ГОСТ 13496.19-2015. Межгосударственный стандарт. Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Методы определения содержания нитратов и нитритов
(введен в действие Приказом Росстандарта от 02.10.2015 № 1442-ст)
Примечание
Документ включен в Перечень международных и региональных (межгосударственных) стандартов, а в случае их отсутствия — национальных (государственных) стандартов государств — членов Евразийского экономического союза, а также методик исследований (испытаний) и измерений, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимые для применения и исполнения требований технического регламента Таможенного союза «О безопасности зерна» (ТР ТС 015/2011) и осуществления оценки соответствия объектов технического регулирования (Решение Коллегии Евразийской экономической комиссии от 26.11.2024 № 134). Документ введен в действие с 1 января 2017 года. Текст данного документа приведен с учетом поправки, опубликованной в «ИУС», № 10, 2017. Взамен ГОСТ 13496.19-93.
ИСТОРИЯ ИЗМЕНЕНИЙ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИХ АКТОВ
flowchart LR n0["ГОСТ 13496.19-93"]:::rst click n0 "https://bukva.ai/docs/gost-13496-19-93" "ГОСТ 13496.19-93. Межгосударственный стандарт. Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Методы определения содержания нитратов и нитритов (введен в действие Постановлением Госстанда" n1["ГОСТ 13496.19-2015"]:::doc click n1 "https://bukva.ai/docs/standart-gost-13496-19-2015" "ГОСТ 13496.19-2015. Межгосударственный стандарт. Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Методы определения содержания нитратов и нитритов (введен в действие Приказом Росстандарта " n0 --> n1 classDef rst fill:#FFEBEB,stroke:#8B0000,color:#000; classDef doc fill:#EBFFEB,stroke:#006400,color:#000; classDef notEnt fill:#FFFFEB,stroke:#FF8C00,color:#000;
Введен в действие Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 2 октября 2015 г. № 1442-ст
КОРМА, КОМБИКОРМА, КОМБИКОРМОВОЕ СЫРЬЕ
МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ НИТРАТОВ И НИТРИТОВ
Feeds, mixed feeds and raw material. Methods for determination of nitrates and nitrites
Дата введения 1 января 2017 года
Предисловие
Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2-2009 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по международной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены»
Сведения о стандарте
1 РАЗРАБОТАН Открытым акционерным обществом «Всероссийский научно-исследовательский институт комбикормовой промышленности» (ОАО «ВНИИКП»)
2 ВНЕСЕН Межгосударственным техническим комитетом по стандартизации МТК 4 «Комбикорма, белково-витаминные добавки, премиксы»
3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 27 августа 2015 г. № 79-П)
4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 2 октября 2015 г. № 1442-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 13496.19-2015 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 января 2017 г.
5 ВЗАМЕН ГОСТ 13496.19-93
Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок — в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет
1. Область применения
Настоящий стандарт распространяется на корма, комбикорма и комбикормовое сырье и устанавливает ионометрический метод определения содержания нитратов и фотометрические методы определения содержания нитратов и нитритов.
2. Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие межгосударственные стандарты:
ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования
ГОСТ 12.1.005-88 Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны
ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности
ГОСТ 12.1.018-93 Система стандартов безопасности труда. Пожаровзрывобезопасность статического электричества. Общие требования
ГОСТ 12.1.019-79 <*> Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты
<*> На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 12.1.019-2009 «Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты».
ГОСТ 12.2.007.0-75 Система стандартов безопасности труда. Изделия электротехнические. Общие требования безопасности
ГОСТ 12.4.009-83 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание
ГОСТ 12.4.021-75 Система стандартов безопасности труда. Системы вентиляционные. Общие требования
ГОСТ OIML R 76-1-2011 Государственная система обеспечения единства измерений. Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания
ГОСТ 334-73 Бумага масштабно-координатная. Технические условия
ГОСТ 1027-67 Реактивы. Свинец (П) уксуснокислый 3-водный. Технические условия
ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия
ГОСТ 3118-77 Реактивы. Кислота соляная. Технические условия
ГОСТ 3760-79 Реактивы. Аммиак водный. Технические условия
ГОСТ 3773-72 Реактивы. Аммоний хлористый. Технические условия
ГОСТ 4108-72 Реактивы. Барий хлорид 2-водный. Технические условия
ГОСТ 4165-78 Реактивы. Медь (II) сернокислая 5-водная. Технические условия
ГОСТ 4174-77 Реактивы. Цинк сернокислый 7-водный. Технические условия
ГОСТ 4197-74 Реактивы. Натрий азотистокислый. Технические условия
ГОСТ 4204-77 Реактивы. Кислота серная. Технические условия
ГОСТ 4207-75 Реактивы. Калий железистосинеродистый 3-водный. Технические условия
ГОСТ 4217-77 Реактивы. Калий азотнокислый. Технические условия
ГОСТ 4234-77 Реактивы. Калий хлористый. Технические условия
ГОСТ 4328-77 Реактивы. Натрия гидроокись. Технические условия
ГОСТ 4329-77 Реактивы. Квасцы алюмокалиевые. Технические условия
ГОСТ 4330-76 Реактивы. Кадмий хлористый 2,5-водный. Технические условия
ГОСТ 4453-74 Уголь активный осветляющий древесный порошкообразный. Технические условия
ГОСТ 4456-75 Реактивы. Кадмий сернокислый. Технические условия
ГОСТ ИСО 5725-6-2003 <*> Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике
<*> В Российской Федерации действует ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике».
ГОСТ ISO 6498-2014 Корма, комбикорма. Подготовка проб для испытаний
ГОСТ 6552-80 Реактивы. Кислота ортофосфорная. Технические условия
ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия
ГОСТ 10652-73 Реактивы. Соль динатриевая этилендиамин-N,N,N',N'-тетрауксусной кислоты 2-водная (трилон Б). Технические условия
ГОСТ 10929-76 Реактивы. Водорода пероксид. Технические условия
ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия
ГОСТ 13496.0-80 <**> Комбикорма, сырье. Методы отбора проб
<**> В Российской Федерации действует ГОСТ Р ИСО 6497-2011 «Корма для животных. Отбор проб».
ГОСТ 13586.3-83 Зерно. Правила приемки и методы отбора проб
ГОСТ 13979.0-86 Жмыхи, шроты и горчичный порошок. Правила приемки и методы отбора проб
ГОСТ 17681-82 Мука животного происхождения. Методы испытаний
ГОСТ 17792-72 Электрод сравнения хлорсеребряный насыщенный образцовый 2-го разряда
ГОСТ 20490-75 Реактивы. Калий марганцовокислый. Технические условия
ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры
ГОСТ 27262-87 <**> Корма растительного происхождения. Методы отбора проб
<**> В Российской Федерации действует ГОСТ Р ИСО 6497-2011 «Корма для животных. Отбор проб».
ГОСТ 27668-88 Мука и отруби. Приемка и методы отбора проб
ГОСТ 28311-89 Дозаторы медицинские лабораторные. Общие технические требования и методы испытаний
ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования
ГОСТ 29251-91 (ИСО 385-1-84) Посуда лабораторная стеклянная. Бюретки. Часть 1. Общие требования
Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или ежегодному информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты» за текущий год. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.
3. Требования техники безопасности
3.1 При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004, ГОСТ 12.1.018, ГОСТ 12.4.009 и электробезопасности при работе с электроприборами по ГОСТ 12.1.019, ГОСТ 12.2.007.
3.2 Помещение, в котором проводят выполнение испытаний, должно быть снабжено приточно-вытяжной вентиляцией по ГОСТ 12.4.021. Чистота воздуха в рабочей зоне должна соответствовать требованиям ГОСТ 12.1.005.
3.3 Работу с химическими реактивами следует проводить в вытяжном шкафу.
4. Условия проведения испытаний
При подготовке и проведении испытаний должны быть соблюдены следующие условия:
5. Требования к квалификации оператора
К выполнению испытаний и обработке их результатов допускают специалиста, имеющего высшее или среднее специальное образование и опыт работы в химической лаборатории, прошедшего соответствующий инструктаж, освоившего методы в процессе обучения и уложившегося в нормативы оперативного контроля при выполнении процедур контроля точности испытаний.
6. Отбор и подготовка проб
6.1 Отбор проб — по ГОСТ 13496.0, ГОСТ 13586.3, ГОСТ 13979.0, ГОСТ 17681, ГОСТ 27262, ГОСТ 27668.
6.2 Подготовка проб — по ГОСТ ISO 6498.
7. Ионометрический метод определения содержания нитратов
7.1 Сущность метода
Сущность метода заключается в извлечении нитратов экстрагирующим раствором и последующем измерении молярной концентрации нитратов с помощью ионоселективного электрода.
7.2 Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и реактивы
Весы неавтоматического действия по ГОСТ OIML R 76-1 или нормативной документации государства, принявшего данный стандарт, с пределами допускаемой абсолютной погрешности +/- 0,001 г.
Иономер, pH-метр, милливольтметр, нитратомер или приборы с микропроцессорами, или другие аналогичные приборы с погрешностью измерений электродвижущей силы (ЭДС) не более 5 мВ.
Электрод ионоселективный нитратный с линейной функцией в диапазоне от c(NO_{3^{-}}) = 10^{- 4} до c(NO_{3^{-}}) = 10^{- 1} (от pC_{NO_{3 -}} = 1 до pC_{NO_{3 -}} = 4 ).
Электрод вспомогательный хлорсеребряный насыщенный образцовый 2-го разряда по ГОСТ 17792.
Гомогенизатор, блендер или измельчитель.
Баня водяная с регулируемой температурой.
Аппарат для встряхивания или ротатор.
Мешалка лабораторная электромеханическая или магнитная.
Бумага масштабно-координатная по ГОСТ 334.
Шкаф сушильный лабораторный с регулируемой температурой.
Воронки для фильтрования ВФ-1-56(75) ХС по ГОСТ 25336.
Колбы мерные 1(2)-50(100, 1000)-2 по ГОСТ 1770.
Бюретки 1(2,3)-1(2)-2-10(20)-0,1 по ГОСТ 29251.
Стаканы лабораторные В(Н)-1(2)-50(500, 1000) ТХС по ГОСТ 25336.
Цилиндры мерные 1(2, 2а, 3, 4)-50-2 по ГОСТ 1770 или дозатор по ГОСТ 28311 вместимостью 50 см3 с погрешностью дозирования не более 0,5 см3.
Пипетки градуированные 1(2, 3, 5)-1(1а, 2, 2а)-1(2)-2(5, 10) по ГОСТ 29227.
Склянки с притертыми пробками.
Палочки стеклянные лабораторные длиной 20 — 25 см.
Водорода пероксид по ГОСТ 10929, х.ч. или ч.д.а.
Кислота серная по ГОСТ 4204, ч.д.а.
Квасцы алюмокалиевые по ГОСТ 4329, ч.д.а.
Калий азотнокислый по ГОСТ 4217, х.ч.
Калий марганцовокислый по ГОСТ 20490, х.ч.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
Межгосударственные стандартные образцы (МСО) состава корма, аттестованные по массовой доле нитратов.
Примечание - Допускается применение других средств измерений с метрологическими характеристиками и вспомогательные устройства с техническими характеристиками, а также реактивов и материалов по качеству не хуже вышеуказанных.
7.3 Подготовка к испытанию
7.3.1 Растворы реактивов хранят в стеклянной посуде с притертыми пробками или в полиэтиленовых флаконах с завинчивающимися крышками при температуре от 15 °C до 25 °C неограниченное время, если настоящим стандартом не установлены другие требования. При появлении осадка, хлопьев, изменении окраски растворы заменяют свежеприготовленными.
7.3.2 Приготовление экстрагирующих растворов
При определении нитратов в кормах, кроме трав семейства капустных, используют экстрагирующий раствор алюмокалиевых квасцов с массовой долей 1%. Для этого взвешивают (10,00 +/- 0,01) г алюмокалиевых квасцов, переносят в стакан вместимостью 1000 см3 и растворяют при нагревании на водяной бане в 990 см3 дистиллированной воды.
При определении нитратов в травах семейства капустных для приготовления экстрагирующего раствора взвешивают (10,00 +/- 0,01) г алюмокалиевых квасцов, переносят в стакан вместимостью 1000 см3 и растворяют при нагревании на водяной бане в 990 см3 дистиллированной воды. Раствор охлаждают до комнатной температуры, добавляют (1,000 +/- 0,001) г марганцовокислого калия и 0,6 см3 концентрированной серной кислоты. После растворения всех компонентов смесь количественно переносят в мерную колбу вместимостью 1000 см3, доводят объем раствора до метки дистиллированной водой.
7.3.3 Приготовление основного раствора азотнокислого калия
c(KNO3) = 0,1 моль/дм3 (pC_{NO_{3 -}} = 1)
Взвешивают (10,110 +/- 0,001) г азотнокислого калия, высушенного в сушильном шкафу при температуре от 100 °C до 105 °C до постоянной массы, переносят в мерную колбу вместимостью 1000 см3 и растворяют в экстрагирующем растворе (см. 7.3.2), доводя объем в колбе до метки тем же раствором.
7.3.4 Приготовление градуировочных растворов
7.3.4.1 Градуировочные растворы готовят из основного раствора азотнокислого калия (см. 7.3.3), используя для разбавления экстрагирующий раствор (см. 7.3.2).
Растворы готовят в день проведения испытания.
7.3.4.2 Приготовление градуировочного раствора c(NO_{3^{-}}) = 0,01\text{моль}/\text{дм}^{3}
В мерную колбу вместимостью 100 см3 отбирают пипеткой 10 см3 основного раствора, доводят до метки и перемешивают.
7.3.4.3 Приготовление градуировочного раствора c(NO_{3^{-}}) = 0,001\text{моль}/\text{дм}^{3}
Раствор, приготовленный по 7.3.4.2, разбавляют 10 раз и перемешивают.
7.3.4.4 Приготовление градуировочного раствора c(NO_{3^{-}}) = 0,0001\text{моль}/\text{дм}^{3}
Раствор, приготовленный по 7.3.4.3, разбавляют 10 раз и перемешивают.
7.3.5 Подготовка электродов к работе и их проверка
7.3.5.1 Подготовка мембранного ионселективного нитратного электрода и вспомогательного электрода к работе
Мембранный ионселективный нитратный электрод и вспомогательный электрод сравнения готовят к работе в соответствии с прилагаемыми к ним инструкциями.
В промежутках между исследованиями нитратный электрод погружают в раствор азотнокислого калия c(NO_{3^{-}}) = 0,0001\text{моль}/\text{дм}^{3} (pC_{NO_{3 -}} = 4) .
Если перерывы в работе составляют сутки и более, его хранят в растворе азотнокислого калия c(NO_{3^{-}}) = 0,001\text{моль}/\text{дм}^{3} (pC_{NO_{3 -}} = 3) .
При перерывах в работе (более пяти дней электрод хранят на воздухе, а перед началом работы вымачивают 1 — 2 ч в растворе азотнокислого калия c(NO_{3^{-}}) = 0,1\text{моль}/\text{дм}^{3} (pC_{NO_{3 -}} = 1) .
Во всех случаях перед началом измерений электрод промывают водой не менее трех раз.
Вспомогательный электрод сравнения в перерывах между исследованиями погружают в стакан с дистиллированной водой.
7.3.5.2 Проверка правильности работы электродной пары
Правильность работы электродной пары (мембранного ионселективного нитратного и вспомогательного электродов) следует начинать с проверки линейности характеристики нитратного ионоселективного электрода в диапазоне от 1 до 4 (от pC_{NO_{3 -}} = 1 до pC_{NO_{3 -}} = 4 ) и наклона, который должен составлять (56 +/- 3) мВ на единицу pC_{NO_{3 -}} .
Проверку правильности работы электродной пары можно проводить с помощью МСО корма, аттестованного на массовую долю нитратов. Допустимое отклонение полученного результата от аттестованного значения рассчитывают по 7.5.4. В случае превышения допустимого отклонения необходимо подбирать другие пары электродов.
При отсутствии МСО корма проверку правильности работы электродной пары проводят в соответствии с инструкцией к ионселективному нитратному электроду.
7.4 Проведение испытания
7.4.1 Приготовление экстрактов
7.4.1.1 Приготовление экстрактов проб, высушенных до воздушно-сухого состояния
Масса навески пробы зависит от предполагаемого содержания нитратов. Для кормов с высоким содержанием нитратов (кормовые травы, силос, сенаж, жмыхи, шроты, премиксы) масса навески должна быть 1 — 2 г с записью результата до третьего десятичного знака, для кормов со средним и низким содержанием нитратов (силос, сенаж, сено злаковых культур, комбикорма) — (5,00 +/- 0,01) г.
Навески помещают в емкости вместимостью 100 или 200 см3. Приливают 50 см3 экстрагирующего раствора, закрывают крышкой или пробкой и перемешивают 3 мин с помощью мешалки или ротора либо гомогенизируют 1 — 2 мин.
Для травянистых кормов при отсутствии гомогенизатора допускается нагревание суспензии в кипящей водяной бане в течение 15 мин с последующим охлаждением и доведением до первоначального объема экстрагирующим раствором.
В полученных суспензиях измеряют молярную концентрацию нитрат-ионов.
Для жмыхов и шротов допускается взятие навески массой (5,00 +/- 0,01) г, но при этом необходимо дополнительное пятикратное разбавление суспензии экстрагирующим раствором или применение для измерения молярной концентрации нитрат-ионов ионоселективного электрода, на мембрану которого надевают гидратцеллюлозную пленку.
При испытании комбикормов с использованием нитратомеров навеску массой (5,00 +/- 0,01) г разводят в 45 см3 экстрагирующего раствора.
7.4.1.2 Приготовление экстрактов проб с высокой влажностью (от 50% до 95%)
Из предварительно подготовленных проб кормов берут навески массой (10,00 +/- 0,01) г, помещают в емкость вместимостью 100 или 200 см3. Приливают 50 см3 раствора экстрагирующего раствора, закрывают крышкой или пробкой и перемешивают 3 мин с помощью мешалки или ротора либо гомогенизируют в течение 1 мин.
При испытании трав (кроме трав семейства капустных) берут навески массой (10,00 +/- 0,01) г, помещают в емкость вместимостью 100 или 200 см3. Приливают 50 см3 экстрагирующего раствора, закрывают крышкой или пробкой и перемешивают 3 мин с помощью мешалки или ротора либо гомогенизируют в течение 1 — 2 мин. При отсутствии гомогенизатора измельченную пробу с экстрагирующим раствором нагревают в кипящей водяной бане в течение 15 мин, охлаждают и доводят до первоначального объема экстрагирующим раствором.
При испытании трав семейства капустных (рапс, редька, горчица, свербига и т.д.) или кормов, содержащих эти травы, берут навески массой (10,00 +/- 0,01) г, помещают в емкость вместимостью 100 или 200 см3. Приливают 50 см3 экстрагирующего раствора, закрывают крышкой или пробкой и перемешивают 3 мин с помощью мешалки или ротора. Затем при помешивании добавляют по каплям 0,5 — 1,0 см3 33%-ного раствора перекиси водорода до обесцвечивания суспензии.
В полученных суспензиях измеряют молярную концентрацию нитрат-ионов.
Для сочных кормов с целью ускорения и снижения трудоемкости анализа можно использовать сок. Пробу, подготовленную для анализа, пропускают через соковыжималку. Полученный сок собирают в одну емкость и перемешивают, отбирают пипеткой (10,0 +/- 0,1) см3 сока, помещают в емкость вместимостью 100 или 200 см3, прибавляют 50 см3 экстрагирующего раствора и перемешивают.
В полученных растворах измеряют молярную концентрацию нитрат-ионов.
7.4.2 Проведение измерений
7.4.2.1 Молярную концентрацию нитрат-ионов измеряют в единицах pC_{NO_{3 -}} по шкале предварительно отградуированного иономера или в милливольтах с последующим определением значения единиц pC_{NO_{3 -}} по градуировочному графику, построенному по результатам измерения ЭДС электродной пары в градуировочных растворах. Молярную концентрацию нитрат-ионов можно измерять на приборах, имеющих преобразователи значения молярной концентрации нитрат-ионов в градуировочном растворе в значение их массовой доли в анализируемой пробе.
Перед измерениями и после градуировки прибора электроды тщательно ополаскивают дистиллированной водой, промокают фильтровальной бумагой и погружают в суспензию или раствор с анализируемой пробой. Показания прибора считывают не ранее, чем через 1 мин после прекращения заметного дрейфа показаний прибора. При переходе от одного испытания к другому электроды ополаскивают дистиллированной водой и промокают фильтровальной бумагой. Температура анализируемых растворов или суспензий и градуировочных растворов должна быть одинаковой с температурой окружающей среды.
7.4.2.2 При измерении концентрации нитрат-ионов в единицах pC_{NO_{3 -}} прибор ежедневно настраивают в режиме «pX» по градуировочным растворам c(NO_{3^{-}}) = 0,0001\text{моль}/\text{дм}^{3} (pC_{NO_{3 -}} = 4) и c(NO_{3^{-}}) = 0,01\text{моль}/\text{дм}^{3} (pC_{NO_{3 -}} = 2) , используя раствор c(NO_{3^{-}}) = 0,001\text{моль}/\text{дм}^{3} для контроля. Отклонения значений pC_{NO_{3 -}} от номинального значения не должны превышать 0,02 единиц pC_{NO_{3 -}} . Настройку прибора проверяют по градуировочным растворам не менее трех раз в течение рабочего дня, используя каждый раз свежие порции градуировочных растворов. Перед каждой проверкой настройки иономера нитратный ионоселективный электрод выдерживают в градуировочном растворе c(NO_{3^{-}}) = 0,0001\text{моль}/\text{дм}^{3} в течение 3 — 4 мин.
Массовую долю нитрат-ионов определяют по значениям pC_{NO_{3 -}} градуировочных растворов с помощью таблиц А.1 - А.7 приложения А, составленных с учетом массовой доли влаги в различных кормах.
7.4.2.3 При измерении молярной концентрации нитрат-ионов в режиме «мВ» определение проводят, используя градуировочный график и снимая показания ЭДС в милливольтах.
По оси ординат откладывают значения ЭДС в милливольтах, а по оси абсцисс — значения pC_{NO_{3 -}} , соответствующие концентрациям градуировочных растворов азотнокислого калия.
По градуировочному графику находят значения pC_{NO_{3 -}} для анализируемой пробы и с помощью формул (1), (2) определяют массовую долю нитратов.
7.4.2.4 При работе с приборами, имеющими преобразователи значения pC_{NO_{3 -}} или значения, выраженные в молях в 1 дм3, в значения массовой концентрации нитрат-ионов в анализируемой пробе, настройку проводят непосредственно в единицах массовой доли нитрата, миллиграмм на килограмм, по раствору известной концентрации с учетом разведения.
1 При анализе кормов с очень низким содержанием нитратов необходимо дополнительно для построения градуировочного графика готовить раствор c(NO_{3^{-}}) = 0,00001\text{моль}/\text{дм}^{3} (pC_{NO_{3 -}} = 5) , при этом градуировочная кривая может отклоняться от прямой на 30 — 60°.
2 При определении нитратов в комбикормах с добавлением соли (хлористого натрия) следует в градуировочные растворы ввести соответствующее количество хлористого натрия. При добавке соли в комбикорма в количестве 1% берут 1 г; 0,5% — 0,5 г; 0,2% — 0,2 г хлористого натрия. Навеску хлористого натрия помещают в мерную колбу вместимостью 1000 см3, добавляют 10 г алюмокалиевых квасцов и растворяют в дистиллированной воде, доводя раствор до метки.
Эти растворы используют вместо экстрагирующего при приготовлении градуировочных растворов.
7.5 Обработка результатов
7.5.1 При испытании проб, высушенных до воздушно-сухого состояния, массовую долю нитратов X, мг/кг, вычисляют по формуле
X = \frac{V \cdot 10^{- pC_{NO3 -}} \cdot 62 \cdot 10^{6}}{10^{3} \cdot m} , (1)
где V — объем экстрагирующего раствора, см3;
10^{- pC_{NO3 -}} — молярная концентрация нитрата в экстракте, моль/дм3;
62 — молярная масса иона NO_{3^{-}} , г/моль;
106 — коэффициент согласования единиц массы;
103 — коэффициент согласования единиц объема;
При разбавлении экстракта результат анализа увеличивают во столько, во сколько раз было разбавление.
7.5.2 При испытании проб с высокой влажностью массовую долю нитратов X, мг/кг, вычисляют по формуле
X = \frac{(V + \frac{W \cdot 0,01 \cdot m}{1}) \cdot 10^{- pC_{NO3 -}} \cdot 62 \cdot 10^{6}}{10^{3} \cdot m} , (2)
где V — объем экстрагирующего раствора, см3;
W — массовая доля воды в пробе, %;
0,01 — коэффициент перевода процентов в доли единиц;
10^{- pC_{NO3 -}} — молярная концентрация нитрата в экстракте, моль/дм3;
62 — молярная масса иона NO_{3^{-}} , г/моль;
106 — коэффициент согласования единиц массы;
103 — коэффициент согласования единиц объема.
7.5.3 Массовую долю нитратов можно определить без использования формул (1) или (2), применяя таблицы А.1 - А.7 приложения А, предназначенные для перевода значений pC_{NO_{3 -}} в массовую долю нитратов в анализируемой пробе. Данные таблиц составлены с учетом массовой доли влаги в различных кормах.
7.5.4 За окончательный результат принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных испытаний, выполненных в условиях повторяемости и удовлетворяющих условию приемлемости по 10.1. Результаты вычисляют до первого десятичного знака и округляют до целого числа.
При наличии МСО корма допускается проведение единичного испытания анализируемой пробы. В этом случае результат считают приемлемым, если выполняется условие
|X — Xа| <= 3,11 + 0,15·Xа, (3)
где X — определенная массовая доля нитратов в МСО корма, мг/кг;
Xа — аттестованное значение массовой доли нитратов в МСО корма, мг/кг;
3,11 — постоянная величина, мг/кг;
8. Фотометрический метод определения содержания нитратов и нитритов после восстановления кадмием
8.1 Сущность метода
Сущность метода заключается в извлечении нитратов и нитритов раствором хлористого кадмия и бария, осветлении экстракта в щелочной среде и фотометрическом определении массовой доли нитритов в виде окрашенного соединения, образующегося при их взаимодействии с сульфаниламидом и N-1-нафтилэтилен-диамин-дигидрохлоридом. Общую массовую долю нитратов и нитритов определяют после восстановления нитратов до нитритов на кадмиевой колонке. Массовую долю нитратов получают путем вычитания из общей массовой доли нитратов и нитритов массовой доли нитритов в анализируемой пробе.
8.2 Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и реактивы
Весы неавтоматического действия по ГОСТ OIML R 76-1 или нормативной документации государства, принявшего данный стандарт, с пределами допускаемой абсолютной погрешности +/- 0,001 г и специального класса точности с пределами допускаемой абсолютной погрешности +/- 0,0005 г.
pH-метр с диапазоном измерений активности водородных ионов от 0 до 14 ед. pH и пределом допускаемой абсолютной погрешности измерения не более 0,05 ед. pH.
Спектрофотометр или фотоэлектроколориметр, обеспечивающий измерение оптической плотности при длине волны 530 нм.
Гомогенизатор, блендер или измельчители различного типа.
Шкаф сушильный лабораторный с регулируемой температурой.
Аппарат для встряхивания или ротатор.
Мешалка лабораторная электромеханическая или магнитная.
Колбы мерные 1(2)-100(500, 1000)-2 по ГОСТ 1770.
Цилиндры мерные 1(2,2а,3,4)-25(100,500)-2 по ГОСТ 1770.
Пипетки градуированные 1(2,3,5)-1(1а,2,2а)-1(2)-2(5,10) по ГОСТ 29227.
Стаканы лабораторные В(Н)-1(2)-250 ТХС по ГОСТ 25336.
Воронки стеклянные В-36(56) ХС по ГОСТ 25336.
Колбы конические с широким горлом Кн-1(2)-250-34/35(45/40) ТХС по ГОСТ 25336.
Склянки с притертыми пробками.
Пробки стеклянные или резиновые.
Бюретки 1-1-2-2(10)-0,1 по ГОСТ 29251.
Палочки стеклянные с тефлоновой или такой же по качеству пластмассовой трубкой на конце.
Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026.
Колонка редуцирующая (см. рисунок 1).
Кислота соляная по ГОСТ 3118, х.ч.
Кадмий сернокислый по ГОСТ 4456, х.ч.
Кадмий хлористый по ГОСТ 4330, х.ч.
Медь сернокислая по ГОСТ 4165, х.ч.
Аммоний хлористый по ГОСТ 3773, ч.ч.
Бария хлорид 2-водный по ГОСТ 4108, х.ч.
Аммиак водный по ГОСТ 3760, х.ч.
Натрия гидроокись по ГОСТ 4328, х.ч.
Соль динатриевая этилендиамин-N',N',N',N'-тетрауксусной кислоты по ГОСТ 10652, х.ч.
Сульфаниламид (белый стрептоцид, не растворимый в воде) с содержанием основного вещества 99,8%.
N-1-нафтилэтилендиамин-дигидрохлорид, ч.
Натрий азотистокислый по ГОСТ 4197, х.ч.
Калий азотнокислый по ГОСТ 4217, х.ч.
Цинк в форме палочек или гранул.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
Примечание - Допускается применение других средств измерений с метрологическими характеристиками и вспомогательных устройств с техническими характеристиками, а также реактивов и материалов по качеству не хуже вышеуказанных.
8.3 Подготовка к испытанию
8.3.1 Растворы реактивов хранят в стеклянной посуде с притертыми пробками или в полиэтиленовых флаконах с завинчивающимися крышками при температуре от 15 °C до 25 °C неограниченное время, если настоящим стандартом не установлены другие требования. При появлении осадка, хлопьев, изменении окраски растворы заменяют свежеприготовленными.
8.3.2 Приготовление экстрагирующего раствора
В мерной колбе вместимостью 1000 см3 растворяют в 500 см3 дистиллированной воды (50,00 +/- 0,01) г хлористого кадмия и (50,00 +/- 0,01) г хлористого бария, доводят раствор соляной кислотой до значения 1 ед. pH и объем раствора доводят водой до метки.
8.3.3 Приготовление буферного раствора
В мерной колбе вместимостью 1000 см3 растворяют в 500 см3 дистиллированной воды (50,00 +/- 0,01) г хлористого аммония. Гидроокисью аммония доводят раствор до значения 9,6 — 9,7 ед. pH и объем раствора доводят водой до метки.
8.3.4 Приготовление раствора гидроокиси натрия c(NaOH) = 2,5 моль/дм3
В мерной колбе вместимостью 1000 см3 растворяют в небольшом количестве дистиллированной воды (100,00 +/- 0,01) г гидроокиси натрия и доливают раствор водой до метки.
8.3.5 Приготовление раствора соляной кислоты c(HCl) = 2 моль/дм3 и c(HCl) = 0,1 моль/дм3
Для приготовления раствора соляной кислоты c(HCl) = 2 моль/дм3 172 см3 соляной кислоты разбавляют дистиллированной водой в мерной колбе вместимостью 1000 см3 и доводят объем раствора в колбе до метки.
Для приготовления раствора соляной кислоты c(HCl) = 0,1 моль/дм3 8,6 см3 соляной кислоты разбавляют дистиллированной водой в мерной колбе вместимостью 1000 см3 и доводят объем раствора в колбе до метки.
8.3.6 Приготовление раствора динатриевой соли этилендиамин-N',N',N',N'-тетрауксусной кислоты (трилона Б)
В мерной колбе вместимостью 1000 см3 растворяют в дистиллированной воде (33,50 +/- 0,01) г трилона Б и доводят объем в колбе водой до метки.
8.3.7 Приготовление раствора сульфаниламида
В 250 см3 соляной кислоты, разбавленной дистиллированной водой в соотношении 1:1 по объему, растворяют (1,250 +/- 0,001) г сульфаниламида.
Срок хранения раствора — 1 - 2 мес.
8.3.8 Приготовление раствора N-1-нафтилэтилендиамин-дигидрохлорида
В мерной колбе вместимостью 100 см3 растворяют в дистиллированной воде (0,100 +/- 0,001) г N-1-нафтилэтилендиамин-дигидрохлорида, доливают водой до метки. Раствор хранят в плотно закрывающейся склянке из темного стекла в холодильнике.
Срок хранения раствора при температуре от 4 °C до 6 °C — от 1 до 2 нед.
8.3.9 Приготовление растворов азотистокислого натрия
8.3.9.1 Приготовление основного раствора азотистокислого натрия
В мерной колбе вместимостью 1000 см3 растворяют в дистиллированной воде (0,150 +/- 0,001) г азотистокислого натрия, предварительно высушенного до постоянной массы при температуре от 110 °C до 120 °C, и доводят водой объем раствора до метки.
8.3.9.2 Приготовление рабочего раствора азотистокислого натрия
Для приготовления рабочего раствора, содержащего 1 мкг нитрит-ионов (NO_{2^{-}}) в 1 см3, к 10 см3 основного раствора (см. 8.3.9.1), помещенного в мерную колбу вместимостью 1000 см3, добавляют 20 см3 буферного раствора (см. 8.3.3) и доводят объем раствора водой до метки.
8.3.10 Приготовление растворов азотнокислого калия
8.3.10.1 Приготовление основного раствора азотнокислого калия
В мерной колбе вместимостью 500 см3 растворяют в дистиллированной воде (0,7340 +/- 0,0005) г азотнокислого калия, предварительно высушенного при температуре от 110 °C до 120 °C до постоянной массы, и доводят водой объем раствора до метки.
8.3.10.2 Приготовление рабочего раствора азотнокислого калия
Для приготовления рабочего раствора, содержащего 4,5 мкг нитрат-ионов (NO_{3^{-}}) в 1 см3 к 5 см3 основного раствора (см. 8.3.10.1), помещенного в мерную колбу вместимостью 1000 см3, добавляют 20 см3 буферного раствора (см. 8.3.3) и доводят объем раствора водой до метки.
8.3.11 Приготовление раствора сернокислого кадмия массовой концентрации 200 г/дм3
В мерной колбе вместимостью 1000 см3 растворяют в дистиллированной воде (200,01 +/- 0,01) г сернокислого кадмия и доливают до метки водой.
8.3.12 Построение градуировочного графика
8.3.12.1 В шесть мерных колб вместимостью 100 см3 приливают из пипетки (или бюретки) 0; 2; 12; 20; 30; 40 см3 рабочего раствора азотистокислого натрия (см. 8.3.9.2), доводят объем до 60 см3 водой.
8.3.12.2 Окрашивают полученные растворы и измеряют оптическую плотность окрашенных растворов, как указано в 8.4.3.
8.3.12.3 По полученным данным строят градуировочный график, откладывая по оси абсцисс значения массовой концентрации нитритов в фотометрируемом растворе: 0; 2; 12; 20; 30; 40 мкг в 100 см3, а по оси ординат — соответствующие им значения оптической плотности.
8.3.13 Подготовка редуцирующей кадмиевой колонки
8.3.13.1 Приготовление гранулированного кадмия с диаметром гранул 0,3 — 0,8 мм
В стакан вместимостью 250 см3 наливают 20 см3 раствора сернокислого кадмия (см. 8.3.11), опускают в него несколько палочек или гранул цинка и выдерживают в течение 24 ч, периодически снимая выделяющую кадмиевую губку стеклянной палочкой с тефлоновой трубкой. После того как выделение кадмия прекратится, вынимают цинковые палочки и сливают жидкость с кадмиевой губки настолько, чтобы она лишь покрывала кадмий. Кадмий в стакане два — три раза промывают декантацией дистиллированной водой, затем переносят при помощи 400 см3 раствора соляной кислоты c(HCl) = 0,1 моль/дм3 в гомогенизатор и измельчают в течение 10 с до размера гранул диаметром примерно 0,3 — 0,8 мм. После этого снова переносят в стакан и оставляют на несколько часов, периодически перемешивая стеклянной палочкой, чтобы удалить пузырьки воздуха. Затем кадмий переносят в коническую колбу вместимостью 250 см3, жидкость декантируют и добавляют такое количество раствора соляной кислоты c(HCl) = 2 моль/дм3, чтобы она покрыла гранулят. Круговыми движениями несколько раз поворачивают колбу, дают кадмию осесть и промывают его дистиллированной водой до исчезновения следов хлорида. Добавляют раствор сернокислой меди из расчета 2,5 см3 на 1 г кадмия, вращая колбу в течение 1 мин кругообразными движениями. Затем сливают раствор и немедленно начинают промывание кадмия дистиллированной водой методом декантации. Промывание повторяют, следя за тем, чтобы кадмий все время был покрыт водой.
8.3.13.2 Приготовление колонки с кадмием
На дно редуцирующей колонки помещают стеклянную вату слоем около 2 см, заполняют ее водой и затем переносят кадмий, следя за тем, чтобы он как можно меньше соприкасался с воздухом. Высота заряда должна достигать 13 — 15 см. Необходимо следить за тем, чтобы в слое стеклянной ваты и между частицами кадмия не оставалось пузырьков воздуха и столбик кадмия был постоянно покрыт жидкостью.
Через свежеприготовленный кадмиевый столбик пропускают смесь, состоящую из 750 см3 дистиллированной воды, 225 см3 рабочего раствора азотнокислого калия, 20 см3 буферного раствора и 20 см3 раствора трилона Б, со скоростью 6 см3/мин, после чего промывают водой до полного удаления нитритов.
1 — резервуар вместимостью 50 см3; 2 — колонка с кадмием; 3 — стеклянная вата; 4 — кран
Рисунок 1 — Редуцирующая кадмиевая колонка
8.3.13.3 Проверка редуцирующей способности кадмиевой колонки
Редуцирующую способность колонки проверяют до и после проведения серии испытаний. Для этого в приемник колонки вводят 20 см3 рабочего раствора азотнокислого калия и добавляют 5 см3 буферного раствора. Скорость прохождения раствора через столбик должна быть 6 см3/мин. Элюат собирают в мерную колбу вместимостью 100 см3. Как только приемник освободится, стенки дважды омывают 15 см3 дистиллированной воды и наполняют его водой. Собранный элюат в мерной колбе доливают до метки дистиллированной водой и взбалтывают.
Отбирают 20 см3 элюата, переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3, доливают до 60 см3 водой, окрашивают и измеряют оптическую плотность, как указано в 8.4.3.2.
По градуировочному графику находят массовую концентрацию нитритов в разбавленном элюате в микрограммах на 100 см3 и определяют редуцирующую способность колонки. Если она ниже 90%, колонку следует регенерировать.
8.3.13.4 Регенерирование колонки
5 см3 раствора трилона Б и 2 см3 раствора соляной кислоты c(HCl) = 0,1 моль/дм3 разбавляют водой в мерной колбе вместимостью 100 см3, доводят объем в колбе до метки и пропускают через колонку. Затем колонку промывают водой.
8.3.13.5 Промывка кадмиевой колонки
Перед началом работы и после каждого анализа кадмиевую колонку промывают 25 см3 раствора соляной кислоты c(HCl) = 0,1 моль/дм3, затем 50 см3 дистиллированной воды и 25 см3 буферного раствора, разбавленного водой в соотношении 1:9 по объему, и 50 см3 воды.
8.4 Проведение испытания
8.4.1 Приготовление экстрактов
Навеску корма, высушенного до воздушно-сухого состояния, массой 1 — 2 г, или навеску корма с высокой влажностью массой 5 г, или навеску травянистого корма массой 5 г, с записью результата до третьего десятичного знака, помещают в мерные колбы вместимостью 100 см3, добавляют по 40 см3 экстрагирующего раствора (см. 8.3.2).
При испытании травянистых кормов колбу помещают на кипящую водяную баню на 15 мин.
Затем в колбы добавляют по 40 см3 воды, взбалтывают и оставляют на 1 ч, периодически перемешивая. При использовании ротатора или электромеханической мешалки достаточно перемешивания в течение 3 — 5 мин.
К полученным суспензиям добавляют по 8 см3 раствора гидроокиси натрия c(NaOH) = 2,5 моль/дм3, доливают до метки водой и немедленно фильтруют через фильтровальную бумагу быстрой фильтрации (ФБ).
8.4.2 Восстановление нитратов в нитриты
Для восстановления нитратов в нитриты в приемник колонки переносят 25 см3 экстракта (см. 8.4.1), 5 см3 буферного раствора (см. 8.3.3) и пропускают через колонку со скоростью (6,0 +/- 0,1) см3/мин. Элюат собирают в мерную колбу вместимостью 100 см3.
Когда приемник колонки почти освободится, дважды смывают его стенки круговым движением воды по 15 см3 и заливают его водой. После того как соберется около 100 см3 элюата, колбу удаляют из-под колонки, доливают до метки водой и взбалтывают.
Для каждой серии испытаний проводят контрольный опыт, применяя вместо экстракта контрольный раствор, который готовят, используя те же реактивы и в тех же количествах, но без анализируемой пробы.
8.4.3 Окрашивание растворов и измерение их оптической плотности
8.4.3.1 В зависимости от ожидаемого содержания нитритов и нитратов переносят от 1 до 60 см3 фильтрата или элюата в мерные колбы вместимостью 100 см3, доводят объем до 60 см3 водой.
8.4.3.2 В колбы вносят по 10 см3 раствора сульфаниламида, тщательно перемешивают и оставляют на 5 мин при комнатной температуре, защитив от прямого солнечного света. Добавляют по 2 см3 раствора N-1-нафтилэтилендиамин-дигидрохлорида, тщательно перемешивают и оставляют на 10 — 20 мин при комнатной температуре в темном месте. Доливают дистиллированной водой до метки, перемешивают и измеряют оптическую плотность по отношению к контрольному раствору (см. 8.4.2) в кювете с толщиной поглощающего свет слоя 1 см при длине волны около 530 нм.
Примечание - Поскольку фильтрат и элюат не бывает абсолютно бесцветным, измеряют их оптическую плотность с эквивалентным разбавлением без добавления окрашивающих растворов и вносят поправку на полученное значение оптической плотности.
При анализе кормов с высокой влажностью допускается окрашивание растворов по методу, указанному в приложении Б.
8.5 Обработка результатов
8.5.1 Массовую долю нитритов в анализируемой пробе X1, мг/кг, вычисляют по формуле
X_{1} = \frac{m_{1} \cdot V_{1}}{V_{2} \cdot m} , (4)
где m1 — масса нитритов в 100 см3 фотометрируемого раствора, найденная по градуировочному графику, мкг;
V1 — общий объем экстракта, см3;
V2 — объем экстракта, взятый для окрашивания, см3;
8.5.2 Массовую долю нитратов в анализируемой пробе X2, мг/кг, вычисляют по формуле
X_{2} = 1,3478(\frac{m_{1} \cdot V_{1} \cdot V_{4}}{m \cdot V_{2} \cdot V_{3}}) - X_{1} , (5)
m1 — масса нитритов в 100 см3 фотометрируемого раствора, найденная по градуировочному графику, мкг;
V1 — общий объем экстракта, см3;
V4 — объем элюата после восстановления, см3;
V2 — объем элюата, взятый для окрашивания, см3;
V3 — объем экстракта, используемый для восстановления на колонке, см3;
X1 — массовая доля нитритов в пробе, мг/кг.
8.5.3 За окончательный результат испытания принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных испытаний, выполненных в условиях повторяемости и удовлетворяющих условию приемлемости по 10.1. Результаты вычисляют до первого десятичного знака и округляют до целого числа.
9. Фотометрический метод определения содержания нитритов
9.1 Сущность метода
Сущность метода заключается в извлечении нитритов раствором хлористого калия, получении окрашенного соединения при их взаимодействии с сульфаниламидом и N-1-нафтилэтилендиамин-дигидрохлоридом и последующем фотометрическом определении массовой доли нитритов.
9.2 Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы
Весы неавтоматического действия по ГОСТ OIML R 76-1 или нормативной документации государства, принявшего данный стандарт, с пределами допускаемой абсолютной погрешности +/- 0,001 г.
Фотоэлектроколориметр, обеспечивающий измерения оптической плотности при длине волны 520 нм с кюветами с толщиной поглощающего свет слоя 1 см.
Центрифуга лабораторная с частотой вращения не менее 5000 об/мин.
Шкаф сушильный электрический вентилируемый, обеспечивающий поддержание температуры (110 +/- 2) °C.
pH-метр с диапазоном измерений активности водородных ионов от 0 до 14 ед. pH и пределом допускаемой абсолютной погрешности измерения не более 0,05 ед. pH.
Аппарат для встряхивания или ротатор.
Колбы мерные 1(2)-100(500, 1000)-2 по ГОСТ 1770.
Цилиндры мерные 1(2, 2а, 3, 4)-100-2 по ГОСТ 1770.
Пипетки градуированные 1(2, 4, 5, 6)-1(1а, 2, 2а)-2-0,5(1, 2, 5, 10, 25) по ГОСТ 29227.
Дозаторы медицинские вместимостью 1, 4 и 50 см3 по ГОСТ 28311.
Колбы П-1(2)-250-29/32(34/35) ТХС по ГОСТ 25336.
Пробирки мерные П-1-20-0,1 ХС по ГОСТ 1770.
Пипетки 1(2,3)-1(2)-2-10(20) по ГОСТ 29251.
Воронки стеклянные В-36(56) ХС по ГОСТ 25336.
Калий хлористый по ГОСТ 4234, х.ч.
Натрий азотистокислый по ГОСТ 4197, х.ч.
Цинк сернокислый по ГОСТ 4174, ч.д.а.
Калий хлористый по ГОСТ 4234, х.ч.
Кислота соляная по ГОСТ 3118, х.ч., плотностью 1,19 г/см3.
Калий железистосинеродистый (желтая кровяная соль) по ГОСТ 4207, ч.д.а.
Свинец уксуснокислый по ГОСТ 1027, х.ч.
Уголь активный, осветляющий марки ОУ-Б по ГОСТ 4453.
Кислота ортофосфорная по ГОСТ 6552, х.ч.
N-этил-1-нафтиламин гидрохлорид, ч., или \alpha - \text{нафтиламин} , ч.д.а., или N-(1-нафтил)-этилендиамин дигидрохлорид, ч.
Сульфаниламид (белый стрептоцид, не растворимый в воде) с содержанием основного вещества 99,8%.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026.
9.3 Подготовка к испытанию
9.3.1 Растворы реактивов хранят в стеклянной посуде с притертыми пробками или в полиэтиленовых флаконах с завинчивающимися крышками при температуре от 15 °C до 25 °C неограниченное время, если настоящим стандартом не установлены другие требования. При появлении осадка, хлопьев, изменении окраски растворы заменяют свежеприготовленными.
9.3.2 Приготовление раствора соляной кислоты с массовой долей 10%
22 см3 соляной кислоты смешивают с 74 см3 дистиллированной воды.
9.3.3 Приготовление раствора гидроокиси калия с массовой долей 10%
В 90 см3 дистиллированной воды растворяют (10,00 +/- 0,01) г гидроокиси калия.
9.3.4 Приготовление раствора хлористого калия c(KCl) = 1,0 моль/дм3
В мерной колбе вместимостью 1000 см3 растворяют дистиллированной водой (75,00 +/- 0,01) г хлористого калия, доводят раствор до значения 5,6 — 6,0 ед. pH, используя 10%-ные растворы соляной кислоты или гидроокиси калия, и доливают до метки дистиллированной водой.
9.3.5 Приготовление раствора уксуснокислого свинца
В мерной колбе вместимостью 1000 см3 растворяют дистиллированной водой (100,00 +/- 0,01) г уксуснокислого свинца и доливают дистиллированной водой до метки.
9.3.6 Приготовление раствора железистосинеродистого калия
В 850 см3 дистиллированной воды растворяют (150,00 +/- 0,01) г железистосинеродистого калия.
9.3.7 Приготовление раствора сернокислого цинка
В 700 см3 дистиллированной воды растворяют (300,00 +/- 0,01) г сернокислого цинка.
9.3.8 Приготовление окрашивающего раствора
В мерную колбу вместимостью 1000 см3 вносят 250 см3 дистиллированной воды, прибавляют 100 см3 ортофосфорной кислоты, перемешивают, добавляют (5,00 +/- 0,01) г хорошо растертого порошка сульфаниламида и (1,00 +/- 0,01) г N-этил-1-нафтиламин гидрохлорида, взбалтывают на аппарате для встряхивания до полного растворения и доводят объем дистиллированной водой до метки.
Раствор хранят в посуде из темного стекла. Срок хранения раствора при температуре от 4 °C до 6 °C — не более 1 мес.
9.3.9 Приготовление основного раствора азотистокислого натрия
В мерной колбе вместимостью 1000 см3 растворяют дистиллированной водой (0,150 +/- 0,001) г азотистокислого натрия, высушенного до постоянной массы при температуре от 100 °C до 105 °C, и доводят объем раствора дистиллированной водой до метки. 1 см3 полученного раствора содержит 0,1 мг нитритов.
9.3.10 Приготовление рабочего раствора азотистокислого натрия
Рабочий раствор азотистокислого натрия готовят десятикратным разбавлением основного раствора (см. 9.3.9) раствором хлористого калия (см. 9.3.4). Получают раствор, содержащий 10 мкг нитритов в 1 см3.
9.3.11 Построение градуировочного графика
Для построения градуировочного графика из рабочего раствора готовят градуировочные растворы. Для этого в восемь мерных колб вместимостью 100 см3 приливают пипеткой объемы рабочего раствора, указанные в таблице 1.
Объемы растворов в каждой колбе доводят до метки раствором хлористого калия (см. 9.3.9) и перемешивают. Затем из каждой колбы отбирают в пробирки по 4 см3 градуировочных растворов, прибавляют по 1 см3 окрашивающего раствора, перемешивают и выдерживают 10 мин. Измеряют оптическую плотность окрашенных растворов при зеленом светофильтре с длиной волны 520 нм в кювете с толщиной поглощающего свет слоя 1 см.
По полученным данным строят градуировочный график, откладывая по оси абсцисс значения массовой концентрации нитритов в градуировочных растворах в пересчете на массовую долю нитритов в анализируемой пробе в миллиграммах на килограмм, по оси ординат — соответствующие им значения оптических плотностей.
9.4 Проведение испытания
9.4.1 Приготовление экстрактов
Навеску воздушно-сухих растительных кормов массой (1,00 +/- 0,01) г переносят в колбу вместимостью 100 см3, приливают 49 см3 раствора хлористого калия (см. 9.3.4), 1 см3 раствора уксуснокислого свинца (см. 9.3.5) и добавляют (0,40 +/- 0,01) г активированного угля, закрывают пробкой и взбалтывают на аппарате для встряхивания в течение 3 мин. Затем суспензию фильтруют через плотный бумажный или двойной простой фильтр.
При испытании проб с высокой влажностью (свежих корнеклубнеплодов, силоса и сенажа) навеску массой (10,00 +/- 0,01) г переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3, приливают 50 см3 раствора хлористого калия (см. 9.3.4), добавляют 1 см3 раствора уксуснокислого свинца (см. 9.3.5), (0,40 +/- 0,01) г активированного угля, закрывают пробкой и взбалтывают на аппарате для встряхивания в течение 10 мин. Затем объем в колбе доливают до метки раствором хлористого калия (см. 9.3.4), перемешивают и фильтруют.
При испытании проб свежих трав навеску массой (10,00 +/- 0,01) г переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3, приливают 50 см3 раствора хлористого калия (см. 9.3.4) и помещают на кипящую водяную баню на 15 мин. После охлаждения раствора добавляют 1 см3 раствора уксуснокислого свинца (см. 9.3.5), (0,40 +/- 0,01) г активированного угля, доливают до метки раствором хлористого калия (см. 9.3.4), тщательно перемешивают и фильтруют.
При испытании комбикормов навеску массой (5,00 +/- 0,01) г переносят в плоскодонную колбу вместимостью 250 см3. Приливают 70 см3 раствора хлористого калия (см. 9.3.4) и встряхивают в течение 3 мин. Содержимое переносят в центрифужные пробирки и центрифугируют при 5000 об/мин в течение 7 мин. Центрифугат фильтруют в мерные колбы вместимостью 100 см3. Осадок в пробирке промывают 15 — 20 см3 раствора хлористого калия (см. 9.3.4) и переносят на фильтр. Фильтрат в мерных колбах доводят до метки раствором хлористого калия. 50 см3 фильтрата переносят в центрифужную пробирку и добавляют 25 см3 раствора железистосинеродистого калия (см. 9.3.6) и 25 см3 раствора сернокислого цинка (см. 9.3.7). Тщательно перемешивают стеклянной палочкой и центрифугируют в течение 7 мин при 5000 об/мин. Центрифугат фильтруют и используют для определения нитритов. Если фильтрат получается окрашенным, к нему прибавляют (0,40 +/- 0,01) г активированного угля, взбалтывают и фильтруют через плотный фильтр.
9.4.2 Окрашивание растворов и измерение оптической плотности
В пробирку дозатором или пипеткой отбирают 4 см3 фильтрата и добавляют 1 см3 окрашивающего раствора (см. 9.3.8). Через 10 мин измеряют оптическую плотность окрашенного раствора по 9.3.11.
При испытании проб допускается окрашивание растворов этакридин-лактатом (риванолом) (см. приложение Б).
Массовую долю нитритов в анализируемой пробе в миллиграммах на килограмм, находят по градуировочному графику (см. 9.3.11).
За окончательный результат испытания принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных испытаний, выполненных в условиях повторяемости и удовлетворяющих условию приемлемости по 10.1.
Результаты вычисляют до первого десятичного знака и округляют до целого числа.
