МУК 4.1.1626-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Измерение массовых концентраций (+-)-2,3-дигидро-3-метил-9-фтор-10-(4-метилпиперазин-1-ил)-7-оксо-7Н-пиридо[1,2,3-dе]-1,4-бензоксазин-6-карбоновой кислоты (офлоксацина) в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания

(утв. Минздравом России от 29.06.2003)

29 июня 2003 года

4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

ИЗМЕРЕНИЕ МАССОВЫХ КОНЦЕНТРАЦИЙ (+-)-2,3-ДИГИДРО-3-МЕТИЛ-9- ФТОР-10-(4-МЕТИЛПИПЕРАЗИН-1-ИЛ)-7-ОКСО-7Н-ПИРИДО[1,2,3-DЕ]- 1,4-БЕНЗОКСАЗИН-6-КАРБОНОВОЙ КИСЛОТЫ (ОФЛОКСАЦИНА) В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

с момента утверждения

1. Методические указания подготовлены творческим коллективом специалистов Научно-исследовательского института медицины труда РАМН (Л.Г. Макеева — руководитель, Г.В. Муравьева, Е.М. Малинина, Е.Н. Грицун, Г.Ф. Громова) при участии А.И. Кучеренко (Департамент Госсанэпиднадзора Минздрава России).

2. Рекомендованы к утверждению на совместном заседании группы Главного эксперта Комиссии по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию по проблеме «Лабораторно-инструментальное дело и метрологическое обеспечение» и методбюро п/секции «Промышленно-санитарная химия» Проблемной комиссии «Научные основы гигиены труда и профпатологии».

3. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Министерстве здравоохранения Российской Федерации.

4. Утверждены и введены в действие Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации 29.06.03.

5. Введены впервые.

Введение

Методические указания «Измерение концентраций вредных веществ в воздухе рабочей зоны» (выпуск 42) разработаны с целью обеспечения контроля соответствия фактических концентраций вредных веществ их предельно допустимым концентрациям (ПДК) и ориентировочным безопасным уровням воздействия (ОБУВ) и являются обязательными при осуществлении санитарного контроля.

Включенные в данный сборник 29 методик контроля вредных веществ в воздухе рабочей зоны разработаны и подготовлены в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 ССБТ «Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования», ГОСТ Р 8.563-96 «Государственная система обеспечения единства измерений. Методики выполнения измерений», МИ 2335-95 «Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа», МИ 2336-95 «Характеристики погрешности результатов количественного химического анализа. Алгоритмы оценивания».

Методики выполнены с использованием современных методов исследования, метрологически аттестованы и дают возможность контролировать концентрации химических веществ на уровне и ниже их ПДК и ОБУВ в воздухе рабочей зоны, установленных в гигиенических нормативах — ГН 2.2.5.1313-03 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны», ГН 2.2.5.1314-03 «Ориентировочные безопасные уровни воздействия (ОБУВ) вредных веществ в воздухе рабочей зоны» и дополнениях № 1 к ним.

Методические указания по измерению массовых концентраций вредных веществ в воздухе рабочей зоны предназначены для центров госсанэпиднадзора, санитарных лабораторий промышленных предприятий при осуществлении контроля за содержанием вредных веществ в воздухе рабочей зоны, а также научно-исследовательских институтов и других заинтересованных министерств и ведомств.

1. Область применения

Настоящие Методические указания устанавливают количественный хроматографический анализ воздуха рабочей зоны на содержание (+-)-2,3-дигидро-3-метил-9-фтор-10-(4-метилпиперазин-1-ил)-7-оксо-7Н-пиридо[1,2,3-dе]-1,4-бензоксазин-6-карбоновой кислоты (офлоксацина) в диапазоне концентраций от 0,25 до 5,00 мг/куб. м.

2. Характеристика вещества

2.1 Структурная формула (не приводится).

2.2 Эмпирическая формула: С Н FN О .

                            18 20  3 4

2.3 Молекулярная масса: 361,4.

2.4 Регистрационный номер CAS 82419-36-1.

2.5 Физико-химические свойства.

    Офлоксацин   -  антибактериальный  препарат  широкого  спектра
действия, кристаллический порошок слегка  желтоватого  цвета, Т

                                                           пл.

260 - 280 °С, малорастворим в воде и в этиловом спирте,  растворим
в органических  растворителях,  растворим в  смеси  ацетонитрила и

воды (элюенте).

2.6 Токсикологическая характеристика.

Офлоксацин обладает антимикробным действием, вызывает нарушение микрофлоры, обладает фотосенсибилизирующим действием.

Предельно допустимая концентрация (ПДК) в воздухе рабочей зоны — 0,5 мг/куб. м. Класс опасности — второй.

3. Погрешность измерений

Методика обеспечивает выполнение измерений массовых концентраций офлоксацина с погрешностью не более +/- 16% при доверительной вероятности 0,95.

4. Метод измерений

Измерения массовых концентраций офлоксацина основаны на использовании высокоэффективной жидкостной хроматографии с применением спектрофотометрического детектора при длине волны 286 нм.

Нижний предел измерения содержания офлоксацина в хроматографируемом объеме раствора — 0,010 мкг.

Нижний предел измерения концентрации офлоксацина в воздухе — 0,25 мг/куб. м (при отборе 200 куб. дм воздуха).

Определению не мешают сопутствующие вещества (целлюлоза микрокристаллическая, титана диоксид, поливинилпирролидон низкомолекулярный, магний стеариновокислый, оксипропилцеллюлоза).

5. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, реактивы

5.1 Средства измерений, вспомогательные устройства,

материалы

Хроматограф жидкостный микроколоночный «Милихром» со спектрофотометрическим детектором Хроматографическая колонка стальная КАХ-44-3, 50 х 2 мм, заполненная сорбентом Сепарон С18, фракция 5 мкм

Пробоотборное устройство, тип ПУ-3Э        ТУ 4215-000-11696625-95
Весы аналитические ВЛА-200                 ГОСТ 24104-88Е
Фильтродержатель                           ТУ 95.72.05-77

Устройство для фильтрации жидкостей НПФ «Биохром» Колбы мерные вместимостью 500, 50 и 25 куб. см ГОСТ 1770-74Е Пипетки вместимостью от 1, 2, 5 и 10 куб. см ГОСТ 29227-91 Цилиндр мерный со шлифом вместимостью 100 куб. см ТУ 25.11.900-73 Бюксы 50/30 ГОСТ 25336-82Е Пробирки с пришлифованными пробками

Фильтры АФА-ВП-10                          ТУ 95-743-80
Фильтры "Владипор" типа ММФК-1Г            ТУ 6-05-221-433-79

5.2 Реактивы

Офлоксацин, содержание основного вещества не менее 98,5% ВФС 42-3556-99 Ацетонитрил для жидкостной хроматографии ТУ-6-09-14-2167-84 Калий дигидрофосфат, х.ч. ГОСТ 4198-75 Ортофосфорная кислота, х.ч. ГОСТ 6552-58 Вода дистиллированная ГОСТ 6709-72

Допускается применение иных средств измерения, вспомогательных устройств, реактивов и материалов, обеспечивающих показатели точности, установленные для данных Методических указаний.

6.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005-88.

6.2. При проведении анализов горючих и вредных веществ соблюдают меры противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-76.

6.3. При выполнении измерений с использованием хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.

К выполнению измерений и обработке результатов допускаются лица с высшим и средним специальным образованием, имеющие навыки работы на жидкостном хроматографе.

8.1. Приготовление растворов и подготовку проб к анализу проводят в нормальных условиях при температуре воздуха (20 +/- 5) °С, атмосферном давлении 84 — 106 кПа и влажности воздуха не более 80%.

8.2. Измерения на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

9.1 Приготовление растворов

9.1.1. Стандартный раствор № 1 офлоксацина в растворе элюента концентрацией 500 мкг/куб. см готовится растворением 25 мг вещества в мерной колбе вместимостью 50 куб. см.

9.1.2. Стандартный раствор № 2 офлоксацина в растворе элюента концентрацией 100 мкг/куб. см готовится разбавлением стандартного раствора № 1. Растворы устойчивы в течение месяца при хранении в холодильнике.

9.1.3. Раствор дигидрофосфата калия концентрацией 0,02 М готовят растворением 1,36 г указанной соли в 500 куб. см дистиллированной воды в колбе данного объема.

9.1.4. Раствор элюента готовят смешиванием в мерном цилиндре 90 куб. см 0,02 М раствора дигидрофосфата калия и 10 куб. см ацетонитрила. Раствор доводят до рН 3 ортофосфорной кислотой. Непосредственно перед измерением раствор фильтруют с помощью устройства для фильтрации и фильтров «Владипор» и дегазируют под вакуумом.

9.2 Подготовка прибора

Общую подготовку прибора осуществляют согласно инструкции по эксплуатации.

9.3 Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость величины хроматографического сигнала от массы анализируемого вещества в хроматографируемом объеме раствора, устанавливают по методу абсолютной калибровки с использованием серии градуировочных растворов, которые готовят разбавлением стандартного раствора № 2 согласно табл. 1. Растворы устойчивы в течение двух недель при хранении в холодильнике.

№ стандарта	Стандартный раствор офлоксацина № 2, куб. см	Раствор элюента, куб. см	Концентрация вещества, мкг/куб. см	Содержание вещества в хроматографируемом объеме пробы, мкг
1	0	20,0	0	0
2	1,0	19,0	5	0,01
3	2,0	18,0	10	0,02
4	3,0	17,0	15	0,03
5	5,0	15,0	25	0,05
6	10,0	10,0	50	0,1
7	20,0	0	100	0,2

Условия хроматографирования градуировочных смесей и анализируемых проб:

состав элюента: ацетонитрил — 0,02 М раствор дигидрофосфата калия 1:9, рН 3;

скорость потока элюента — 100 куб. мм/мин.;

объем вводимой пробы — 2 куб. мм;

длина волны спектрофотометрического детектора — 286 нм;

время удерживания офлоксацина — 5 мин.

Растворы помещают в пробоотборное устройство хроматографа.

На полученной хроматограмме измеряют площади пиков с помощью интегратора хроматографа (в условных единицах) при анализе 6 растворов разных концентраций и растворителя, проводя не менее 5 параллельных определений для каждого раствора, и строят градуировочную кривую зависимости площади пика от количества компонента в хроматографируемом объеме раствора (мкг). Проверку градуировочного графика проводят при изменении условий анализа, но не реже 1 раза в месяц.

9.4 Отбор пробы воздуха

Воздух с объемным расходом 20 куб. дм/мин. аспирируют через фильтр АФА ВП-10. Для измерения 1/2 ПДК офлоксацина достаточно отобрать 200 куб. дм воздуха. Пробы можно хранить в течение трех суток.

Фильтр с отобранной пробой помещают в бюкс с пришлифованной крышкой и приливают пипеткой 5 куб. см раствора элюента. Периодически встряхивая, выдерживают раствор в течение 5 мин. и сливают его в пробирку. Аналогичным образом проводят повторную экстракцию с фильтра и объединяют растворы. Степень экстракции с фильтра — 92%. Хроматографирование раствора пробы проводят в тех же условиях, что и хроматографирование градуировочных растворов. Количественное определение содержания анализируемого вещества в растворе проводят по предварительно построенному градуировочному графику.

Концентрацию офлоксацина (С, мг/куб. м) в воздухе вычисляют по формуле:

                            а х в

С = ------, б х V

где:

а — содержание вещества в анализируемом объеме пробы, найденное по градуировочному графику, мкг;

б — объем пробы, взятый для хроматографирования, куб. см;

в — общий объем раствора пробы, куб. см;

V — объем воздуха, отобранный для анализа и приведенный к стандартным условиям, куб. дм (см. Прилож. 1).

Результат количественного анализа представляют в виде (С +/- ДЕЛЬТА) мг/куб. м, Р = 0,95, где ДЕЛЬТА — характеристика погрешности, ДЕЛЬТА = 0,16 С + 0,02.

Значения характеристики погрешности, норматива оперативного контроля точности и норматива оперативного контроля воспроизводимости приведены в табл. 2 в виде зависимости от значения массовой концентрации анализируемого компонента в пробе С.

Диапазон определяемых	Наименование метрологической характеристики
концентраций офлоксацина, мг/куб. м	характеристика погрешности ДЕЛЬТА, мг/куб. м (Р = 0,95)	норматив оперативного контроля точности К, мг/куб. м (Р = 0,90, m = 2)	норматив оперативного контроля воспроизводимости D, мг/куб. м (Р = 0,95, m = 2)
От 0,25 до 5,0	0,02 + 0,16С	0,03 + 0,17С	0,07 + 0,05С

13.1 Оперативный контроль воспроизводимости

Оперативный контроль воспроизводимости выполняют в одной серии

с  анализом  рабочих проб. Отбирают реальные пробы воздуха рабочей
зоны  из  одного традиционного места отбора двумя пробоотборниками
одновременно.  Анализируют  в  соответствии  с  прописью методики,

максимально варьируя условия проведения анализа: партии реактивов,

наборы мерной  посуды  и  т.д., и получают два результата С  и  С
                                                           1     2

анализов. Результаты анализа не должны отличаться друг от друга на величину большую, чем норматив оперативного контроля воспроизводимости D:

                           |С  - С | <= D.
                             1    2

При превышении расхождения между двумя результатами норматива оперативного контроля воспроизводимости эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их. Внутренний оперативный контроль воспроизводимости проводят не реже, чем 1 раз в неделю.

13.2 Оперативный контроль точности

    Оперативный  контроль  точности  выполняют  в  одной  серии  с
анализом  рабочих  проб.  Отбирают  реальные пробы воздуха рабочей
зоны  из  одного традиционного места отбора двумя пробоотборниками
одновременно.  Затем  к  одной пробе, отобранной на фильтр, делают

добавку анализируемого компонента дельта С из раствора, нанося его

на фильтр. Величина добавки должна  соответствовать  50  - 150% от
содержания компонента в пробе. Результаты анализа С  без   добавки

                                               1

и С с добавкой получают по возможности в одинаковых условиях: 2

одним аналитиком, с одной партией реактивов, одним набором  посуды
и  т.д.  Погрешность  процедуры  отбора  проб  контролируют  путем
поверки    используемых    пробоотборников.    Расчет    норматива
оперативного контроля погрешности  К  проводят  по  характеристике
погрешности  методики   за   вычетом   характеристики  погрешности
пробоотборника.   Решение   об    удовлетворительной   погрешности

принимают при выполнении условия:

                    |С  - С  - дельта С| <= К.
                      2    1

Для проведения серии анализов из 6 проб при последовательном отборе проб воздуха требуется 4 ч.

Методические указания разработаны Российским государственным медицинским университетом (Е.Б. Гугля).

Приведение объема воздуха к стандартным условиям (температура 20 °С и давление 101,33 кПа) проводят по формуле:

                        V  х (273 + 20) х Р
                         t

                      V   = -------------------,
                       20   (273 + t) х 101,33

где:
V  - объем воздуха, отобранного для анализа, куб. дм;
 t
Р  -  барометрическое  давление,  кПа (101,33 кПа = 760 мм рт.

ст.); t — температура воздуха в месте отбора пробы, °С.

Для удобства расчета V следует пользоваться таблицей 20 коэффициентов (Прилож. 2). Для приведения воздуха к стандартным условиям надо умножить V на соответствующий коэффициент. t

Давление Р, кПа/мм рт. ст.
t °C	97,33/ 730	97,86/ 734	98,4/ 738	98,93/ 742	99,46/ 746	100/ 750	100,53/ 754	101,06/ 758	101,33/ 760	101,86/ 764
-30	1,1582	1,1646	1,1709	1,1772	1,1836	1,1899	1,1963	1,2026	1,2058	1,2122
-26	1,1393	1,1456	1,1519	1,1581	1,1644	1,1705	1,1768	1,1831	1,1862	1,1925
-22	1,1212	1,1274	1,1336	1,1396	1,1458	1,1519	1,1581	1,1643	1,1673	1,1735
-18	1,1036	1,1097	1,1158	1,1218	1,1278	1,1338	1,1399	1,1460	1,1490	1,1551
-14	1,0866	1,0926	1,0986	1,1045	1,1105	1,1164	1,1224	1,1284	1,1313	1,1373
-10	1,0701	1,0760	1,0819	1,0877	1,0986	1,0994	1,1053	1,1112	1,1141	1,1200
-6	1,0540	1,0599	1,0657	1,0714	1,0772	1,0829	1,0887	1,0945	1,0974	1,1032
-2	1,0385	1,0442	1,0499	1,0556	1,0613	1,0669	1,0726	1,0784	1,0812	1,0869
0	1,0309	1,0366	1,0423	1,0477	1,0535	1,0591	1,0648	1,0705	1,0733	1,0789
+2	1,0234	1,0291	1,0347	1,0402	1,0459	1,0514	1,0571	1,0627	1,0655	1,0712
+6	1,0087	1,0143	1,0198	1,0253	1,0309	1,0363	1,0419	1,0475	1,0502	1,0557
+10	0,9944	0,9999	0,0054	1,0108	1,0162	1,0216	1,0272	1,0326	1,0353	1,0407
+14	0,9806	0,9860	0,9914	0,9967	1,0027	1,0074	1,0128	1,0183	1,0209	1,0263
+18	0,9671	0,9725	0,9778	0,9830	0,9884	0,9936	0,9989	1,0043	1,0069	1,0122
+20	0,9605	0,9658	0,9711	0,9783	0,9816	0,9868	0,9921	0,9974	1,0000	1,0053
+22	0,9539	0,9592	0,9645	0,9696	0,9749	0,9800	0,9853	0,9906	0,9932	0,9985
+24	0,9475	0,9527	0,9579	0,9631	0,9683	0,9735	0,9787	0,9839	0,9865	0,9917
+26	0,9412	0,9464	0,9516	0,9566	0,9618	0,9669	0,9721	0,9773	0,9799	0,9851
+28	0,9349	0,9401	0,9453	0,9503	0,9555	0,9605	0,9657	0,9708	0,9734	0,9785
+30	0,9288	0,9339	0,9391	0,9440	0,9432	0,9542	0,9594	0,9645	0,9670	0,9723
+34	0,9167	0,9218	0,9268	0,9318	0,9368	0,9418	0,9468	0,9519	0,9544	0,9595
+38	0,9049	0,9099	0,9149	0,9199	0,9248	0,9297	0,9347	0,9397	0,9421	0,9471

Название вещества	Ссылка на опубликованные методические указания
1	2
1. N-децил-N,N-диметил-	МУ по фотометрическому измерению кон-
1-деканаминий хлорид	центраций диалкилдиметиламмоний хлорида
(дидецилдиметиламмоний	(С — С ) и алкилбензилдиметиламмоний
хлорид; «Арквад»	17 20
2.10.50»)	хлорида (С — С )-ДОН-2, диалкиламино- 10 16 пропионитрила (С — С )-ИФХАН-ГАЗ, ал- 7 9 килтриметиламмоний хлорида (С — С ), 10 16 ДОН-52 в воздухе рабочей зоны. № утв. 4905-88, дата утв. 12.12.88, вып. 25, М., 1989, с. 49
2. Поликарбонофторид	МУ на гравиметрическое определение пыли в воздухе рабочей зоны и в системах вентиляционных установок. МУ № 1719-77, дата утв. 18.04.77, вып. 1 — 5, М., 1981, с. 235
3. Препарат МЭК-Сх-3	МУ по фотометрическому измерению массовых концентраций эндо-1,3в-ксиланазы (ксиланаза) в воздухе рабочей зоны. МУК 4.1.1642-03, дата утв. 29.06.03, вып. 42
4. Препарат ПФП-1	МУ по спектрофотометрическому измерению концентрации амилазы в воздухе рабочей зоны. МУК 4.1.1575-03, дата утв. 29.06.03, вып. 38
5. Препарат Феркон	МУ по фотометрическому измерению массовых концентраций целловиридина в воздухе рабочей зоны. МУК 4.1.1753-03, дата утв. 29.06.03, вып. 46
6. Селенит натрия	МУ по атомно-абсорбционному измерению массовых концентраций селена и диоксида селена в воздухе рабочей зоны. МУК 4.1.1368-03, дата утв. 16.05.03, вып. 41
7. Триамин G-12Д	МУ по спектрофотометрическому измерению концентраций N',N'-бис-(3-аминопропил)- додециламина(лонзабака) в воздухе рабочей зоны. МУК 4.1.1522-03, дата утв. 29.06.03, вып. 37

---