ФС.2.5.0045. Фармакопейная статья. Хвоща полевого трава

(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 13.03.2024 № 120)

(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XV издание»)

ИСТОРИЯ ИЗМЕНЕНИЙ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИХ АКТОВ

flowchart LR
  n0["Государственная фармакопея СССР. XI издание. Выпуск..."]:::rst
  click n0 "https://bukva.ai/docs/gf-xi-minzdrav-sssr-ministerstvo" "Государственная фармакопея СССР. XI издание. Выпуск 2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье"
  n1["ФС.2.5.0045.15"]:::rst
  click n1 "https://bukva.ai/docs/gf-xiii-minzdrav-rossii-ministerstvo-389" "ФС.2.5.0045.15. Фармакопейная статья'Хвоща полевого трава. ФС.2.5.0045.15'"
  n2["ФС.2.5.0045"]:::doc
  click n2 "https://bukva.ai/docs/prikaz-fs-2-5-0045" "ФС.2.5.0045. Фармакопейная статья. Хвоща полевого трава (утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 13.03.2024 N 120)"
  n1 --> n2
  n0 --> n1
classDef rst fill:#FFEBEB,stroke:#8B0000,color:#000;
classDef doc fill:#EBFFEB,stroke:#006400,color:#000;
classDef notEnt fill:#FFFFEB,stroke:#FF8C00,color:#000;

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Собранные в течение лета и высушенные надземные вегетативные побеги многолетнего травянистого дикорастущего растения хвоща полевого — Equisetum arvense L., сем. хвощевых — Equisetaceae.

Содержит не менее 0,3% суммы флавоноидов в пересчете на изокверцитрозид в сухом сырье.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

Внешние признаки. Определение проводят в соответствии с ОФС «Травы».

Цельное сырье. Цельные и частично измельченные стебли длиной до 30 см, жесткие, членистые, бороздчатые, с 6 — 18 продольными ребрышками, почти от основания мутовчато-ветвистые, с полыми междоузлиями и утолщениями в узлах. Ветви неразветвленные, членистые, косо вверх направленные, 4 — 5-гранные, без полости. Влагалища стеблей цилиндрические, длиной 4 — 8 мм, с треугольно-ланцетными, темно-коричневыми, белоокаймленными по краю зубцами, спаянными по 2 — 3. Влагалища веточек зеленые с 4 — 5 коричневатыми длиннооттянутыми зубчиками. При обрывании ветвей на стебле удерживаются только первые короткие членики.

Цвет серовато-зеленый. Запах слабый.

Измельченное сырье. Кусочки стеблей и ветвей частично с узлами и влагалищами, проходящие сквозь сито с отверстиями размером 7 мм.

При рассмотрении под лупой (10x) видны кусочки ветвей, четырех-пятиребристых, без полости на срезе, без листовых влагалищ, иногда с влагалищами или с их остатками. Отдельно встречаются целые влагалища и их части. Влагалища стеблей — зубчатые трубочки, серовато-зеленые, коричневые и темно-коричневые со спаянными по 2 — 3 треугольно-ланцетными коричневыми зубцами; влагалища ветвей — серовато-зеленые с длиннозаостренными зубцами, светло-коричневыми, зелеными или зелеными со светло-коричневой каймой. Реже встречаются кусочки стебля (междоузлия и узлы) в поперечном и продольном сечении. Кусочки стебля в поперечном сечении ребристо-бороздчатые с центральной крупной полостью и мелкими полостями (под бороздами).

В продольном сечении кусочки стебля (междоузлия), с одной стороны — ребристые серовато-зеленые, с другой — гладкие, слегка продольно-слоистые, блестящие светло-желтые. Кусочки стебля, соответствующие узлам, с одним или несколькими мелкими коричневыми влагалищами ветвей. При рассматривании полости узла может быть видна перегородка или ее остаток.

