ФС.2.5.0099. Фармакопейная статья. Толокнянки обыкновенной листья

(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 13.03.2024 № 120)

(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XV издание»)

ИСТОРИЯ ИЗМЕНЕНИЙ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИХ АКТОВ

flowchart LR
  n0["Государственная фармакопея СССР. XI издание. Выпуск..."]:::rst
  click n0 "https://bukva.ai/docs/gf-xi-minzdrav-sssr-ministerstvo" "Государственная фармакопея СССР. XI издание. Выпуск 2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье"
  n1["ФС.2.5.0099.18"]:::rst
  click n1 "https://bukva.ai/docs/fs-2-5-0099-18" "ФС.2.5.0099.18. Фармакопейная статья. Толокнянки обыкновенной листья (утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 31.10.2018 N 749)"
  n2["ФС.2.5.0099"]:::doc
  click n2 "https://bukva.ai/docs/prikaz-fs-2-5-0099" "ФС.2.5.0099. Фармакопейная статья. Толокнянки обыкновенной листья (утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 13.03.2024 N 120)"
  n1 --> n2
  n0 --> n1
classDef rst fill:#FFEBEB,stroke:#8B0000,color:#000;
classDef doc fill:#EBFFEB,stroke:#006400,color:#000;
classDef notEnt fill:#FFFFEB,stroke:#FF8C00,color:#000;

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Собранные весной до и в начале цветения или осенью с начала созревания плодов до появления снежного покрова, высушенные листья дикорастущего вечнозеленого кустарничка толокнянки обыкновенной — Arctostaphylos uva-ursi (L.) Spreng., семейства вересковых — Ericaceae.

Содержит:

• не менее 7,0% суммы фенологликозидов в пересчете на арбутин в сухом сырье (ОФС «Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях»);

- или не менее 7,0% арбутина в пересчете на сухое сырье (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

Внешние признаки. Определение проводят в соответствии с ОФС «Листья».

Цельное сырье. Смесь цельных или частично измельченных листьев. Листья мелкие, кожистые, ломкие, обратно-яйцевидной или удлиненно-овальной формы, иногда с небольшой выемкой, на верхушке закругленные, к основанию клиновидно-суженные, с очень коротким черешком. Длина листьев 1 — 2,2 см, ширина 0,5 — 1,2 см. Жилкование сетчатое. При рассмотрении под лупой (10x и др.) на верхней поверхности листа жилки заметно вдавлены. Черешки листьев в поперечном сечении округло-треугольной формы.

Листья с верхней стороны темно-зеленые, блестящие, с нижней стороны немного светлее, матовые, голые. Запах отсутствует.

Измельченное сырье. Кусочки листьев различной формы и черешков, проходящие сквозь сито с отверстиями размером 3 мм. При рассмотрении под лупой (10x) видны кусочки листьев различной формы, на верхней поверхности жилки вдавлены; кусочки черешков, редко-тонких стеблей.

Цвет от светло-зеленого до темно-зеленого с коричневато-зелеными, светло-коричневыми, коричневыми, редко фиолетовыми и желтовато-белыми вкраплениями. Запах отсутствует.

Порошок. Кусочки листьев и черешков, проходящие сквозь сито с отверстиями размером 2 мм. При рассмотрении под лупой (10x) видны кусочки листьев с вдавленными жилками на верхней поверхности листа; кусочки черешков, редко-тонких стеблей.

Цвет от светло-зеленого до темно-зеленого с коричневато-зелеными, светло-коричневыми, коричневыми, редко фиолетовыми и желтовато-белыми вкраплениями. Запах отсутствует.

Микроскопические признаки. Определение проводят в соответствии с ОФС «Микроскопический и микрохимический анализ лекарственного растительного сырья и лекарственных средств растительного происхождения».

Цельное сырье, измельченное сырье. При рассмотрении микропрепарата листа с поверхности должны быть видны: многоугольные клетки верхнего и нижнего эпидермиса с прямыми и довольно толстыми стенками; устьица крупные, округлые, с широко раскрытой устьичной щелью, окружены 8 (5 — 9) клетками эпидермиса (аномоцитный тип), расположенные на нижнем эпидермисе; вдоль крупных жилок располагаются кристаллы оксалата кальция в виде призм, их сростков и друз.

Волоски редкие, изогнутые, 2 — 3-клеточные, встречаются у основания листа и на черешке.

Клетки эпидермиса черешка толстостенные, прозенхимной формы. Эпидермис опушен многочисленными 2 — 3 клеточными волосками. Под эпидермисом в три-четыре слоя залегает колленхима.

