ГОСТ 7702.2.0-95/ГОСТ Р 50396.0-92. Межгосударственный стандарт. Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты птичьи. Методы отбора проб и подготовка к микробиологическим исследованиям
(утв. и введен в действие Постановлением Госстандарта России от 18.11.1992 № 1496)
Внимание
Документ утратил силу с 01.07.2014 в связи с изданием Приказа Росстандарта от 29.07.2013 № 460-ст. Взамен введен в действие ГОСТ Р 50396.0-2013. Документ утратил силу с 01.07.2014 в связи с изданием Приказа Росстандарта от 29.07.2013 № 460-ст. Взамен введен в действие ГОСТ Р 50396.0-2013. Документ включен в Перечень стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимые для применения и исполнения требований технического регламента «О безопасности пищевой продукции» (ТР ТС 021/2011) и осуществления оценки (подтверждения) соответствия продукции (Решение Комиссии Таможенного союза от 09.12.2011 № 880). Документ включен в Перечень нормативной документации, разрешенной для использования в государственных ветеринарных лабораториях при диагностике болезней животных, рыб, пчел, а также контроля безопасности сырья животного и растительного происхождения (утв. Россельхознадзором 30.07.2009 № 02-03-48/563). С 1 июля 2003 года до вступления в силу технических регламентов акты федеральных органов исполнительной власти в сфере технического регулирования носят рекомендательный характер и подлежат обязательному исполнению только в части, соответствующей целям, указанным в пункте 1 статьи 46 Федерального закона от 27.12.2002 № 184-ФЗ. Документ введен в действие с 01.01.1994.
ИСТОРИЯ ИЗМЕНЕНИЙ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИХ АКТОВ
flowchart LR n0["ГОСТ 7702.2.0-95"]:::rst click n0 "https://bukva.ai/docs/gost-7702-2-0-95" "ГОСТ 7702.2.0-95. Межгосударственный стандарт. Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты птичьи. Методы отбора проб и подготовка к микробиологическим исследованиям (утв. и введен в д" n1["ГОСТ Р 50396.0-2013"]:::rst click n1 "https://bukva.ai/docs/gost-r-50396-0-2013" "ГОСТ Р 50396.0-2013. Национальный стандарт Российской Федерации. Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты из мяса птицы. Методы отбора проб и подготовка к микробиологическим... (утв" n2["ГОСТ 7702.2.0-2016"]:::doc click n2 "https://bukva.ai/docs/gost-7702-2-0-2016" "ГОСТ 7702.2.0-2016. Межгосударственный стандарт. Продукты убоя птицы, полуфабрикаты из мяса птицы и объекты окружающей производственной среды. Методы отбора проб и подготовка к... " n0 --> n1 n0 --> n2 classDef rst fill:#FFEBEB,stroke:#8B0000,color:#000; classDef doc fill:#EBFFEB,stroke:#006400,color:#000; classDef notEnt fill:#FFFFEB,stroke:#FF8C00,color:#000;
Утвержден и введен в действие Постановлением Госстандарта России от 18 ноября 1992 г. № 1496
МЯСО ПТИЦЫ, СУБПРОДУКТЫ И ПОЛУФАБРИКАТЫ ПТИЧЬИ
МЕТОДЫ ОТБОРА ПРОБ И ПОДГОТОВКА К МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИМ ИССЛЕДОВАНИЯМ
Poultry meat, edible, offal ready-to-cook products. Methods for sampling and preparing of microbiological examinations
ГОСТ 7702.2.0-95/ ГОСТ Р 50396.0-92
Дата введения 1 января 1994 года
ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ
1. Разработан и внесен Научно-производственным объединением птицеперерабатывающей промышленности «Комплекс», Техническим комитетом по стандартизации ТК 116 «Продукты переработки птицы, яиц и сублимационной сушки».
2. Утвержден и введен в действие Постановлением Госстандарта России от 18.11.92 № 1496.
3. Срок проверки — 1997 г.; периодичность проверки — 5 лет.
5. Настоящий стандарт ГОСТ Р 50396.0-92 на заседании Межгосударственного Совета по стандартизации, метрологии и сертификации принят в качестве межгосударственного стандарта ГОСТ 7702.2.0-95 «Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты птичьи. Методы отбора проб и подготовка к микробиологическим исследованиям», который содержит полный аутентичный текст ГОСТ Р 50396.0-92.
Постановлением Комитета Российской Федерации по стандартизации, метрологии и сертификации от 12.03.96 № 164 межгосударственный стандарт ГОСТ 7702.2.0-95 введен в действие для применения в качестве нормативного документа по стандартизации Российской Федерации с 1 июля 1996 г.
6. Ссылочные нормативно-технические документы
Настоящий стандарт распространяется на предназначенные для реализации и промышленной переработки:
мясо птицы в виде потрошеных, полупотрошеных и потрошеных с комплектом потрохов и шеей тушек, частей, полученных при их разделке, а также обвалянное и измельченное;
субпродукты и полуфабрикаты птичьи.
Стандарт устанавливает методы отбора проб и подготовку к микробиологическим исследованиям.
1. МЕТОДЫ ОТБОРА ПРОБ
1.1. Методы отбора проб и подготовка их к исследованиям — по ГОСТ 26668, ГОСТ 26669 со следующими дополнениями.
1.1.1. Для контроля качества тушек или полутушек птицы из области грудной части, голени и бедра вырезают на всю глубину мышцы в равных количествах общей массой не менее 150 г, измельчают их с соблюдением правил асептики с помощью ножниц, гомогенизатора в течение 2 — 2,5 мин или фарфоровой ступки с пестиком, перемешивают и получают объединенную пробу одной тушки или полутушки.
1.1.2. Объединенную пробу обвалянного, измельченного мяса, птичьих субпродуктов и полуфабрикатов отбирают по нормативно-технической документации на эти виды продуктов.
1.1.3. Для приготовления исходного разведения из объединенной измельченной пробы отбирают навеску не менее 10 г.
1.1.4. Для исследования микробного загрязнения поверхности тушек, их частей, обвалянного мяса, субпродуктов, полуфабрикатов (кроме панированных и измельченных) пробы отбирают в виде смывов, полученных с помощью ватных тампонов по ГОСТ 26669, или стерильной жидкостью для смыва (пептонной водой, физиологическим раствором, водопроводной водой).
1.1.5. При отборе проб в виде смывов жидкостью в новый стерильный пакет одноразового пользования из полимерного материала помещают тушку птицы или ее части массой не более 1,5 кг, объединенную пробу обвалянного мяса или субпродуктов массой не менее 150 г, добавляют жидкость для смыва в количестве, равном массе исследуемого продукта. Встряхивают содержимое пакета в течение 2 мин. Полученная смывная жидкость служит исходным материалом для последующих 10-кратных разведений.
1.1.6. При выявлении микроорганизмов из мяса птицы, субпродуктов и полуфабрикатов для посевов на питательные среды используют верхний слой надосадочной жидкости, а при определении их количества используют взвесь исходного разведения.
2. ПОДГОТОВКА К МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИМ ИССЛЕДОВАНИЯМ
2.1 Аппаратура, материалы и реактивы
Баня водяная с терморегулятором, позволяющая поддерживать температуру 20 °C — 100 °C с отклонением до 1 °C от заданной.
Весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания 200 г и пределом допускаемой погрешности +/- 2 мг для взвешивания реактивов.
Весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания 1 кг и пределом допускаемой погрешности +/- 10 мг для взвешивания продукта.
Термостаты электрические для выращивания бактерий с автоматическим терморегулятором до температуры 55 °C и с ценой деления 0,2 °C.
Стерилизатор паровой медицинский по ГОСТ 19569.
Холодильник бытовой электрический по ГОСТ 26678.
Гомогенизатор бактериологический или аппарат для измельчения тканей с числом оборотов 8000 — 45000 об/мин.
Мешалки из нержавеющего металла.
Микроскоп световой биологический с увеличением в 900^{x} - 1000^{x} раз.
Пробоотборник (буравчик или зонд) из нержавеющей стали.
pH-метр с пределом допускаемой погрешности не более 0,05 ед. pH.
Мясорубка по ГОСТ 4025.
Часы песочные по ОСТ 25-11-38 или часы механические с сигнальным устройством по ГОСТ 3145.
Термометры жидкостные стеклянные с диапазоном температуры 0 °C — 50 °C и 50 °C — 100 °C по ГОСТ 28498 с пределом допускаемой погрешности +/- 0,5 °C с ценой деления шкалы 0,5 °C.
Шпатели, ложки, половник из нержавеющей стали.
Шприцы медицинские по ГОСТ 22967.
Скальпели и ножи медицинские по ГОСТ 21240.
Ножи и проволока из нержавеющей стали.
Пинцеты по ГОСТ 21241.
Ножницы медицинские по ГОСТ 21239.
Пакеты из полимерных пленочных материалов по ТУ 63-102-115.
Кюветы разные для окрашивания препаратов.
Трафареты (шаблоны) из нержавеющей стали.
Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026.
Марля по ГОСТ 11109.
Капельница 1-50 ХС по ГОСТ 25336.
Колба Кп 1(2) или П(2) по ГОСТ 25336.