При рассмотрении под лупой (10x и др.) видна поверхность кусочков ветвей, стеблей, влагалищ серовато-зеленого цвета, покрытая мелкими беловатыми сосочками. Гребни ребер с беловатыми зубчатыми выростами. На большинстве кусочков, у основания ребер вдоль бороздок, расположены 2 — 3 (реже 1 — 4) ряда более крупных, чем сосочки, беловатых образований с лучистой складчатостью поверхности — устьица. Замыкающие клетки устьиц расположены на уровне клеток эпидермиса. Кусочки стеблей в продольном сечении, с одной стороны — ребристые, зеленые, с беловатыми зубчатыми гребнями, с другой — продольно-слоистые, светло-желтые, блестящие. На поперечном сечении кусочков стебля, в коре под бороздками, видны полости.

Цвет серовато-зеленый, желтовато-зеленый со светло-желтыми и коричневыми вкраплениями. Запах слабый.

Порошок. Кусочки стеблей, ветвей, влагалищ, проходящие сквозь сито с отверстиями размером 2 мм.

При рассмотрении под лупой (10x и др.) видны мелкие беловатые сосочки. Вдоль бороздок расположены 2 — 3 (реже 1 — 4) ряда более крупных, чем сосочки, беловатых образований с лучистой складчатостью поверхности — устьица. Замыкающие клетки устьиц расположены на уровне клеток эпидермиса. Кусочки ветвей в поперечном сечении с 4 — 5 ребрами, без полости. Гребни ребер с зубчатыми выростами. Видны отдельные зубцы (редуцированные листья) стеблевых влагалищ, треугольно-ланцетные плоские, спаянные или неспаянные, коричневые.

Цвет порошка серовато-зеленый с желтоватыми, беловатыми и коричневатыми вкраплениями. Запах слабый.

Примечание - К другим видам хвощей, встречающимся в сырье как примесь, относят:

а) Хвощ лесной (Equisetum sylvaticum L.) имеет нежесткий стебель с вторично ветвящимися, отклоненными вниз, тонкими ветвями. В верхней части стебля на ребрах под лупой (10x и др.) заметны 2 ряда роговидных выростов (шипиков). Зубцы влагалищ на стебле сросшиеся и в сырье легко обламываются. Веточки с 3 — 5 ребрами. На верхушках встречаются тупые колоски.

б) Хвощ луговой (Equisetum pratense L.) имеет ветви с почти горизонтальным расположением, дуговидно книзу отогнутые. Зубцы влагалищ неспаянные. На верхушках стеблей могут быть тупые колоски. В верхней части стебля по ребрам видны множественные, острые конусовидные выросты (сосочки), хорошо заметные под лупой (10x и др.). Веточки с 3 ребрами.

в) Хвощ речной (синонимы: топяной, приречный) (Equisetum fluviatile L.) имеет мощный стебель толщиной около 0,5 см и высотой от 20 до 150 см. На верхушках стеблей встречаются тупые колоски. При рассмотрении под лупой (10x и др.) видно, что ветви очень короткие, малочисленные или отсутствуют, влагалища с многочисленными зубцами (от 18 до 20).

г) Хвощ болотный (Equisetum palustre L.). На верхушке стеблей могут быть тупые колоски. При рассмотрении под лупой (10x и др.) видно, что стеблевые влагалища с неспаянными, снабженными широкой белой каймой зубцами, влагалища ветвей на стебле черного цвета. При отрывании ветвей на стебле удерживаются не только влагалища, но и первые членики. Поверхность стеблей и ветвей поперечно-морщинистая.

Микроскопические признаки. Определение проводят в соответствии с ОФС «Микроскопический и микрохимический анализ лекарственного растительного сырья и лекарственных средств растительного происхождения».

