ФС.2.5.0024. Фармакопейная статья. Липы цветки

(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 13.03.2024 № 120)

(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XV издание»)

ИСТОРИЯ ИЗМЕНЕНИЙ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИХ АКТОВ

flowchart LR
  n0["Государственная фармакопея СССР. XI издание. Выпуск..."]:::rst
  click n0 "https://bukva.ai/docs/gf-xi-minzdrav-sssr-ministerstvo" "Государственная фармакопея СССР. XI издание. Выпуск 2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье"
  n1["ФС.2.5.0024.15"]:::rst
  click n1 "https://bukva.ai/docs/gf-xiii-minzdrav-rossii-ministerstvo-368" "ФС.2.5.0024.15. Фармакопейная статья'Липы цветки.'"
  n2["ФС.2.5.0024"]:::doc
  click n2 "https://bukva.ai/docs/fs-2-5-0024" "ФС.2.5.0024. Фармакопейная статья. Липы цветки (утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 13.03.2024 N 120)"
  n1 --> n2
  n0 --> n1
classDef rst fill:#FFEBEB,stroke:#8B0000,color:#000;
classDef doc fill:#EBFFEB,stroke:#006400,color:#000;
classDef notEnt fill:#FFFFEB,stroke:#FF8C00,color:#000;

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Собранные во время цветения и высушенные соцветия дикорастущих и культивируемых деревьев липы сердцевидной — Tilia cordata Mill. и липы широколистной — Tilia platyphyllos Scop., сем. липовых — Tiliaceae.

Содержит не менее 0,4% суммы флавоноидов в пересчете на кверцетин в сухом сырье.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

Внешние признаки. Определение проводят в соответствии с ОФС «Цветки».

Цельное сырье. Соцветия щитковидные, состоят из 5 — 15 (у липы сердцевидной) или 2 — 9 (у липы широколистной) цветков на удлиненных цветоножках, сидящих на общем цветоносе, сросшимся в нижней части с главной жилкой прицветного листа. Цветки правильные, 1 — 1,5 см в диаметре. Чашечка из 5 продолговато-яйцевидных чашелистиков, густо опушенных по краю и с внутренней стороны. Венчик из 5 свободных яйцевидных лепестков, длиннее чашечки. Тычинки многочисленные, с 2 желтыми пыльниками на длинных нитях, сросшихся в 5 пучков. Пестик один с верхней шаровидной завязью, густо покрытой пушистыми волосками. Встречаются цветочные бутоны и незрелые плоды — шаровидные сильно опушенные орешки до 2 мм в диаметре. Прицветный лист пленчатый, с густой сетью жилок, длиной до 6 см и шириной до 1,5 см, продолговато-эллиптической формы с притупленной верхушкой, в нижней половине сросшийся по главной жилке с цветоносом. Цвет лепестков беловато-желтый, чашелистиков зеленовато- или желтовато-серый, прицветных листьев светло-желтый или зеленовато-желтый. Запах слабый, характерный.

Измельченное сырье. Смесь цветков, цветоножек и кусочков прицветников различной формы, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 7 мм.

При рассмотрении измельченного сырья под лупой ( 10 \times и др.) видны кусочки слегка опушенных прицветных листьев светло-желтого, зеленовато-желтого или светло-зеленого цвета; чашелистики или их части, густо опушенные (с внутренней стороны и по краю), желто-серого, зеленовато-серого, реже светло-коричневого цвета; лепестки яйцевидной формы бело-желтого цвета; тычинки, пестик или их части, опушенные, светло-желтого цвета; кусочки цветоножек и цветоносов, опушенные, светло-зеленого, зеленого или серо-зеленого цвета; отдельные цветочные бутоны и незрелые сильноопушенные плоды (орешки) светло-зеленого или серо-зеленого цвета.

Цвет лепестков беловато-желтый, чашелистиков зеленовато- или желтовато-серый, светло-коричневый, прицветных листьев — светло-желтый или зеленовато-желтый, светло-зеленый. Запах слабый, характерный.

Порошок. Смесь частиц цветков, цветоножек и прицветников липы различной формы, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 2 мм.

При рассмотрении порошка под лупой ( 10 \times , 16 \times ) видны: кусочки слегка опушенных прицветных листьев зеленого, светло-зеленого или зелено-желтого цвета; чашелистики или их части, густо опушенные (с внутренней стороны и по краю), желто-серого, зеленовато-серого, реже светло-коричневого цвета; лепестки яйцевидной формы бело-желтого цвета; тычинки, пестик или их части, опушенные, светло-желтого цвета; кусочки цветоножек и цветоносов, опушенные, светло-зеленого, зеленого или серо-зеленого цвета; отдельные цветочные бутоны и незрелые сильноопушенные плоды (орешки) светло-зеленого или серо-зеленого цвета.

Цвет порошка серовато-зеленый, серовато-желтый или светло-коричневый с желтыми, темно-желтыми, коричневыми и темно-коричневыми вкраплениями. Запах слабый, характерный.

Микроскопические признаки. Определение проводят в соответствии с ОФС «Микроскопический и микрохимический анализ лекарственного растительного сырья и лекарственных средств растительного происхождения». Раздел «Листья».

Цельное сырье, измельченное сырье. При рассмотрении микропрепарата прицветного листа с поверхности, с обеих сторон листа видны сильноизвилистые стенки клеток эпидермиса. Кутикула продольно-морщинистая с обеих сторон. Морщинистость очень сильно выраженная. Устьица только на нижней стороне, овальные, с 4 — 6 околоустьичными клетками (аномоцитный тип). Жилки сопровождаются вытянутыми клетками с утолщенными слабоизвилистыми стенками. Вдоль жилок пролегают секреторные ходы, наполненные розовым содержимым. Волоски встречаются преимущественно в средней части прицветного листа, вблизи места срастания его с цветоносом. Волоски 2 типов: головчатые — с многоклеточной овальной головкой на короткой 1 — 3-клеточной ножке и звездчато-лучистые, состоящие из 3 — 8 длинных извилистых клеток, сросшихся основаниями. Мезофилл очень рыхлый, типа аэренхимы, с друзами, реже с призматическими кристаллами кальция оксалата, особенно многочисленными вблизи жилок.

Клетки эпидермиса лепестка прямоугольной формы с прямыми или слабоизвилистыми стенками. Наблюдаются клетки со слизью. Кутикула с верхней стороны слабовыраженно штриховатая. В мезофилле располагаются друзы кальция оксалата. Волоски такие же, как на прицветном листе, присутствуют вильчатые волоски, состоящие из 2 извилистых клеток, сросшихся основаниями. Простые волоски встречаются редко с нижней стороны лепестка и по краю лепестка. На верхушке лепестка цветка клетки эпидермиса образуют сосочковидные выросты.

Клетки эпидермиса чашелистика многоугольные с прямыми и слабоизвилистыми стенками, кутикула продольно-морщинистая, устьица на верхней стороне аномоцитного типа. Волоски такие же, как на прицветном листе и, кроме того, у основания чашелистиков с верхней стороны располагаются длинные прямые параллельные волоски, состоящие из 2 параллельных клеток, сросшихся основаниями. В мезофилле располагаются друзы кальция оксалата. На поперечном срезе чашелистика видны крупные полости слизистых клеток.

Пыльца округло-угловатая, гладкая, сплющенная с 3 щелевидными отверстиями.

Эпидермис цветоножки состоит из клеток прямоугольной формы с прямыми стенками без устьиц. В паренхиме содержатся друзы кальция оксалата. Проводящие пучки сопровождаются клетками-идиобластами с коричнево-оранжевым содержимым, механическими волокнами и пористыми толстостенными клетками.

Тычинки и пестик содержат друзы. Пестик опушен волосками, сидящими пучками и выходящими по 2 — 10 из общего основания. Волоски извилистые тонкостенные.

