ФС.2.5.0099.18. Фармакопейная статья. Толокнянки обыкновенной листья

(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 31.10.2018 № 749)

(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV издание. Том IV»)

ИСТОРИЯ ИЗМЕНЕНИЙ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИХ АКТОВ

flowchart LR
  n0["Государственная фармакопея СССР. XI издание. Выпуск..."]:::rst
  click n0 "https://bukva.ai/docs/gf-xi-minzdrav-sssr-ministerstvo" "Государственная фармакопея СССР. XI издание. Выпуск 2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье"
  n1["ФС.2.5.0099.18"]:::rst
  click n1 "https://bukva.ai/docs/fs-2-5-0099-18" "ФС.2.5.0099.18. Фармакопейная статья. Толокнянки обыкновенной листья (утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 31.10.2018 N 749)"
  n2["ФС.2.5.0099"]:::doc
  click n2 "https://bukva.ai/docs/prikaz-fs-2-5-0099" "ФС.2.5.0099. Фармакопейная статья. Толокнянки обыкновенной листья (утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 13.03.2024 N 120)"
  n1 --> n2
  n0 --> n1
classDef rst fill:#FFEBEB,stroke:#8B0000,color:#000;
classDef doc fill:#EBFFEB,stroke:#006400,color:#000;
classDef notEnt fill:#FFFFEB,stroke:#FF8C00,color:#000;

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Собранные весной до и в начале цветения или осенью с начала созревания плодов до появления снежного покрова и высушенные листья дикорастущего вечнозеленого кустарничка толокнянки обыкновенной Arctostaphylos uva-ursi (L.) Spreng., семейства вересковых — Ericaceae.

ПОДЛИННОСТЬ

Внешние признаки. Цельное сырье. Смесь цельных или частично измельченных листьев. Листья мелкие, кожистые, ломкие, обратно-яйцевидной или удлиненно-овальной формы, иногда с небольшой выемкой, на верхушке закругленные, к основанию клиновидно-суженные, с очень коротким черешком. Длина листьев 1 — 2,2 см, ширина 0,5 — 1,2 см. Жилкование сетчатое. При рассмотрении под лупой (10x) или стереомикроскопом (16x) на верхней поверхности листа жилки заметно вдавлены. Черешки листьев в поперечном сечении округлотреугольной формы.

Цвет листьев с верхней стороны темно-зеленый, блестящие, с нижней стороны немного светлее, матовые, голые. Запах отсутствует. Вкус водного извлечения сильно вяжущий, горьковатый.

Измельченное сырье. Кусочки листьев различной формы и черешков, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 3 мм. При рассмотрении под лупой (10x) или стереомикроскопом (16x) видны кусочки листьев различной формы, на верхней поверхности жилки вдавлены. Цвет от светло-зеленого до темно-зеленого с коричневато-зелеными, светло-коричневыми, коричневыми, редко фиолетовыми и желтовато-белыми вкраплениями. Запах отсутствует. Вкус водного извлечения сильно вяжущий, горьковатый.

Порошок. Кусочки листьев и черешков, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 2 мм. При рассмотрении под лупой (10x) или стереомикроскопом (16x) видны кусочки листьев с вдавленными жилками на верхней поверхности листа. Цвет порошка от светло-зеленого до темно-зеленого с коричневато-зелеными, светло-коричневыми, коричневыми, редко фиолетовыми и желтовато-белыми вкраплениями. Запах отсутствует, вкус водного извлечения сильно вяжущий, горьковатый.

Микроскопические признаки. Цельное, измельченное сырье. При рассмотрении листа с поверхности должно быть видно, что клетки верхнего и нижнего эпидермиса многоугольные с прямыми и довольно толстыми стенками. Устьица располагаются на нижнем эпидермисе. Устьица крупные, округлые, с широко раскрытой устьичной щелью, окружены 8 (5 — 9) клетками эпидермиса (аномоцитный тип). Вдоль крупных жилок располагаются кристаллы оксалата кальция в виде призм, их сростков и друз.

Волоски редкие, изогнутые, 2 — 3-клеточные, встречаются у основания листа и на черешке.

Клетки эпидермиса черешка толстостенные, прозенхимной формы. Эпидермис опушен многочисленными 2 — 3-клеточными волосками. Под эпидермисом в три-четыре слоя залегает колленхима.

Проводящая система черешка представлена одним крупным коллатеральным пучком, расположенным в центре.

