ФС.2.5.0123. Фармакопейная статья. Первоцвета весеннего цветки

(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 13.03.2024 № 120)

(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XV издание»)

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Первоцвета весеннего цветки	ФС.2.5.0123
Primulae veris flores	Вводится впервые

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Собранные в фазу начала цветения, высушенные цветки дикорастущего многолетнего травянистого растения первоцвета весеннего — Primula veris L., сем. первоцветные — Primulaceae.

Содержит не менее 2,6% суммы флавоноидов в пересчете на рутин в сухом сырье.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

Внешние признаки. Определение проводят в соответствии с ОФС «Цветки».

Цельное сырье. Соцветия зонтик, состоят из цветков правильных, обоеполых, диаметром 7 — 15 мм. Околоцветник двойной, пятичленный; чашечка трубчато-колокольчатая, длиной от 9 до 20 мм, из 5 зубчиков овальной формы, длиной от 2 до 3 мм; серовато-зеленого цвета. Венчик с частично сросшимися пятью лепестками, длиннее чашечки, с воронковидным или колокольчатым отгибом, с пятью красно-желтыми пятнами в зеве. Тычинок 5, со свободными и короткими тычиночными нитями. Пестик с верхней завязью, столбик с головчатым или усеченным рыльцем. Цвет желтый. Запах характерный.

Микроскопические признаки. Определение проводят в соответствии с ОФС «Микроскопический и микрохимический анализ лекарственного растительного сырья и лекарственных средств растительного происхождения».

Цельное сырье. При рассмотрении лепестка с поверхности должны быть видны клетки верхнего эпидермиса с сосочковидными выростами, кутикула на вершине сосочков морщинистая; клетки нижнего эпидермиса с извилистыми стенками, местами с сосочковидными выростами, со складчатой кутикулой. Устьица округлые аномоцитного типа, располагаются в основном на нижнем эпидермисе. На эпидермисе лепестка с обеих сторон встречаются головчатые волоски, состоящие из многоклеточной ножки и одноклеточной, иногда удлиненной (грушевидной), головки. Клетки верхнего и нижнего эпидермиса чашелистика с извилистыми (зигзагообразными и зубчатыми) стенками, местами четковидноутолщенными. Кутикула продольно-морщинистая вдоль жилок, по краю и у вершины чашелистика. У основания волоска кутикула лучисто-морщинистая. Местами на поверхности чашелистика встречаются сосочковидные выросты. Устьица расположены с нижней стороны, округлые, аномоцитного типа; с верхней стороны устьица встречаются очень редко. С верхней и нижней стороны чашелистика встречаются головчатые волоски с одноклеточной головкой на одно- и многоклеточной ножке. Головчатые волоски расположены в основном по краю чашелистика. Эпидермис цветоножки состоит из вытянутых клеток с прямыми стенками, устьицами аномоцитного типа; кутикула продольно-морщинистая; на поверхности располагаются длинные головчатые волоски с одноклеточной головкой на многоклеточной ножке. Пыльца сферической формы.

Рисунок 1 — Первоцвета весеннего цветки

1 — фрагмент нижнего эпидермиса лепестка со складчатой кутикулой и устьичным комплексом аномоцитного типа (400x); 2 — фрагмент эпидермиса лепестка с головчатым волоском, состоящим из многоклеточной ножки и одноклеточной удлиненной головки (400x); 3 — фрагмент эпидермиса чашелистика с головчатыми волосками, состоящими из трехклеточной ножки и грушевидной одноклеточной головки (400x); 4 — пыльца (800x)

Определение основных групп биологически активных веществ

Тонкослойная хроматография. Определение проводят методом ТСХ (ОФС «Тонкослойная хроматография»).

Пластинка. ТСХ пластинка со слоем силикагеля.

Подвижная фаза (ПФ). Вода — метанол — уксусная кислота ледяная — хлороформ 4:6:16:30.

Испытуемый раствор. Аналитическую пробу сырья измельчают до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 1 мм. В колбу вместимостью 100 мл помещают 0,5 г измельченного сырья, прибавляют 15 мл метанола, экстрагируют на ультразвуковой бане в течение 15 мин. Полученное извлечение фильтруют через беззольный фильтр, упаривают на водяной бане досуха. Сухой остаток растворяют в 1,0 мл метанола.

Раствор стандартного образца рутина. Растворяют 10 мг фармакопейного стандартного образца рутина в 10,0 мл спирта 96%.

Реактив для детектирования 1. Дифенилборной кислоты аминоэтилового эфира раствор 1% в спирте 96%.

Реактив для детектирования 2. Макрогола 400 раствор спиртовой 5%. На линию старта пластинки в виде полос длиной 10 мм и шириной 2 мм наносят по 5 мкл испытуемого раствора и раствора стандартного образца рутина. Пластинку с нанесенными пробами сушат на воздухе, помещают в предварительно насыщенную в течение не менее 1 ч камеру с ПФ и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт ПФ пройдет около 80 — 90% длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат до удаления следов растворителей. Пластинку обрабатывают реактивом для детектирования 1 и сушат, а затем — реактивом для детектирования 2, сразу выдерживают в сушильном шкафу при температуре 100 — 105 °C в течение 1 — 3 мин и просматривают в УФ-свете при длине волны 365 нм.