Проводящая система черешка представлена одним крупным коллатеральным пучком, расположенным в центре.

Порошок. При рассмотрении микропрепарата порошка должны быть видны фрагменты многоугольных клеток эпидермиса с прямыми и довольно толстыми стенками, устьица с 8 (5 — 9) околоустьичными клетками, с широко раскрытой устьичной щелью (аномоцитный тип); фрагменты волосков простых, слегка изогнутых, 2 — 3-клеточных. На фрагментах листьев в мезофилле должны быть видны редкие одиночные кристаллы оксалата кальция в виде призм, их сростков и друз. В микропрепарате также обнаруживаются фрагменты черешка листа.

Определение основных групп биологически активных веществ

Тонкослойная хроматография. Определение проводят методом ТСХ (ОФС «Тонкослойная хроматография»).

Пластинка. ТСХ пластинка со слоем силикагеля.

Подвижная фаза (ПФ). Вода — муравьиная кислота безводная — этилацетат 6:6:88.

Испытуемый раствор. Полученного для количественного определения арбутина 10 мл исходного раствора пропускают через колонку с алюминия оксидом нейтральным для хроматографии и используют для хроматографирования.

Раствор стандартного образца арбутина. Растворяют 10 мг арбутина в 10 мл спирта 70% при нагревании на водяной бане.

Реактив для детектирования. Фосфорномолибденовой кислоты спиртовой раствор 10%.

На линию старта пластинки полосами длиной 10 мм и шириной 2 мм наносят 60 мкл испытуемого раствора и 10 мкл раствора стандартного образца арбутина. Пластинку с нанесенными пробами сушат на воздухе в течение 5 мин, помещают в камеру, предварительно насыщенную в течение 30 мин ПФ, и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт ПФ пройдет около 80 — 90% длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат до удаления следов растворителей. Пластинку опрыскивают реактивом для детектирования, выдерживают при температуре 100 — 105 °C в течение 3 — 10 мин и просматривают при дневном свете.

Результат

На хроматограмме раствора стандартного образца арбутина должна обнаруживаться зона адсорбции синего цвета.

На хроматограмме испытуемого раствора должна обнаруживаться зона адсорбции синего цвета на уровне или чуть ниже зоны адсорбции арбутина и над ней зона адсорбции синего цвета; допускается обнаружение других зон адсорбции,

ИСПЫТАНИЯ

Влажность. Не более 12,0% (ОФС «Определение влажности лекарственного растительного сырья и лекарственных средств растительного происхождения»).

Зола общая. Не более 4,0% (ОФС «Зола общая»).

Зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте. Не более 2,0% (ОФС «Зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте»).

Измельченность. Определение проводят в соответствии с ОФС «Определение подлинности, измельченности и содержания примесей в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Цельное сырье: частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 3 мм, — не более 2%.

Измельченное сырье: частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями размером 3 мм, — не более 5%; частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,5 мм, — не более 5%.

Порошок: частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями размером 2 мм, — не более 5%; частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,18 мм, — не более 5%.

Допустимые примеси. Определение проводят в соответствии с ОФС «Определение подлинности, измельченности и содержания примесей в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Сырье, изменившее окраску (листья, потемневшие с обеих сторон). Цельное сырье — не более 3%.

Другие части растения (веточки, плоды). Цельное сырье — не более 4%.

Органическая примесь. Цельное сырье, измельченное сырье — не более 0,5%.

Минеральная примесь. Не более 0,5%.

Тяжелые металлы и мышьяк. В соответствии с ОФС «Определение содержания тяжелых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Радионуклиды. В соответствии с ОФС «Определение содержания радионуклидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Зараженность вредителями запасов. В соответствии с ОФС «Определение степени зараженности лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов вредителями запасов».

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Определение проводят одним из приведенных методов.

1. Сумма фенологликозидов в пересчете на арбутин. Определение проводят в соответствии с ОФС «Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях»

Раствор стандартного образца арбутина. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 0,1 г (точная навеска) фармакопейного стандартного образца арбутина, прибавляют 80 мл спирта 70% и нагревают на водяной бане до полного растворения. Затем раствор охлаждают, доводят объем раствора тем же растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 7,0 мл полученного раствора, доводят объем раствора спиртом 70% до метки.

Исходный раствор. Аналитическую пробу сырья измельчают до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 2 мм. В коническую колбу со шлифом вместимостью 250 мл помещают 0,5 г (точная навеска) измельченного сырья, прибавляют 100 мл спирта 70% и взвешивают с погрешностью +/- 0,01 г. Колбу с содержимым присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на водяной бане в течение 45 мин, периодически встряхивая для смывания частиц сырья со стенок. Содержимое колбы охлаждают до комнатной температуры, взвешивают и при необходимости доводят спиртом 70% до первоначальной массы. Извлечение фильтруют через беззольный фильтр, отбрасывая первые 10 мл фильтрата.

Испытуемый раствор. Пропускают через стеклянную хроматографическую колонку диаметром 1,5 см и высотой 25 см, заполненную 3,0 г алюминия оксида нейтрального для хроматографии (L 40/250 мкм), предварительно промытую 5 мл спирта 70%, 3,0 мл исходного раствора. Далее раствор элюируют 15 мл спирта 70% и элюат собирают в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят объем раствора спиртом 70% до метки.

Раствор сравнения. Спирт 70%, который предварительно пропускают через колонку с алюминия оксидом нейтральным для хроматографии.

Измеряют оптическую плотность испытуемого раствора на спектрофотометре при длине волны 285 нм в кюветах с толщиной слоя 10 мм относительно раствора сравнения.

Параллельно измеряют оптическую плотность раствора стандартного образца арбутина в аналогичных условиях относительно раствора сравнения.

Содержание суммы фенологликозидов в пересчете на арбутин в сухом сырье в процентах (X) вычисляют по формуле:

где, A — оптическая плотность испытуемого раствора;

Ao — оптическая плотность раствора стандартного образца арбутина;

a — навеска сырья, г;

ao — навеска фармакопейного стандартного образца арбутина, г;

P — содержание арбутина в фармакопейном стандартном образце арбутина, %;

W — влажность сырья, %.

Допускается содержание суммы фенологликозидов в пересчете на арбутин в сухом сырье вычислять с использованием удельного показателя поглощения по формуле:

X = \frac{A \cdot 100 \cdot 25 \cdot 100}{72 \cdot a \cdot 3 \cdot (100 - W)} ,

где, A — оптическая плотность испытуемого раствора;

a — навеска сырья, г;

W — влажность сырья, %.

2. Арбутин. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

Подвижная фаза (ПФ). Метанол — вода 10:90.

Испытуемый раствор. Аналитическую пробу сырья измельчают до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 2 мм. В коническую колбу со шлифом вместимостью 100 мл помещают 0,8 г (точная навеска) измельченного сырья, прибавляют 20 мл воды. Колбу с содержимым присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на водяной бане в течение 30 мин. Затем охлаждают и фильтруют через вату в мерную колбу вместимостью 50 мл. Вату помещают в колбу с остатками сырья, прибавляют 20 мл воды и нагревают на водяной бане в течение 30 мин. После охлаждения извлечения фильтруют через вату в ту же мерную колбу и доводят объем раствора водой до метки. Содержимое мерной колбы фильтруют через беззольный фильтр, отбрасывая первые 10 мл фильтрата.

Раствор стандартного образца арбутина. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 0,05 г (точная навеска) фармакопейного стандартного образца арбутина, прибавляют 30 мл ПФ и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 2,5 мг гидрохинона, растворяют в 5 мл ПФ и доводят объем раствора тем же растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 5,0 мл полученного раствора, прибавляют 2,5 мл раствора стандартного образца арбутина и доводят объем раствора ПФ до метки.

Хроматографические условия

Пригодность хроматографической системы

На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы:

• разрешение (RS) между пиками арбутина и гидрохинона должно быть не менее 4,0.

Содержание арбутина в пересчете на сухое сырье в процентах (X) вычисляют по формуле:

X = \frac{S_{1} \cdot a_{o} \cdot 50 \cdot P \cdot 100}{S_{o} \cdot a \cdot 50 \cdot (100 - W)} ,

где S1 — площадь пика арбутина на хроматограмме испытуемого раствора;

So — площадь пика арбутина на хроматограмме раствора стандартного образца арбутина;

a — навеска сырья, г;

ao — навеска фармакопейного стандартного образца арбутина, г;

P — содержание арбутина в фармакопейном стандартном образце арбутина, %;

W — влажность сырья, %.

УПАКОВКА, МАРКИРОВКА И ПЕРЕВОЗКА

В соответствии с ОФС «Упаковка, маркировка и перевозка лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов».

ХРАНЕНИЕ

В соответствии с ОФС «Хранение лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов».