ФС.2.1.0672. Фармакопейная статья. Гидрокортизон
(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 13.03.2024 № 120)
(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XV издание»)
Примечание
Текст документа приведен в соответствии с публикацией на сайте https://minzdrav.gov.ru/ru по состоянию на 15.03.2024. В соответствии с Приказом Минздрава России от 13.03.2024 № 120 данный документ введен в действие с 13.03.2024.
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
| Гидрокортизон | ФС.2.1.0672 |
|---|---|
| Гидрокортизон | |
| Hydrocortisonum | Вводится впервые |
 | |
| C21H30O5 [50-23-7] | М.м. 362,46 |
11 \beta ,17,21-Тригидроксипрегн-4-ен-3,20-дион.
Содержит не менее 97,0% и не более 103,0% гидрокортизона C21H30O5 в пересчете на сухое вещество.
Описание. Белый или почти белый кристаллический порошок.
<*> Проявляет полиморфизм.
<*> Приводится для информации.
Растворимость. Умеренно растворим в ацетоне и спирте 96%, мало растворим в метиленхлориде, очень мало растворим или практически нерастворим в воде.
1. ИК-спектрометрия (ОФС «Спектрометрия в средней инфракрасной области»). Инфракрасный спектр субстанции по положению полос поглощения должен соответствовать спектру фармакопейного стандартного образца гидрокортизона.
Если спектры различаются, испытуемую субстанцию и стандартный образец по отдельности растворяют в минимальных объемах ацетона, выпаривают досуха на водяной бане и незамедлительно записывают спектры сухих остатков.
2. ВЭЖХ. Время удерживания основного пика на хроматограмме испытуемого раствора должно соответствовать времени удерживания пика гидрокортизона на хроматограмме раствора стандартного образца гидрокортизона (раздел «Родственные примеси»).
3. Определение проводят методом ТСХ (ОФС «Тонкослойная хроматография»).
Пластинка. ТСХ пластинка со слоем силикагеля F254
Подвижная фаза А (ПФА). Вода — метанол — эфир — метиленхлорид 1,2:8:15:77.
Подвижная фаза Б (ПФБ). Бутанол, насыщенный водой — толуол — эфир 5:15:80.
Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 5 мл помещают 25 мг субстанции, растворяют в метаноле и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.
Раствор стандартного образца гидрокортизона. В мерную колбу вместимостью 5 мл помещают 25 мг фармакопейного стандартного образца гидрокортизона, растворяют в метаноле и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.
Раствор стандартного образца А. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 2 мл раствора стандартного образца гидрокортизона и доводят объем раствора метиленхлоридом до метки.
Раствор стандартного образца Б. В стеклянную пробирку длиной 100 мм и диаметром 20 мм с подходящей стеклянной притертой пробкой или пробкой из политетрафторэтилена помещают 0,4 мл раствора стандартного образца гидрокортизона и выпаривают растворитель при слабом нагревании в потоке азота. Прибавляют 2 мл уксусной кислоты разведенной 15% и 50 мг натрия висмутата, пробирку закрывают и встряхивают полученную суспензию в течение 1 ч на механическом встряхивателе, защищая раствор от света. Прибавляют 2 мл уксусной кислоты разведенной 15% и фильтруют в делительную воронку вместимостью 50 мл, промывая фильтр двумя порциями воды по 5 мл каждая. Прозрачный фильтрат встряхивают с 10 мл метиленхлорида. Органический слой промывают 5 мл натрия гидроксида раствором 1 М и двумя порциями воды по 5 мл каждая и высушивают с использованием натрия сульфата безводного.
Раствор сравнения А. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 2 мл испытуемого раствора и доводят объем раствора метиленхлоридом до метки.
Раствор сравнения Б. В стеклянную пробирку длиной 100 мм и диаметром 20 мм с подходящей стеклянной притертой пробкой или пробкой из политетрафторэтилена помещают 0,4 мл испытуемого раствора и выпаривают растворитель при слабом нагревании в потоке азота. Прибавляют 2 мл уксусной кислоты разведенной 15% и 50 мг натрия висмутата, пробирку закрывают и встряхивают полученную суспензию в течение 1 ч на механическом встряхивателе, защищая раствор от света. Прибавляют 2 мл уксусной кислоты разведенной 15% и фильтруют в делительную воронку вместимостью 50 мл, промывая фильтр двумя порциями воды по 5 мл каждая. Прозрачный фильтрат встряхивают с 10 мл метиленхлорида. Органический слой промывают 5 мл натрия гидроксида раствором 1 М и двумя порциями воды по 5 мл каждая и высушивают с использованием натрия сульфата безводного.
Реактив для детектирования. Серной кислоты раствор спиртовой 36,6%.
На линию старта пластинки наносят 5 мкл раствора сравнения А, 5 мкл раствора стандартного образца А, 25 мкл раствора сравнения Б, 25 мкл раствора стандартного образца Б. Последние два раствора наносятся малыми количествами для получения пятен небольшого размера. Пластинку с нанесенными пробами сушат на воздухе, помещают в камеру с ПФА и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт ПФА пройдет около 15 см длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры с ПФА и помещают в камеру с ПФБ, хроматографируют восходящим способом. Когда фронт ПФБ пройдет около 15 см длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат до удаления следов растворителей.
Просматривают в УФ-свете при длине волны 254 нм.
Основные зоны адсорбции на хроматограмме растворов сравнения А и Б по положению и величине должны соответствовать зонам адсорбции гидрокортизона на хроматограмме растворов стандартных образцов А и Б.
Пластинку опрыскивают реактивом для детектирования, выдерживают в сушильном шкафу при температуре 120 °C в течение 10 мин или до появления пятен. Охлаждают и просматривают при видимом свете и в УФ-свете при длине волны 365 нм.
Основные зоны адсорбции на хроматограмме растворов сравнения А и Б по положению, величине и окраске при видимом свете и положению, величине и интенсивности флуоресценции в УФ-свете должны соответствовать зонам адсорбции гидрокортизона на хроматограмме растворов стандартных образцов А и Б.
Пригодность хроматографической системы. Значения Rf основных зон адсорбции на хроматограмме растворов сравнения Б и стандартного образца Б заметно выше значений Rf основных зон адсорбции на хроматограмме растворов сравнения А и стандартного образца А.
4. Качественная реакция. К 2 мг субстанции прибавляют 2 мл серной кислоты концентрированной и встряхивают до растворения; в течение 5 мин должно появиться интенсивное коричнево-красное окрашивание с зеленой флуоресценцией, более интенсивной при просмотре в УФ-свете при длине волны 365 нм. Полученный раствор прибавляют к 10 мл воды и перемешивают; окраска должна измениться на более тусклую, прозрачность раствора и зеленая флуоресценция в УФ-свете сохраняются.
Удельное вращение. От +162 до +168 в пересчете на сухое вещество (ОФС «Оптическое вращение»).
Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 0,2 г субстанции, растворяют в метаноле, доводят объем раствора тем же растворителем до метки и обрабатывают ультразвуком в течение 10 мин.
Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).
Подвижная фаза Б (ПФБ). Ацетонитрил.
Растворитель. Ацетонитрил — вода 400:600.
Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 20 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в растворителе, доводят объем раствора растворителем до метки и обрабатывают раствор ультразвуком в течение 10 мин.
Раствор стандартного образца гидрокортизона. Растворяют 2 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца гидрокортизона в 1,0 мл растворителя и обрабатывают раствор ультразвуком в течение 10 мин.
Раствор стандартного образца гидрокортизона, содержащего примеси D, E, G, H, I и N. Растворяют 2 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца гидрокортизона содержащего примеси D, E, G, H, I и № в 1,0 мл растворителя и обрабатывают раствор ультразвуком в течение 10 мин.
Раствор сравнения. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл испытуемого раствора и доводят объем раствора растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора растворителем до метки.
Раствор для идентификации. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 4 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца преднизолона (примесь A), 2 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца кортизона (примесь B), 8 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца гидрокортизона ацетата (примесь C) и 6 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца 11-дезоксикортизола (примесь F), растворяют в 40 мл ацетонитрила и доводят объем раствора водой до метки. В мерную колбу вместимостью 5 мл помещают 0,5 мл полученного раствора и доводят объем раствора испытуемым раствором до метки.
Примесь A (преднизолон): 11 \beta ,17,21-тригидроксипрегна-1,4-диен-3,20-дион [50-24-8].
Примесь B (кортизон): 17,21-дигидроксипрегн-4-ен-3,11,20-трион [53-06-5].
Примесь C (гидрокортизона ацетат): (11 \beta ,17-дигидрокси-3,20-диоксопрегн-4-ен-21-ил) ацетат [50-03-3].
Примесь D: 6 \beta ,11 \beta ,17,21-тетрагидроксипрегн-4-ен-3,20-дион [53-35-0].
Примесь E (6-дегидрокортизол): 11 \beta ,17,21-тригидроксипрегна-4,6-диен-3,20-дион [600-99-7].
Примесь F (11-дезоксикортизол): 17,21-дигидроксипрегн-4-ен-3,20-дион [152-58-9].
Примесь G: 11 \beta ,17-дигидрокси-3,20-диоксопрегн-4-ен-21-аль [14760-49-7].
Примесь H: 7 \alpha ,11 \beta ,17,21-тетрагидроксипрегн-4-ен-3,20-дион.
Примесь I: 11 \beta ,14,17,21-тетрагидроксипрегн-4-ен-3,20-дион [103795-84-2].
Примесь N: 11 \beta ,17,21-тригидрокси-21-(11 \beta ,17,21-тригидрокси-3,20-диоксопрегн-4-ен-21-ил)прегн-4-ен-3,20-дион.
| Время, мин | ПФА, % | ПФБ, % |
|---|---|---|
| 0 — 18 | 74 | 26 |
| 18 — 32 | 74 \rightarrow 55 | 26 \rightarrow 45 |
| 32 — 48 | 55 \rightarrow 30 | 45 \rightarrow 70 |
| 48 — 50 | 74 | 26 |
| 50 — 55 | 74 | 26 |
Хроматографируют раствор для идентификации, раствор стандартного образца гидрокортизона, содержащего примеси D, E, G, H, I и N, раствор сравнения и испытуемый раствор.
Относительное время удерживания соединений. Гидрокортизон — 1 (около 24 мин); примесь D — около 0,2; примесь H — около 0,3; примесь I — около 0,5; примесь G — около 0,8; примесь E — около 0,86; примесь A — около 0,96; примесь B — около 1,1; примесь F — около 1,4; примесь C — около 1,5; примесь N — около 1,7.
Идентификация примесей. Для идентификации пиков примесей D, E, G, H, I и № используют хроматограмму стандартного образца гидрокортизона, содержащего примеси D, E, G, H, I и № и хроматограмму, прилагаемую к фармакопейному стандартному образцу гидрокортизона. Для идентификации пиков примесей A, B, C и F используют хроматограмму раствора для идентификации.
Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для идентификации отношение максимум/минимум (p/v) между пиками примеси A и гидрокортизона должно быть не менее 3,0.
Поправочные коэффициенты. Для расчета содержания площади пиков следующих примесей умножают на соответствующие поправочные коэффициенты: примесь D — 1,8; примесь E — 2,7.
Допустимое содержание примесей. На хроматограмме испытуемого раствора:
- площадь пика каждой из примесей C, D, E и I не должна более чем в 5 раз превышать площадь пика гидрокортизона на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,5%);
- площадь пика примеси G не должна более чем в 4 раза превышать площадь пика гидрокортизона на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,4%);
- площадь пика примеси F не должна более чем в 3 раза превышать площадь пика гидрокортизона на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,3%);
- площадь пика каждой из примесей A и B не должна превышать 2 площади пика гидрокортизона на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,2%);
- площадь пика каждой из примесей H и № не должна более чем в 1,5 раза превышать площадь пика гидрокортизона на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,15%);
- площадь пика любой другой примеси не должна превышать площадь пика гидрокортизона на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,10%);
- сумма площадей пиков всех примесей не должна превышать двадцатикратную площадь пика гидрокортизона на хроматограмме раствора сравнения (не более 2,0%).
Не учитывают пики, площадь которых менее 0,5 площади пика гидрокортизона на хроматограмме раствора сравнения (менее 0,05%).
Потеря в массе при высушивании. Не более 1,0% (ОФС «Потеря в массе при высушивании», способ 1). Для определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.
Сульфатная зола. Не более 0,1% (ОФС «Сульфатная зола»). Для определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.
Тяжелые металлы. Не более 0,002%. Определение проводят в соответствии с ОФС «Тяжелые металлы» (метод 3Б) в зольном остатке, полученном после сжигания 1,0 г субстанции, с использованием эталонного раствора 2.
Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС «Остаточные органические растворители».
Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».
Определение проводят методом спектрофотометрии (ОФС «Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях»).
Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 0,1 г (точная навеска) субстанции, растворяют в спирте 96% и доводят объем раствора тем же растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 2,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора спиртом 96% до метки.
Измеряют оптическую плотность полученного раствора на спектрофотометре в максимуме поглощения при длине волны 241,5 нм в кювете с толщиной слоя 1 см. В качестве раствора сравнения используют спирт 96%.
Содержание гидрокортизона C21H30O5 в субстанции в пересчете на сухое вещество в процентах (X) вычисляют по формуле:
X = \frac{A \cdot 100 \cdot 100 \cdot 100}{440 \cdot a \cdot 2 \cdot (100 - W)} ,
где A — оптическая плотность испытуемого раствора;
440 — удельный показатель поглощения гидрокортизона (A_{1\text{см}}^{1\%}) ;
W — потеря в массе при высушивании, %.