ФС.2.5.0133. Фармакопейная статья. Черники обыкновенной побеги

(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 13.03.2024 № 120)

(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XV издание»)

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

Черники обыкновенной побеги Vaccinii myrtilli cormi	ФС.2.5.0133
	Взамен ФС 42-2948-93

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Собранные до окончания плодоношения и высушенные верхушки побегов многолетнего дикорастущего кустарника черники обыкновенной — Vaccinium myrtillus L., сем. вересковых — Ericaceae.

Содержит:

• не менее 3,5% дубильных веществ в пересчете на сухое сырье;

- не менее 0,7% суммы флавоноидов в пересчете на гиперозид в сухом сырье.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

Внешние признаки. Определение проводят в соответствии с ОФС «Травы».

Цельное сырье. Цельные или частично измельченные верхушки побегов длиной не более 150 мм, отдельные листья и стебли (веточки), изредка бутоны, цветки и плоды. Листья очередные, голые, короткочерешковые, тонкие, хрупкие, блестящие, с перистым жилкованием, яйцевидные или эллиптические, в основании округлые или слабосердцевидные, на верхушке острые, иногда притупленные, с мягким шипиком, по краю мелкопильчатые, длиной до 30 мм, шириной до 20 мм. Стебли простые или ветвистые, остроребристые, голые. Цветки (бутоны), одиночные поникающие, расположены в пазухах листьев; венчик зеленовато-белый с красноватым оттенком, кувшинчато-шаровидный с 4 — 5 зубчиками, чашечка без зубчиков, тычинок 8 — 10. Плоды — ягоды, бесформенные, морщинистые, диаметром до 6 мм. На верхушке виден остаток чашечки, которая окружает вздутый диск.

Цвет листьев и стеблей светло-зеленый, зеленый, коричневато-зеленый; плодов — черный, светло- или темно-коричневый. Запах слабый характерный.

Измельченное сырье. Смесь кусочков листьев, стеблей, изредка бутонов, цветков и плодов различной формы, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 5 мм.

Цвет листьев светло-зеленый, зеленый, коричневато-зеленый, цвет стеблей снаружи светло-зеленый, зеленый, коричневато-зеленый, иногда встречаются фрагменты стеблей в продольном сечении, имеющие беловато-желтую внутреннюю поверхность. Цвет плодов — черный, светло- или темно-коричневый. Запах слабый характерный.

Порошок. Смесь кусочков стеблей, листьев, бутонов, цветков и плодов, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 2 мм.

Цвет от светло-зеленого до зеленого и коричневато-зеленого с многочисленными беловато-желтыми вкраплениями. Запах слабый характерный.

Микроскопические признаки. Определение проводят в соответствии с ОФС «Микроскопический и микрохимический анализ лекарственного растительного сырья и лекарственных средств растительного происхождения».

Цельное сырье, измельченное сырье. При рассмотрении микропрепаратов листа с поверхности должны быть видны клетки верхнего и нижнего эпидермиса с тонкими извилистыми стенками. Устьица мелкие, окружены 4 — 6 околоустьичными клетками (аномоцитный тип), расположены в основном на нижней стороне листовой пластинки, на верхней отсутствуют или встречаются единично. На верхней стороне листа по жилкам видны некрупные, одноклеточные, прямые или слегка изогнутые толстостенные волоски с грубобородавчатой поверхностью. На обеих сторонах листа по жилкам и на краевых зубцах встречаются булавовидные железки с многоклеточной двурядной ножкой и овальной многоклеточной головкой с содержимым коричневого цвета. Верхушка листа заканчивается небольшим, закругленным выступом — шипиком-гидатодой с водяными устьицами. Вдоль жилок с нижней стороны листа встречается кристаллоносная обкладка. С обеих сторон листа наблюдается складчатость кутикулы, особенно по крупным жилкам.

При рассмотрении микропрепаратов поперечного среза стебля должно быть видно, что срез неправильный, трех- или четырехгранный, с вытянутыми ребристыми углами. Клетки эпидермиса мелкие, прямоугольные, тонкостенные, практически одинаковые по размерам, покрыты толстой кутикулой. Встречаются редкие одноклеточные игловидные волоски. Колленхима представляет собой 1 — 3 слоя плотно сложенных паренхимных клеток. Паренхима первичной коры имеет хорошо развитую сеть межклетников. В клетках паренхимы наблюдаются многочисленные хлоропласты, встречаются включения в виде крупных призматических кристаллов оксалата кальция. Механические элементы в первичной коре представлены волокнами, которые окружают практически сплошным кольцом флоэмную часть стебля. Флоэма граничит с камбием. Древесина рассеянно-сосудистого типа с цепочками из однорядных сердцевинных лучей. Сердцевина состоит из крупных клеток паренхимы с лигнифицированными сильно утолщенными стенками. Клетки сердцевины содержат большое количество крахмальных зерен.

Порошок. При рассмотрении микропрепарата должны быть видны фрагменты эпидермиса листьев с извилистыми тонкостенными клетками и устьицами аномоцитного типа. По жилкам, а также на фрагментах края листа часто встречаются булавовидные железки с многоклеточной двурядной ножкой и овальной многоклеточной головкой с содержимым коричневого цвета. На верхней стороне листа по жилкам видны грубобородавчатые, толстостенные одноклеточные прямые или изогнутые волоски. Иногда наблюдается складчатость кутикулы, часто встречаются фрагменты жилок с кристаллоносной обкладкой. На фрагментах эпидермиса стебля можно увидеть прямоугольные клетки с прямыми боковыми стенками и устьицами с 6 сопровождающими клетками (аномоцитный тип), у каждой замыкающей клетки сбоку имеется по две узкие клетки, параллельные щели. Встречаются одноклеточные игловидные волоски и реже булавовидные железки. В поперечном сечении стебля видны клетки эпидермиса с толстым слоем кутикулы.

Определение основных групп биологически активных веществ

1. ТСХ. Определение проводят методом ТСХ (ОФС «Тонкослойная хроматография»).

Пластинка. ТСХ пластинка со слоем силикагеля.

Подвижная фаза (ПФ). Муравьиная кислота безводная — вода — этилацетат 8:10:80.

Испытуемый раствор. Аналитическую пробу сырья измельчают до величины частиц, проходящих сквозь сито с размером отверстий 2 мм. Около 1,0 г измельченного сырья помещают в колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 10 мл спирта 70%, нагревают на водяной бане с обратным холодильником в течение 15 мин. После охлаждения полученное извлечение фильтруют через беззольный фильтр.

Раствор стандартного образца рутина. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 5 мг рутина, растворяют в спирте 96% при нагревании на водяной бане и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Раствор стандартного образца гиперозида. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 5 мг гиперозида, растворяют в спирте 96% при нагревании на водяной бане и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Реактив для детектирования 1. Дифенилборной кислоты аминоэтилового эфира раствор 1% в спирте 96%.

Реактив для детектирования 2. Макрогола 400 раствор спиртовой 5%.

На линию старта пластинки полосами длиной 10 мм и шириной 2 мм наносят 10 мкл испытуемого раствора и по 5 мкл раствора рутина и раствора гиперозида. Пластинку с нанесенными пробами сушат на воздухе, помещают в предварительно насыщенную в течение не менее 30 мин камеру с ПФ и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт ПФ пройдет около 80 — 90% длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры и сушат до удаления следов растворителей. Хроматограмму нагревают при температуре 100 — 105 °C в течение 1 — 3 мин. Теплую пластинку опрыскивают реактивом для детектирования 1, сушат, затем опрыскивают реактивом для детектирования 2 и просматривают в УФ-свете при длине волны 365 нм.

Результат

На хроматограмме раствора рутина и гиперозида должна обнаруживаться зона адсорбции желтого, желто-оранжевого или желто-коричневого цвета (рутин) и над ней зона адсорбции желтого, желто-оранжевого или желто-коричневого цвета (гиперозид).

На хроматограмме испытуемого раствора должна обнаруживаться над линией старта зона адсорбции голубого цвета, 2 зоны адсорбции желтого, желто-оранжевого или желто-коричневого цвета — чуть ниже и выше зоны адсорбции рутина, яркая желто-оранжевая зона адсорбции чуть ниже зоны адсорбции гиперозида и менее выраженная желто-оранжевая зона адсорбции на уровне зоны адсорбции гиперозида, 3 зоны адсорбции желтого, желто-оранжевого, желто-коричневого или коричневато-оранжевого цвета выше зоны адсорбции гиперозида, над ними зона адсорбции голубого или синего цвета; допускается наличие других зон адсорбции.

2. Качественная реакция

Аналитическую пробу сырья измельчают до величины частиц, проходящих сквозь сито с размером отверстий 1 мм. Около 0,5 г измельченного сырья кипятят с 10 мл воды в течение 3 мин и после охлаждения фильтруют.

К 3 мл фильтрата прибавляют 3 капли железа(III) аммония сульфата раствора 30%; должно наблюдаться черно-синее окрашивание (дубильные вещества).

ИСПЫТАНИЯ

Влажность. Не более 13,0% (ОФС «Определение влажности лекарственного растительного сырья и лекарственных средств растительного происхождения»).

Зола общая. Не более 4,0% (ОФС «Зола общая»).

Зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте. Не более 0,6% (ОФС «Зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте»).

Измельченность сырья. Определение проводят в соответствии с ОФС «Определение подлинности, измельченности и содержания примесей в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Измельченное сырье: частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями размером 5 мм — не более 5%; частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,5 мм — не более 5%.

Порошок: частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями размером 2 мм — не более 5%; частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,18 мм — не более 5%.

Допустимые примеси. Определение проводят в соответствии с ОФС «Определение подлинности, измельченности и содержания примесей в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Почерневших листьев. Цельное сырье, измельченное сырье: не более 3,5%.

Стеблей, в том числе отделенных при анализе. Цельное сырье: не более 70%.

Органическая примесь. Цельное сырье, измельченное сырье: не более 2%.

Минеральная примесь. Цельное сырье, измельченное сырье, порошок: не более 0,5%.

Тяжелые металлы и мышьяк. В соответствии с ОФС «Определение содержания тяжелых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Радионуклиды. В соответствии с ОФС «Определение содержания радионуклидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Зараженность вредителями запасов. Испытание проводят в соответствии с ОФС «Определение степени зараженности лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов вредителями запасов».

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Сумма флавоноидов. Определение проводят методом спектрофотометрии (ОФС «Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях»).

Исходный раствор. Аналитическую пробу сырья измельчают до величины частиц, проходящих сквозь сито с размером отверстий 1 мм. Около 1,0 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в колбу со шлифом вместимостью 250 мл, прибавляют 150 мл спирта 70%, присоединяют к обратному холодильнику и кипятят на водяной бане в течение 30 мин, периодически встряхивая колбу для смывания частиц сырья со стенок. Колбу с содержимым охлаждают, затем извлечение фильтруют через беззольный фильтр, смоченный спиртом 70%, в мерную колбу вместимостью 200 мл. Фильтр помещают в колбу для экстрагирования и экстракцию 50 мл спирта 70% повторяют еще один раз в течение 30 мин, охлаждают и фильтруют в ту же мерную колбу. Объем извлечений доводят спиртом 70% до метки.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 5,0 мл исходного раствора, прибавляют 5 мл алюминия хлорида раствора 4% в спирте 96%, 0,1 мл уксусной кислоты ледяной и доводят объем раствора спиртом 96% до метки.

Исходный раствор стандартного образца гиперозида. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 0,005 г (точная навеска) фармакопейного стандартного образца гиперозида, прибавляют 20 мл спирта 96% и нагревают на водяной бане до полного растворения. Затем раствор охлаждают, доводят его объем спиртом 96% до метки.

Раствор стандартного образца гиперозида. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 2,0 мл исходного раствора стандартного образца гиперозида, прибавляют 5 мл алюминия хлорида раствора 4% в спирте 96%, 0,1 мл уксусной кислоты ледяной и доводят объем раствора спиртом 96% до метки.

Раствор сравнения испытуемого раствора. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 5,0 мл исходного раствора, прибавляют 0,1 мл уксусной кислоты ледяной и доводят объем раствора спиртом 96% до метки.

Раствор сравнения стандартного образца гиперозида. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 2,0 мл исходного раствора стандартного образца гиперозида и 0,1 мл уксусной кислоты ледяной, доводят объем раствора спиртом 96% до метки.

Измеряют оптическую плотность испытуемого раствора через 40 мин на спектрофотометре при длине волны 410 нм в кювете с толщиной слоя 1 см относительно раствора сравнения.

Параллельно измеряют оптическую плотность раствора стандартного образца гиперозида относительно раствора сравнения стандартного образца гиперозида.

Содержание суммы флавоноидов в пересчете на гиперозид и сухое сырье в процентах (X) вычисляют по формуле:

где A — оптическая плотность испытуемого раствора;

A0 — оптическая плотность раствора стандартного образца гиперозида;

a — навеска сырья, г;

a0 — навеска фармакопейного стандартного образца гиперозида, г;

P — содержание гиперозида в фармакопейном стандартном образце гиперозида, %;

W — влажность сырья, %.

Допускается содержание суммы флавоноидов вычислять с использованием удельного показателя поглощения комплекса гиперозида с хлоридом алюминия в спирте 96% по формуле:

X = \frac{A \cdot 200 \cdot 25 \cdot 100}{380 \cdot a \cdot 5 \cdot (100 - W)} ,

380 — удельный показатель поглощения комплекса гиперозида с алюминия хлоридом в спирте 96% (A_{1\text{см}}^{1\%}) ;

a — навеска сырья, г;

W — влажность сырья, %.

Дубильные вещества. Определение проводят в соответствии с ОФС «Определение содержания дубильных веществ в лекарственном растительном сырье и лекарственных средствах растительного происхождения» (метод 1; навеска сырья 1,0 г, измельченного до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 1 мм; экстрагент — вода.)

УПАКОВКА, МАРКИРОВКА И ПЕРЕВОЗКА

В соответствии с ОФС «Упаковка, маркировка и перевозка лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов».

ХРАНЕНИЕ

В соответствии с ОФС «Хранение лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов».

---