Порошок. При рассмотрении микропрепарата должны быть видны фрагменты эпидермиса прицветного листа, состоящего из клеток с извилистыми стенками; продольно-морщинистой кутикулы; овальных устьиц аномоцитного типа; головчатых волосков, состоящих из многоклеточной овальной головки на короткой 1 — 3-клеточной ножке (и без них); звездчато-лучистых волосков, состоящих из 3 — 8 извилистых клеток, сросшихся основаниями; мезофилл листа очень рыхлый, типа аэренхимы, содержит друзы кальция оксалата, реже призматические кристаллы кальция оксалата, особенно многочисленные вблизи жилок; фрагменты лепестка с клетками эпидермиса прямоугольной формы с прямыми или слабоизвилистыми стенками, с вильчатыми волосками, состоящими из 2 извилистых клеток, сросшихся у основания (и без них), с просвечивающимися друзами в мезофилле; фрагменты чашелистика с многоугольными клетками эпидермиса с прямыми или извилистыми стенками, продольно-морщинистой кутикулой, с овальными устьицами аномоцитного типа (и без них), со звездчато-лучистыми волосками, состоящими из 3 — 8 извилистых клеток, сросшихся основаниями, с вильчатыми волосками, состоящими из 2 извилистых клеток, сросшихся у основания (и без них), с длинными прямыми параллельными волосками, состоящими из 2 параллельных клеток, сросшихся основаниями (и без них); фрагменты цветоножки с эпидермисом, представленным клетками прямоугольной формы с прямыми стенками, с просвечивающимися в паренхиме друзами кальция оксалата, со звездчато-лучистыми волосками, состоящими из 3 — 8 извилистых клеток, сросшихся основаниями (и без них), с головчатыми волосками, состоящими из многоклеточной овальной головки на короткой 1 — 3-клеточной ножке (и без них); фрагменты тычинок, содержащих друзы в паренхиме; фрагменты пестика, содержащего друзы в паренхиме и имеющего на поверхности извилистые тонкостенные волоски, сидящие пучками и выходящие по 2 — 10 из общего основания; пыльцы округло-угловатой гладкой сплющенной с 3 щелевыми отверстиями.

Определение основных групп биологически активных веществ

Тонкослойная хроматография

Определение проводят методом ТСХ (ОФС «Тонкослойная хроматография»).

Пластинка. ТСХ пластинка со слоем силикагеля.

Подвижная фаза (ПФ). Вода — муравьиная кислота безводная — толуол — этилацетат 8:10:14:60.

Испытуемый раствор. В колбу со шлифом вместимостью 100 мл помещают около 1,0 г сырья, измельченного до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 1 мм, прибавляют 10 мл спирта 96%, присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на водяной бане в течение 15 мин. После охлаждения полученное извлечение фильтруют через беззольный фильтр.

Раствор рутина. Растворяют 5 мг рутина в 10 мл спирта 96%.

Раствор кофейной кислоты. Растворяют 2 мг кофейной кислоты в 10 мл спирта 96%.

Реактив для детектирования 1. Дифенилборной кислоты аминоэтилового эфира раствор 1% в спирте 96%.

Реактив для детектирования 2. Макрогола 400 раствор спиртовой 5%. На линию старта пластинки в виде полос длиной 10 мм и шириной 2 мм наносят по 10 мкл раствора рутина, раствора кофейной кислоты, испытуемого раствора. Пластинку с нанесенными пробами сушат на воздухе в течение 10 мин, помещают в камеру, выложенную изнутри фильтровальной бумагой, предварительно насыщенную в течение 1 ч ПФ, и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт ПФ пройдет около 80 — 90% длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры и сушат до удаления следов растворителей. Пластинку выдерживают при температуре 100 — 105 °C в течение 5 — 10 мин, еще теплую обрабатывают последовательно реактивом для детектирования 1, затем реактивом для детектирования 2 и через 15 мин просматривают в УФ-свете при длине волны 365 нм.

Результат. На хроматограмме раствора рутина должна обнаруживаться зона адсорбции желтого или оранжево-желтого цвета.

На хроматограмме раствора кофейной кислоты должна обнаруживаться зона адсорбции голубого цвета.

На хроматограмме испытуемого раствора должны обнаруживаться: две зоны адсорбции желтого или желто-оранжевого цвета — на уровне зоны адсорбции рутина и выше нее; зона адсорбции синего или фиолетово-синего цвета на уровне зоны адсорбции кофейной кислоты; допускается обнаружение других зон адсорбции (фенольные соединения).

Качественная реакция

К 10 мл настоя липы цветков (1:20) прибавляют 30 мл спирта 96% и перемешивают, появляются хлопьевидные сгустки, выпадающие в осадок при стоянии (полисахариды).

ИСПЫТАНИЯ

Влажность. Не более 13,0% (ОФС «Определение влажности лекарственного растительного сырья и лекарственных средств растительного происхождения»).

Зола общая. Не более 10,0% (ОФС «Зола общая»).

Зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте. Не более 3,0% (ОФС «Зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте»).

Измельченность. Определение проводят в соответствии с ОФС «Определение подлинности, измельченности и содержания примесей в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Цельное сырье: частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 3 мм, — не более 3%.

Измельченное сырье: частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями размером 7 мм, — не более 5%; частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,18 мм, — не более 5%.

Порошок: частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями размером 2 мм, не более 5%; частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,18 мм, не более 5%.

Допустимые примеси. Определение проводят в соответствии с ОФС «Определение подлинности, измельченности и содержания примесей в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Соцветия с прицветниками и отдельные прицветники, поврежденные вредителями и пораженные ржавчиной. Цельное сырье: не более 2%.

Изменившие окраску части соцветия (потемневшие и почерневшие). Цельное сырье, измельченное сырье: не более 4%.

Другие части липы (листья и побеги). Цельное сырье, измельченное сырье: не более 1%.

Соцветия, полностью отцветшие, с плодами. Цельное сырье: не более 2%.

Осыпь отдельных цветков или соцветий без прицветников. Цельное сырье: не более 15%.

Органическая примесь. Цельное сырье, измельченное сырье: не более 0,3%.

Минеральная примесь. Не более 0,1%.

Тяжелые металлы и мышьяк. В соответствии с ОФС «Определение содержания тяжелых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Радионуклиды. В соответствии с ОФС «Определение содержания радионуклидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Остаточные количества пестицидов. В соответствии с ОФС «Определение содержания остаточных пестицидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Зараженность вредителями запасов. В соответствии с ОФС «Определение степени зараженности лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов вредителями запасов».

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Определение проводят в соответствии с ОФС «Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях».

Исходный раствор. Аналитическую пробу сырья измельчают до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 1 мм. В коническую колбу со шлифом вместимостью 250 мл помещают 1,0 г (точная навеска) измельченного сырья, прибавляют 20 мл ацетона, 2 мл хлористоводородной кислоты 25%, 1 мл гексаметилентетрамина раствора 5 г/л. Колбу с содержимым присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на водяной бане в течение 30 мин. Затем охлаждают и фильтруют через вату в мерную колбу вместимостью 100 мл. Вату помещают в колбу с остатками сырья, и повторяют экстракцию.

После охлаждения извлечения фильтруют через вату в ту же мерную колбу и доводят объем раствора ацетоном до метки. В делительную воронку помещают 20,0 мл полученного раствора, прибавляют 20 мл воды и встряхивают с 15 мл этилацетата. Экстракцию повторяют трижды с тем же растворителем порциями по 10 мл. Объединенные этилацетатные слои промывают два раза по 40 мл водой, фильтруют через беззольный фильтр с натрия сульфатом безводным в мерную колбу вместимостью 50 мл и доводят объем раствора этилацетатом до метки.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 10,0 мл исходного раствора, прибавляют 2 мл алюминия хлорида реактива и доводят объем раствора уксусной кислотой раствором 5% (о/о) в метаноле до метки.

Раствор сравнения. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 10,0 мл исходного раствора и доводят объем раствора уксусной кислотой раствором 5% (о/о) в метаноле до метки.

Измеряют оптическую плотность испытуемого раствора через 45 мин на спектрофотометре при длине волны 425 нм в кюветах с толщиной слоя 1 см относительно раствора сравнения.

Содержание суммы флавоноидов в пересчете на кверцетин в сухом сырье в процентах (X) вычисляют по формуле:

X = \frac{\text{А} \cdot 100 \cdot 50 \cdot 25 \cdot 100}{714 \cdot a \cdot 20 \cdot 10 \cdot (100 - W)} ,

где A — оптическая плотность испытуемого раствора;

a — навеска сырья, г;

714 — удельный показатель поглощения кверцетина при длине волны 425 нм (A_{1c\text{м}}^{1\%}) ;

W — влажность сырья, %.

УПАКОВКА, МАРКИРОВКА И ПЕРЕВОЗКА

В соответствии с ОФС «Упаковка, маркировка и перевозка лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов».

ХРАНЕНИЕ

В соответствии с ОФС «Хранение лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов».