общие требования
ГОСТ 490 Кислота молочная пищевая. Технические условия
ГОСТ 908 Кислота лимонная моногидрат пищевая. Технические условия
ГОСТ 1770 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия
ГОСТ 3118 Реактивы. Кислота соляная. Технические условия
ГОСТ 4328 Реактивы. Натрия гидроокись. Технические условия
ГОСТ 9245 Потенциометры постоянного тока измерительные. Общие технические условия
ГОСТ 15846 Продукция, отправляемая в районы Крайнего Севера и приравненные к ним местности. Упаковка, маркировка, транспортирование и хранение
ГОСТ 17626-81 Казеин технический. Технические условия
ГОСТ 23285 Пакеты транспортные для пищевых продуктов и стеклянной тары. Технические условия
ГОСТ 23452 Молоко и молочные продукты. Методы определения остаточных количеств хлорорганических пестицидов
ГОСТ 24363 Реактивы. Калия гидроокись. Технические условия
ГОСТ 25336 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры
ГОСТ 25794.1 Реактивы. Методы приготовления титрованных растворов для кислотно-основного титрования
ГОСТ 26663 Пакеты транспортные. Формирование с применением средств пакетирования. Общие технические требования
ГОСТ 26809.1 Молоко и молочная продукция. Правила приемки, методы отбора и подготовка проб к анализу. Часть 1. Молоко, молочные, молочные составные и молокосодержащие продукты
ГОСТ 26927 Сырье и продукты пищевые. Методы определения ртути
ГОСТ 26929 Сырье и продукты пищевые. Подготовка проб. Минерализация для определения содержания токсичных элементов
ГОСТ 26930 Сырье и продукты пищевые. Метод определения мышьяка
ГОСТ 26932 Сырье и продукты пищевые. Методы определения свинца
ГОСТ 26933 Сырье и продукты пищевые. Методы определения кадмия
ГОСТ 29245 Консервы молочные. Методы определения физических и органолептических показателей
ГОСТ 29246 Консервы молочные сухие. Методы определения влаги
ГОСТ 29247 Консервы молочные. Методы определения жира
ГОСТ 30178 Сырье и продукты пищевые. Атомно-абсорбционный метод определения токсичных элементов
ГОСТ 30305.4 Продукты молочные сухие. Методика выполнения измерений индекса растворимости
ГОСТ 30347 Молоко и молочная продукция. Методы определения Staphylococcus aureus
ГОСТ 30538 Продукты пищевые. Методика определения токсичных элементов атомно-эмиссионным методом
ГОСТ 30648.5 Продукты молочные для детского питания. Метод определения активной кислотности
ГОСТ 30711 Продукты пищевые. Методы выявления и определения содержания афлатоксинов B1 и M1
ГОСТ 31628 Продукты пищевые и продовольственное сырье. Инверсионно-вольтамперометрический метод определения массовой концентрации мышьяка
ГОСТ 31659 (ISO 6579-1:2017) Микробиология пищевой цепи. Горизонтальный метод обнаружения, подсчета и серотипирования бактерий рода Salmonella. Часть 1. Обнаружение Salmonella spp.
ГОСТ 31671 (EN 13805:2002) Продукты пищевые. Определение следовых элементов. Подготовка проб методом минерализации при повышенном давлении
ГОСТ 31707 (EN 14627:2005) Продукты пищевые. Определение следовых элементов. Определение общего мышьяка и селена методом атомно-абсорбционной спектрометрии с генерацией гидридов с предварительной минерализацией пробы под давлением
ГОСТ 31977 Продукты молочные сухие. Метод определения насыпной плотности
ГОСТ 32161 Продукты пищевые. Метод определения содержания цезия Cs-137
ГОСТ 32163 Продукты пищевые. Метод определения содержания стронция Sr-90
ГОСТ 32164 Продукты пищевые. Метод отбора проб для определения стронция Sr-90 и цезия Cs-137
ГОСТ 35265 Концентраты молочного белка сухие. Технические условия
ГОСТ 32892 Молоко и молочная продукция. Метод измерения активной кислотности
ГОСТ 32901 Молоко и молочная продукция. Методы микробиологического анализа
ГОСТ 33526 Молоко и продукты переработки молока. Методика определения содержания антибиотиков методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
ГОСТ 33566 Молоко и молочная продукция. Определение дрожжей и плесневых грибов
ГОСТ 33824 Продукты пищевые и продовольственное сырье. Инверсионно-вольтамперометрический метод определения содержания токсичных элементов (кадмия, свинца, меди и цинка)
ГОСТ 34049 Молоко и кисломолочные продукты. Определение содержания афлатоксина M1 методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с флуориметрическим (спектрофлуориметрическим) детектированием
ГОСТ 34141 Продукты пищевые, корма, продовольственное сырье. Определение мышьяка, кадмия, ртути и свинца методом масс-спектрометрии с индуктивно связанной плазмой
ГОСТ 34352 Сыворотка молочная — сырье. Технические условия
ГОСТ 34427 Продукты пищевые и корма для животных. Определение ртути методом атомно-абсорбционной спектрометрии на основе эффекта Зеемана
ГОСТ 34449 Продукты пищевые, продовольственное сырье, корма, кормовые добавки. Определение массовой доли диоксинов методом хромато-масс-спектрометрии высокого разрешения
ГОСТ 34454 Продукция молочная. Определение массовой доли белка методом Кьельдаля
ГОСТ 34515 Молоко, молочная продукция, соевые продукты. Определение массовой доли меламина
ГОСТ 35005-2023 Сыворотка молочная деминерализованная. Технические условия
ГОСТ EN 14083 Продукты пищевые. Определение следовых элементов. Определение свинца, кадмия, хрома и молибдена с помощью атомно-абсорбционной спектрометрии с атомизацией в графитовой печи с предварительной минерализацией пробы при повышенном давлении
ГОСТ EN 14084 Продукты пищевые. Определение следовых элементов. Определение содержания свинца, кадмия, цинка, меди и железа с помощью атомно-абсорбционной спектрометрии после микроволнового разложения
ГОСТ ISO/TS 15495/IDF/RM 230 Молоко, молочные продукты и питание для детей раннего возраста. Руководящие указания для количественного определения меламина и циануровой кислоты методом жидкостной хроматографии — тандемной масс-спектрометрии (LC-MS/MS)
ГОСТ OIML R 76-1 Государственная система обеспечения единства измерений. Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания
ГОСТ Р 51463 Казеины сычужные и казеинаты. Метод определения массовой доли золы
ГОСТ Р 52501 (ИСО 3696:1987) Вода для лабораторного анализа. Технические условия
ГОСТ Р 53183 (ЕН 13806:2002) Продукты пищевые. Определение следовых элементов. Определение ртути методом атомно-абсорбционной спектрометрии холодного пара с предварительной минерализацией пробы под давлением
ГОСТ Р 53456 Концентраты сывороточных белков сухие. Технические условия
ГОСТ Р 54760 Продукты молочные составные и продукты детского питания на молочной основе. Определения массовой концентрации моно- и дисахаридов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
ГОСТ Р 55578 Продукты пищевые специализированные. Метод определения осмоляльности
ГОСТ Р 58144 Вода дистиллированная. Технические условия
ГОСТ Р 72031 Часы электронно-механические кварцевые настольные, настенные и часы-будильники. Общие технические условия
ГОСТ Р 72674 Продукты мембранного фракционирования молока. Термины и определения
ГОСТ Р 72675 Изолят сывороточных белков сухой. Технические условия
ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике
Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты» за текущий год. Если заменен ссылочный стандарт, на который дана недатированная ссылка, то рекомендуется использовать действующую версию этого стандарта с учетом всех внесенных в данную версию изменений. Если заменен ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, то рекомендуется использовать версию этого стандарта с указанным выше годом утверждения (принятия). Если после утверждения настоящего стандарта в ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, внесено изменение, затрагивающее положение, на которое дана ссылка, то это положение рекомендуется применять без учета данного изменения. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, рекомендуется применять в части, не затрагивающей эту ссылку.
3 Термины и определения
В настоящем стандарте применены термины по [1] и ГОСТ Р 72674.
4 Технические требования
4.1 Характеристики
4.1.1 Продукт должен соответствовать требованиям настоящего стандарта и изготавливаться по технологической инструкции с соблюдением требований, установленных в [1], [2].
