ФС.2.1.0429. Фармакопейная статья. Канамицина сульфат кислый. Канамицин

(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 № 377)

(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XV издание»)

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Канамицина сульфат кислый Канамицин Kanamycini sulfas acidus	ФС.2.1.0429
	Вводится впервые

C18H36N4O11·xH2SO4	М.м. 582,6 (моносульфат) М.м. 484,5 (основание)

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

O-3-Амино-3-дезокси- \alpha -D-глюкопиранозил-( 1 \rightarrow 6 )-O-[6-амино-6-дезокси- \alpha -D-глюкопиранозил-( 1 \rightarrow 4 )]-2-дезокси-D-стрептамина сульфат.

Канамицина сульфат кислый является производной формой канамицина моносульфата, полученный путем биосинтеза с добавлением серной кислоты. Активность не менее 670 ЕД/мг в пересчете на сухое вещество.

Один микрограмм химически чистого канамицина соответствует специфической активности, равной одной единице действия (ЕД).

СВОЙСТВА

Описание. Белый или почти белый порошок.

<*> Гигроскопичен.

---

<*> Приводится для информации.

Растворимость. Очень легко растворим в воде, практически нерастворим в спирте 96% и ацетоне.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

1. ТСХ (ОФС «Тонкослойная хроматография»).

Пластинка. ТСХ пластинка со слоем силикагеля.

Предварительная подготовка пластинки. Пластинку выдерживают при температуре 110 °C в течение 1 ч.

Подвижная фаза (ПФ). Калия дигидрофосфата раствор 0,5 М.

Испытуемый раствор. Растворяют 10 мг субстанции в 10 мл воды.

Раствор стандартного образца канамицина моносульфата. Растворяют 10 мг фармакопейного стандартного образца канамицина моносульфата в 10 мл воды.

Раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы. Растворяют 10 мг фармакопейного стандартного образца канамицина моносульфата, 10 мг фармакопейного стандартного образца стрептомицина сульфата и 10 мг фармакопейного стандартного образца неомицина сульфата в 10 мл воды.

Реактив для детектирования. Смешивают равные объемы 1,3-дигидроксинафталина раствора 0,2% и серной кислоты раствора 50%.

На линию старта пластинки наносят по 10 мкл испытуемого раствора, раствора стандартного образца канамицина моносульфата и раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы. Пластинку с нанесенными пробами сушат на воздухе в течение 15 мин, помещают в камеру с ПФ и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт ПФ пройдет около 80 — 90% длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат в токе холодного воздуха до удаления следов растворителей, опрыскивают раствором для детектирования и нагревают при температуре 150 °C в течение 5 — 10 мин. Пластинку охлаждают и просматривают в видимом свете.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы должны обнаруживаться 3 четко разделенные зоны адсорбции.

Результат. Основная зона адсорбции на хроматограмме испытуемого раствора по положению, окраске и величине должна соответствовать основной зоне адсорбции на хроматограмме раствора стандартного образца канамицина моносульфата.

2. Качественная реакция. Растворяют 50 мг субстанции в 2 мл воды, прибавляют 1 мл нингидрина раствора 1% и нагревают на водяной бане; должно появиться фиолетовое окрашивание.

3. Качественная реакция. Субстанция должна давать характерную реакцию на сульфаты (ОФС «Общие реакции на подлинность»).

ИСПЫТАНИЯ

Температура плавления производного. Растворяют 0,5 г субстанции в 10 мл воды, прибавляют 10 мл пикриновой кислоты раствора 1%, при необходимости инициируют кристаллизацию трением стеклянной палочкой о стенки сосуда и оставляют стоять для образования осадка. Выпавший осадок отфильтровывают, промывают 20 мл воды и сушат при температуре 100 °C. Температура плавления около 235 °C (с разложением, ОФС «Температура плавления»).

Удельное вращение. От +112 до +123 в пересчете на сухое вещество (1% раствор субстанции в воде, ОФС «Оптическое вращение»).

Прозрачность раствора. Раствор 0,2 г субстанции в 20 мл воды должен быть прозрачным (ОФС «Прозрачность и степень опалесценции (мутности) жидкостей»).

Цветность раствора. Раствор, полученный в испытании «Прозрачность раствора», должен выдерживать сравнение с эталоном Y7 (ОФС «Степень окраски жидкостей», метод 2).

pH раствора. От 6,5 до 8,5 (1% раствор, ОФС «Ионометрия», метод 3).

Канамицин B. Не более 4%. Испытание проводят методом ТСХ в условиях испытания «Идентификация 1. Тонкослойная хроматография», со следующими изменениями.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 0,10 г (точная навеска) субстанции, растворяют в воде и доводят объем раствора водой до метки.

Раствор стандартного образца канамицина B сульфата. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 4 мг фармакопейного стандартного образца канамицина B сульфата (O-3-амино-3-дезокси- \alpha -D-глюкопиранозил-( 1 \rightarrow 6 )-O-[2,6-диамино-2,6-дидезокси- \alpha -D-глюкопиранозил-( 1 \rightarrow 4 )]-2-дезокси-D-стрептамина сульфат (1:1) [29701-07-3]), растворяют в воде и доводят объем раствора водой до метки.

На линию старта пластинки наносят по 4 мкл испытуемого раствора (20 мкг) и раствора стандартного образца канамицина B сульфата (0,8 мкг). Пластинку с нанесенными пробами сушат на воздухе, помещают в камеру с ПФ и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт ПФ пройдет около 80 — 90% длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат в токе теплого воздуха до удаления следов растворителей, опрыскивают нингидрина и олова(II) хлорида реактивом (1) и выдерживают при температуре 110 °C в течение 15 мин. Пластинку охлаждают и просматривают в видимом свете.

Зона адсорбции канамицина B на хроматограмме испытуемого раствора по совокупности величины и интенсивности окраски не должна превышать аналогичную зону адсорбции на хроматограмме раствора стандартного образца.

Потеря в массе при высушивании. Не более 5,0% (ОФС «Потеря в массе при высушивании», способ 3). Сушат 1 г (точная навеска) субстанции в вакуум-сушильном шкафу при температуре 60 °C и остаточном давлении не превышающем 0,67 кПа (5 мм рт. ст.) в течение 3 ч.

Сульфатная зола. Не более 0,5% (ОФС «Сульфатная зола»). Для определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.

Сульфаты. От 23,0 до 26,0% в пересчете на сухое вещество.

В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 0,175 г (точная навеска) субстанции, растворяют в воде, тщательно перемешивают, pH полученного раствора доводят до значения 11 (потенциометрически) аммиака раствором 13,5 М. К полученному раствору прибавляют 10 мл 0,1 М раствора бария хлорида и около 0,5 мг индикатора фталеинового пурпурного. Избыток хлорида бария титруют 0,1 М раствором эдетата натрия до начала изменения окраски. Далее прибавляют 50 мл спирта 96% и продолжают титрование до исчезновения фиолетово-синей окраски раствора.

1 мл 0,1 М раствора бария хлорида соответствует 9,606 мг сульфатов SO4.

Тяжелые металлы. Не более 0,001%. Определение проводят в соответствии с ОФС «Тяжелые металлы» (метод 3Б) в зольном остатке, полученном в испытании «Сульфатная зола», с использованием эталонного раствора 1.

Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС «Остаточные органические растворители».

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».

<**> Аномальная токсичность. Субстанция должна быть нетоксичной (ОФС «Аномальная токсичность»). Тест-доза — 1,8 мг канамицина в 0,5 мл воды для инъекций на мышь. Скорость введения — 0,1 мл/с. Срок наблюдения — 48 ч.

<**> Бактериальные эндотоксины. Не более 0,35 ЕЭ на 1 мг канамицина (ОФС «Бактериальные эндотоксины»).

<**> Испытание на депрессорные вещества. Субстанция не должна обладать депрессорным действием (ОФС «Испытание на депрессорные вещества»). Тест-доза — 10 мг канамицина в 1 мл воды для инъекций на 1 кг массы животного.

<**> Стерильность. Субстанция должна быть стерильной (ОФС «Стерильность»).

---

<**> Испытание проводят в субстанции, предназначенной для производства лекарственных препаратов для парентерального применения.

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Определение проводят в соответствии с ОФС «Определение антимикробной активности антибиотиков методом диффузии в агар». В качестве стандартного образца используют фармакопейный стандартный образец канамицина моносульфата.

ХРАНЕНИЕ

В герметично укупоренном контейнере.

---