Воронка Бюхнера 3(5) по ГОСТ 9147.
Воронка ВФ 1(3) — 75(100) ХС по ГОСТ 25336.
Цилиндр по ГОСТ 1770.
Стакан В-1 (2)-100(150-1000) по ГОСТ 25336.
Стакан Н-2(100-1000) по ГОСТ 25336.
Стекла предметные по ГОСТ 9284.
Стекла покровные по ГОСТ 6672.
Спиртовка СЛ-1(2) по ГОСТ 25336.
Пробирки П1-16-150ХС или П2-10-90ХС или П2Т-10ТС по ГОСТ 25336.
Желчь крупного рогатого скота, сухая или натуральная, медицинская по ТУ 6-09-10-364.
Масло вазелиновое по ГОСТ 3164.
Масло иммерсионное по ТУ 81-05-79.
Пептон по ГОСТ 13805.
Растворы буферные для pH-метра.
Сыворотки антилистерозные люминесцирующие.
Сыворотки антисальмонеллезные поливалентные и моновалентные.
Бриллиантовый зеленый по ТУ 6-09-4278.
Бромкрезоловый пурпурный по ТУ 6-09-1386.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
Глицерин х.ч. по ГОСТ 6824.
Глюкоза х.ч., ч.д.а. по ГОСТ 6038.
Желатин пищевой по ГОСТ 11293.
Железо треххлористое, 6-водное.
Калий гидрат окиси (гидроокись) технический по ГОСТ 9285.
Калий фосфорно-кислый двузамещенный (дигидрофосфат) по ГОСТ 2493.
Калий фосфорно-кислый однозамещенный (гидрофосфат) по ГОСТ 4198.
Кальций углекислый (карбонат) по ГОСТ 4530.
Магний хлористый (хлорид) по ГОСТ 4209.
Мочевина по ГОСТ 6691.
Натрия гидрат окиси едкий (гидроокись) по ГОСТ 11078.
Натрий селенисто-кислый (гидроселенит).
Натрий серноватисто-кислый (тиосульфат).
Натрий сернисто-кислый (сульфит).
Натрий фосфорно-кислый двузамещенный (дигидрофосфат) по ГОСТ 4172.
Натрий фосфорно-кислый однозамещенный (гидрофосфат) по ГОСТ 245.
Натрий хлористый (хлорид) по ГОСТ 4233.
Пероксид (перекись) водорода по ГОСТ 10929.
Сахароза ч.д.а. по ГОСТ 5833.
Свинец уксуснокислый (ацетат).
Спирт этиловый по ГОСТ 18300 и ГОСТ 5962 <*>, раствор с массовой долей 70%, 96%.
<*> На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 51652.
Допускается применение других средств измерений с метрологическими характеристиками и оборудования с техническими характеристиками не хуже, а реактивов по качеству не ниже указанных в стандарте.
2.2 Подготовка посуды и материалов
2.2.1. Вся посуда должна быть вымыта, высушена. Перед стерилизацией пробирки, колбы закрывают пробками из ваты в марлевой обертке, в концы пипеток вкладывают по кусочку ваты. Подготовленные пробирки, пипетки, чашки завертывают в бумагу или помещают в металлические пеналы. Горлышко колб с пробками, стаканов закрывают сверху бумажным колпачком, который обвязывают ниткой.
2.2.2. Стерилизация посуды, инструментов, материалов — по ГОСТ 26668.
2.3 Приготовление компонентов питательных сред и растворов
2.3.1. Пептонно-солевой раствор. В 1 дм3 дистиллированной воды растворяют при медленном нагревании 8,5 г хлористого натрия и 1,0 г пептона. Полученный раствор при необходимости фильтруют через бумажный фильтр, устанавливают pH (7,0 +/- 0,1), стерилизуют (30 +/- 1) мин при температуре (121 +/- 1) °C. Раствор хранят в темном месте при температуре (4 +/- 2) °C не более 1 мес.
2.3.2. Пептонная вода. Приготовление аналогично пептонно-солевому раствору (см. п. 2.3.1) без добавления хлористого натрия.
2.3.3. Физиологический раствор. В 1 дм3 дистиллированной воды растворяют 8,5 г хлористого натрия. Стерилизуют (20 +/- 1) мин при температуре (121 +/- 1) °C.
2.3.4. Агар голодный. 2,0 г агара растворяют в 98 см3 дистиллированной воды, стерилизуют (20 +/- 1) мин при температуре (121 +/- 1) °C.
2.3.5. Спиртовой раствор розоловой кислоты массовой концентрации 50 г/дм3. 0,5 г розоловой кислоты заливают 10 см3 этилового ректификованного спирта с массовой долей 96%. Через 24 ч раствор готов к употреблению. Хранят в закрытом сосуде из темного стекла при комнатной температуре не более 1 мес.
