ФС.2.1.0680. Фармакопейная статья. Прогестерон

(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 13.03.2024 № 120)

(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XV издание»)

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Прогестерон Прогестерон Progesteronum	ФС.2.1.0680
	Взамен ФС 42-2831-92

C21H30O2 [57-83-0]	М.м. 314,46

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Прегн-4-ен-3,20-дион.

Содержит не менее 97,0% и не более 102,0% прогестерона C21H30O2 в пересчете на сухое вещество.

СВОЙСТВА

Описание. Белый или почти белый кристаллический порошок или бесцветные кристаллы.

<*> Проявляет полиморфизм.

---

<*> Приводится для информации.

Растворимость. Очень легко растворим в хлороформе и этаноле, умеренно или мало растворим в жирных маслах, практически нерастворим в воде.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

1. ИК-спектрометрия (ОФС «Спектрометрия в средней инфракрасной области»). Инфракрасный спектр субстанции по положению полос поглощения должен соответствовать спектру фармакопейного стандартного образца прогестерона.

Если спектры различаются, испытуемую субстанцию и фармакопейный стандартный образец прогестерона по отдельности растворяют в этаноле, выпаривают досуха и записывают спектры сухих остатков.

2. ВЭЖХ. Время удерживания основного пика на хроматограмме испытуемого раствора должно соответствовать времени удерживания пика прогестерона на хроматограмме раствора стандартного образца прогестерона (раздел «Количественное определение»).

3. Определение проводят методом ТСХ (ОФС «Тонкослойная хроматография»).

Пластинка. ТСХ пластинка со слоем силикагеля F254.

Подвижная фаза (ПФ). Этилацетат — метиленхлорид 33:66.

Растворитель. Метанол — метиленхлорид 1:9.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 10 мг субстанции, растворяют в растворителе и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Раствор стандартного образца прогестерона. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 10 мг фармакопейного стандартного образца прогестерона, растворяют в растворителе и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

На линию старта пластинки наносят по 5 мкл испытуемого раствора и раствора стандартного образца прогестерона. Пластинку с нанесенными пробами сушат на воздухе, помещают в камеру с ПФ и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт ПФ пройдет около 80 — 90% длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат до удаления следов растворителей, и просматривают в УФ-свете при длине волны 254 нм.

Основная зона адсорбции на хроматограмме испытуемого раствора по положению, величине и степени подавления флуоресценции должна соответствовать зоне адсорбции прогестерона на хроматограмме раствора стандартного образца прогестерона.

4. Качественная реакция. К 5 мг субстанции прибавляют 2 мл серной кислоты концентрированной и 3 мл воды; должно появиться желтое окрашивание с зеленой флуоресценцией. Раствор охлаждают, прибавляют 3 мл хлороформа и встряхивают, окраска обоих слоев должна исчезнуть.

ИСПЫТАНИЯ

Удельное вращение. От +186 до +194 в пересчете на сухое вещество (1% раствор субстанции в этаноле, ОФС «Оптическое вращение»).

Прозрачность раствора. Раствор 0,2 г субстанции в 20 мл этанола должен быть прозрачным (ОФС «Прозрачность и степень опалесценции (мутности) жидкостей»).

Цветность раствора. Раствор, полученный в испытании «Прозрачность раствора», должен выдерживать сравнение с эталоном Y6 (ОФС «Степень окраски жидкостей», метод 2).

Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

Подвижная фаза (ПФА). Ацетонитрил — вода 500:500.

Подвижная фаза (ПФБ). Вода — ацетонитрил 200:800.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 20 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в ПФБ и доводят объем раствора ПФБ до метки.

Раствор сравнения. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл испытуемого раствора и доводят объем раствора ПФБ до метки. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора ПФБ до метки.

Раствор стандартного образца прогестерона, содержащего примеси B, C, G, I и M. В мерную колбу вместимостью 5 мл помещают 2 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца прогестерона, содержащего примеси B, C, G, I и M, растворяют в ПФБ и доводят объем раствора ПФБ до метки.

Раствор стандартного образца прогестерона, содержащего примеси D, E, J, K и L. В мерную колбу вместимостью 5 мл помещают 2 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца прогестерона, содержащего примеси D, E, J, K и L, растворяют в ПФБ и доводят объем раствора ПФБ до метки.

Раствор стандартного образца прогестерона, содержащего примесь H.

В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 10 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца прогестерона, содержащего примесь H (с заданным содержанием примеси H), растворяют в ПФБ и доводят объем раствора ПФБ до метки.

Примечание

Примесь B: (20S)-20-гидроксипрегн-4-ен-3-он [145-14-2].

Примесь C: (20R)-20-гидроксипрегн-4-ен-3-он [145-15-3].

Примесь D: [(20S)-3-оксопрегн-4-ен-20-ил]ацетат [5035-09-6].

Примесь E: [(20R)-3-оксопрегн-4-ен-20-ил]ацетат [5062-62-4].

Примесь G: 21-(циклогексилиден)прегн-4-ен-3,20-дион [2257421-79-5].

Примесь H ( \Delta 6 -прогестерон): прегна-4,6-диен-3,20-дион [1162-56-7].

Примесь I: (20RS)-20-метил-3-оксопрегн-4-ен-21-аль [24254-01-1].

Примесь J: прегна-1,4-диен-3,20-дион [1162-54-5].

Примесь K: прегна-4,9(11)-диен-3,20-дион [17652-16-3].

Примесь L: 20-метилиден-3-оксопрегн-4-ен-21-аль [2257421-80-8].

Примесь M: (17\alpha) -прегн-4-ен-3,20-дион [2000-66-0].

Хроматографические условия

Колонка	150 x 4,6 мм, силикагель октадецилсилильный, экстра плотно связанный, эндкепированный, для хроматографии, 5 мкм;
Скорость потока	1,0 мл/мин;
Детектор	спектрофотометрический, 241 нм; спектрофотометрический, 286 нм (для определения примеси H);
Объем пробы	10 мкл.

Режим хроматографирования

Время, мин	ПФА, %	ПФБ, %
0 — 20	100	0
20 — 27	100 \rightarrow 0	0 \rightarrow 100
27 — 45	0	100
45 — 52	100	0
52 — 55	100	0

Хроматографируют раствор стандартного образца прогестерона, содержащего примеси B, C, G, I и M, раствор стандартного образца прогестерона, содержащего примеси D, E, J, K и L, раствор стандартного образца прогестерона, содержащего примесь H, раствор сравнения и испытуемый раствор.

Относительное время удерживания соединений. Прогестерон — 1 (около 14 мин); примесь B — около 0,6; примесь J — около 0,65; примесь H — около 0,82; примесь K — около 0,85; примесь C — около 0,93; примесь M — около 1,1; примесь L — около 1,90; примесь I — около 1,95; примеси D и E — около 2,05; примесь G — около 2,65.

Для идентификации пиков используют хроматограммы прилагаемые к фармакопейному стандартному образцу прогестерона, к фармакопейному стандартному образцу прогестерона, содержащего примеси B, C, G, I и M, к фармакопейному стандартному образцу прогестерона, содержащего примеси D, E, J, K и L и фармакопейному стандартному образцу прогестерона содержащего примесь H.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора стандартного образца прогестерона, содержащего примеси B, C, G, I и M отношение максимум/минимум (p/v) между пиком M и высотой нижней точки линии перегиба между пиками примеси M и прогестерона относительно базовой линии должно быть не менее 4.

Допустимое содержание примесей. На хроматограмме испытуемого раствора:

• площадь пика примеси I (сумма двух эпимеров) не должна более чем в 6 раз превышать площадь пика прогестерона на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,6%);
• площадь пика примеси C не должна более чем в 3 раза превышать площадь пика прогестерона на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,3%);
• площадь пика примеси B не должна более чем в 2 раза превышать площадь пика прогестерона на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,2%);
• площадь пика каждой из примесей G, J, K, L, M не должна более чем в 1,5 раз превышать площадь пика прогестерона на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,15%);
• площадь пика примеси H (при 286 нм) рассчитывается по площади соответствующего пика на хроматограмме, полученной с использованием раствора стандартного образца прогестерона, содержащего примесь H с учетом заданного содержания примеси H в стандартном образце прогестерона, содержащего примесь H (не более 0,15%);
• площадь пика любой другой примеси не должна превышать площадь пика прогестерона на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,10%);
• сумма площадей пиков D и E не должна превышать 1,5 площади пика прогестерона на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,15%);
• сумма площадей пиков всех примесей (кроме H) не должна превышать десятикратную площадь пика прогестерона на хроматограмме раствора сравнения (не более 1,0%);

Не учитывают пики, площадь которых менее 0,5 площади пика прогестерона на хроматограмме раствора сравнения (менее 0,05%).

Потеря в массе при высушивании. Не более 0,5% (ОФС «Потеря в массе при высушивании», способ 1). Высушивают до постоянной массы 0,5 г (точная навеска) субстанции при температуре 105 °C в течение 2 ч.

Сульфатная зола. Не более 0,1% (ОФС «Сульфатная зола»). Для определения используют около 1 г (точная навеска) субстанции.

Тяжелые металлы. Не более 0,001%. Определение проводят в соответствии с ОФС «Тяжелые металлы», метод 3Б, в зольном остатке, полученном после сжигания 1,0 г субстанции, с использованием эталонного раствора 1.

Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС «Остаточные органические растворители».

<**> Бактериальные эндотоксины. Не более 3,5 ЕЭ на 1 мг прогестерона (ОФС «Бактериальные эндотоксины»). Для проведения испытания готовят исходный раствор субстанции с концентрацией 0,5 мг прогестерона в 1 мл этанола.

---

<**> Контроль по показателю проводят в субстанции, предназначенной для производства лекарственных препаратов для парентерального применения.

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Определение проводят методом ВЭЖХ в условиях испытания «Родственные примеси» со следующими изменениями.

Хроматографируют раствор стандартного образца прогестерона и испытуемый раствор.

Раствор стандартного образца прогестерона. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 20 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца прогестерона, растворяют в ПФБ и доводят объем раствора ПФБ до метки.

Содержание прогестерона C21H30O2 в субстанции в пересчете на сухое вещество в процентах (X) вычисляют по формуле:

X = \frac{S_{1} \cdot a_{0} \cdot 50 \cdot P \cdot 100}{S_{0} \cdot a_{1} \cdot 50 \cdot (100 - W)} ,

где S1 — площадь пика прогестерона на хроматограмме испытуемого раствора;

S0 — площадь пика прогестерона на хроматограмме раствора стандартного образца прогестерона;

a1 — навеска субстанции, мг;

a0 — навеска фармакопейного стандартного образца прогестерона, мг;

W — потеря в массе при высушивании, %;

P — содержание прогестерона в фармакопейном стандартном образце прогестерона, %.

ХРАНЕНИЕ

В защищенном от света месте.

---