Результат. На хроматограмме раствора рутина должна обнаруживаться зона адсорбции с флуоресценцией желтого, желто-оранжевого или оранжевого цвета.

На хроматограмме испытуемого раствора должна обнаруживаться зона адсорбции с флуоресценцией желтого, желто-оранжевого или оранжевого цвета на уровне зоны адсорбции рутина, выше нее зона адсорбции с флуоресценцией желтого, желто-оранжевого или оранжевого цвета; допускается обнаружение других зон адсорбции.

ИСПЫТАНИЯ

Влажность. Не более 14,0% (ОФС «Определение влажности лекарственного растительного сырья и лекарственных средств растительного происхождения»).

Зола общая. Не более 10,0% (ОФС «Зола общая»).

Зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте. Не более 2,0% (ОФС «Зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте»).

Измельченность сырья. Определение проводят в соответствии с ОФС «Определение подлинности, измельченности и содержания примесей в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 1 мм. Не более 5%.

Допустимые примеси. Определение проводят в соответствии с ОФС «Определение подлинности, измельченности и содержания примесей в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Сырье, изменившее окраску. Не более 6%.

Другие части растения (стебли, листья). Не более 4%.

Органическая примесь. Не более 1%.

Минеральная примесь. Не более 1%.

Тяжелые металлы и мышьяк. В соответствии с ОФС «Определение содержания тяжелых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Радионуклиды. В соответствии с ОФС «Определение содержания радионуклидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Зараженность вредителями запасов. Испытание проводят в соответствии с ОФС «Определение степени зараженности лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов вредителями запасов».

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Определение проводят методом спектрофотометрии (ОФС «Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях»).

Исходный раствор. Аналитическую пробу сырья измельчают до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 1 мм. В колбу вместимостью 100 мл помещают 1 г (точная навеска) измельченного сырья, прибавляют 40 мл спирта 70%. Колбу с содержимым присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на водяной бане в течение 30 мин. После охлаждения извлечение фильтруют через беззольный фильтр в мерную колбу вместимостью 100 мл. Фильтр переносят в колбу для экстрагирования, прибавляют 40 мл спирта 70% и повторяют экстрагирование в течение 20 мин. После охлаждения извлечения фильтруют через беззольный фильтр в ту же мерную колбу вместимостью 100 мл. Доводят объем раствора спиртом 70% до метки и фильтруют через беззольный фильтр, отбрасывая 10 мл фильтрата.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 1,0 мл исходного раствора, прибавляют 10 мл спирта 70%, 1,0 мл алюминия хлорида раствор 5% в спирте 96%, выдерживают в течение 15 мин, прибавляют 1,0 мл уксусной кислоты раствора 1%, доводят объем раствора спиртом 70% до метки.

Раствор сравнения. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 1,0 мл исходного раствора, 10 мл спирта 70%, 1,0 мл уксусной кислоты раствора 1% и доводят объем раствора спиртом 70% до метки.

Исходный раствор стандартного образца рутина. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 50 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца рутина, прибавляют 60 мл спирта 70%, перемешивают при нагревании до полного растворения, охлаждают до комнатной температуры, доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Испытуемый раствор стандартного образца рутина. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 1,0 мл исходного раствора стандартного образца рутина, 1,0 мл алюминия хлорида раствор 5% в спирте 96%, выдерживают в течение 15 мин, прибавляют 1,0 мл уксусной кислоты раствора 1% и доводят объем раствора спиртом 70% до метки.

Раствор сравнения стандартного образца рутина. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 1,0 мл исходного раствора стандартного образца рутина, 1,0 мл уксусной кислоты раствора 1% и доводят объем раствора спиртом 70% до метки.

Измеряют оптическую плотность испытуемого раствора на спектрофотометре через 40 мин при длине волны 408 +/- 2 нм в кювете с толщиной слоя 1 см относительно раствора сравнения.

Параллельно измеряют оптическую плотность испытуемого раствора стандартного образца рутина в аналогичных условиях. В качестве раствора сравнения используют раствор сравнения стандартного образца рутина.

Содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин в сухом сырье в процентах (X) вычисляют по формуле:

X = \frac{A \cdot a_{0} \cdot 100 \cdot 1 \cdot 25 \cdot 100 \cdot P \cdot 100}{A_{0} \cdot a \cdot 25 \cdot 100 \cdot 1 \cdot (100 - W) \cdot 100} ,

где A — оптическая плотность испытуемого раствора;

A0 — оптическая плотность испытуемого раствора стандартного образца рутина;

a — навеска сырья, г;

a0 — навеска фармакопейного стандартного образца рутина, г;

P — содержание рутина в фармакопейном стандартном образце рутина, %;

W — влажность сырья, %.

УПАКОВКА, МАРКИРОВКА И ПЕРЕВОЗКА

В соответствии с ОФС «Упаковка, маркировка и перевозка лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов».

ХРАНЕНИЕ

В соответствии с ОФС «Хранение лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов».

---