10. Контроль точности результатов испытаний
10.1 Приемлемость результатов испытаний, полученных в условиях повторяемости (сходимости)
Абсолютное расхождение между результатами двух независимых испытаний, полученными одним и тем же методом на одной лабораторной пробе в одной и той же лаборатории одним и тем же оператором на одном и том же экземпляре оборудования в течение короткого промежутка времени при доверительной вероятности P = 0,95%, не должно превышать предела повторяемости (сходимости) r, приведенного в таблице 2.
Если расхождение между результатами параллельных испытаний превышает предел повторяемости, то испытание повторяют, начиная со взятия навески.
Если расхождение между результатами параллельных испытаний вновь превышает предел повторяемости, выясняют и устраняют причины плохой повторяемости результатов испытаний.
10.2 Приемлемость результатов испытаний, полученных в условиях воспроизводимости
Абсолютное расхождение между результатами двух испытаний, полученными одним и тем же методом на идентичных пробах в разных лабораториях разными операторами на различных экземплярах оборудования при доверительной вероятности P = 0,95%, не должно превышать предела воспроизводимости R, приведенного в таблице 2.
При выполнении этого условия приемлемы оба результата испытаний, и в качестве окончательного может быть использовано их среднеарифметическое значение. Если это условие не соблюдается, могут быть использованы методы оценки приемлемости результатов измерений согласно ГОСТ ИСО 5725-6 (раздел 5).
Метрологические характеристики методов определения массовой доли нитратов и нитритов
| Метод определения | Единица измерения | Предел повторяемости (допускаемое расхождение между результатами двух параллельных испытаний) r | Предел воспроизводимости (допускаемое расхождение между результатами испытаний в двух разных лабораториях) R | Границы абсолютной погрешности результатов анализа при доверительной вероятности P = 0,95%, \pm \Delta |
| Ионометрический метод определения содержания нитратов: | 2,60 + 0,13 \cdot \overline{X} <*> | |||
| - воздушно-сухие пробы | мг/кг | 8,3 + 0,066 \cdot \overline{X} <*> | 4,3 + 0,21 \cdot \overline{X} <**> | |
| - пробы с высокой влажностью | мг/кг | 13,8 + 0,08 \cdot \overline{X} <*> | 0,354 \cdot \overline{X} <**> | |
| Фотометрический метод определения содержания нитратов и нитритов после восстановления кадмием | % | 10 | 30 | - |
| Фотометрический метод определения содержания нитритов | мг/кг | 0,34 + 0,183 \cdot \overline{X} <*> | 0,52 + 0,209 \cdot \overline{X} <**> | - |
| <*> \overline{X} — среднеарифметическое значение результатов двух параллельных испытаний. <**> \overline{X} — среднеарифметическое значение результатов двух испытаний, выполненных в разных условиях. | ||||
11. Оформление результатов испытаний
Результаты измерений оформляют в виде протокола испытаний, который должен включать следующее:
- информацию, необходимую для полной идентификации пробы;
- использованный метод отбора проб;
- использованный метод анализа со ссылкой на настоящий стандарт;
- обстоятельства, которые могли повлиять на результат испытания;
- полученный результат испытания.
ТАБЛИЦЫ ДЛЯ ПЕРЕСЧЕТА ЕДИНИЦ pC_{NO_{3 -}} В МАССОВУЮ ДОЛЮ НИТРАТОВ В АНАЛИЗИРУЕМЫХ ПРОБАХ
Воздушно-сухие корма с высоким содержанием нитратов (силос, сенаж, сено злаковых культур, комбикорма при соотношении пробы и экстрагирующего раствора 1:50)
Воздушно-сухие корма со средним и низким содержанием нитратов (кормовые травы, силос, сенаж, жмыхи, шроты, премиксы при соотношении пробы и экстрагирующего раствора 1:10)
Корма с влажностью 50% (при соотношении пробы и экстрагирующего раствора 1:5)
Корма с влажностью 70% (при соотношении пробы и экстрагирующего раствора 1:5)
Корма с влажностью 80% (при соотношении пробы и экстрагирующего раствора 1:5)
Корма с влажностью 90% (при соотношении пробы и экстрагирующего раствора 1:5)
Сок (при соотношении пробы и экстрагирующего раствора 1:5)
МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ МАССОВОЙ ДОЛИ НИТРИТОВ ПРИ ОКРАШИВАНИИ РАСТВОРОВ ЭТАКРИДИН-ЛАКТАТОМ (РИВАНОЛОМ)
Сущность метода заключается в извлечении нитритов раствором хлористого калия, получении окрашенного соединения при их взаимодействии с этакридин-лактатом (риванолом) и последующем фотометрическом измерении оптической плотности анализируемых растворов и вычислении массовой доли нитритов.
Б.2 Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и реактивы
Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и реактивы по 9.2 с использованием вместо N-этил-1-нафтиламин гидрохлорида этакридин-лактата (риванола) с содержанием основного вещества 98,0%.
Б.3.1 Растворы реактивов хранят в стеклянной посуде с притертыми пробками или в полиэтиленовых флаконах с завинчивающимися крышками при температуре от 15 °C до 25 °C неограниченное время, если настоящим стандартом не установлены другие требования. При появлении осадка, хлопьев, изменении окраски растворы заменяют свежеприготовленными.
Б.3.2 Приготовление раствора риванола с массовой долей 0,02%
5 таблеток риванола растирают в ступке до однородного порошка, переносят в мерную колбу вместимостью 500 см3 и растворяют в дистиллированной воде, доводят объем раствора водой до метки. Раствор хранят в темной склянке.
Б.3.3 Приготовление раствора соляной кислоты c(HCl) = 5,2 моль/дм3
430 см3 соляной кислоты разбавляют в мерной колбе вместимостью 1000 см3 дистиллированной водой и доводят объем раствора до метки.
Б.3.4 Приготовление окрашивающего раствора риванола
Раствор риванола (см. Б.3.2) смешивают в соотношении 1:1 по объему с раствором соляной кислоты (см. Б.3.3).
Б.3.5 Приготовление градуировочных растворов
В семь мерных колб вместимостью 50 см3 переносят 0; 0,5; 1,0; 2,0; 4,0; 6,0 и 10,0 см3 основного раствора азотистокислого натрия массовой концентрации нитритов 0,1 мг/см3 (см. 9.3.9). Объем в колбах доливают до метки дистиллированной водой или экстрагирующим раствором. Массовая концентрация нитритов в градуировочных растворов составляет: 0; 1; 2; 4; 8; 12 и 20 мкг/см3 соответственно.
Б.4.1 Приготовление экстрактов анализируемых проб
Экстракты анализируемых проб готовят по 9.4.1.
Б.4.2 Окрашивание растворов и измерение оптической плотности
К 4 см3 окрашивающего раствора риванола (см. Б.3.4) приливают 10 см3 градуировочных растворов (см. Б.3.5) и 10 см3 экстракта анализируемой пробы, перемешивают и через 5 мин измеряют оптическую плотность окрашенных растворов при зеленом светофильтре с длиной волны 520 нм в кювете с толщиной поглощающего свет слоя 1 см.
По результатам фотометрирования градуировочных растворов строят градуировочный график, откладывая по оси абсцисс массовую концентрацию нитритов в градуировочных растворах в микрограммах в 1 см3, по оси ординат — соответствующие им значения оптической плотности и по графику находят содержание нитритов в анализируемом растворе.
Массовую долю нитритов в анализируемой пробе X, мг/кг, вычисляют по формуле
X = \frac{C \cdot V_{1} \cdot V_{3}}{V_{2} \cdot m} , (Б.1)
где C — массовая концентрация нитритов анализируемого раствора, найденная по градуировочному графику, мкг/см3;
V1 — общий объем экстракта, см3;
V3 — объем фотометрируемого раствора, см3;
V2 — объем экстракта, используемый для окрашивания, см3;
За окончательный результат испытания принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных испытаний, выполненных в условиях повторяемости и удовлетворяющих условию приемлемости по 10.1. Результаты вычисляют до первого десятичного знака и округляют до целого числа.