4.1.2 По органолептическим показателям продукт должен соответствовать требованиям, указанным в таблице 1.
4.1.3 По физико-химическим показателям продукт должен соответствовать требованиям, указанным в таблице 2.
| Наименование показателя | Значение показателя |
| Массовая доля влаги, %, не более | 6,0 |
| Массовая доля белка в сухом веществе, %, не менее | 80,0 |
| Массовая доля белка, %, не менее | 75,2 |
| Массовая доля жира, %, не более | 0,5 |
| Массовая доля лактозы, %, не более | 10,0 |
| Содержание \beta - \text{лактоглобулина} , мг/100 г, не более | 140,0 |
| Осмоляльность, ммоль/кг воды, не более | 250 |
| Насыпная плотность, г/см3 | От 0,1 до 0,5 включ. |
| Массовая доля золы, %, не более | 5,0/3,5 <*> |
| Активная кислотность, ед. pH | От 6,0 до 7,5 включ. |
| Индекс растворимости, см3 сырого осадка, не более | 0,1 |
| Группа чистоты, не ниже | I |
| Пригорелые частицы, не ниже | Диск A |
| <*> Для продукта, применяемого при изготовлении детского и специализированного питания. | |
4.1.4 По микробиологическим показателям продукт должен соответствовать требованиям, указанным в таблице 3.
| Наименование показателя | Значение показателя | |
| Количество мезофильных аэробных и факультативных анаэробных микроорганизмов, КОЕ/г, не более <*> | 1·104 | |
| Количество мезофильных аэробных и факультативных анаэробных микроорганизмов, КОЕ/г, не более <**> | 5·103 | |
| Масса продукта, г, в которой не допускаются: | Бактерии группы кишечной палочки (колиформы) | 1,0 |
| Патогенные микроорганизмы (в том числе сальмонеллы) | 25 | |
| S.aureus | 1,0 | |
| Дрожжи, КОЕ/г, не более | 50 | |
| Плесени, КОЕ/г, не более | 50 | |
| <*> Для продукта, используемого в качестве сырья в производстве пищевых продуктов. <**> Для продукта, используемого в качестве сырья без тепловой обработки, а также для продукта, упакованного в потребительскую упаковку. | ||
4.1.5 По содержанию токсичных элементов, пестицидов, микотоксинов, диоксинов, меламина, остаточных количеств ветеринарных лекарственных средств (фармакологически активных веществ и их метаболитов), радионуклидов продукт должен соответствовать требованиям [1], [2].
4.2 Требования к сырью и материалам
4.2.1 Сырье, используемое для изготовления продукта, по показателям безопасности должно соответствовать требованиям, установленным [1] - [3].
4.2.2 Для производства продукта применяют следующее сырье:
- сыворотку молочную по ГОСТ 34352;
- концентрат сывороточных белков сухой по ГОСТ Р 53456;
- изолят сывороточных белков сухой по ГОСТ Р 72675;
- нативную сыворотку;
- концентрат нативных сывороточных белков;
- изолят нативных сывороточных белков;
- ферментные протеолитические препараты, разрешенные для использования при производстве молочной продукции по [3];
- натрия гидроокись по ГОСТ 4328;
- калия гидроокись по ГОСТ 24363;
- кислоту лимонную по ГОСТ 908;
- кислоту молочную по ГОСТ 490;
- воду питьевую по [4], [5].
4.2.3 Допускается использование аналогичного сырья, не уступающего по качественным характеристикам, перечисленным в 4.2.2, и соответствующего по показателям безопасности уровням, установленным [1], [2].
4.3 Упаковка
4.3.1 Упаковка, используемая для продукта, должна соответствовать требованиям документа, в соответствии с которыми она изготовлена, и требованиям, установленным [6], обеспечивать сохранность качества и безопасности продукта при его перевозке, хранении и реализации.
4.3.2 Продукт упаковывают в потребительскую или непосредственно в транспортную упаковку.
Потребительские упаковки формируют в групповую упаковку.
4.3.3 Транспортные пакеты формируют по ГОСТ 23285 и ГОСТ 26663. Укладку транспортного пакета осуществляют так, чтобы была видна маркировка не менее одной единицы транспортной упаковки с каждой боковой стороны транспортного пакета. Укладку транспортного пакета осуществляют способами, обеспечивающими сохранность нижних рядов транспортной упаковки без их деформации.
4.3.4 Пределы допускаемых отрицательных отклонений содержимого массы нетто продукта — в соответствии с требованиями ГОСТ 8.579-2019 (приложение А).
4.3.5 Продукт, предназначенный для отправки в районы Крайнего Севера и приравненные к ним местности, упаковывают в соответствии с требованиями ГОСТ 15846.
4.4 Маркировка
4.4.1 Маркировка упаковки должна соответствовать требованиям [1], [7].
4.4.2 Если при обандероливании маркировка на транспортной упаковке четко просматривается, допускается не наносить маркировку на боковые (торцевые) поверхности групповой упаковки или транспортного пакета. В этом случае на ярлыки (листы-вкладыши) наносят недостающую информацию о числе единиц. Ярлыки (листы-вкладыши) вкладывают или прикрепляют любым способом, обеспечивающим сохранность информации при транспортировании и хранении.
4.4.3 Информацию, соответствующую требованиям [1], [7], наносят на транспортную упаковку с помощью этикетки, изготовленной типографским способом, или при помощи трафарета, маркиратора или другого приспособления, обеспечивающего ее четкое прочтение.
4.4.4 Манипуляционные знаки «Беречь от солнечных лучей», «Пределы температуры», «Беречь от влаги» наносят в соответствии с ГОСТ 14192.
4.4.5 Продукты, отправляемые в районы Крайнего Севера и приравненные к ним местности, маркируют по ГОСТ 15846.
5 Правила приемки
5.1 Правила приемки — по ГОСТ 26809.1. Продукт принимают партиями.
5.2 Контроль за содержанием диоксинов проводят в случаях ухудшения экологической ситуации, связанной с авариями, техногенными и природными катастрофами, приводящими к образованию и попаданию диоксинов в окружающую среду; в случае обоснованного предположения о возможном их наличии в сырье.
5.3 Контроль за содержанием меламина проводят в случае обоснованного предположения о возможном его наличии в сырье.
6 Методы контроля
6.1 Методы отбора проб и подготовка к анализам — по ГОСТ 26809.1, ГОСТ 26929, ГОСТ 32901, ГОСТ 32164.
6.2 Внешний вид, консистенцию, цвет, качество упаковки и маркировки определяют визуально, вкус и запах — органолептически и характеризуют в соответствии с нормами настоящего стандарта.
6.3 Определение массовой доли влаги — по ГОСТ 29246.
Массовую долю сухого вещества в продукте СВп, %, вычисляют по формуле
где Вп — массовая доля влаги в анализируемой пробе продукта, %.
6.4 Определение массовой доли белка — по ГОСТ 34454.
6.4.1 Коэффициент пересчета массовой доли азота на массовую долю общего белка — 6,38; масса навески продукта — 0,12 г.
6.4.2 Массовую долю белка в сухом веществе Бсв, %, вычисляют по формуле
где Бп — массовая доля белка в анализируемой пробе продукта, %;
СВп — массовая доля сухих веществ в анализируемой пробе продукта, %;
100 — коэффициент пересчета результатов измерений в проценты.
6.5 Определение массовой доли лактозы — по ГОСТ 35005-2023 (пункт 8.4 и приложение В), ГОСТ Р 54760.
6.6 Определение массовой доли жира — по ГОСТ 29247.
6.7 Определение насыпной плотности — по ГОСТ 31977.
6.8 Определение массовой доли золы — по ГОСТ 35005-2023 (подраздел 8.22), ГОСТ 17626-81 (подраздел 4.5), ГОСТ Р 51463.
6.9 Определение активной кислотности — по ГОСТ 32892 или по ГОСТ 30648.5. Восстановление продукта — по ГОСТ 35265-2025 (пункты 7.2.1, 7.2.2).
6.10 Определение группы чистоты — по ГОСТ 29245 (применительно к сухому обезжиренному молоку).
6.11 Определения осмоляльности — по ГОСТ Р 55578. Восстановление продукта — по ГОСТ 35265-2025 (пункты 7.2.1, 7.2.2).
6.12 Определение индекса растворимости — по ГОСТ 30305.4 (применительно к сухому обезжиренному молоку).
6.13 Определение массовой доли \beta - \text{лактоглобулина} — по методике, приведенной в приложении А.
6.14 Определение микробиологических показателей:
- количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов — по ГОСТ 32901;
- бактерии группы кишечных палочек — по ГОСТ 32901;
- патогенные микроорганизмы, в том числе сальмонеллы, — по ГОСТ 31659;
- Staphylococcus aureus — по ГОСТ 30347;
- дрожжи и плесневые грибы — по ГОСТ 33566.
6.15 Минерализация проб при определении токсичных элементов — по ГОСТ 26929, ГОСТ 31671.
6.16 Определение токсичных элементов:
- свинца — по ГОСТ 26932, ГОСТ 30178, ГОСТ 30538, ГОСТ EN 14083, ГОСТ EN 14084, ГОСТ 33824, ГОСТ 34141;
- мышьяка — по ГОСТ 26930, ГОСТ 30538, ГОСТ 31707, ГОСТ 31628, ГОСТ 34141;
- кадмия — по ГОСТ 26933, ГОСТ 30178, ГОСТ 30538, ГОСТ EN 14083, ГОСТ EN 14084, ГОСТ 33824, ГОСТ 34141;
- ртути — по ГОСТ 26927, ГОСТ 34427, ГОСТ 34141, ГОСТ Р 53183.
6.17 Определение пестицидов — по ГОСТ 23452.
6.18 Определение микотоксинов (афлатоксина M1) — по ГОСТ 30711, ГОСТ 34049.
6.19 Определение диоксинов — по ГОСТ 34449 и другим аттестованным методам.
6.20 Определение меламина — по ГОСТ 34515, ГОСТ ISO/TS 15495/IDF/RM 230.
6.21 Определение остаточных количеств ветеринарных лекарственных средств (фармакологически активных веществ и их метаболитов) — по ГОСТ 33526.
6.22 Определение радионуклидов — по ГОСТ 32161, ГОСТ 32163.
6.23 При проведении испытаний допускается применять другие методики исследований (испытаний) и измерений, включенные в перечень международных и межгосударственных стандартов, а в случае их отсутствия — национальных стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимые для применения и исполнения требований [1], [2] и осуществления оценки соответствия объектов технического регулирования.
6.24 При возникновении спорных ситуаций при наличии двух и более аттестованных методик измерений одной и той же величины арбитражная методика измерений определяется соглашением заинтересованных юридических лиц.
7 Транспортирование и хранение
7.1 Продукт перевозят в крытых транспортных средствах в соответствии с правилами перевозок грузов, действующими на транспорте соответствующего вида.
7.2 Рекомендовано транспортирование и хранение продукта осуществлять при температуре от 2 °C до 20 °C и относительной влажности не более 80%.
7.3 Продукт хранят упакованным в чистых, сухих и хорошо вентилируемых помещениях. Хранение продукта совместно с другими пищевыми продуктами со специфическим запахом не допускается.
7.4 Сроки годности устанавливает изготовитель согласно [2]. Рекомендуемый срок годности продукта — не более 24 мес.
7.5 Транспортирование и хранение продуктов, отправляемых в районы Крайнего Севера и приравненные к ним местности, — по ГОСТ 15846.
ОПРЕДЕЛЕНИЕ МАССОВОЙ ДОЛИ \beta - \text{ЛАКТОГЛОБУЛИНА} МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
А.1 Диапазон измерения массовой доли \beta - \text{лактоглобулина} в продукте — от 0,01 до 100,00 мг/г включительно.
Метод основан на удалении из пробы жира и казеиновой фракции белка и определении в полученном фильтрате содержания \beta - \text{лактоглобулина} методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) по обращенно-фазовому механизму при применении спектрометрического детектора при длине волны 205 нм.
А.3 Средства измерений, вспомогательное оборудование, посуда, реактивы и материалы
Хроматограф, включающий следующие элементы:
- колонку C18 с размером пор 300Е длиной 250 мм, внутренним диаметром 4,6 мм;
- устройство петлевое для ввода пробы рабочим объемом петли 0,020 см3;
- спектрофотометрический детектор с переменной длиной волны, позволяющий проводить измерения оптической плотности при длине волны 205 нм, снабженный проточной кварцевой кюветой объемом 1 см3;
- программное обеспечение для статистической обработки полученных результатов измерений.
Микрошприц для ВЭЖХ вместимостью 0,1 см3.
Весы специального (I) класса точности по ГОСТ OIML R 76-1 с поверочным интервалом e не более 1 мг и действительной ценой деления d не более 0,1 мг.
Анализатор потенциометрический с диапазоном измерения от 1 до 12 ед. pH с погрешностью +/- 0,05 ед. pH.
Центрифуга лабораторная со скоростью вращения не менее 5000 мин-1.
Дозаторы пипеточные переменного объема дозирования в диапазоне (0,020 — 5,000) см3.
Часы электронно-механические по ГОСТ Р 72031.
Колбы 1-25-2, 1-100-2, 1-1000-2 по ГОСТ 1770.
Пробирки П-1-10-0,1 ХС по ГОСТ 1770.
Цилиндры 1-50-2, 1-100-2 по ГОСТ 1770.
Колба К-1-1000-29/32 по ГОСТ 25336.
Стаканы В-1-25, В-1-150 по ГОСТ 25336.
pH-метр по ГОСТ 9245 с погрешностью измерения +/- 0,05 ед. pH в диапазоне измерения от 4 до 9 ед. pH, снабженный комбинированным стеклянным электродом.
Фильтры мембранные с диаметром пор не более 0,5 мкм.
Ацетонитрил для жидкостной хроматографии, с содержанием основного вещества не менее 99,9%.
Кислота соляная по ГОСТ 3118, х.ч. или стандарт-титр, раствор молярной концентрации 1 моль/дм3.
Кислота трифторуксусная (ТФУ) с содержанием основного вещества не менее 98%.
\beta - \text{лактоглобулин} из коровьего молока с содержанием основного вещества не менее 90%, лиофилизированный порошок.
Вода для лабораторного анализа (бидистиллированная вода) по ГОСТ Р 52501.
Вода дистиллированная по ГОСТ Р 58144.
Допускается применение других средств измерения, вспомогательного оборудования, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам и обеспечивающих необходимую точность измерения, а также реактивов и материалов по качеству не хуже вышеуказанных.
Отбор проб — по ГОСТ 26809.1.
А.5 Подготовка к проведению измерений
А.5.1 Приготовление раствора соляной кислоты молярной концентрации c(HCl) = 1 моль/дм3
Приготовление раствора соляной кислоты молярной концентрации 1,0 моль/дм3 и проверку его молярной концентрации проводят в соответствии с требованиями ГОСТ 25794.1.
Срок хранения раствора при температуре (20 +/- 5) °C — не более 1 мес.
А.5.2 Подготовка пробы исследуемого продукта
Пробы продукта массой (5,000 +/- 0,001) г растворяют в 50 см3 дистиллированной воды, помещают туда электроды и по каплям добавляют раствор соляной кислоты молярной концентрацией 1 моль/дм3 до достижения pH значения 4,6 ед. pH. После достижения указанной величины раствор переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3 и доводят до метки дистиллированной водой. Дают отстояться в течение 30 мин. Затем фильтруют через складчатый фильтр. В случае недостаточного осаждения казеина проводят центрифугирование фильтрата: переливают полученный фильтрат в центрифужные пробирки и центрифугируют 5 мин при скорости вращения 5000 мин-1.
Полученный экстракт используют для измерений.
А.5.3 Приготовление подвижной фазы для жидкостной хроматографии (элюенты A, B)
Для приготовления элюента A к ацетонитрилу добавляют 0,1% ТФУ по объему.
Для приготовления элюента B к воде для лабораторного анализа (бидистиллированной воде) добавляют 0,1% ТФУ по объему.
Полученные элюенты рекомендуется профильтровать через мембранный фильтр. Перед использованием подвижную фазу дегазируют в круглодонной колбе под вакуумом на ультразвуковой бане.
Срок хранения элюента A в плотно укупоренной темной посуде при температуре (4 +/- 2) °C — не более 3 мес.
Элюент B используется свежеприготовленным.
А.5.4 Приготовление раствора \beta - \text{лактоглобулина} массовой концентрации 1 мг/см3
В мерную колбу вместимостью 25 см3 помещают (0,025 +/- 0,001) г \beta - \text{лактоглобулина} , добавляют небольшое количество воды для лабораторного анализа (бидистиллированной воды) и тщательно перемешивают.
Объем раствора доводят водой для лабораторного анализа (бидистиллированной водой) до метки и аккуратно перемешивают.
Срок хранения раствора при температуре (4 +/- 2) °C — не более 1 мес.
А.5.5 Приготовление раствора \beta - \text{лактоглобулина} массовой концентрации 0,5 мг/см3
В центрифужную пробирку вместимостью 10 см3 помещают 1 см3 раствора \beta - \text{лактоглобулина} массовой концентрации 1 мг/см3 (см. А.5.4), приливают 1 см3 воды для лабораторного анализа (бидистиллированной воды) и аккуратно перемешивают.
А.5.6 Приготовление раствора \beta - \text{лактоглобулина} массовой концентрации 0,25 мг/см3
В центрифужную пробирку вместимостью 10 см3 помещают 1 см3 раствора \beta - \text{лактоглобулина} массовой концентрации 0,5 мг/см3 (см. А.5.5), приливают 1 см3 воды для лабораторного анализа (бидистиллированной воды) и аккуратно перемешивают.
А.5.7 Приготовление раствора \beta - \text{лактоглобулина} массовой концентрации 0,1 мг/см3
В пробирку эппендорфа вместимостью 1,5 см3 отмеряют 0,1 см3 раствора \beta - \text{лактоглобулина} массовой концентрации 1 мг/см3 (см. А.5.4), приливают 0,9 см3 воды для лабораторного анализа (бидистиллированной воды) и аккуратно перемешивают.
А.5.8 Приготовление раствора \beta - \text{лактоглобулина} массовой концентрации 0,01 мг/см3
В пробирку эппендорфа вместимостью 1,5 см3 отмеряют 0,1 см3 раствора \beta - \text{лактоглобулина} массовой концентрации 0,1 мг/см3 (см. А.5.4), приливают 0,9 см3 воды для лабораторного анализа (бидистиллированной воды) и аккуратно перемешивают.
А.5.9 Построение градуировочной зависимости
Построение градуировочной зависимости и проверку приемлемости градуировки проводят в соответствии с руководством пользователя программного обеспечения, прилагаемого к хроматографу, с использованием растворов \beta - \text{лактоглобулина} , приготовленных по А.5.4 - А.5.8.
Градуировку проводят при изменении условий хроматографического анализа, при несоответствии результатов метрологическим требованиям.
Проверку градуировки проводят непосредственно после выполнения градуировки, а в дальнейшем — периодически, перед каждой серией измерений.
А.5.10 Подготовка хроматографа к работе
Подготовку хроматографа к работе проводят в соответствии с прилагаемой к хроматографу инструкцией.
Соблюдают условия хроматографирования, описанные далее.
а) подвижная фаза: элюент A — элюент B.
б) длина волны детектора — 205 нм;
в) чувствительность детектора — 0,08 единицы оптической плотности по шкале (ориентировочное значение);
г) скорость потока подвижной фазы — 1,2 см3/мин;
А.6 Условия проведения измерений
При выполнении измерений в лаборатории следует соблюдать следующие условия:
После выхода системы в режим равновесия в хроматограф вводят 20 мкл экстракта, приготовленного по А.5.2, и детектируют с помощью спектрофотометрического детектора при длине волны 205 нм. Приблизительное время удерживания \beta - \text{лактоглобулина} — 18 — 20 мин.
А.8 Обработка результатов измерений
Массовую долю \beta - \text{лактоглобулина} X, мг/г, в анализируемом продукте определяют по формуле
X = \frac{C \cdot V}{m} , (А.1)
где C — массовая концентрация \beta - \text{лактоглобулина} , определенная по градуировочному графику, мг/см3;
V — объем раствора, полученный после разведения пробы продукта, см3;
За окончательный результат измерения принимают среднеарифметическое значение результатов двух последовательных измерений, выполненных в условиях повторяемости, округленное до второго десятичного знака.
А.9 Контроль точности результатов измерений
А.9.1 Метрологические характеристики метода
Метрологические характеристики метода определения массовой доли \beta - \text{лактоглобулина} при доверительной вероятности P = 0,95 приведены в таблице А.1.
Метрологические характеристики метода определения массовой доли \beta - \text{лактоглобулина}
| Диапазон определения \beta - \text{лактоглобулина} , мг/г | Предел повторяемости rотн | Предел воспроизводимости Rотн | Границы относительной погрешности \pm \delta |
|---|---|---|---|
| 0,01 — 100,00 | 18 | 28 | 20 |
А.9.2 Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях повторяемости
Проверку приемлемости результатов измерения массовой доли \beta - \text{лактоглобулина} в анализируемом продукте, полученных в условиях повторяемости (два последовательных определения, n = 2), проводят с учетом требований ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 (пункт 5.2.2).
Результаты измерений считаются приемлемыми при условии
где X1, X2 — значения результатов двух измерений, полученных в условиях повторяемости, мг/г;
rотн — предел повторяемости (сходимости), значение которого приведено в таблице А.1, %.
Если данное условие не выполняется, то проводят повторные измерения и проверку приемлемости результатов измерений в условиях повторяемости в соответствии с требованиями ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 (пункт 5.2.2)
А.9.3 Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости
Проверку приемлемости результатов измерения массовой доли \beta - \text{лактоглобулина} в анализируемом продукте, полученных в условиях воспроизводимости (в двух лабораториях, m = 2), проводят с учетом требований ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 (подпункт 5.3.2.1).
Результаты измерений считаются приемлемыми при условии
|X'1 — X'2| <= Rотн·0,01·Xср, (А.3)
где X'1, X'2 — значения результатов двух измерений, полученных в условиях воспроизводимости, мг/г;
Xср — среднеарифметическое значение результатов двух измерений, полученных в условиях воспроизводимости, мг/г;
Rотн — предел воспроизводимости, значение которого приведено в таблице А.1, %.
Если данное условие не выполняется, то выполняют процедуры в соответствии с требованиями ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 (пункт 5.3.3).
А.10 Оформление результатов измерений
Результат измерения массовой доли \beta - \text{лактоглобулина} в анализируемом продукте представляют в документах, предусматривающих его в виде
X_{\text{ср}} \pm \delta \cdot 0,01 \cdot X_{\text{ср}}\Delta , мг/г, при P = 0,95,
где Xср — среднеарифметическое значение результатов двух измерений, удовлетворяющих условию приемлемости по А.9.2, мг/г;
\Delta — границы абсолютной погрешности измерений (\Delta = \delta \cdot 0,01 \cdot X_{\text{ср},}) , мг/г;
\delta — границы относительной погрешности измерений, % (см. таблицу А.1).
А.11 Требования, обеспечивающие безопасность
При выполнении работ необходимо соблюдать следующие требования:
- помещение лаборатории должно быть оборудовано общей приточно-вытяжной вентиляцией в соответствии с ГОСТ 12.4.021. Содержание вредных веществ в воздухе рабочей зоны не должно превышать норм, установленных ГОСТ 12.1.005;
- требования техники безопасности при работе с химическими реактивами в соответствии с ГОСТ 12.1.007;
- требования техники безопасности при работе с электроустановками в соответствии с ГОСТ 12.1.019.
Помещение лаборатории должно соответствовать требованиям пожарной безопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.004 и быть оснащено средствами пожаротушения в соответствии с ГОСТ 12.4.009.
А.12 Требования к квалификации оператора
Выполнение измерений может проводить специалист, имеющий специальное образование, освоивший метод и уложившийся в норматив контроля точности при выполнении процедур контроля точности.
А.13 Пример хроматограммы определения массовой концентрации \beta - \text{лактоглобулина}
Пример хроматограммы определения массовой концентрации \beta - \text{лактоглобулина} в молоке приведен на рисунке А.1.
1 — БСА; 2 — \alpha - \text{лактоальбумин} ; 3 — лактоферрин; 4 — \beta - \text{лактоглобулин} A; 5 — \beta - \text{лактоглобулин} B