2.3.6. Раствор метиленового голубого массовой концентрации 1 г/дм3. 0,1 г метиленового голубого помещают в колбу вместимостью 100 см3, доливают до метки дистиллированную воду. Через 24 ч раствор готов к употреблению. Хранят в закрытом сосуде из темного стекла при комнатной температуре. Срок хранения не ограничен.
2.3.7. Раствор бриллиантового зеленого массовой концентрацией 5 г/дм3 (или 1 г/дм3). 0,5 г (или 0,1 г) бриллиантового зеленого помещают в колбу вместимостью 100 см3, доливают дистиллированную воду до метки. Хранят в закрытом сосуде из темного стекла при комнатной температуре не более 3 мес.
2.3.8 Раствор Люголя — по ГОСТ 10444.1.
2.3.9 Бульон Хоттингера — по ГОСТ 10444.1.
2.3.10. Раствор натрия тиосульфата (Na_{2}S_{2}O_{3}·5H_{2}O) массовой концентрации 500 г/дм3. 50 г натрия тиосульфата помещают в колбу, добавляют до 100 см3 дистиллированную воду. Раствор стерилизуют (20 +/- 1) мин при температуре (121 +/- 1) °C или (30 +/- 1) мин при температуре (112 +/- 1) °C.
2.3.11. Аминопептидный бульон. 250 см3 жидкого аминопептида, 5,5 г хлорида натрия, 750 см3 дистиллированной воды перемешивают, стерилизуют (20 +/- 1) мин при температуре (121 +/- 1) °C. Срок хранения при температуре 4 °C — 10 °C не ограничен.
2.3.12. Раствор натрия гидроселенита (NaHSeO_{3}) массовой концентрации 100 г/дм3. 10 г натрия гидроселенита помещают в стерильную колбу и добавляют асептически до метки 100 см3 стерильную дистиллированную воду. Готовят перед употреблением.
2.3.13. Раствор L-цистина. 0,1 г L-цистина, 15 см3 раствора гидроокиси натрия массовой концентрации 1 моль/дм3 в стерильной колбе доводят до 100 см3, добавляя стерильную дистиллированную воду. Раствор стерилизации не подлежит.
2.3.14. Экстракт дрожжевой сухой готовят по прописи, указанной на этикетке, или по ГОСТ 10444.1.
2.3.15. Хлористый магний. 36 г кристаллического хлористого магния растворяют в 90 см3 дистиллированной воды.
2.3.16. Раствор мочевины массовой концентрации 400 г/дм3. 40 г мочевины помещают в колбу и добавляют стерильную дистиллированную воду до метки 100 см3. Растворяют, стерилизуют через фильтр Зейтца. Допускается «самостерилизация» раствора мочевины путем выдерживания его при комнатной температуре в течение 2 — 3 сут. Проверяют стерильность раствора мочевины контрольным посевом.
2.3.17. Раствор метилового красного. 0,1 г метилового красного растворяют в 300 см3 этилового ректификованного спирта с массовой долей 96%, затем добавляют дистиллированную воду до метки 500 см3.
2.3.18. Спиртовой раствор \alpha - \text{нафтола} массовой концентрации 60 г/дм3. 6 г \alpha - \text{нафтола} растворяют в 100 см3 этилового ректификованного спирта с массовой долей 96%.
2.3.19. Раствор гидроокиси калия массовой концентрации 400 г/дм3, 40 г гидроокиси калия помещают в колбу и доливают дистиллированную воду до метки 100 см3.
2.3.20 Реактив Ковача, реактив Эрлиха по ГОСТ 28560.
2.3.21. Индикаторная бумага для определения сероводорода. 20 г ацетата свинца, 1 г карбоната натрия растворяют в 100 см3 дистиллированной воды. Раствором пропитывают фильтровальную бумагу, высушивают ее при температуре 18 °C — 25 °C и нарезают на узкие полоски. После приготовления бумага остается белой, при наличии сероводорода чернеет.
2.3.22. Раствор железа треххлористого 6-водного массовой концентрации 80 г/дм3 8,0 г железа треххлорного 6-водного переносят в колбу вместимостью 100 см3, добавляют до метки дистиллированную воду.
2.3.23. Физиологический фосфат-буферный раствор. 8,5 г хлорида натрия, 0,45 г дигидрофосфата калия безводного, 5,34 г натрия гидрофосфата безводного помещают в мерную посуду, доливают до 1000 см3 дистиллированную воду, стерилизуют (30 +/- 1) мин при температуре (121 +/- 1) °C.
2.3.24. Плазма крови кроличья сухая: готовят по прописи, указанной на этикетке. Плазма свежеприготовленная — по ГОСТ 10444.2.
2.4 Приготовление питательных сред
2.4.1. Мясо-пептонный агар. В 1 дм3 мясо-пептонного бульона по ГОСТ 10444.1 добавляют 15 — 20 г агара и кипятят на слабом огне при постоянном помешивании до полного растворения агара, устанавливают pH 7,0 — 7,2 и стерилизуют (20 +/- 1) мин при температуре (121 +/- 1) °C.
2.4.2. Мясо-пептонный агар с глюкозой. К 1 дм3 мясо-пептонного агара перед стерилизацией добавляют 1 или 10 г глюкозы, устанавливают pH 7,0 — 7,2 и стерилизуют (20 +/- 1) мин при температуре (121 +/- 1) °C.
2.4.3. Мясо-пептонный агар с глюкозой и дрожжевым экстрактом. К 1 дм3 стерильного агара перед применением асептически добавляют 2 г дрожжевого экстракта.
2.4.4. Среда из сухого питательного агара: готовят по прописи, указанной на этикетке.
2.4.5. Среда из сухого питательного агара с глюкозой: в 975 см3 сухого питательного агара (см. п. 2.4.4) непосредственно перед применением асептически добавляют 25 см3 стерильного раствора глюкозы массовой концентрации 200 г/дм3.
2.4.6. Среда Кесслера (с лактозой): 10 г пептона, 5 г сухой желчи или 50 см3 натуральной стерильной желчи, 2,5 г лактозы, 0,01 г генциан фиолетового добавляют в 1 дм3 дистиллированной воды, тщательно перемешивают, кипятят в течение 20 — 30 мин, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, устанавливают pH таким образом, чтобы после стерилизации он составлял (7,3 +/- 0,2) при температуре (25 +/- 1) °C. Разливают в пробирки с поплавками (трубками Дархема) дном вверх и стерилизуют (20 +/- 1) мин при температуре (114 +/- 1) °C. Если в поплавках остался воздух, среду не используют. Цвет среды фиолетовый. Срок хранения не более 14 сут при температуре (4 +/- 1) °C.
2.4.7. Среда Кесслера сухая. Готовят по прописи, указанной на этикетке.
2.4.8. Среда Хейфеца с лактозой. 10 г пептона, 5 г хлорида натрия, 5 г лактозы растворяют в 1 дм3 дистиллированной воды, устанавливают pH (7,4 — 7,6), нагревают до кипения, фильтруют, добавляют 1 см3 раствора розоловой кислоты, приготовленной по п. 2.3.5, и 2,5 см3 раствора метиленового голубого, приготовленного по п. 2.3.6. Разливают по 10 см3 в пробирки с поплавками. Стерилизуют (20 +/- 1) мин при температуре (112 +/- 1) °C. Цвет среды красно-фиолетовый. Срок хранения не более 14 сут при температуре (4 +/- 2) °C.
2.4.9. Бульон лактозный с бриллиантовым зеленым и желчью: 10 г пептона, 10 г лактозы, 20 г сухой говяжьей желчи или 200 см3 натуральной желчи, 2,66 см3 бриллиантового зеленого, приготовленного по п. 2.3.7, добавляют к 1000 см3 дистиллированной воды, перемешивают, нагревают на слабом огне до кипения, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, охлаждают до температуры (50 +/- 5) °C, устанавливают pH таким образом, чтобы после стерилизации он составил (7,2 +/- 0,1) при температуре (25 +/- 1) °C. Разливают по 10 см3 в пробирки с поплавками, стерилизуют (15 +/- 1) мин при температуре (121 +/- 1) °C. Хранят не более 14 сут при температуре (4 +/- 1) °C.
2.4.10. Среды Эндо, Левина, сухие: готовят по прописи, указанной на этикетке.
2.4.11. Пептонно-буферная среда: 10 г пептона, 0,45 г калия дигидрофосфата безводного, 5,34 г натрия гидрофосфата безводного растворяют в 1000 см3 кипящей дистиллированной воды. Разливают в колбы вместимостью 500 см3 по 255 см3 среды. Стерилизуют (20 +/- 1) мин при температуре (121 +/- 1) °C, pH среды при температуре (25 +/- 1) °C составляет (7,0 +/- 0,1). Хранение при комнатной температуре не более 14 сут.
2.4.12. Среда Мюллера. 2,5 г стерильного карбоната кальция, приготовленного по ГОСТ 10444.1, помещают в стерильный флакон, добавляют 90 см3 бульона Хоттингера, приготовленного по ГОСТ 10444.1, стерилизуют (30 +/- 1) мин при температуре (121 +/- 1) °C, pH 7,2 — 7,4. Хранят не более 1 мес при температуре (4 +/- 1) °C. Перед использованием асептически добавляют 2 см3 раствора Люголя, приготовленного по ГОСТ 10444.1, и 10 см3 раствора тиосульфата натрия, приготовленного по п. 2.3.10. Готовая среда стерилизации не подлежит.
2.4.13. Среда Кауфмана. 100 см3 стерильной среды Мюллера (см. п. 2.4.12) с асептическим добавлением 10 см3 раствора бриллиантового зеленого массовой концентрации 1 г/дм3 (см. п. 2.3.7), 10 г сухой желчи или 50 см3 натуральной говяжьей желчи перемешивают. Среда стерилизации не подлежит. Хранят не более 7 сут при температуре (4 +/- 1) °C.
2.4.14. Селенитовая среда. 5 г пептона или триптона, 4 г лактозы, 10 г натрия дигидрофосфата безводного (допускается 7 г натрия гидрофосфата безводного и 3 г натрия дигидрофосфата безводного) растворяют в 100 см3 дистиллированной воды, разливают в колбы, стерилизуют (30 +/- 1) мин при температуре (112 +/- 0,5) °C, pH 6,9 — 7,1. Хранят не более 2 мес при температуре (4 +/- 1) °C. Это служит основой среды. Для приготовления основы среды допускается вместо высококачественного пептона (триптона) и дистиллированной воды использовать 960 см3 аминопептонного бульона, приготовленного из жидкого аминопептида (см. п. 2.3.11). Перед использованием добавляют 40 см3 раствора гидроселенита (см. п. 2.3.12) на 1000 см3 основы среды. Готовую смесь не стерилизуют. Хранению она не подлежит, pH (7,0 +/- 0,1).
2.4.15. Селенитово-цистиновая среда. В 1000 см3 селенитовой среды (см. п. 2.4.14) асептически добавляют 10 см3 раствора L-цистина (см. п. 2.3.13). Устанавливают pH таким образом, чтобы он составлял (7,0 +/- 0,1) при температуре (25 +/- 1) °C. Среда хранению не подлежит.
2.4.16. Магниевая или хлористомагниевая среда. 4,2 г пептона, 7,15 г хлорида натрия, 1,48 г дигидрофосфата калия безводного, 9 см3 дрожжевого экстракта по ГОСТ 10444.1 растворяют в 900 см3 дистиллированной воды, добавляют раствор хлористого магния и 0,9 см3 раствора бриллиантового зеленого массовой концентрации 5 г/дм3. Стерилизуют (30 +/- 1) мин при температуре (112 +/- 0,5) °C. Хранят не более 14 сут при температуре (4 +/- 1) °C.
2.4.17. Среды Плоскирева, висмут-сульфитный агар, сухие. Готовят по прописи, указанной на этикетке.
2.4.18. Агар с феноловым красным и бриллиантовым зеленым. 5 г мясного экстракта, 10 г пептона, 3 г дрожжевого экстракта, 1 г дигидрофосфата натрия безводного, 0,6 г гидрофосфата натрия безводного, 15 — 18 г агара растворяют в 900 см3 кипящей дистиллированной воды. Охлаждают до температуры (45 — 50) °C, доводят pH до такого уровня, чтобы он составлял (7,0 +/- 0,1) при температуре (25 +/- 1) °C. Стерилизуют (15 +/- 1) мин при температуре (121 +/- 1) °C. Хранят не более 1 мес при температуре (4 +/- 1) °C.
2.4.19. Среды Гисса с углеводами (глюкозой, лактозой, сахарозой, маннитом), сухие. Готовят по прописи, указанной на этикетке.
2.4.20. Агар Клиглера сухой, среда Ресселя сухая. Готовят по прописи, указанной на этикетке. При скашивании сред в пробирках оставляют столбик высотой 2 — 2,5 см.
2.4.21. Агар тройной сахарный с цитратом железа — по ГОСТ 28560.
2.4.22. Трехсахарный агар по Олькеницкому. 25 г сухого питательного агара, 10 г лактозы, 10 г сахарозы, 1 г глюкозы, 0,2 г железа (II) сульфата аммония, 10 г мочевины, 4 см3 0,4%-ного раствора фенолового красного растворяют в 1000 см3 дистиллированной воды. Предварительно растворяют соли в небольшом объеме дистиллированной воды. Углеводы и мочевину также растворяют в небольших объемах воды при подогревании в водяной бане. Сухой питательный агар расплавляют при нагревании в оставшемся объеме воды. Затем все ингредиенты соединяют, перемешивают с расплавленным агаром, фильтруют через марлевый фильтр, устанавливают pH 7,2 — 7,4, добавляют индикатор и разливают в пробирки по 6 — 7 см3. Среду стерилизуют текучим паром 3 дня подряд по 2 мин и скашивают, оставляя столбик 2 — 2,5 см. Готовая среда бледно-розового цвета. Хранят при комнатной температуре не более 7 сут.
2.4.23. Агар с цитратом (Симмонса) сухой. Готовят по прописи, указанной на этикетке. Среду разливают по 5 — 7 см3, оставляя столбик высотой 2 — 2,5 см при скашивании после стерилизации.
2.4.24. Агар с мочевиной (Кристенсена). 1 г пептона, 1 г глюкозы, 5 г хлорида натрия, 2 г калия дигидрофосфата безводного, 0,012 г фенолового красного, 15 г агара растворяют в 1000 см3 кипящей дистиллированной воды, pH устанавливают таким образом, чтобы после стерилизации он составлял (6,8 +/- 0,1) при температуре (25 +/- 1) °C. Это составляет основу среды. Стерилизуют (20 +/- 1) мин при температуре (121 +/- 1) °C. Хранят не более 7 сут при температуре (4 +/- 1) °C. Перед употреблением асептически к 1000 см3 основы среды добавляют 50 см3 раствора мочевины.
2.4.25. Среда Кларка для реакции Фогес-Проскауэра. 7 г пептона, 5 г калия гидрофосфата безводного, 5 г глюкозы растворяют в 1000 см3 дистиллированной воды, кипятят 2 — 3 мин, фильтруют через ватно-марлевый или бумажный фильтр, устанавливают pH 6,9 — 7,0, разливают в пробирки, стерилизуют 20 мин при температуре (115 +/- 1) °C. Хранят не более 28 сут при температуре (4 +/- 1) °C.
2.4.26. Триптон-триптофановая среда Лютова — по ГОСТ 28560.
2.4.27. Среда для расцепления фенилаланина. В 1 дм3 дистиллированной воды при нагревании растворяют 15 см3 дрожжевого экстракта, 2 г DL-фенилаланина или 1 г L-фенилаланина, 1 г натрия дигидрофосфата безводного, 5 г хлорида натрия, 12 г агара. По 5 см3 среды разливают в пробирки, стерилизуют (10 +/- 1) мин при температуре (121 +/- 1) °C, дают застыть в наклонном положении. Среду хранят при температуре (4 +/- 1) °C не более 7 сут.
2.4.28. Среды с аминокислотами (лизином, орнитином, аргинином). 5 г одной из L-аминокислот или 10 г одной из DL-аминокислот, 3 г дрожжевого экстракта, 1 г глюкозы, 0,012 г бромкрезолового пурпурного растворяют в 1000 см3 кипящей дистиллированной воды, устанавливают pH таким образом, чтобы после стерилизации он составлял (6,8 +/- 0,1) при температуре (25 +/- 1) °C. Среды разливают в агглютинационные пробирки. Стерилизуют (10 +/- 1) мин при температуре (121 +/- 1) °C или (30 +/- 1) мин при температуре (110 +/- 1) °C. Цвет среды светло-фиолетовый. Хранению среды не подлежат.
2.4.29. Полужидкий агар. 3 г мясного экстракта, 5 г пептона, 4 — 9 г агара растворяют при нагревании до кипения в 1000 см3 дистиллированной воды. Устанавливают pH таким образом, чтобы после стерилизации он составлял (7,0 +/- 0,1) при температуре (25 +/- 1) °C. Стерилизуют (20 +/- 1) мин при температуре (121 +/- 1) °C. Хранение не более 28 сут при температуре (4 +/- 1) °C.
2.4.30. Мясо-пептонный бульон с глюкозой — по ГОСТ 10444.1.
2.4.31. Солевой бульон. К 100 см3 мясо-пептонного бульона по ГОСТ 10444.1 добавляют 6,5 г хлорида натрия. Стерилизуют (20 +/- 1) мин при температуре (121 +/- 1) °C. Хранят не более 28 сут при температуре (4 +/- 1) °C.
2.4.32. Агар Байрд-Паркер. В 1 дм3 дистиллированной воды вносят 10 г триптона, 5 г хлорида лития 6-водного, 20 г агара, 5 г мясного экстракта и 1 см3 дрожжевого экстракта. При отсутствии мясного экстракта вместо дистиллированной воды применяют 1 дм3 мясо-пептонного бульона или 1 дм3 бульона Хоттингера. Все компоненты, внесенные в 1 дм3 воды или бульона, нагревают, помешивая до полного растворения, охлаждают до температуры 50 — 60 °C. Устанавливают pH 6,8 — 7,0, стерилизуют (20 +/- 1) мин при температуре (121 +/- 1) °C. К 90 см3 основной среды добавляют асептически стерилизованные фильтрованием через мембранный фильтр растворы: 6,3 см3 раствора глицерина массовой концентрации 200 г/дм3, 5 см3 раствора пирувата натрия массовой концентрации 200 г/дм3, 1 см3 раствора теллурита калия массовой концентрации 10 г/дм3, 5 см3 желточной эмульсии. После тщательного перемешивания приготовленную среду разливают в чашки Петри. Хранят при температуре (4 +/- 1) °C не более 48 ч.
2.4.33. Яично-желточно-солевой агар. Перед анализом 1 дм3 мясо-пептонного агара расплавляют и растворяют в нем 95 г хлорида натрия, охлаждают до температуры (45 +/- 1) °C и добавляют 100 см3 яично-желточной эмульсии по ГОСТ 10444.1. Смесь тщательно перемешивают и разливают в чашки Петри, хранят при температуре (4 +/- 1) °C не более 5 сут.
2.4.34. Яично-желточный азидный агар. В 1 дм3 дистиллированной воды растворяют при нагревании 10 г пептона, 3 г хлорида натрия, 0,2 г дигидрофосфата натрия безводного, 15 г агара, 5,5 г мясного экстракта. При отсутствии мясного экстракта используют мясную воду по ГОСТ 10444.1, при этом все компоненты растворяют в 1 дм3 мясной воды. Устанавливают pH (7,6 +/- 0,1), стерилизуют (30 +/- 1) мин при температуре (121 +/- 1) °C, охлаждают до температуры 50 — 60 °C, добавляют 0,15 г азида натрия, смешивают, вновь стерилизуют (30 +/- 1) мин при температуре (121 +/- 1) °C, охлаждают до температуры (50 +/- 1) °C, добавляют 150 см3 желточной эмульсии, смешивают и разливают в чашки Петри.
2.4.35. Желатин. 10 — 15 г измельченного пищевого желатина добавляют в 100 см3 мясо-пептонного бульона, растворяют при помешивании и медленном нагревании в водяной бане при температуре 40 — 50 °C. После полного растворения устанавливают pH 7,1 — 7,3. Фильтруют через ватно-марлевый или бумажный фильтр, разливают в пробирки по 5 — 7 см3, стерилизуют текучим паром по 20 мин 2 дня подряд. После стерилизации среду охлаждают при строго вертикальном положении пробирок.
2.4.36. Среда Вильсон-Блера (агаризованная), измененная для анаэробов. 1 дм3 стерильно расплавленного и охлажденного до температуры (80 +/- 1) °C питательного агара добавляют 10 см3 раствора сульфита натрия массовой концентрации 100 г/дм3 и 1 см3 раствора железа (III) аммония сульфата массовой концентрацией 50 г/дм3. Среду хранят в защищенном от света месте при температуре (6 +/- 2) °C не более 7 сут.
Допускается приготовление среды Вильсон-Блера следующим образом: к 100 см3 расплавленного питательного агара добавляют 4 см3 раствора сульфита натрия массовой концентрации 100 г/дм3 и 1 см3 раствора треххлористого железа массовой концентрации 80 г/дм3. Готовая среда хранению не подлежит.
2.4.37. Железосульфитная среда. К 1 дм3 дистиллированной воды добавляют 10,0 г триптона, 0,5 г сульфита натрия, 0,5 г железа (III) цитрата, 15,0 г агара (при приготовлении агаризованной среды) или 1,5 г агара (при приготовлении вязкой среды). Компоненты растворяют при нагревании, после чего охлаждают до температуры (50 +/- 5) °C. Устанавливают pH (7,1 +/- 0,1). Среду разливают в пробирки по 10 — 12 см3 и стерилизуют (15 +/- 1) мин при температуре (121 +/- 1) °C.
Триптон может быть заменен на равноценную навеску сухого панкреатического гидролизата казеина или на десятикратный объем жидкого панкреатического гидролизата казеина. Триптон и 1 дм3 воды могут быть заменены на 1 дм3 мясной воды по ГОСТ 10444.1.
2.4.38. Среда Китт-Тароцци — по ГОСТ 10444.1 со следующим дополнением. Перед употреблением среду регенерируют. Для этого пробирки со средой помещают в водяную баню и прогревают (20 +/- 1) мин при температуре (100 +/- 1) °C. Затем их охлаждают водопроводной водой.
2.5. Окраска препаратов по Граму, бактериальных спор и микроскопирование — по ГОСТ 36425.