Цельное сырье, измельченное сырье. При рассмотрении с поверхности эпидермиса стебля, ветвей, листовых влагалищ и зубцов (редуцированных листьев) должны быть видны клетки на ребрах, сильно удлиненные (вытянутые по оси роста) с утолщенными прямыми или слегка извилистыми, пористыми стенками. Клетки в бороздках короче, их длинные стенки извилистые (угловато и округло зазубренные), пористые. На коротких стенках (стыках) клеток эпидермиса, расположенных на вершине ребер (гребнях), видны выросты, имеющие (с поверхности) вид спаренных кружочков с ясно выраженной перегородкой. При рассмотрении выростов сбоку видно, что на стеблях зубцы иногда сглаженные (закругленные), на ветвях зубцы наклонные, острые, перегороженные. На поверхности клеток эпидермиса ребер также имеются многочисленные мелкие сосочковидные выросты. Устьица расположены в основании ребер обычно в 2 — 3 ряда (реже в 4 или 1 ряд) и сопровождают бороздку. Они слегка погруженные, с характерной лучистой складчатостью кутикулы. У зубцов с наружной стороны над жилкой расположен ряд парных устьиц, иногда с внутренней стороны, на верхушке над жилкой имеется крупное устьице (гидатода).

На поперечном срезе стебля под эпидермисом в ребрах и в бороздках должны быть видны участки округлых клеток с утолщенными стенками (колленхима).

Клетки паренхимы округлые, тонкостенные, наружный слой хлорофиллоносный (хлоренхима) образует сплошное кольцо, внутренний — рыхлый, в нем под бороздками располагаются крупные полости. Проводящие пучки закрытые (без камбия), расположены в 1 ряд под ребрами, отделены от коры слабозаметной эндодермой и имеют небольшую полость. Центральная часть стебля (междоузлия) полая. На поперечном и продольном срезах стебля в области узла видна разделительная перегородка центральной полости соседних междоузлий. На продольных срезах стебля видны тяжи механической ткани (колленхима), расположенной в ребрах и бороздках. Клетки колленхимы узкие, длинные с пропитанной кремнеземом стенкой. Сосуды древесины междоузлий с кольчатым утолщением стенок по длине равны междоузлию. Флоэма состоит из ситовидных элементов и паренхимы. В узлах, по сравнению с междоузлиями, возрастает количество ксилемы. Сосуды здесь короткие, почти изодиаметрические с сетчатыми, пористыми (простыми или окаймленными порами) стенками.

Порошок. При рассмотрении микропрепаратов порошка должны быть видны кусочки, чаще в продольном и реже в поперечном сечении, ветвей, стеблей, влагалищ и зубцов. Клетки эпидермиса с сильно удлиненными, прямыми или слегка извилистыми, утолщенными, пористыми стенками или с удлиненными, сильноизвилистыми, пористыми стенками. На коротких стенках (стыках) клеток эпидермиса, соответствующих гребням, видны выросты, с поверхности имеющие вид спаренных кружочков, при рассмотрении сбоку они закругленные или зубчатые с ясно выраженной перегородкой. Поверхность большинства клеток с мелкими сосочковидными выростами. Должны быть видны фрагменты эпидермиса со слегка погруженными устьицами, имеющими характерную лучистую складчатость кутикулы. На некоторых кусочках устьица частично разрушены или вместо них видны овальные отверстия. На кусочках ветвей продольного сечения, соответствующих наружной поверхности, видны эпидермис с зубчатыми и сосочковидными выростами и устьица с лучистой складчатостью. На кусочках ветвей продольного сечения, соответствующих внутренней части, видна рыхлая сердцевина с клетками, содержащими хлорофилл, по краям могут быть видны зубчатые и мелкие сосочковидные выросты или выпуклые с лучистой складчатостью устьица. Видны части влагалищ и зубцов с центральной жилкой, над которой располагаются парами по всей длине жилки, устьица с лучистой складчатостью. На верхушках зубцов иногда видны крупные устьица.

На кусочках продольного сечения стебля видны группы сосудов ксилемы с различным утолщением стенок (спиралевидным, кольчатым, сетчатым, реже пористым).

Примечания - К другим видам хвощей, встречающимся в сырье как примесь, относят:

а) Хвощ лесной (Equisetum sylvaticum L.) при рассмотрении под микроскопом эпидермиса стебля с поверхности в бороздках видны один (два) ряда устьиц. Ребра гладкие, но местами по краям заметны крупные выросты в виде зубцов или сосочков. Стенки клеток ребер ветвей слабоволнистые.

б) Хвощ луговой (Equisetum pratense L.) при рассмотрении под микроскопом видно, что выросты на эпидермисе ребрышек расположены в несколько рядов. В бороздках один, реже два ряда устьиц. Стенки клеток ребер ветвей слегка волнистые. На стеблях имеются поперечные кольчатые выросты.

в) Хвощ речной (топяной, приречный) (Equisetum fluviatile L.) При рассмотрении эпидермиса стебля под микроскопом с поверхности видны гладкие ребра, чередующиеся с широкими бороздами, несущими до 12 рядов устьиц в ширину. По краю ребер видны зубцы.

г) Хвощ болотный (Equisetum palustre L.) при рассмотрении под микроскопом эпидермиса стебля и ветвей с поверхности видны устьица, расположенные несколькими рядами. Ребра стеблей и ветвей несут заостренные зубцы. На поперечном срезе ветвей имеется центральная полость, у стебля отсутствует колленхима в бороздках.

в виде кружочков (вид сверху) (200x).

Определение основных групп биологически активных веществ

Тонкослойная хроматография. Определение проводят методом ТСХ (ОФС «Тонкослойная хроматография»).

Пластинка. ВЭТСХ пластинка со слоем силикагеля.

Подвижная фаза (ПФ). Муравьиная кислота безводная — уксусная кислота ледяная — вода — этилацетат 7,5:7,5:18:67.

Раствор стандартного образца кофейной кислоты. Растворяют 1 мг кофейной кислоты в 20 мл спирта 96%.

Раствор стандартного образца рутина. Растворяют 2,5 мг рутина в 20 мл спирта 96%.

Испытуемый раствор. В круглодонную колбу вместимостью 50 мл помещают 1,0 г сырья, измельченного до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 1 мм, прибавляют 10 мл метанола и нагревают на водяной бане при температуре 60 °C в течение 10 мин, периодически встряхивая. После охлаждения фильтруют через беззольный фильтр.

Реактив для детектирования 1. Дифенилборной кислоты аминоэтилового эфира раствор 1% в спирте 96%.

Реактив для детектирования 2. Макрогола 400 раствор спиртовой 5%.

На линию старта пластинки полосами длиной 8 мм и шириной 2 мм наносят 5 мкл испытуемого раствора и по 5 мкл раствора стандартного образца кофейной кислоты и раствора стандартного образца рутина в одну полосу. Пластинку с нанесенными пробами сушат, помещают в предварительно насыщенную в течение не менее 1 ч камеру с ПФ и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт ПФ пройдет около 80 — 90% длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат до удаления следов растворителей, нагревают при температуре 100 — 105 °C в течение 3 — 5 мин. Затем еще теплую пластинку последовательно опрыскивают реактивом для детектирования 1 и реактивом для детектирования 2, сушат до удаления следов растворителей и через 10 мин просматривают в УФ-свете при длине волны 365 нм.

Результат. На хроматограмме растворов стандартных образцов кофейной кислоты и рутина должна обнаруживаться зона адсорбции с флуоресценцией желтого, зелено-желтого или оранжевого цвета (рутин) и над ней зона адсорбции с флуоресценцией от голубого до зеленовато-синего цвета (кофейная кислота).

На хроматограмме испытуемого раствора между зоной адсорбции раствора стандартного образца рутина и раствора стандартного образца кофейной кислоты должны обнаруживаться следующие зоны: две зоны адсорбции с флуоресценцией от голубого до зеленовато-синего цвета, над ними зона адсорбции с флуоресценцией оранжевого цвета и над ней две зоны адсорбции с флуоресценцией от голубого до зеленовато-синего цвета; выше или на уровне зоны адсорбции раствора стандартного образца кофейной кислоты должны обнаруживаться одна или две зоны адсорбции с флуоресценцией красного цвета; допускается обнаружение других зон адсорбции (фенольные соединения).

Примечание - Другие виды хвоща

На хроматограмме испытуемого раствора не должны обнаруживаться две зоны адсорбции с флуоресценцией светло-зеленого или желто-зеленого цвета непосредственно над линией старта.

ИСПЫТАНИЯ

Влажность. Не более 13,0% (ОФС «Определение влажности лекарственного растительного сырья и лекарственных средств растительного происхождения»).

Зола общая. Не менее 12,0% и не более 27,0% (ОФС «Зола общая»).

Зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте. Не менее 3,0% и не более 15,0% (ОФС «Зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте»).

Измельченность сырья. Определение проводят в соответствии с ОФС «Определение подлинности, измельченности и содержания примесей в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Цельное сырье: частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 3 мм, — не более 5%.

Измельченное сырье: частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями размером 7 мм, — не более 5%; частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,18 мм, — не более 5%.

Порошок: частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями размером 2 мм — не более 5%; частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,18 мм, — не более 5%.

Допустимые примеси. Определение проводят в соответствии с ОФС «Определение подлинности, измельченности и содержания примесей в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Другие части растения (корневища, корни). Цельное сырье, измельченное сырье: не более 1%.

Органическая примесь. Цельное сырье, измельченное сырье: не более 1%.

Минеральная примесь. Не более 0,5%.

Тяжелые металлы и мышьяк. В соответствии с ОФС «Определение содержания тяжелых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Радионуклиды. В соответствии с ОФС «Определение содержания радионуклидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Зараженность вредителями запасов. Испытание проводят в соответствии с ОФС «Определение степени зараженности лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов вредителями запасов».

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Сумма флавоноидов. Определение проводят методом спектрофотометрии (ОФС «Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях»).

Исходный раствор. Аналитическую пробу сырья измельчают до величины частиц, проходящих через сито с отверстиями размером 1 мм. В круглодонную колбу со шлифом вместимостью 250 мл помещают 0,5 г (точная навеска) измельченного сырья, прибавляют 60 мл смеси хлористоводородной кислоты разведенной 10% — спирта 96% 2:28. Колбу с содержимым присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на водяной бане в течение 120 мин, периодически встряхивая для смывания частиц сырья со стенок. После охлаждения полученное извлечение фильтруют через беззольный фильтр в мерную колбу вместимостью 100 мл, так чтобы частицы сырья не попали на фильтр. Фильтр после фильтрации помещают в колбу для экстрагирования, добавляют 40 мл смеси хлористоводородной кислоты разведенной 10% — спирта 96% 2:28, присоединяют к обратному холодильнику и проводят вторую экстракцию при нагревании на водяной бане в течение 60 мин. После охлаждения извлечение фильтруют в ту же мерную колбу. Объем раствора доводят спиртом 96% до метки.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 5,0 мл исходного раствора, прибавляют 4 мл алюминия хлорида раствора 2% в спирте 96%, 0,15 мл хлористоводородной кислоты разведенной 10% и доводят объем раствора спиртом 96% до метки.

Раствор сравнения. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 5,0 мл исходного раствора, прибавляют 0,15 мл хлористоводородной кислоты разведенной 10% и доводят объем раствора спиртом 96% до метки.

Измеряют оптическую плотность испытуемого раствора через 30 мин на спектрофотометре при длине волны 415 нм в кювете с толщиной слоя 1 см относительно раствора сравнения.

Содержание суммы флавоноидов в пересчете на изокверцитрозид в сухом сырье в процентах (X) вычисляют по формуле:

где A — оптическая плотность испытуемого раствора;

a — навеска сырья, г;

316 — удельный показатель поглощения комплекса изокверцитрозида с алюминия хлоридом при длине волны 415 нм (A_{1\text{см}}^{1\%}) ;

W — влажность сырья, %.

УПАКОВКА, МАРКИРОВКА И ПЕРЕВОЗКА

В соответствии с ОФС «Упаковка, маркировка и перевозка лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов».

ХРАНЕНИЕ

В соответствии с ОФС «Хранение лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов».