ГОСТ 13496.4-93. Межгосударственный стандарт. Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Методы определения содержания азота и сырого протеина

(введен в действие Постановлением Госстандарта России от 02.06.1994 № 160)

ИСТОРИЯ ИЗМЕНЕНИЙ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИХ АКТОВ

flowchart LR
  n0["ГОСТ 80-62*"]:::rst
  n1["ГОСТ 20083-74*"]:::doc
  click n1 "https://bukva.ai/docs/gost-20083-74" "ГОСТ 20083-74*. Государственный стандарт Союза ССР. Дрожжи кормовые. Технические условия (введен в действие Постановлением Госстандарта СССР от 20.08.1974 N 2020)"
  n2["ГОСТ 18663-78"]:::doc
  click n2 "https://bukva.ai/docs/gost-18663-78" "ГОСТ 18663-78. Государственный стандарт Союза ССР. Витамин B12 кормовой. Технические условия (введен Постановлением Госстандарта СССР от 21.11.1978 N 3062)"
  n3["ГОСТ 7636-55"]:::rst
  click n3 "https://bukva.ai/docs/standart-gost-34308-2017" "ГОСТ 7636-55. Межгосударственный стандарт. Рыбы, морские млекопитающие, морские беспозвоночные и продукты их переработки. Методы анализа"
  n4["ГОСТ 13979.3-68*"]:::doc
  click n4 "https://bukva.ai/docs/gost-13979-3-68" "ГОСТ 13979.3-68*. Межгосударственный стандарт. Жмыхи и шроты. Метод определения суммарной массовой доли растворимых протеинов (введен Постановлением Госстандарта СССР от 01.11.1968"
  n5["ГОСТ 10846-74*"]:::rst
  n6["ГОСТ 23637-79"]:::rst
  click n6 "https://bukva.ai/docs/gost-11304-2013" "ГОСТ 23637-79. Государственный стандарт Союза ССР. Сенаж. Технические условия (утв. и введены в действие Постановлением Госстандарта СССР от 23.05.1979 N 1819)"
  n7["ГОСТ 13496.3-80*"]:::rst
  n8["ГОСТ 17681-82"]:::doc
  click n8 "https://bukva.ai/docs/gost-17681-82" "ГОСТ 17681-82. Государственный стандарт Союза ССР. Мука животного происхождения. Методы испытаний (введен в действие Постановлением Госстандарта СССР от 02.09.1982 N 3482)"
  n9["ГОСТ 13496.4-84"]:::rst
  n10["ГОСТ Р 50466-93"]:::rst
  click n10 "https://bukva.ai/docs/postanovlenie-gost-19522-74" "ГОСТ Р 50466-93. Национальный стандарт Российской Федерации. Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Методы определения содержания азота и сырого протеина"
  n11["ГОСТ 13496.4-93"]:::rst
  click n11 "https://bukva.ai/docs/gost-13496-4-93" "ГОСТ 13496.4-93. Межгосударственный стандарт. Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Методы определения содержания азота и сырого протеина (введен в действие Постановлением Госста"
  n12["ГОСТ Р 51417-99"]:::rst
  click n12 "https://bukva.ai/docs/gost-r-51417-99" "ГОСТ Р 51417-99. Государственный стандарт Российской Федерации. Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Определение массовой доли азота и вычисление массовой доли... (принят и введ"
  n13["ГОСТ 13496.4-2019"]:::doc
  click n13 "https://bukva.ai/docs/standart-gost-13496-4-2019" "ГОСТ 13496.4-2019. Межгосударственный стандарт. Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Методы определения содержания азота и сырого протеина (введен в действие Приказом Росстандар"
  n14["ГОСТ 32044.1-2012"]:::doc
  click n14 "https://bukva.ai/docs/gost-32044-1-2012" "ГОСТ 32044.1-2012. Межгосударственный стандарт. Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Определение массовой доли азота и вычисление массовой доли сырого протеина. Часть 1. Метод К"
  n11 --> n12
  n11 --> n13
  n9 --> n11
  n10 --> n11
  n12 --> n14
  n6 --> n9
  n5 --> n9
  n8 --> n9
  n3 --> n9
  n7 --> n9
  n4 --> n9
  n0 --> n4
  n2 --> n7
  n1 --> n7
classDef rst fill:#FFEBEB,stroke:#8B0000,color:#000;
classDef doc fill:#EBFFEB,stroke:#006400,color:#000;
classDef notEnt fill:#FFFFEB,stroke:#FF8C00,color:#000;

Введен в действие Постановлением Комитета

КОРМА, КОМБИКОРМА, КОМБИКОРМОВОЕ СЫРЬЕ

МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ АЗОТА И СЫРОГО ПРОТЕИНА

Fodder, mixed fodder and animal feed raw stuff. Methods of nitrogen and crude protein determination

ГОСТ 13496.4-93

Группа С19

ОКСТУ 9209

Предисловие

Внесен Техническим секретариатом Межгосударственного Совета по стандартизации, метрологии и сертификации.

2. Принят Межгосударственным Советом по стандартизации, метрологии и сертификации 21 октября 1993 г.

За принятие проголосовали:

3. Постановлением Комитета Российской Федерации по стандартизации, метрологии и сертификации от 02.06.94 № 160 межгосударственный стандарт ГОСТ 13496.4-93 введен в действие непосредственно в качестве государственного стандарта Российской Федерации с 01.01.95.

4. Взамен ГОСТ 13496.4-84.

Информационные данные

1. ОТБОР ПРОБ

Отбор проб — по ГОСТ 13496.0-80, ГОСТ 13586.3-83, ГОСТ 13979.0-86, ГОСТ 27262-87.

2. ТИТРИМЕТРИЧЕСКИЙ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ АЗОТА ПО КЬЕЛЬДАЛЮ (ОСНОВНОЙ МЕТОД)

Сущность метода заключается в разложении органического вещества пробы кипящей концентрированной серной кислотой с образованием солей аммония, переведении аммония в аммиак, отгонке его в раствор кислоты, количественном учете аммиака титриметрическим методом и расчете содержания азота в исследуемом материале.

2.1 Аппаратура, материалы и реактивы

Весы лабораторные 2-го класса точности по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания 200 г.

Весы лабораторные 4-го класса точности по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания 500 г или другие весы того же класса точности.

Измельчитель проб растений ИПР-2.

Соломорезка марки ИСР-1 или других марок.

Сушилка проб кормов марки СК-1 или шкаф сушильный лабораторный с погрешностью поддержания температуры не более 5 °C.

Мельница лабораторная марки МРП-2 или других марок.

Сито с отверстиями диаметром 1 мм.

Электронагреватели или горелки газовые.

Установка типа Кьельдаля или аппарат для отгонки аммиака с водяным паром (см. черт. 1 и 2).

1 — колба вместимостью 1000 см3; 2 — капельная воронка вместимостью 100 см3; 3 — каплеуловитель; 4 — холодильник; 5 — приемная колба вместимостью 250 см3; 6 — подъемный столик; 7 — колбонагреватель, или электроплитка с регулятором температуры, или газовая горелка

Черт. 1

1 — приемная колба; 2 — холодильник; 3 — каплеуловитель; 4 — отгонная колба; 5, 9 — воронки; 6, 7, 8 — краны; 10 — парообразователь

Черт. 2

Капельница для индикатора.

Установка для титрования с бюреткой 2-го класса точности вместимостью 10, 25 или 50 см3 по ГОСТ 29252.

Ступки фарфоровые и пестик по ГОСТ 9147.

Колбы Кьельдаля вместимостью 100, 250 или 500 см3.

Пробирки из термостойкого стекла вместимостью 50 — 100 см3 или колбы из термостойкого стекла вместимостью 100 см3.

Воронки стеклянные диаметром 2 — 3 см по ГОСТ 25336 или втулки Кьельдаля.

Колба коническая вместимостью 250 см3 по ГОСТ 25336.

Колбы мерные вместимостью 500 и 1000 см3 по ГОСТ 1770.

Цилиндр мерный вместимостью 50 и 1000 см3 по ГОСТ 1770.

Пипетки с делениями вместимостью 1 и 25 см3 по ГОСТ 29169.

Стакан фарфоровый вместимостью 1000 см3 по ГОСТ 9147.

Стакан химический вместимостью 50 см3 по ГОСТ 25336.

Асбест листовой.

Вещества, предотвращающие выбрасывание жидкости: кусочки фарфора, стеклянные бусинки, свежепрокаленные кусочки пемзы.

Кислота серная концентрированная по ГОСТ 4204, х.ч., ч.д.а. и стандарт-титр серной кислоты 0,05 моль/дм3 (0,1 н.) раствор.

Калий сернокислый по ГОСТ 4145, х.ч., ч.д.а.

Калий надсернокислый по ГОСТ 4146, ч.д.а.

Медь сернокислая 5-водная по ГОСТ 4165, ч.д.а., х.ч.

Натрий сернокислый безводный по ГОСТ 4166, ч.д.а.

Селен, ч.

Перекись водорода по ГОСТ 10929, водный раствор с массовой долей 30%.

Кислота борная по ГОСТ 9656, ч.д.а.

Натрия гидроокись по ГОСТ 4328, х.ч. или ч.д.а., водный раствор с массовой долей 33 — 40%; 0,1 моль/дм3 раствор гидроокиси натрия, приготовленный по ГОСТ 25794.1.

Спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962.

Метиловый красный.

Метиловый голубой или бромкрезоловый зеленый.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Примечание. Допускается использовать аппаратуру, мерную посуду и другие средства измерений, имеющие такие же или лучшие метрологические характеристики.

2.2 Подготовка к испытанию

2.2.1 Подготовка проб к испытанию

Среднюю пробу сена, силоса, сенажа, соломы, зеленых кормов и т.п. измельчают на отрезки длиной 1 — 3 см; корнеплоды и клубнеплоды разрезают на пластинки (ломтики) толщиной до 0,8 см. Методом квартования выделяют часть средней пробы, масса которой после высушивания должна быть не менее 50 г. Высушивание проб проводят в сушильном шкафу при температуре 60 — 65 °C до воздушно-сухого состояния.

После высушивания воздушно-сухую пробу размалывают на лабораторной мельнице и просеивают через сито. Трудноизмельчимый остаток на сите после ручного измельчения ножницами или в ступке добавляют к просеянной части и тщательно перемешивают.

Среднюю пробу комбикормов и комбикормового сырья размалывают и просеивают без предварительного подсушивания.

Приготовленные для испытания пробы хранят в стеклянной или пластмассовой банке с притертой пробкой (крышкой) в сухом месте.

Пробы жидких кормов анализируют без предварительной подготовки.

2.2.2 Подготовка реактивов и растворов

2.2.2.1 Приготовление смешанных катализаторов

Катализатор 1. Смешивают 10 весовых частей сернокислой меди, 100 весовых частей сернокислого калия и 2 весовые части селена, тщательно растирают в ступке до получения мелкозернистого порошка.

Катализатор 2. Смешивают 10 весовых частей сернокислой меди и 100 весовых частей сернокислого калия, тщательно растирают в ступке до получения мелкозернистого порошка.

При приготовлении катализаторов 1 и 2 допускается заменять сернокислый калий надсернокислым калием или сернокислым натрием в том же количестве.

2.2.2.2 Приготовление раствора серной кислоты, содержащей селен

Аморфный или растертый селен, из расчета 5 г на 1 дм3 кислоты, растворяют при нагревании в концентрированной серной кислоте в термостойкой колбе до обесцвечивания.

2.2.2.3 Приготовление раствора серной кислоты c(1/2H_{2}SO_{4}) = 0,05\text{моль}/\text{дм}^{3} (0,1 н)

Используют стандарт-титр серной кислоты. Растворы готовят в соответствии с правилами, приложенными к комплекту.

Допускается приготовление раствора серной кислоты c(1/2H_{2}SO_{4}) = 0,05\text{моль}/\text{дм}^{3} из концентрированной серной кислоты в соответствии с требованиями ГОСТ 25794.1-83.

2.2.2.4 Приготовление раствора борной кислоты с массовой концентрацией 4%

40 г борной кислоты растворяют в небольшом количестве теплой воды при нагревании и переносят в колбу вместимостью 1000 см3. После охлаждения доводят объем водой до 1000 см3.

2.2.2.5 Приготовление смешанного индикатора

При титровании применяют один из следующих индикаторов:

индикатор 1 — растворяют 0,20 г метилового красного и 0,10 г метиленового голубого в 100 см3 96%-ного раствора этилового спирта;

индикатор 2 — смешивают 3 объема 0,1%-ного раствора бромкрезолового зеленого в этиловом спирте и 1 объем 0,2%-ного раствора метилового красного в этиловом спирте. Хранят индикаторы в темной склянке.

2.2.2.6 Приготовление раствора гидроокиси натрия с массовой долей 33%

330 г гидроокиси натрия растворяют в фарфоровом стакане в 670 см3 дистиллированной воды.

2.2.2.7 Приготовление раствора гидроокиси натрия с массовой долей 40%

2.3 Проведение испытания

2.3.1 Приготовление минерализата

В длинной сухой пробирке, свободно входящей в горло колбы Кьельдаля, отвешивают 0,7 — 1 г кормов растительного происхождения и комбикормов, 0,3 — 0,5 г муки животного происхождения или 0,4 — 0,5 г дрожжей с погрешностью не более 0,001 г. Вставив пробирку в колбу Кьельдаля до ее дна, высыпают навеску и вновь взвешивают пробирку. По разности между первым и вторым взвешиваниями определяют массу навески, взятую для анализа. Минерализацию осуществляют одним из двух способов:

Способ 1. Добавляют в колбу Кьельдаля 2 г смешанного катализатора 1 или 8 г катализатора 2. После прибавления катализатора осторожно приливают 10 — 12 см3 концентрированной серной кислоты в зависимости от массы навески;

Способ 2. Добавляют в колбу Кьельдаля 10 см3 водного раствора перекиси водорода с массовой долей 30% в качестве окислителя. После прекращения бурной реакции приливают такое же количество концентрированной серной кислоты. Для ускорения сжигания рекомендуется использовать серную кислоту, содержащую селен, приготовленную по п. 2.2.2.2.

Содержимое колбы Кьельдаля тщательно перемешивают легкими круговыми движениями, обеспечивая полное смачивание навески. Колбу устанавливают на нагреватель так, чтобы ее ось была наклонена под углом 30 — 45° к вертикали, в горло колбы вставляют маленькую стеклянную воронку или втулку для уменьшения улетучивания кислоты во время минерализации. Вначале колбу нагревают умеренно, чтобы предотвратить бурное пенообразование.

При нагревании навеску время от времени помешивают вращательными движениями колбы. После исчезновения пены нагревание усиливают, пока жидкость не будет доведена до постоянного кипения. Нагрев считается нормальным, если пары кислоты конденсируются ближе к середине горла колбы Кьельдаля, избегая перегрева стенок колбы, не соприкасающихся с жидкостью. Если используют открытое пламя, то такой перегрев можно предотвратить, помещая колбу на лист асбеста с отверстием по диаметру несколько меньшим, чем диаметр колбы на уровне жидкости.

Допускается проводить отгонку непосредственно из колбы Кьельдаля. В этом случае для минерализации используют колбу Кьельдаля вместимостью 500 см3. Перед отгонкой аммиака минерализат разбавляют 150 — 200 см3 дистиллированной воды.

При проведении экспресс-анализа на комбикормовых предприятиях и в период заготовки травянистых кормов допускается следующий способ приготовления минерализата.

Навеску испытуемой пробы массой 0,2 — 0,3 г помещают в колбу Кьельдаля или в пробирку, или в колбу из термостойкого стекла. В колбу с навеской добавляют 4 см3, а в пробирку — 3 см3 водного раствора перекиси водорода с массовой концентрацией 30%. Через 1,5 — 2 мин в колбу добавляют 5 — 8 см3, а в пробирку — 2 см3 концентрированной серной кислоты, содержащей селен, приготовленной по п. 2.2.2.2. Содержимое колбы или пробирки тщательно перемешивают для полного смачивания навески. Колбу или пробирку с навеской помещают на электронагреватель и нагревают до кипения. Затем нагрев увеличивают и минерализацию продолжают до полного обесцвечивания раствора (20 — 30 мин). Если раствор не осветлился, то нагревание продолжают еще 5 — 8 мин или охлаждают, приливают 0,5 см3 раствора перекиси водорода с массовой концентрацией 30% и кипятят до полного обесцвечивания. После охлаждения минерализат количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3, объем раствора доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают. В отгонную колбу переносят 50 см3 раствора минерализата.

2.3.2 Отгонка аммиака и титрование

2.3.2.1 Отгонка аммиака в борную кислоту

В приемную колбу наливают 20 см3 раствора борной кислоты с массовой концентрацией 4% и 5 капель любого из смешанных индикаторов. Колбу подставляют под холодильник так, чтобы его кончик был погружен в раствор борной кислоты на глубину не менее чем 1 см. Через холодильник пропускают холодную воду.

Отгонную колбу присоединяют к аппарату для отгонки аммиака и через капельную воронку осторожно приливают в колбу с минерализатом раствор гидроокиси натрия с массовой долей 33%. Воронку промывают 2 — 3 раза 10 — 15 см3 дистиллированной воды, оставляя небольшое количество воды в качестве гидрозатвора. Допускается прибавлять раствор гидроокиси натрия до присоединения отгонной колбы к аппарату. В этом случае раствор гидроокиси натрия наливают в отгонную колбу по стенке, стараясь не перемешивать его с минерализатом, и сразу присоединяют к аппарату для отгонки аммиака.

Объем приливаемой гидроокиси натрия зависит от объема серной кислоты, использованной для приготовления минерализата. На каждый кубический сантиметр серной кислоты, оставшейся после окончания процесса минерализации, следует добавлять не менее 3,5 см3 раствора гидроокиси натрия массовой долей 33%. Если объем оставшейся серной кислоты трудно установить, объем щелочи рассчитывают исходя из объема серной кислоты, взятой для минерализации. Допускается предварительная нейтрализация содержимого отгонной колбы раствором гидроокиси натрия массовой долей 40%, используя любой из индикаторов. Для обеспечения выделения аммиака добавляют дополнительно 1 см3 раствора гидроокиси натрия массовой долей 40%.

Отгонную колбу нагревают с помощью электронагревателя или газовой горелки. Раствор в отгонной колбе нагревают так, чтобы обеспечить равномерное кипение. Допускается проводить отгонку водяным паром. Чтобы исключить выделение аммиака, вода в парообразователе должна быть подкислена серной кислотой до фиолетовой окраски при применении индикатора 1 и розовой — при применении индикатора 2.

В начале отгонки аммиака цвет раствора в приемной колбе меняется на зеленый. При нормальном кипении объем раствора в приемной колбе через 20 — 30 мин обычно составляет 150 — 200 см3. При проведении экспресс-анализа время отгонки сокращается до 7 — 10 мин. Конец отгонки можно установить с помощью красной лакмусовой бумажки. Для этого приемную колбу отставляют от аппарата, предварительно обмыв конец холодильника дистиллированной водой, и подставляют лакмусовую бумажку под стекающие капли дистиллята. Если лакмус не синеет, отгон аммиака закончен. Если лакмус синеет, приемную колбу снова подставляют под холодильник и продолжают отгонку. После окончания отгонки приемную колбу опускают и конец холодильника обмывают дистиллированной водой в приемную колбу. Оттитровывают аммиак из бюретки раствором серной кислоты c(1/2H_{2}SO_{4}) = 0,05\text{моль}/\text{дм}^{3} до перехода окраски индикатора от зеленой в фиолетовую при применении индикатора 1 и от зеленой в розовую при применении индикатора 2.

2.3.2.2 Отгонка аммиака в серную кислоту

В приемную колбу пипеткой наливают 50 см3 раствора серной кислоты c(1/2H_{2}SO_{4}) = 0,05\text{моль}/\text{дм}^{3} . Отгонку ведут способом, указанным в п. 2.3.2.1. После окончания отгонки содержимое приемной колбы (избыток раствора серной кислоты c(1/2H_{2}SO_{4}) = 0,05\text{моль}/\text{дм}^{3} титруют раствором гидроокиси натрия c(NaOH) = 0,1 моль/дм3 до перехода окраски в зеленую.

2.3.2.3. Одновременно с проведением испытания проводят контрольный опыт на загрязнение воды и реактивов аммиаком, исключая взятие навески корма.

Объем серной кислоты, израсходованной на титрование в контрольном опыте при отгонке в борную кислоту, не должен превышать 0,5 см3. При отгонке в серную кислоту объем раствора гидроокиси натрия, израсходованного на титрование, должен быть не менее 49,5 см3. В случае превышения установленных норм выявляют источники загрязнения реактивов аммиаком и устраняют их.

2.4 Обработка результатов

2.4.1. Массовую долю азота (X) в испытуемой пробе в процентах при проведении отгонки аммиака в борную кислоту вычисляют по формуле

X = \frac{(V_{1} - V_{0})K \cdot 0,0014 \cdot 100}{m} ,

где V_{1} — объем раствора серной кислоты, израсходованного на титрование испытуемого раствора, см3;

V_{0} — объем раствора серной кислоты, израсходованного на титрование в контрольном опыте, см3;

K — поправка к титру раствора серной кислоты c(1/2H_{2}SO_{4}) = 0,05\text{моль}/\text{дм}^{3} , если он приготовлен не из стандарт-титра;

0,0014 — масса азота, эквивалентная массе серной кислоты, содержащейся в 1 см3 раствора c(1/2H_{2}SO_{4}) = 0,05\text{моль}/\text{дм}^{3} ;

m — масса навески, г;

100 — коэффициент пересчета в проценты.

2.4.2. Массовую долю азота (X) в испытуемой пробе в процентах при проведении отгонки аммиака в серную кислоту вычисляют по формуле

X = \frac{(V_{0} - V_{1})K \cdot 0,0014 \cdot 100}{m} ,

где V_{0} — объем раствора гидроокиси натрия c(NaOH) = 0,1 моль/дм3, израсходованного на титрование раствора серной кислоты c(1/2H_{2}SO_{4}) = 0,05\text{моль}/\text{дм}^{3} в контрольном опыте, см3;

V_{1} — объем раствора гидроокиси натрия c(NaOH) = 0,1 моль/дм3, израсходованного на титрование серной кислоты в испытуемом растворе, см3;

K — поправка к титру раствора гидроокиси натрия c(NaOH) = 0,1 моль/дм3;

0,0014 — масса азота, эквивалентная массе серной кислоты, содержащейся в 1 см3 раствора c(1/2H_{2}SO_{4}) = 0,05\text{моль}/\text{дм}^{3} ;

m — масса навески, г;

100 — коэффициент пересчета в проценты.

Примечание. При проведении экспресс-анализа полученный результат увеличивают в два раза, так как для отгонки используется лишь половина объема минерализата.

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Результаты вычисляют до третьего десятичного знака и округляют до второго десятичного знака.

2.4.3. Допускаемые расхождения между результатами двух параллельных определений (d) и между двумя результатами, полученными в разных условиях (D) (в разных лабораториях, в разное время, при работе на разных приборах и т.д.), при доверительной вероятности P = 0,95 не должны превышать следующих значений:

d = 0,02 + 0,03\overline{X},

D = 0,09 + 0,05\overline{X},

где \overline{X} — среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, %;

\overline{X} — среднее арифметическое результатов двух испытаний, выполненных в разных условиях, %.

Допускаемые расхождения между результатами параллельных определений и испытаний, проведенных в разных условиях, могут иметь иное выражение, оговоренное в нормативно-технической документации на данный вид продукта.

Предельную погрешность результата анализа (\Delta_{\Sigma}) при односторонней доверительной вероятности P = 0,95 вычисляют по формуле

\Delta_{\Sigma} = 0,051 + 0,028\overline{X}.

Предельную погрешность результата анализа используют при оценке качества кормов.

Допускается проведение анализа без параллельных определений при наличии в партии исследуемых проб стандартных образцов (СО). В этом случае (при обязательном проведении выборочного статистического контроля сходимости параллельных) за результат испытания принимают результат единичного определения, если разница между воспроизведенной и аттестованной в СО массовой долей азота (\overline{D}) не превышает

\overline{D} = 0,06 + 0,033X_{\text{атт}},

где X_{\text{атт}} — аттестованное значение определяемого компонента, взятое из свидетельства на СО, %.

Контрольные анализы образцов исследуемой партии и анализы СО проводят в соответствии с утвержденной научно-технической документацией.

2.4.4 Массовую долю азота в сухом веществе (X_{1}) в процентах вычисляют по формуле

X_{1} = \frac{X \cdot 100}{100 - W} ,

где X — массовая доля азота в испытуемой пробе, %;

W — массовая доля влаги в испытуемой пробе, %.

2.5. Массовую долю сырого протеина в испытуемой пробе (X_{2}) или в сухом веществе (X_{3}) в процентах вычисляют по формуле

X_{2}(X_{3}) = 6,25X(X_{1}),

где 6,25 — коэффициент пересчета общего содержания азота на сырой протеин;

X — массовая доля азота в испытуемой пробе, %;

X_{1} — массовая доля азота в сухом веществе, %.

3. ФОТОМЕТРИЧЕСКИЙ ИНДОФЕНОЛЬНЫЙ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ АЗОТА

Сущность метода заключается в разложении органического вещества пробы концентрированной серной кислотой с образованием солей аммония и последующем фотометрическом определении азота в виде окрашенного индофенольного соединения, образующегося в щелочной среде при взаимодействии с салицилатом и гипохлоритом натрия и имеющего максимум светопоглощения при 655 нм. Концентрация азота в фотометрируемых растворах должна быть 0,01 — 0,14 мг/см3.

3.1 Аппаратура, материалы и реактивы

Весы лабораторные 2-го класса точности по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания 200 г или аналогичные по точности и весы лабораторные 4-го класса точности по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания 500 г или другие весы того же класса точности.

Соломорезка марки ИСР-1 или других марок.

Сушилка проб кормов марки СК-1 или шкаф сушильный лабораторный с погрешностью поддержания температуры не более 5 °C.

Мельница лабораторная марки МРП-2 или других марок.

Сито с отверстиями диаметром 1 мм.

Фотоэлектроколориметр, имеющий светофильтр с максимумом светопропускания в области 620 — 670 нм.

Электронагреватель с температурой нагрева 350 — 400 °C или горелки газовые.

Груша резиновая.

Пробирки из термостойкого стекла вместимостью 50 — 100 см3 или колбы из термостойкого стекла вместимостью 100 см3.

Дозатор вместимостью 3 см3 или градуированная пипетка вместимостью 3 см3 по ГОСТ 29169.

Шприц-дозатор или градуированные пипетки вместимостью 0,5 и 2,5 см3 по ГОСТ 29169.

Дозатор вместимостью 50 см3 или цилиндр мерный вместимостью 50 см3 по ГОСТ 1770.

Колбы Кьельдаля вместимостью 100 и 500 см3.

Колбы мерные вместимостью от 100 до 1000 см3 по ГОСТ 1770.

Стаканы химические или колбы конические вместимостью 100 см3 по ГОСТ 25336.

Бюретки и градуированные пипетки вместимостью до 50 см3 по ГОСТ 1770.

Аммоний хлористый по ГОСТ 3773, ч.д.а.

Натрия гидроокись по ГОСТ 4328, ч.д.а., водный раствор c(NaOH) = 2 моль/дм3.

Натрий салицилово-кислый, ч.д.а.

Натрий нитропруссидный, ч.д.а.

Калий-натрий виннокислый по ГОСТ 5845, ч.д.а.

Соль динатриевая этилендиамин-N', N', N', N'-тетрауксусной кислоты, 2-водная (трилон Б) по ГОСТ 10652, х.ч.

3.2 Подготовка к испытанию — по п. 2.2.1.

3.2.1 Приготовление растворов

3.2.1.1 Приготовление раствора 1

3.2.1.2 Приготовление раствора 2

3.2.1.3 Приготовление раствора 3

3.2.1.4 Приготовление раствора 4

V = \frac{1,2 \cdot V_{1}}{c} ,

где 1,2 — требуемая массовая концентрация хлора, г/дм3;

V — объем раствора 3, необходимый для приготовления V_{1} см3 раствора 4, см3;

V_{1} — приготовляемый объем раствора 4, см3;

c — концентрация активного хлора, г/дм3.

3.2.1.5. Приготовление раствора серной кислоты, содержащей селен, — по п. 2.2.2.2.

3.2.1.6 Приготовление основного раствора хлористого аммония

Навеску 1,919 г хлористого аммония (содержащего 99,5% основного вещества) растворяют в дистиллированной воде и доводят объем раствора дистиллированной водой до 1000 см3. Раствор содержит 0,5 мг азота в 1 см3.

3.2.1.7 Приготовление растворов сравнения и построение градуировочного графика

Берут восемь пронумерованных мерных колб вместимостью 100 см3 и приливают из бюретки вместимостью 50 см3 указанные в таблице объемы основного раствора. Затем в каждую колбу доливают до половины ее объема дистиллированную воду и приливают 3 см3 концентрированной серной кислоты, содержащей селен, приготовленной по п. 2.2.2.2, и перемешивают. После охлаждения доводят объемы растворов дистиллированной водой до метки и снова перемешивают.

Перед началом каждого испытания для построения градуировочного графика из каждой колбы растворов сравнения берут по 0,5 см3 раствора и помещают в пронумерованные восемь стаканов вместимостью 100 см3, затем в каждый стакан добавляют по 50 см3 раствора 2, перемешивают и добавляют по 2,5 см3 раствора 4, снова перемешивают и оставляют растворы на 1 ч при комнатной температуре для полного развития окраски.

Оптическую плотность растворов измеряют относительно первого раствора сравнения, не содержащего азот, в кюветах с толщиной просвечиваемого слоя 10 мм, используя красный светофильтр с максимумом пропускания 620 — 670 нм.

По результатам фотометрирования растворов сравнения строят градуировочный график, откладывая на оси абсцисс значения содержания азота в миллиграммах в 100 см3 растворов сравнения, а на оси ординат — показатели оптической плотности растворов.

3.3 Проведение испытания

3.3.1 Приготовление минерализата

В длинной сухой пробирке, свободно входящей в горло термостойкой колбы или в пробирку для сжигания, отвешивают 0,2 — 0,3 г исследуемой пробы корма. Вставив пробирку с навеской в колбу или в пробирку для сжигания до ее дна, высыпают навеску и вновь взвешивают пробирку. По разности между первым и вторым взвешиванием определяют массу навески, взятой для анализа. К навеске добавляют 2 см3 30%-ного раствора перекиси водорода. Через 1,5 — 2 мин добавляют 3 см3 концентрированной серной кислоты, содержащей селен, и слегка встряхивают. Пробирки или колбы постепенно нагревают до 340 — 380 °C. Минерализацию проб продолжают до полного обесцвечивания раствора. Если через 1,5 — 2 ч не происходит обесцвечивания, раствор охлаждают до 60 — 80 °C, приливают 1 см3 перекиси водорода и кипятят до полного обесцвечивания.

После обесцвечивания раствор охлаждают, количественно переносят в мерную колбу, доводят дистиллированной водой до 100 см3 и перемешивают. Допускается проводить минерализацию в калиброванных пробирках.

3.3.2 Фотометрическое определение азота в минерализатах

Для определения азота в коническую колбу или стакан вместимостью 100 см3 пипеткой или шприцем-дозатором отбирают 0,5 см3 минерализата, приготовленного по п. 3.3.1, приливают к нему 50 см3 раствора 2 и перемешивают, затем прибавляют пипеткой или шприцем-дозатором 2,5 см3 раствора 4, снова перемешивают и оставляют раствор на 1 ч при комнатной температуре для полного развития окраски.

Оптическую плотность растворов измеряют относительно раствора сравнения, не содержащего азот, в кюветах с толщиной просвечиваемого слоя 10 мм, используя красный светофильтр с максимумом пропускания 620 — 670 нм.

Если показание прибора для испытуемого раствора превышает показание восьмого раствора сравнения, то исходный раствор минерализата, приготовленный по п. 3.3.1, разбавляют первым раствором сравнения до оптимальной для фотометрирования концентрации (оптическая плотность 0,2 — 0,8).

3.4 Обработка результатов

3.4.1 Массовую долю азота (X) в процентах в исследуемой пробе вычисляют по формуле

X = \frac{(m - m_{1}) \cdot 100}{m_{2}} ,

Если исходный раствор минерализата перед анализом был разбавлен, полученный результат увеличивают во столько раз, во сколько был разбавлен исходный раствор.

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Результаты вычисляют до третьего десятичного знака и округляют до второго десятичного знака.

3.4.2. Допускаемые расхождения между результатами двух параллельных определений (d) и между двумя результатами, полученными в разных условиях (D) (в разных лабораториях, в разное время, при работе на разных приборах и т.д.), при доверительной вероятности P = 0,95 не должны превышать следующих значений:

d = 0,03 + 0,03\overline{X};

D = 0,08 + 0,07\overline{X},

где \overline{X} — среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, %;

\overline{X} — среднее арифметическое результатов двух испытаний, выполненных в разных условиях, %.

Предельную погрешность результата анализа (\Delta_{\Sigma}) при односторонней доверительной вероятности P = 0,95 вычисляют по формуле

\Delta_{\Sigma} = 0,046 + 0,039\overline{X}.

\overline{D} = 0,055 + 0,047X_{\text{атт}},

где X_{\text{атт}} — аттестованное значение определяемого компонента, взятое из свидетельства на СО.

3.4.3. Массовую долю азота в сухом веществе вычисляют по п. 2.4.4.

3.5. Массовую долю сырого протеина в испытуемой пробе или в сухом веществе вычисляют по п. 2.5.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ АЗОТА И ВЫЧИСЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ СЫРОГО ПРОТЕИНА ИСО 5983-79

1. ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Настоящий международный стандарт устанавливает метод определения содержания азота в кормах для животных по Кьельдалю и метод вычисления содержания сырого протеина.

2. ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ

Метод не делает различий между белковым и небелковым азотом. Если требуется определить содержание небелкового азота, должны быть использованы соответствующие методы. В некоторых случаях этот метод не позволяет полностью обнаружить азот нитратов и нитритов.

3. ССЫЛКА

Продукты пищевые сельскохозяйственные. Общее руководство по определению азота методом Кьельдаля.

4. ПРИНЦИП

Разложение органического вещества серной кислотой в присутствии катализатора, высвобождение продукта реакции щелочью, дистилляция и титрование высвобождающегося аммиака. Вычисление содержания азота и умножение результата на коэффициент 6,25, чтобы получить содержание сырого протеина.

5. РЕАКТИВЫ

Все реактивы должны быть квалификации чистые для анализов. Используемая вода должна быть дистиллированная или вода такой же чистоты.

Все реактивы, за исключением стандартов (5.6), должны быть практически свободны от азотистых соединений.

5.1 Сульфат калия.

5.2 Катализатор.

Предупреждение. Обращается внимание на токсичность соединений ртути. Необходимо соблюдать все меры предосторожности. Растворы, содержащие ртуть, нельзя непосредственно выливать в дренажную систему, а следует собрать для последующей обработки.

5.2.1 Ртуть или

5.2.2 Окись ртути (II) (HgO) или

5.2.3 Окись меди (II) (CuO) или

5.2.4 Сернокислая медь (II) пятиводная (CuSO_{4} \cdot 5H_{2}O) .

5.3 Серная кислота 1,84 г/см3.

5.4 Парафиновая смола.

5.5 Сахароза.

5.6 Стандарты.

5.6.1. Ацетанилид, точка плавления 114 °C, содержание азота (N) 10,37% (m/m).

5.6.2. Триптофан, точка плавления 282 °C, содержание азота (N) 13,37 (m/m).

5.7 Раствор гидроокиси натрия, 33% (m/m).

5.8 Реактив для осаждения ртути.

5.8.1. Раствор тиосульфата натрия, приготовленный растворением 80 г тиосульфата пятиводного (Na_{2}S_{2}O_{3} \cdot 5H_{2}O) в 1000 см3 воды или

5.8.2 Гипофосфит натрия или калия.

5.9 Поглощающая жидкость.

5.9.1. Серная кислота c(1/2H_{2}SO_{4}) = 0,05\text{и }0,125\text{моль}/\text{дм}^{3} , стандартный титрованный раствор или

5.9.2 Раствор борной кислоты, 40 г/дм3.

5.10 Раствор для титрования.

5.10.1 Гидроксид натрия, c(NaOH) = 0,1 и 0,25 моль/дм3, стандартный титрованный раствор или

5.10.2. Серная кислота c(1/2H_{2}SO_{4}) = 0,05\text{и }0,125\text{моль}/\text{дм}^{3} , стандартный титрованный раствор.

5.11 Смешанный индикатор.

Растворяют 2 г метилового красного и 1 г метиленового голубого в 1000 см3 95%-ного (объемный) этанола.

5.12 Лакмусовая бумага.

5.13. Вещества, предотвращающие выбрасывание жидкости: гранулы пемзы или стеклянные бусинки диаметром 5 — 7 мм или кусочки карборунда, промытые соляной кислотой и кальцинированные.

6. АППАРАТУРА

Обычная лабораторная аппаратура, а также:

6.1 Аналитические весы.

6.2 Установки для сжигания, дистилляции и титрования.

7. ОБРАЗЕЦ

Образцы хранят в условиях, не допускающих порчу и изменение состава.

8. ПРОВЕДЕНИЕ ИСПЫТАНИЯ

8.1 Взятие навески

Отвесить навеску пробы с точностью 1 мг, содержащую 0,005 — 0,08 г азота. Масса навески должна быть между 0,5 и 2,0 г (предпочтительно 1,0 г).

Примечание. Когда в связи с неоднородностью пробы значение навески больше, чем указано выше, и поэтому ожидаемое содержание азота будет превышать 0,08 г, соответственно увеличивают объем серной кислоты в приемной колбе (см. 8.2.2), если в качестве приемной жидкости используют серную кислоту.

8.2 Определение

Предупреждение! Последующие операции должны проводиться под хорошо вентилируемым колпаком или в вытяжном шкафу.

8.2.1 Разложение органического вещества

Испытуемую навеску количественно переносят в колбу Кьельдаля соответствующей вместимости (обычно 800 см3). Добавляют сульфат калия (5.1). Если в качестве катализатора используют ртуть или окись ртути (II), достаточно 10 г сульфата. Когда катализатором служит окись меди (II) или пятиводный сульфат меди (II), требуется 15 г сульфата калия.

Добавляют соответствующее количество катализатора: для всех продуктов могут быть использованы 0,65 г (1 капля) ртути (5.2.1) или 0,7 г окиси ртути (II) (5.2.2). Вместо этого можно применить 0,3 г окиси меди (II) (5.2.3) или 0,9 — 1,2 г пятиводного сульфата меди (II) (5.2.4). Установлено, что при этом для полного обнаружения азота требуется более длительное сжигание.

Примечание. Когда анализируются продукты с высоким содержанием азота, в качестве катализатора лучше использовать ртуть.

Добавляют 25 см3 серной кислоты (5.3) для первого грамма сухого вещества навески и 6 — 12 см3 на каждый дополнительный грамм сухого вещества (для сжигания крахмала и жира требуется около 6 и 12 см3 кислоты, соответственно). Тщательно перемешивают, чтобы полностью смочить навеску. Сначала колбу нагревают умеренно, чтобы предотвратить поднятие пены до горла колбы или ее выбрасывание из колбы.

Примечание. Желательно добавить антипенообразующее вещество, как например парафиновую смолу (5.4).

Нагревают умеренно, поворачивая время от времени, до тех пор, пока масса не обуглится и не исчезнет пена. Затем нагревание усиливают до тех пор, пока не установится равномерное кипение. Нагрев является достаточным, если кипящая кислота конденсируется в середине горла колбы Кьельдаля. Следует избегать перегрева стенок колбы, не находящихся в контакте с жидкостью. Если используют открытое пламя, такой перегрев можно предотвратить путем установления колбы на лист асбеста с отверстием диаметром немного меньше, чем диаметр колбы на уровне жидкости.

Во время нагревания колба должна быть установлена наклонно под углом 30 — 45° к вертикали.

После осветления жидкости продолжают нагревание в течение 1 ч в случае использования ртутного катализатора или 2 ч в случае использования медного катализатора.

Оставляют остывать. Если холодный минерализат застывает, рекомендуется использовать для сжигания больший объем кислоты, чем указано выше.

8.2.2 Отгонка аммиака

Осторожно добавляют 250 — 350 см3 воды для полного растворения сульфатов, перемешивают круговыми движениями и оставляют остывать. Добавляют немного вещества, предотвращающего выбрасывание (п. 5.13). Пипеткой переносят в приемную колбу отгонного аппарата 25 см3 раствора серной кислоты c(1/2H_{2}SO_{4}) = 0,05\text{или }0,125\text{моль}/\text{дм}^{3} (п. 5.9.1). Концентрацию кислоты выбирают в зависимости от ожидаемого содержания азота в навеске (примечание к п. 8.1), добавляют 100 — 150 см3 воды и несколько капель смешанного индикатора (п. 5.11).

Кончик трубки холодильника погружают в жидкость, содержащуюся в приемной колбе, на глубину не менее 1 см. Медленно по стенкам в колбу Кьельдаля вводят 100 см3 раствора гидроксида натрия (п. 5.7).

Примечание. Если серной кислоты (п. 5.3) было использовано больше, чем указано (п. 8.2.1, последний абзац), следует пропорционально увеличить объем гидроксида натрия.

Если в качестве катализатора использовались соединения ртути, раствор гидроксида натрия до внесения в колбу смешивают с 25 см3 раствора тиосульфата (п. 5.8.1).

Примечание. Если добавлять отдельно, тиосульфат может вступить в реакцию с кислотой в колбе с образованием сульфида водорода, что приводит к искажению результатов. Вместо тиосульфата можно использовать гипофосфит (п. 5.8.2). В этом случае нет опасности образования сульфида водорода. 1 г гипосульфита, добавленного в твердом виде после разбавления водой до приливания щелочи, достаточно для осаждения 1 г ртути.

Колбу немедленно присоединяют к отгонному аппарату и нагревают с такой интенсивностью, чтобы за 30 мин собрать 150 см3 дистиллята. После этого лакмусовой бумагой (п. 5.12) проверяют pH дистиллята на кончике трубки холодильника. Если реакция щелочная, продолжают дистилляцию.

Кончик трубки холодильника сразу после окончания дистилляции вынимают из холодильника, чтобы предотвратить обратное засасывание. Если во время отгонки содержимое приемной колбы становится щелочным, определение повторяют, внося соответствующие изменения. При отгонке аммиака в борную кислоту в приемную колбу отгонного аппарата наливают 100 — 250 см3 раствора борной кислоты (п. 5.9.2).

8.2.3 Титрование

Если в качестве поглощающей жидкости была использована серная кислота, ее избыток титруют раствором гидроксида натрия c(NaOH) = 0,1 или 0,25 моль/дм3 (п. 5.10.1) до перехода фиолетовой окраски в зеленую.

Если в качестве поглощающей жидкости была использована борная кислота, аммиак титруют раствором серной кислоты c(1/2H_{2}SO_{4}) = 0,05\text{или }0,125\text{моль}/\text{дм}^{3} (п. 5.10.2) до перехода окраски раствора от зеленой до фиолетовой.

Рекомендуется титрование проводить во время дистилляции, так как это позволяет уточнить конец дистилляции. Окончание дистилляции показывает изменение окраски смешанного индикатора (п. 5.11).

Если невозможно проводить титрование одновременно с отгонкой, следует титровать сразу после окончания дистилляции, следя за тем, чтобы температура дистиллята не превышала 25 °C. При этих условиях потери аммиака отсутствуют.

8.3 Число определений

Проводят два определения одного образца.

8.4 Холостое определение

Холостое определение проводят, используя сахарозу (п. 5.5) в качестве испытуемой пробы.

8.5 Контрольный анализ

Контрольный анализ проводят путем определения содержания азота в ацетанилиде (п. 5.6.1) или триптофане (п. 5.6.2), добавляя 1 г сахарозы (п. 5.5).

Выбор анализируемого вещества для контрольного анализа зависит от того, насколько легко озоляются испытуемые пробы. Ацетанилид озоляется легко, в то время как триптофан сжигается труднее. Триптофан перед использованием следует высушить.

9. ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ

9.1 Вычисление содержания азота

9.1.1 Метод вычисления и формула

9.1.1.1 Отгонка аммиака в серную кислоту

Если для поглощения аммиака при анализе испытуемой пробы (п. 8.2) и холостом определении (п. 8.4) в приемную колбу были взяты одинаковые объемы серной кислоты, массовую долю азота в процентах вычисляют по формуле

\frac{(V_{0} - V_{1}) \cdot T \cdot 0,014 \cdot 100}{m} = \frac{1,4(V_{0} - V_{1}) \cdot T}{m} ,

где V_{0} — объем раствора гидроксида натрия (п. 5.10.1), использованного при холостом определении, см3;

V_{1} — объем раствора гидроксида натрия (п. 5.10.1), использованного при анализе пробы, см3;

T — нормальность раствора гидроксида натрия (п. 5.10.1), использованного для титрования;

9.1.1.2 Отгонка аммиака в борную кислоту

Массовую долю азота в процентах продукта вычисляют по формуле

\frac{(V_{1} - V_{0}) \cdot T \cdot 0,014 \cdot 100}{m} = \frac{1,4(V_{1} - V_{0}) \cdot T}{m} ,

где V_{0} — объем раствора серной кислоты (п. 5.10.2), использованный при холостом определении, см3;

V_{1} — объем раствора серной кислоты (п. 5.10.2), использованный при анализе пробы, см3;

T — нормальность раствора серной кислоты (п. 5.10.2), использованной для титрования;

m — масса испытуемой навески, г.

9.1.1.3 Результат

Массовую долю азота в испытуемой пробе вычисляют как средний арифметический результат двух определений при условии, если удовлетворяются требования к сходимости (см. п. 9.1.2). Результат выражают с точностью 0,01% (m/m).

9.1.2 Сходимость

Расхождения между результатами двух определений, выполненных одновременно или сразу друг за другом одним и тем же аналитиком, не должны превышать:

0,03% при содержании азота менее 3% (m/m); 1% относительно среднего результата при содержании азота от 3 до 6% (m/m);

0,06% при содержании азота больше 6% (m/m).

9.2 Вычисление содержания сырого протеина

Содержание сырого протеина в продукте вычисляют умножением содержания азота на коэффициент 6,25.

Результаты вычисляют с точностью 0,1% (m/m).

10. ПРОТОКОЛ ИСПЫТАНИЯ

В протоколе испытания следует указать использованный метод и полученный результат. Следует также указать коэффициент пересчета (т.е. 6,25), использованный для пересчета содержания азота на сырой протеин, а также условия выполнения анализа, не указанные в настоящем международном стандарте или рассматриваемые как необязательные, так же, как любые обстоятельства, которые могут влиять на результат.