Рисунок — Толокнянки листья

1 — фрагмент верхнего эпидермиса листа (400x); 2 — фрагмент нижнего эпидермиса листа с устьицами (аномоцитный тип) (400x); 3 — фрагмент эпидермиса листа вдоль жилки с кристаллами оксалата кальция в виде призм (400x); 4 — фрагмент мезофилла листа с кристаллами оксалата кальция в виде призм, их сростков и друз (400x); 5 — поперечный срез листа (100x); 6 — поперечный срез черешка (40x); 7 — фрагмент эпидермиса черешка (400x); 8 — фрагмент эпидермиса черешка с 2-клеточным изогнутым волоском (400x)

Порошок. При рассмотрении микропрепарата порошка должны быть видны фрагменты многоугольных клеток эпидермиса с прямыми и довольно толстыми стенками, устьица с 8 (5 — 9) околоустьичными клетками, с широко раскрытой устьичной щелью (аномоцитный тип); фрагменты волосков простых, слегка изогнутых, 2 — 3-клеточных. На фрагментах листьев в мезофилле должны быть видны редкие одиночные кристаллы оксалата кальция в виде призм, их сростков и друз. В микропрепарате также обнаруживаются фрагменты черешка листа.

Определение основных групп биологически активных веществ

Тонкослойная хроматография

Приготовление растворов

Раствор стандартного образца (СО) арбутина. Около 0,01 г СО арбутина помещают в колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 8 мл спирта 70% и нагревают на водяной бане до полного растворения. Затем раствор охлаждают, доводят объем тем же спиртом до 10 мл и перемешивают.

Срок годности раствора 3 мес.

На линию старта аналитической хроматографической пластинки со слоем силикагеля наносят 60 мкл (0,06 мл) испытуемого раствора (см. раздел «Количественное определение арбутина», раствор А; 10,0 мл раствора А пропускают через колонку с алюминия оксидом и используют для хроматографирования), рядом наносят 10 мкл (0,01 мл) раствора СО арбутина. Пластинку с нанесенными пробами сушат на воздухе в течение 5 мин, помещают в камеру, предварительно насыщенную в течение 30 мин смесью растворителей этилацетат — кислота муравьиная — вода (88:6:6) и хроматографируют восходящим способом.

Когда фронт растворителей пройдет около 80 — 90% длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат до удаления следов растворителей, обрабатывают натрия фосфорномолибдата раствором 10%, выдерживают при температуре 100 — 105 °C в течение 10 мин и просматривают при дневном свете.

На хроматограмме раствора СО арбутина должна обнаруживаться зона адсорбции синего цвета.

На хроматограмме испытуемого раствора должна обнаруживаться зона адсорбции синего цвета на уровне зоны адсорбции СО арбутина и 2 зоны адсорбции синего цвета выше и ниже зоны адсорбции СО арбутина; допускается обнаружение дополнительных зон адсорбции.

Качественные реакции

Около 0,5 г измельченного сырья помещают в колбу вместимостью 50 мл, прибавляют 10 мл воды, присоединяют к обратному холодильнику и кипятят в течение 2 — 3 мин. Затем содержимое колбы фильтруют через бумажный фильтр.

1. К 1 мл фильтрата (в фарфоровой чашке) прибавляют 4 мл раствора аммиака и по каплям 1 мл натрия фосфорномолибдата раствор 10%; должно наблюдаться синее окрашивание (арбутин).

2. К 2 мл фильтрата (в фарфоровой чашке) прибавляют 0,1 мл железа (III) аммония сульфата раствор 1%; должно наблюдаться зеленовато-черное окрашивание (дубильные вещества).

ИСПЫТАНИЯ

Влажность. Цельное сырье, измельченное сырье, порошок — не более 12%.

Зола общая. Цельное сырье, измельченное сырье, порошок — не более 4%.

Зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте. Цельное сырье, измельченное сырье, порошок — не более 2%.

Измельченность сырья. Цельное сырье: частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 3 мм, — не более 2%. Измельченное сырье: частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями размером 3 мм, — не более 5%. Частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,5 мм, — не более 5%. Порошок: частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями размером 2 мм, — не более 5%; частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,18 мм, — не более 5%.

Посторонние примеси

Сырье, изменившее окраску (листьев, потемневших с обеих сторон). Цельное сырье, измельченное сырье, порошок — не более 3%.

Других частей растения (веточки, плоды). Цельное сырье — не более 4%.

Органическая примесь. Цельное сырье, измельченное сырье — не более 0,5%.

Минеральная примесь. Цельное сырье, измельченное сырье, порошок — не более 0,5%.

Тяжелые металлы и мышьяк. В соответствии с требованиями ОФС «Определение содержания тяжелых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Радионуклиды. В соответствии с требованиями ОФС «Определение содержания радионуклидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Остаточные количества пестицидов. В соответствии с требованиями ОФС «Определение содержания остаточных пестицидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Микробиологическая чистота. В соответствии с требованиями ОФС «Микробиологическая чистота».

Количественное определение. Цельное сырье, измельченное сырье, порошок: содержание арбутина — не менее 6%, экстрактивных веществ, извлекаемых водой — не менее 18%.

Содержание арбутина

Приготовление раствора стандартного образца (СО) арбутина. Около 0,1 г (точная навеска) СО арбутина помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 80 мл спирта 70% и нагревают на водяной бане до полного растворения. Затем раствор охлаждают, доводят объем раствора тем же спиртом до метки и перемешивают (раствор А СО арбутина). Срок годности раствора 3 мес.

7,0 мл раствора А СО арбутина помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора спиртом 70% до метки и перемешивают (раствор Б СО арбутина).

Аналитическую пробу сырья измельчают до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 2 мм.

Около 0,5 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в колбу со шлифом вместимостью 250 мл, прибавляют 100,0 мл спирта 70% и взвешивают с погрешностью +/- 0,01 г. Колбу присоединяют к обратному холодильнику, нагревают на водяной бане в течение 45 мин, периодически встряхивая для смывания частиц сырья со стенок. Затем колбу с содержимым охлаждают до комнатной температуры, взвешивают и при необходимости доводят до первоначальной массы спиртом 70%. Извлечение фильтруют через бумажный фильтр, смоченный тем же спиртом, отбрасывая первые 10 мл фильтрата (раствор А испытуемого раствора).

Для очистки полученного извлечения от сопутствующих веществ, 3,0 мл раствора А испытуемого раствора пропускают через стеклянную хроматографическую колонку диаметром 1,5 см и высотой 25 см, заполненную 3,0 г алюминия оксида нейтрального для хроматографии (L 40/250 мкм), предварительно промытую 5 мл спирта 70%. Далее раствор А элюируют 15,0 мл спирта 70%. Элюат собирают в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят объем раствора спиртом 70% до метки и перемешивают (раствор Б испытуемого раствора). Оптическую плотность раствора Б испытуемого раствора измеряют на спектрофотометре при длине волны 285 нм в кювете с толщиной рабочего слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют спирт 70%, который предварительно пропускают через колонку с алюминия оксидом нейтральным.

Параллельно измеряют оптическую плотность раствора Б СО арбутина. В качестве раствора сравнения используют спирт 70%.

Содержание арбутина в абсолютно сухом сырье в процентах (X) вычисляют по следующей формуле:

X = \frac{\text{А} \cdot \text{а}_{0} \cdot 100 \cdot 25 \cdot 7 \cdot 100 \cdot 100 \cdot \text{Р}}{\text{А}_{\text{о}} \cdot \text{а} \cdot 3 \cdot (100 - W) \cdot 100 \cdot 100 \cdot 100} = \frac{\text{А} \cdot \text{а}_{0} \cdot 175 \cdot \text{Р}}{\text{А}_{\text{о}} \cdot \text{а} \cdot 3 \cdot (100 - W)} ,

где A — оптическая плотность раствора Б испытуемого раствора;

Aо — оптическая плотность раствора Б СО арбутина;

a — навеска сырья, г;

a0 — навеска СО арбутина, г;

W — влажность сырья, %;

P — содержание основного вещества в СО арбутина, %.

Допускается содержание арбутина в сырье вычислять с использованием удельного показателя поглощения по следующей формуле:

X = \frac{\text{А} \cdot 100 \cdot 25 \cdot 100}{\text{А}_{1\text{см}}^{1\%} \cdot \text{а} \cdot 3 \cdot (100 - W)} = \frac{\text{А} \cdot 250000}{\text{А}_{1\text{см}}^{1\%} \cdot \text{а} \cdot 3 \cdot (100 - W)} ,

где A — оптическая плотность раствора Б испытуемого раствора;

\text{А}_{1\text{см}}^{1\%} _ удельный показатель поглощения арбутина при длине волны 285 нм, равный 72,23;

a — навеска сырья, г;

W — влажность сырья, %.

Определение экстрактивных веществ, извлекаемых водой, проводят в соответствии с требованиями ОФС «Определение содержания экстрактивных веществ в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах» (навеска сырья — 1,0 г, экстрагент — вода очищенная).

Примечание. Определение арбутина проводят в сырье, предназначенном для производства лекарственных растительных препаратов (пачка, фильтр-пакеты), экстрактивных веществ, извлекаемых водой, в сырье, предназначенном для производства экстрактов.

Упаковка, маркировка и транспортирование. В соответствии с требованиями ОФС «Упаковка, маркировка и транспортирование лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов».

Хранение. В соответствии с требованиями ОФС «Хранение лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов».