МУК 4.2.2428-08. 4.2. Методы контроля. Биологические и микробиологические факторы. Метод определения бактерий Cronobacter spp. (Enterobacter sakazakii) в продуктах для питания детей раннего возраста. Методические указания

(утв. Роспотребнадзором 29.10.2008)

(ред. от 26.11.2013)

Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере

4.2 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ.

МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ БАКТЕРИЙ CRONOBACTER SPP. (ENTEROBACTER SAKAZAKII) В ПРОДУКТАХ ДЛЯ ПИТАНИЯ ДЕТЕЙ РАННЕГО ВОЗРАСТА

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ МУК 4.2.2428-08

Дата введения 15 декабря 2008 года

1. Разработаны Государственным учреждением «Научно-исследовательский институт питания» Российской Академии медицинских наук.

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.

3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 29 октября 2008 г.

1.1. Настоящие методические указания устанавливают порядок контроля и методы определения бактерий Cronobacter spp. (Enterobacter sakazakii) — возбудителей пищевых токсикоинфекций у детей раннего возраста — при осуществлении государственного санитарно-эпидемиологического надзора, а также при санитарно-эпидемиологическом расследовании вспышек пищевых отравлений и инфекций с пищевым путем передачи.

(в ред. МУК 4.2.3144-13, утв. Роспотребнадзором 26.11.2013)

1.2. Методические указания предназначены для органов и организаций Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, осуществляющих контроль качества и безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов, в т.ч. импортируемых в Российскую Федерацию, а также лабораторную диагностику заболеваний с пищевым путем передачи. Методические указания могут быть использованы другими лабораторными центрами, осуществляющими контроль качества и безопасности пищевых продуктов и аккредитованными в установленном порядке.

1.3. Контролю на наличие бактерий E. sakazakii подлежат детские молочные смеси и продукты прикорма сухие, а также специализированные продукты для лечебного и профилактического питания детей первого года жизни, при анализе которых на наличие патогенных микроорганизмов, в т.ч. сальмонелл, не были выявлены облигатные патогены, принадлежащие к родам Salmonella, Shigella, Yersinia, группам энтеровирулентных Escherichia coli, но выявлялся рост сопутствующей грамотрицательной неспорообразующей микрофлоры.

1.4. Необходимость контроля указанных групп продукции на наличие E. sakazakii обусловлена регистрацией в последние годы документированных спорадических случаев и вспышек септических инфекций и некротизирующего энтероколита у детей 1 года жизни, в первую очередь недоношенных, новорожденных с низкой массой тела или иммунокомпромиссных. Все случаи заболеваний связаны с употреблением детских молочных смесей, контаминированных E. sakazakii, в т.ч. при очень низких уровнях возбудителя (1 — 10 КОЕ/г). При этом установлено, что в первую очередь E. sakazakii может попадать в сухие молочные смеси с контаминированными ингредиентами, добавляемыми после сушки, или из окружающей среды в процессе упаковки готового продукта.

1.5. Предлагаемый метод определения бактерий E. sakazakii в пищевых продуктах, предназначенных для детей раннего возраста, предусматривает определение наличия или отсутствия указанных микроорганизмов в определенной массе (объеме) продукта в соответствии с нормативами СанПиН 2.3.2.1078-01 «Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов», выраженными в альтернативной форме и основанными на существующей системе отбора образцов и оценки результатов анализа по двухклассной системе. Настоящие методические указания также предусматривают определение количества E. sakazakii в пищевых продуктах для детей раннего возраста методом наиболее вероятного числа (НВЧ).

1.6. Обнаружение E. sakazakii в 300 г инстантных молочных смесей и продуктов прикорма сухих, предназначенных для детей 1 года жизни, или в 300 г сухих молочных смесей или специализированных продуктов для детей младше 6 месяцев должно рассматриваться как присутствие патогенных бактерий в исследуемых образцах, свидетельствующее о высокой степени риска для детей данной возрастной категории, и служить основанием для запрета использования такой продукции с принятием соответствующих мер, направленных на обеспечение безопасности продуктов детского питания.

1.7 Методические указания носят рекомендательный характер.

(п. 1.7 введен МУК 4.2.3144-13, утв. Роспотребнадзором 26.11.2013)

(раздел 2 в ред. МУК 4.2.3144-13, утв. Роспотребнадзором 26.11.2013)

2.1. Метод определения бактерий Enterobacter sakazakii (Cronobacter spp.) основан на высеве определенных количеств продукта в жидкие неселективные среды для предварительного обогащения проб, пересеве в жидкие селективные среды для выделения бактерий семейства Enterobacteriaceae с последующим пересевом на поверхность твердых селективных сред, инкубировании посевов, выявлении в этих посевах бактерий, способных расти и образовывать типичные колонии на поверхности селективного агара, с последующим выделением чистой культуры.

Ниже представлена методическая схема определения Cronobacter spp.

Таблица 1

СХЕМА ИССЛЕДОВАНИЯ СУХИХ ДЕТСКИХ СМЕСЕЙ НА НАЛИЧИЕ CRONOBACTER SPP.

2.2. Идентификация чистых культур проводится по совокупности морфологических, биохимических и других признаков, определяющих принадлежность к E.sakazakii (Cronobacter spp.). Подтверждение принадлежности к Cronobacter spp. производится путем получения развернутых биохимических характеристик штаммов. Допускается использование тест-систем для биохимической дифференциации энтеробактерий API 20E, Rapid 20E, ID 32E (ф. "БиоМерье", Франция) и др.

Определение биохимических характеристик, подтверждающих принадлежность выделенных штаммов к роду Cronobacter spp. и дифференцирующих их от близкородственных представителей энтеробактерий Enterobacter cloacae и Pantoea agglomerans, приведены в табл. 2.

3.1 Аппаратура и инструментарий

3.2 Лабораторная посуда и материалы

Колбы плоскодонные конические или круглые разной вместимости ГОСТ 1770-74

Воронки стеклянные ГОСТ 25336-82

Вата медицинская гигроскопическая ГОСТ 5556-81

Пипетки вместимостью 1, 2, 5 и 10 куб. см ГОСТ 29227-91

Пробирки типов П1, П2 ГОСТ 25336-82

Стекла предметные для микропрепаратов ГОСТ 6672-75

Спиртовки лабораторные стеклянные ГОСТ 23932-90

Термометр ртутный с диапазоном измерения от 0 до 100 °C (цена деления шкалы 1 °C) ГОСТ 13646-68

Чашки биологические (Петри) или одноразовые из полимерных материалов ГОСТ 23932-90

                                                 им. Л.А. Тарасевича

Денситометр для бактериальных суспензий типа «Densi-La-Meter» или «Денсимат» ф. «Лахема»,

                                                 "BioMerieux"<br>

3.3 Реактивы и питательные среды

Агар микробиологический ГОСТ 17206-84

Вода дистиллированная ГОСТ 6709-72

D-глюкоза, ч. ГОСТ 6038-79

D-лактоза, 1-водная ТУ 6-09-22-98-79

Маннит

D-сорбит

Рамноза

Калия гидроокись ГОСТ 24363-80

Калий фосфорнокислый однозамещенный, ч. ГОСТ 4198-75

Калий фосфорнокислый двузамещенный 3-водный ГОСТ 2493-75

Кислота соляная, х.ч. ГОСТ 3118-77

Литий хлористый, ч., или х.ч., или ч.д.а. ГОСТ 4328-77

Масло иммерсионное для микроскопии ГОСТ 31739-78

Набор реактивов для окраски по Граму

Натрий-аммоний фосфорнокислый двузамещенный, 4-водный, ч. или х.ч. ГОСТ 4170-78

Натрия гидроокись, ч.д.а. ГОСТ 4328-77

Натрий лимоннокислый, 5,5-водный, ч.д.а. ГОСТ 22280-75

Натрий хлористый, ч., или х.ч., или ч.д.а. ГОСТ 4233-77

Пара-диметиламинобензальдегид, ч. ТУ 6-09-3272-77

Пептон сухой ферментативный для бактериологических целей ГОСТ 13805-76

Спирт этиловый ректификованный технический ГОСТ 18300-87

Спирт этиловый ректификованный ГОСТ 5962-67

Феноловый красный ГОСТ 5853-51

Фенолфталеин                                         ГОСТ 5850-72
Фуксин основной                                      ТУ 6-09-4119-75
Хлороформ технический                                ГОСТ 2-15-76-72

Уксусная кислота ГОСТ 61-75

Сульфаниловая кислота альфа-Нафтол

Цинк порошкообразный ГОСТ 3640

Желатин сухой

Экстракт дрожжевой сухой

Тест-штамм Cronobacter spp. (Enterobacter sakazakii), типичный по культуральным, морфологическим и биохимическим свойствам ГИСК им. Л.А. Тарасевича

(в ред. МУК 4.2.3144-13, утв. Роспотребнадзором 26.11.2013)

Пептонная вода забуференная (сухая)

Триптозный ГРМ-агар и ГРМ-бульон, ФС 42-3377-97 (ГНЦПМ)

Питательный бульон и питательный агар ТУ 10-02-02-789-176-94

Триптон-соевый агар с дрожжевым экстрактом (TSYEA) HiMedia M1214

Триптон-соевый бульон с дрожжевым

Среды Гисса с глюкозой, лактозой, маннитом, рамнозой, дульцитом, адонитом, сахарозой, сорбитом ФС (ЦНИИВС им. И.И. Мечникова НИИ питательных сред)

SIM-arap (сероводород-индол-подвижность)             Difco
Среда Эндо                                           ТУ 9229-072-00419785
Агар желчный фиолетово-красный                       ТУ 9229-072-00419785

Среда Кесслер с глюкозой ГОСТ 30519-97

Бульон Мак-Конки с глюкозой ГОСТ 30519-97

Бульон с желчью, бриллиантовым зеленым и глюкозой ГОСТ 30519-97

Тест-системы биохимические для видовой идентификации API 20E, Rapid 20E, ID 32E, для идентификации Enterobacteriaceae и других грамотрицательных палочек BioMerieux

Набор реактивов для окраски по Граму

Набор для постановки оксидазного теста

модифицированный лаурилсульфат триптозный бульон с ванкомицином (мЛСТ с ванкомицином)

(введено МУК 4.2.3144-13, утв. Роспотребнадзором 26.11.2013)

Enterobacter sakazakii хромогенный агар (ESIA^{TM}) или селективные хромогенные среды аналогичного назначения, соответствующие требованиями стандарта ISO/TS 22964:2006 IDF/RM 210:2006

(введено МУК 4.2.3144-13, утв. Роспотребнадзором 26.11.2013)

Примечание. Допускается использование других питательных сред и диагностических препаратов с аналогичными характеристиками, прошедших регистрацию в РФ в установленном порядке, после процедуры их стандартизации относительно официально утвержденных методов анализа.

Питательные среды и биологические препараты зарубежного производства должны иметь международный сертификат качества ИСО 9000 или EN 29000. Питательные среды и препараты отечественного производства должны вырабатываться по нормативной документации, утвержденной в установленном порядке.

4.1 Приготовление растворов и реактивов

4.2 Приготовление питательных сред

4.2.1. Среды промышленного изготовления, поименованные в п. 3.3, готовят согласно прописям на этикетке или в соответствии с рекомендациями фирмы-изготовителя.

4.2.2. Питательный агар с 5% глюкозы готовят в соответствии с ГОСТ 10444.1-84 «Консервы. Приготовление растворов, красок, индикаторов, питательных сред, применяемых в микробиологическом анализе».

4.2.3. Триптон-соевый бульон с дрожжевым экстрактом, триптон-соевый агар с дрожжевым экстрактом.

Состав сред (г/л): ферментативный гидролизат казеина — 17,0; пептон соевый — 3,0; натрий хлористый — 5,0; фосфат калия однозамещенный — 2,5; глюкоза — 2,5; дрожжевой экстракт — 6,0; агар микробиологический (для TSYEA) — 15,0.

Компоненты растворяют в 1000 куб. см дистиллированной воды, тщательно перемешивают, устанавливают pH 7,3 +/- 0,2 и автоклавируют при 121 °C в течение 15 мин.

Готовые среды разливают в стерильные колбы или пробирки и хранят в защищенных от света условиях при температуре не выше 8 °C.

4.2.4. Среда для определения подвижности: 20 г гидролизата казеина ферментативного, 6 г пептона мясного ферментативного и 5 г агара растворяют в 1000 куб. см дистиллированной воды, устанавливают pH 7,3 +/- 0,2, разливают в пробирки по 5 — 7 куб. см и стерилизуют при 121 °C в течение 15 мин.

4.2.5. Среды Гисса с углеводами: 10 г пептона ферментативного и 5 г натрия хлористого растворяют в 1000 куб. см дистиллированной воды и добавляют 10 г соответствующего углевода. Устанавливают pH 7,1 +/- 0,1, вносят 10 мл индикатора Андреде (также возможно использование индикатора бромкрезолового пурпурного, «ВР» и др.), разливают в пробирки и стерилизуют при 112 °C в течение 20 мин.

4.2.6 Забуференная пептонная вода

(п. 4.2.6 введен МУК 4.2.3144-13, утв. Роспотребнадзором 26.11.2013)

Компоненты растворяют в 1000 куб. см дистиллированной воды, тщательно перемешивают, устанавливают рН 7,0 +/- 0,2 при 25 °С, и автоклавируют при 121 °С в течение 15 мин.

4.2.7 Модифицированный лаурилсульфат триптозный бульон

(мЛСТ) с ванкомицином

(п. 4.2.7 введен МУК 4.2.3144-13, утв. Роспотребнадзором 26.11.2013)

Компоненты растворяют в 1000 куб. см дистиллированной воды, тщательно перемешивают, устанавливают рН 6,8 +/- 0,2 при 25 °С, разливают по 10 мл в пробирки и автоклавируют при 121 °С в течение 15 мин.

Приготовление рабочего раствора ванкомицина: 10 мг ванкомицина растворяют в 10 куб. см дистиллированной воды, тщательно перемешивают и стерилизуют методом мембранной фильтрации. Готовый раствор ванкомицина может храниться при температуре от 0 до 5 °С в течение 15 суток.

Для получения готовой среды раствор ванкомицина вносят в каждую пробирку со стерильной основой мЛСТ в количестве 0,1 куб. см для получения конечной концентрации ванкомицина в готовой среде 10 мкг/куб. см. Готовая среда может храниться при температуре от 0 до 5 °С в течение 1 суток.

4.2.8 Enterobacter sakazakii хромогенный агар (ESIA^{TM})

(п. 4.2.8 введен МУК 4.2.3144-13, утв. Роспотребнадзором 26.11.2013)

Компоненты растворяют в 1000 куб. см дистиллированной воды, тщательно перемешивают, устанавливают рН 7,0 +/- 0,2 при 25 °С и автоклавируют при 121 °С в течение 15 мин. Стерилизованную агаровую среду охлаждают до температуры 44 — 47 °С и разливают по 15 куб. см в стерильные чашки Петри.

Готовая среда может храниться при температуре от 0 до 5 °С в течение 1 суток.

5.1. Отбор и подготовку проб продукции производят в соответствии с ГОСТ 26668-85 «Методы отбора проб для микробиологических анализов», ГОСТ 26669-85 «Продукты пищевые и вкусовые. Подготовка проб для микробиологических анализов», МУК 4.2.577-96 «Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов», ГОСТ Р 51446-99 (ИСО 7218-96). Масса или объем отбираемых проб должны быть достаточными для проведения исследования на патогенные микроорганизмы и минимально вдвое превышать аналитический образец.

5.2. От продукции в потребительской таре пробы отбирают в количестве одной или нескольких единиц в зависимости от массы или объема потребительской тары, с тем чтобы количество было достаточным для проведения анализа. От продукции в транспортной или потребительской таре больших размеров (или неупакованной) пробы отбирают из разных мест с различной глубины, включая поверхность.

5.3. Для микробиологических анализов пробы отбирают до взятия проб на физико-химические и органолептические анализы стерильным инструментом в стерильную посуду.

5.4. Первичный посев исследуемых проб продуктов на патогенные микроорганизмы проводят в соответствии с порядком, изложенным в МУК 4.2.577-96 «Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов».

5.5. При отсутствии роста облигатных патогенов, принадлежащих к родам Salmonella, Shigella, Yersinia, группам энтеровирулентных Escherichia coli, но при обнаружении роста сопутствующей грамотрицательной неспорообразующей микрофлоры в нормируемых навесках исследуемых продуктов, от них отбирают дополнительные пробы (2 навески по 100 г при первичном посеве 100 г продукта, 2 невески по 125 г при первичном посеве 50 г, 2 навески по 137,5 г при первичном посеве 25 г) и анализируют в соответствии с процедурой, изложенной в разделе 6.

6. Проведение анализа

(раздел 6 в ред. МУК 4.2.3144-13, утв. Роспотребнадзором 26.11.2013)

6.1. Пробы продуктов массой 100 г, 125 г или 137,5 г вносят в забуференную пептонную воду (ЗПВ) по п. 4.2.6 в соотношении 1:9 по объему. Посевы термостатируют при температуре (37 +/- 1) °С в течение (18 +/- 2) ч.

6.2. При количественном анализе общая масса (объем) навески должна быть не менее 400 г (куб. см).

Из подготовленной по п. 5 пробы отбирают 4 навески (порции) продукта массой 100 г (куб. см) каждая для анализа. Производят посев каждой из трех навесок (порций) в 900 куб. см ЗПВ и перемешивают.

Из четвертой навески (порции) массой (объемом) 100 г (куб. см) отбирают три навески (порции) продукта массой 10 г (куб. см) и производят посев в 90 куб. см ЗПВ и перемешивают. Из этой же пробы отбирают три навески (порции) продукта массой 1 г (куб. см) и производят посев в 9 куб. см ЗПВ. Для посева (при необходимости — предполагаемом высоком содержании Cronobacter spp. в продукте) меньших количеств продукта — 0,1 и 0,01 г, делают десятикратно убывающие разведения навески массой 10 г, и вносят по 1 куб. см (х 3) соответствующих разведений в 9 куб. см ЗПВ.

Посевы термостатируют при температуре (37 +/- 1) °С в течение (22 +/- 2) ч.

6.3. После термостатирования проб продукта в среде для первичного накопления 0,1 куб. см суспензии пересевают в 10 куб. см модифицированного лаурилсульфат триптозного бульона с ванкомицином (арбитражная среда) или в 10 куб. см одной из жидких селективных сред для выделения бактерий семейства Enterobacteriaceae по ГОСТ 29184-91 - среду Кесслер с глюкозой или буферный глюкозный бульон с бриллиантовым зеленым и желчью, или бульон Мак-Конки. Посевы термостатируют при температуре 44 °С в течение (24 +/- 2) ч.

6.4. Из посевов после термостатирования, независимо от наличия или отсутствия признаков роста, делают пересев штрихом на поверхность хромогенного агара по п. 4.2.8 для выявления Cronobacter spp., содержащего 5 - \text{бромо} - 4 - \text{хлоро} - 3 - \text{индолил} - \alpha - D - \text{глюкопиранозид} (арбитражная среда), или на поверхность фиолетово-красного желчного агара с глюкозой (VRBG-arap). Чашки с агаризованной средой предварительно подсушивают. Посевы термостатируют при температуре 44 °С в течение (24 +/- 2) ч.

6.5. При отсутствии роста на поверхности хромогенного агара для выявления Cronobacter spp. или VRBG-arapa анализ прекращают и дают заключение об отсутствии Cronobacter spp. в исследованной пробе.

6.6. После этапа селективного обогащения проб для обнаружения Cronobacter spp. (п. 6.3) допускается использовать ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в соответствии с процедурой, изложенной в МУК 4.2.2872-11. При получении отрицательных результатов исследований образцов предварительно обогащенных жидких селективных сред с применением ПЦР анализ прекращают и дают заключение об отсутствии Cronobacter spp. в исследованной пробе.

6.7. При обнаружении на чашках хромогенного агара для выявления Cronobacter spp. роста подозрительных культур для дальнейшего изучения отбирают 3 — 5 характерных колоний. При обнаружении на поверхности VRBG-агара роста дальнейшему изучению подвергают все обнаруженные варианты культур, для чего отбирают по 3 — 5 колоний каждого типа.

6.8. Отобранные для исследования 3 — 5 характерных колоний пересевают на поверхность триптон-соевого агара с дрожжевым экстрактом и термостатируют при температуре 25 °С в течение (48 +/- 2) ч. В качестве положительного контроля используют референс-штамм E.sakazakii (Cronobacter spp.), типичный по фенотипическим свойствам.

6.9. Культуры, растущие на триптон-соевом агаре с образованием желтого или желто-коричневого пигмента, подвергают дальнейшему изучению для подтверждения принадлежности к Cronobacter spp.

7. Подтверждение принадлежности выделенных культур к Cronobacter spp. (Enterobacter sakazakii)

(в ред. МУК 4.2.3144-13, утв. Роспотребнадзором 26.11.2013)

7.1. Подтверждение принадлежности выделенных культур проводят с применением тест-систем для биохимической идентификации API 20E, Rapid 20E, ID 32E.

7.2. К бактериям Cronobacter spp. (Enterobacter sakazakii) относят культуры, имеющие характерные признаки роста на дифференциально-диагностических средах, при микроскопии по Граму окрашенные отрицательно, подвижные, оксидазоотрицательные, соответствующие комплексу признаков, указанных в табл. 2, имеющие желтый пигмент, не ферментирующие сорбит и не разжижающие желатину. Бактерии Е. sakazakii обладают альфа-глюкозидазной активностью.

(в ред. МУК 4.2.3144-13, утв. Роспотребнадзором 26.11.2013)

8. Учет результатов

8.1 Результаты оценивают по каждой исследованной пробе отдельно.

8.2. При получении положительного результата подтверждающего анализа дают заключение о выявлении E. sakazakii в исследованной навеске (объеме) продукта.

При получении отрицательного результата дают заключение об отсутствии E. sakazakii в исследованной навеске (объеме) продукта.

8.3 Учет результатов при количественном определении.

Результат оценивают по каждой исследованной пробе продукта отдельно. Регистрируют число положительных результатов в колбах и пробирках с посевами трех последовательно убывающих масс (объемов) продукта, в которых подтверждено наличие бактерий E. sakazakii при пересеве на твердые питательные среды и последующей идентификации. В зависимости от получаемой комбинации положительных и отрицательных результатов для каждого значения массы (объема) продукта составляют трехзначное число (индекс), по которому, используя таблицу, приведенную в Приложении, находят наиболее вероятное число (НВЧ) бактерий E. sakazakii, соответствующее их содержанию в 1 г (куб. см) продукта.

Для окончательного определения НВЧ бактерий E. sakazakii в анализируемом образце учитывают значение первой выбранной для расчета индекса НВЧ массы (объема) продукта с подтвержденным наличием E. sakazakii. Так, в случае если расчет ведется от посева массы (объема) 100 г (куб. см) (х 3) продукта, количество E. sakazakii в 1 г (куб. см) образца рассчитывается путем деления числа НВЧ, взятого из таблицы соответственно установленному индексу, на 100. В случае, когда в качестве первого значения для расчета выбрана масса (объем) 10 г (х 3), количество E. sakazakii в 1 г (куб. см) образца рассчитывается путем деления числа НВЧ из таблицы на 10.

Результат по числу секторов с подтвержденным ростом бактерий E. sakazakii из трех выбранных масс записывается как индекс 3:3:1, что соответствует НВЧ, равному 46 (см. Приложение). Соответственно, наиболее вероятное число бактерий E. sakazakii составляет 0,46 КОЕ в 1 г продукта.

Если значение НВЧ по таблице составляет величину более чем 110 КОЕ (индекс 3:3:3), исследование целесообразно повторить, используя более высокие разведения образца, в которых исходная концентрация продукта будет в 10 или 100 раз ниже, чем в первоначально выбранном значении.

10.1. ГОСТ Р 54005-2010 «Продукты пищевые. Методы выявления и определения количества бактерий семейства Enterobacteriaceae».

10.2. ГОСТ ISO 7218-2011 «Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие требования и рекомендации по микробиологическим исследованиям».

10.3. ГОСТ Р 54004-2010 «Продукты пищевые. Методы отбора проб для микробиологических испытаний».

10.4. ГОСТ 26669-85 «Продукты пищевые и вкусовые. Подготовка проб для микробиологических анализов».

10.9. СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами III — IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней».

10.10. МУК 4.2.577-96 «Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов».

10.11. Стандарт ISO/TS 22964:2006 IDF/RM 210:2006 «Milk and milk products — Detection of Enterobacter sakazakii».