Изменение № 2 ГОСТ 7636-85 «Рыба, морские млекопитающие, морские беспозвоночные и продукты их переработки. Методы анализа»
(принято Протоколом Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации от 31.08.2023 № 164-П)
Примечание
Текст данного документа приведен с учетом поправки, опубликованной в «ИУС», № 4, 2024. Документ введен в действие на территории Российской Федерации с 01.08.2024 с правом досрочного применения (Приказ Росстандарта от 03.10.2023 № 1043-ст).
Принято Протоколом Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации от 31 августа 2023 г. № 164-П
ИЗМЕНЕНИЕ № 2 ГОСТ 7636-85 «РЫБА, МОРСКИЕ МЛЕКОПИТАЮЩИЕ, МОРСКИЕ БЕСПОЗВОНОЧНЫЕ И ПРОДУКТЫ ИХ ПЕРЕРАБОТКИ. МЕТОДЫ АНАЛИЗА»
Принято Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол № 164-П от 31.08.2023)
Зарегистрировано Бюро по стандартам МГС № 16925
За принятие изменения проголосовали национальные органы по стандартизации следующих государств: AM, BY, KZ, KG, RU, TJ, UZ [коды альфа-2 по МК (ИСО 3166) 004]
Дату введения в действие настоящего изменения устанавливают указанные национальные органы по стандартизации <*>
<*> Дата введения в действие на территории Российской Федерации — 2024-08-01 с правом досрочного применения.
По всему тексту стандарта заменить ссылки: датированные на недатированные.
Подпункт 3.2.1.2. Второй абзац. Заменить ссылку: «ГОСТ 6709-72» на «ГОСТ 6709 <*>»;
дополнить сноской — <*>:
<*> В Российской Федерации действует ГОСТ Р 58144-2018 «Вода дистиллированная. Технические условия».
Подраздел 3.2 дополнить пунктом 3.2.1а:
«3.2.1а Определение массовой доли общего азота летучих оснований титриметрическим методом в диапазоне измерений от 10 до 50 мг/100 г»
Метод основан на экстракции из пробы летучих азотистых оснований с помощью раствора хлорной кислоты, подщелачивании, отгонке (дистилляции) летучих азотистых оснований водяным паром в раствор борной кислоты с последующим титрованием раствором соляной кислоты, с потенциометрической или автоматической индикацией точки эквивалентности.
Метод применяют при разногласиях в оценке органолептических показателей непереработанной пищевой рыбной продукции животного происхождения.
3.2.1а.2 Средства измерений, оборудование, реактивы, материалы
Бюретки лабораторные стеклянные номинальной вместимостью 5 см3 и наименьшей ценой деления 0,01 см3 по ГОСТ 29251.
Весы неавтоматического действия специального или высокого класса точности с пределом допускаемой абсолютной погрешности не более +/- 0,01 г по ГОСТ OIML R 76-1 или весы лабораторные электронные 2 класса точности с наибольшим пределом взвешивания 300 г.
Колбы лабораторные стеклянные Кн-2-(250, 500)-29/32 ТХС по ГОСТ 25336.
Колбы мерные лабораторные стеклянные 2-(250, 500, 1000, 2000)-1 по ГОСТ 1770.
pH-метр лабораторный или блок автоматического титрования.
Стаканы лабораторные стеклянные В-1-(50, 100, 250, 500) ТХС по ГОСТ 25336.
Цилиндры мерные лабораторные стеклянные 2-(10, 50, 100, 1000)-1 по ГОСТ 1770.
Мясорубка механическая по ГОСТ 4025, или мясорубка электрическая по ГОСТ 20469, или гомогенизатор.
Аммоний хлористый по ГОСТ 3773, х.ч.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
Кислота борная по ГОСТ 9656, х.ч.
Кислота соляная (плотность 1,19 г/см3) по ГОСТ 3118, х.ч.
Кислота соляная стандарт-титр с молярной концентрацией c(HCl) = 0,1 моль/дм3.
Кислота хлорная (плотность 1,66 г/см3), х.ч.
Натрия гидроокись по ГОСТ 4328, х.ч.
Спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962.
Бумага фильтровальная лабораторная ФМ-III диаметром 110 мм по ГОСТ 12026.
Воронки лабораторные стеклянные В-25-38 ХС, В-36-80 ХС, В-100-150 ХС по ГОСТ 25336.
Пипетки градуированные 1-1-1-1; 1-1-1-2; 1-1-1-5; 1-1-1-10 по ГОСТ 29228.
Пробирки для минерализации вместимостью 250 см3.
Стаканчики лабораторные стеклянные СВ-14/8 по ГОСТ 25336.
Допускается применение других средств измерений и оборудования, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам, а также реактивов и материалов по качеству не ниже указанных.
3.2.1а.3 Приготовление растворов
Приготовление раствора хлорной кислоты 6 г/100 см3
36,14 см3 хлорной кислоты плотностью 1,66 г/см3 растворяют в 200 — 300 см3 дистиллированной воды, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 1000 см3, доводят объем дистиллированной водой до метки и перемешивают.
Раствор хранят не более 1 мес при температуре (20 +/- 5) °C.
Приготовление раствора гидроокиси натрия 20 г/100 см3
100 г гидроокиси натрия растворяют в 200 — 300 см3 дистиллированной воды, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 500 см3, доводят объем дистиллированной водой до метки и перемешивают.
Раствор хранят не более 14 сут при температуре (20 +/- 5) °C.
Приготовление раствора соляной кислоты молярной концентрации 0,01 моль/дм3
0,835 см3 соляной кислоты плотностью 1,19 г/см3 переносят в мерную колбу вместимостью 1000 см3, доводят объем в колбе дистиллированной водой до отметки и перемешивают. Работу проводят в вытяжном шкафу.
Раствор хранят не более 3 мес при температуре (20 +/- 5) °C.
Приготовление раствора соляной кислоты молярной концентрации 0,01 моль/дм3 из стандарт-титра соляной кислоты молярной концентрации c(HCl) = 0,1 моль/дм3 (0,1 Н)
Содержимое одной ампулы стандарт-титра соляной кислоты вносят в мерную колбу вместимостью 1000 см3, доводят дистиллированной водой объем до метки и перемешивают. Получают основной раствор соляной кислоты концентрацией 0,1 моль/дм3. Из него готовят рабочий раствор соляной кислоты молярной концентрации 0,01 моль/дм3.
100 см3 основного раствора соляной кислоты концентрации 0,1 моль/дм3 доводят до метки дистиллированной водой в мерной колбе вместимостью 1000 см3.
Раствор хранят не более 3 мес при температуре (20 +/- 5) °C.
Приготовление раствора соляной кислоты молярной концентрации 0,05 моль/дм3 из стандарт-титра
Содержимое одной ампулы стандарт-титра соляной кислоты молярной концентрации c(HCl) = 0,1 моль/дм3 (0,1 Н) вносят в мерную колбу вместимостью 2000 см3, доводят дистиллированной водой до метки и перемешивают.
Раствор хранят не более 1 мес при температуре (20 +/- 5) °C.
Определение точной молярной концентрации соляной кислоты проводят в соответствии с требованиями ГОСТ 25794.1 не реже одного раза в месяц.
Приготовление раствора борной кислоты 3 г/100 см3
30 г борной кислоты растворяют в 200 — 300 см3 дистиллированной воды, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 1000 см3, доводят объем дистиллированной водой до метки и перемешивают.
Раствор хранят не более 14 сут при температуре (20 +/- 5) °C.
Приготовление раствора индикатора фенолфталеина 1 г/100 см3
1,0 г фенолфталеина растворяют в 100 см3 этилового спирта.
Раствор хранят не более 6 мес при температуре (20 +/- 5) °C.
Приготовление раствора индикатора Таширо
0,2 г метилового красного и 0,1 г метиленового синего растворяют в 100 см3 этилового спирта.
Раствор хранят в емкости из темного стекла не более 10 сут при температуре (20 +/- 5) °C.
3.2.1а.4 Проверка правильности работы оборудования
При получении сомнительных результатов (слишком низких или с большими расхождениями между параллельными определениями) проводят проверку системы паровой дистилляции.
Для проверки системы паровой дистилляции в отгонную колбу вместо экстракта помещают 0,05 г аммония хлористого и проводят процедуру паровой дистилляции.
Используют аммоний хлористый (NH4)Cl с чистотой не менее 99,5%. Его молекулярная масса равна 53,491 г/моль. Процентное содержание азота в аммонии хлористом (чистотой 99,5%) составляет 26,04%.
Получение результата содержания азота в аммонии хлористом ниже 26,04% может указывать на неполную перегонку или нарушение герметичности системы паровой дистилляции.
Анализ необходимо проводить в лаборатории, свободной от паров аммиака, в соответствии с ГОСТ 12.1.005.
Навеску измельченной средней пробы массой (10 +/- 0,1) г смешивают с 90,0 см3 раствора хлорной кислоты (концентрацией 6 г/100 см3) в гомогенизаторе в течение 2 мин. Затем смесь фильтруют. Полученный экстракт допускается хранить в холодильнике при температуре от 2 °C до 6 °C не более 7 сут в воздухонепроницаемой колбе (банке) с закрытой крышкой.
В отгонную колбу помещают 50,0 см3 экстракта и добавляют 3 — 5 капель раствора индикатора фенолфталеина (концентрацией 1 г/100 см3) для последующей проверки подщелачивания экстракта. Для предотвращения вспенивания в экстракт допускается добавить несколько капель силиконового пеногасителя. Непосредственно перед началом паровой дистилляции в отгонную колбу наливают 6,5 см3 раствора гидроокиси натрия (концентрацией 20 г/100 см3).
В приемную коническую колбу вместимостью не менее 250 см3 наливают 100 см3 раствора борной кислоты (концентрацией 3 г/100 см3) и 3 — 5 капель раствора индикатора Таширо. Колбу располагают таким образом, чтобы нижний конец трубки дистиллятора был полностью погружен в раствор борной кислоты.
При применении блока автоматического титрования в качестве приемника используют колбу вместимостью 500 см3, которую по окончании дистилляции помещают в титратор.
Перед осуществлением процесса паровой дистилляции необходимо прогреть систему в течение 5 мин при максимальном уровне подачи пара.
Систему паровой дистилляции настраивают таким образом, чтобы за 10 мин производилось около 100 см3 дистиллята. Через 10 мин дистилляции трубку дистилляционного аппарата удаляют из приемной колбы и промывают водой.
Содержимое приемной колбы титруют раствором соляной кислоты молярной концентрации 0,05 моль/дм3. Уровень pH конечной точки должен составлять (5,0 +/- 0,1).
При применении блока автоматического титрования проводится титрование с использованием стандартного раствора соляной кислоты молярной концентрации 0,01 моль/дм3.
Полученные результаты титрования используют для вычисления массовой доли общего азота летучих оснований.
Контрольный (холостой) анализ проводят, используя вместо экстракта 50,0 см3 раствора хлорной кислоты.
3.2.1а.6 Обработка результатов
Массовую долю общего азота летучих оснований X (мг/100 г пробы), вычисляют по формуле
X = \frac{(V_{1} - V_{0}) \cdot c \cdot 14 \cdot 100 \cdot 2}{m} , (1)
где V1 — объем 0,05 моль/дм3 (0,01 моль/дм3 при автоматическом титровании) раствора соляной кислоты, израсходованный на титрование исследуемой пробы, см3;
V0 — объем 0,05 моль/дм3 (0,01 моль/дм3 при автоматическом титровании) раствора соляной кислоты, израсходованный на титрование контрольной пробы, см3;
c — точная молярная концентрация раствора соляной кислоты, моль/дм3;
14 — масса азота, эквивалентная 1 см3 раствора соляной кислоты молярной концентрации 1 моль/дм3, мг;
2 — фактор пересчета количества экстракта, взятого для измерения, на общий объем экстракта.
Вычисление проводят до третьего десятичного знака. За окончательный результат принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных измерений, округленное до второго десятичного знака, если удовлетворяются условия повторяемости.
3.2.1а.7 Метрологические характеристики
При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в таблице 1а, для соответствующих диапазонов концентраций.
3.2.1а.8 Контроль точности результатов
Проверку приемлемости результатов измерений, полученных в условиях повторяемости, осуществляют в соответствии с требованиями нормативных документов, действующих на территории государства, принявшего стандарт. Расхождение между результатами измерений не должно превышать предела повторяемости (r). Значение r приведено в п. 3.2.1а.7, таблица 1а.
\frac{2 \cdot |X_{1} - X_{2}| \cdot 100}{(X_{1} + X_{2})} \leq r, (2)
где X1, X2 - результаты измерений, выполненных в условиях повторяемости;
Проверку приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости, проводят с учетом требований нормативных документов, действующих на территории государства, принявшего стандарт. Расхождение между результатами измерений, полученными двумя лабораториями, не должно превышать предела воспроизводимости (R). Значение R приведено в п. 3.2.1а.7, таблица 1а.
Процедуру контроля стабильности показателей качества, результатов анализа (повторяемости, промежуточной прецизионности и погрешности) проводят в соответствии с порядком, установленным в лаборатории, по нормативным документам, действующим на территории государства, принявшего стандарт.
3.2.1а.9 Оформление результатов
Результат анализа, выраженный в мг/100 г, при доверительной вероятности P = 0,95 представляют в виде
(\overline{X} \pm \Delta), (3)
где \overline{X} — среднеарифметическое значение результатов определений, признанных приемлемыми, мг/100 г;
\Delta — граница абсолютной погрешности, мг/100 г.
\Delta = \frac{\delta \cdot X}{100} , (4)
где \delta — граница относительной погрешности методики [показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций (п. 3.2.1а.7, таблица 1а)], %».
Подпункт 3.2.3.2. Последний абзац изложить в новой редакции:
«Эфир медицинский по нормативным документам, действующим на территории государства, принявшего стандарт».
Подраздел 3.4 дополнить пунктом 3.4.5.
«3.4.5 Определение массовой доли белка в рыбе, морских млекопитающих, морских беспозвоночных и продукции из них по методу Кьельдаля — по п. 8.9.1а».
Подпункт 3.6.4.2. Восьмой абзац изложить в новой редакции:
«Эфир серный по нормативным документам, действующим на территории государства, принявшего стандарт».
Пункт 3.7.1. Сноска <*>. Заменить ссылку: «ГОСТ 13496.15-97» на «ГОСТ 13496.15-2016».
Подпункт 3.7.1.2. Четырнадцатый абзац изложить в новой редакции:
«Эфир петролейный температурой кипения 40 — 60 °C или эфир этиловый, не содержащий перекисей, высушенный над хлористым кальцием или сернокислым натрием, по нормативным документам, действующим на территории государства, принявшего стандарт».
Подпункт 3.7.4.2. Девятый абзац. Заменить ссылку: «ГОСТ 5962-67 <*>» на «ГОСТ 5962»;
Пункт 3.7.6. Заменить слова: «института питания АМН СССР» на «ФГБУН „ФИЦ питания и биотехнологии“.»
Подпункт 3.7.6.2. Седьмой абзац. Исключить слова: «Клинского завода „Лабприбор“.»
Подпункт 5.6.2.2. Восемнадцатый абзац изложить в новой редакции:
«Уротропин (гексаметилентетрамин) с массовой долей основного вещества не менее 990 г/дм3 (99%-ный) по нормативным документам, действующим на территории государства, принявшего стандарт».
Подпункт 7.2.3.2. Третий абзац изложить в новой редакции:
«Эфир медицинский по нормативным документам, действующим на территории государства, принявшего стандарт».
Пункт 7.6.2. Последний абзац изложить в новой редакции:
«Эфир петролейный температурой кипения 40 — 60 °C или бензин-растворитель для резиновой промышленности температурой кипения до 90 °C по нормативным документам, действующим на территории государства, принявшего стандарт».
Пункт 7.9.2. Двенадцатый абзац изложить в новой редакции:
«Эфир медицинский по нормативным документам, действующим на территории государства, принявшего стандарт».
Подпункт 7.11.1.2. Шестой, двенадцатый абзацы изложить в новой редакции:
«Ртуть двухлористая (сулема) по нормативным документам, действующим на территории государства, принявшего стандарт»;
«Хлороформ по нормативным документам, действующим на территории государства, принявшего стандарт».
Подпункт 7.11.2.2. Восьмой, одиннадцатый абзацы изложить в новой редакции:
«Хлороформ по нормативным документам, действующим на территории государства, принявшего стандарт»;
«Эфир медицинский по нормативным документам, действующим на территории государства, принявшего стандарт».
Пункт 7.12.2. Девятый абзац изложить в новой редакции:
«Хлороформ по нормативным документам, действующим на территории государства, принявшего стандарт».
Пункт 7.13.2. Семнадцатый абзац изложить в новой редакции:
«Эфир медицинский по нормативным документам, действующим на территории государства, принявшего стандарт».
Пункт 7.14.1. Заменить слова: «по ФС 42-965-75» на «по нормативным документам, действующим на территории государства, принявшего стандарт».
Подпункт 7.14.2.2. Двадцать четвертый, двадцать седьмой, двадцать восьмой абзацы изложить в новой редакции:
«Пирогаллол А по нормативным документам, действующим на территории государства, принявшего стандарт»;
«Хлороформ по нормативным документам, действующим на территории государства, принявшего стандарт»;
«Эфир медицинский по нормативным документам, действующим на территории государства, принявшего стандарт».
Подпункт 7.14.2.5. Первый абзац. Заменить слова: «в ФС 42-101-72» на «в нормативных документах, действующих на территории государства, принявшего стандарт».
Пункт 8.6. Заменить ссылку: «ГОСТ 13496.3-92» на «ГОСТ 13496.3 <*>»;
дополнить сноской — <*>:
<*> В Российской Федерации действует ГОСТ Р 54951-2012 (ИСО 6496:1999) «Корма для животных. Определение содержания влаги».
Подраздел 8.9 дополнить пунктом 8.9.1а:
«8.9.1а Определение массовой доли белка в рыбе, морских млекопитающих, морских беспозвоночных и продукции из них по методу Кьельдаля»
Метод Кьельдаля основан на минерализации органического вещества концентрированной серной кислотой в присутствии катализатора с образованием сульфата аммония, разрушении сульфата аммония щелочью с выделением аммиака, отгонке (дистилляции) аммиака водяным паром в раствор борной кислоты с последующим титрованием раствором соляной кислоты, с автоматической фотометрической индикацией точки эквивалентности.
Метод Кьельдаля включает три основных этапа: минерализация, дистилляция и титрование.
Определение массовой доли белка по методу Кьельдаля осуществляется в диапазоне измерений:
- для непереработанной пищевой рыбной продукции (рыба, морские млекопитающие, беспозвоночные) <*> — от 1,0% до 30,0%;
- для переработанной пищевой рыбной продукции (рыбная продукция) <*> — от 1,0% до 60,0%;
- для непищевой рыбной продукции (кормовая мука рыбная) <*> — от 45% до 80,0%.
<*> Наименование анализируемого объекта приведено в таблице 6а (п. 8.9.1а.7).
8.9.1а.2 Средства измерений, оборудование, реактивы, материалы
Блок автоматического фотометрического титрования.
Весы лабораторные электронные 2 класса точности с наибольшим пределом взвешивания 300 г.
Колбы лабораторные стеклянные Кн-2-250-29/32 ТХС по ГОСТ 25336.
Колбы мерные лабораторные стеклянные 2-(100, 250, 500, 1000, 2000)-1 по ГОСТ 1770.
Стаканы лабораторные стеклянные В-1-(50, 100, 250) ТХС по ГОСТ 25336.
Цилиндры мерные лабораторные стеклянные 2-(10, 50, 100, 1000)-1 по ГОСТ 1770.
Скруббер (вытяжная система) с водоструйным насосом или отсасывающим устройством, изготовленным из кислотоустойчивого материала для использования с магистральным водопроводом.
Дигестор для минерализации проб или минерализатор, снабженный электронным терморегулятором (100 — 420) °C.
Мясорубка механическая по ГОСТ 4025, или мясорубка электрическая по ГОСТ 20469, или гомогенизатор.
Бромкрезоловый зеленый, ч.д.а.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
Водорода пероксид (раствор с массовой долей 30%) по ГОСТ 10929, ч.д.а.
Калий сернокислый по ГОСТ 4145, х.ч.
Калия гидроокись по ГОСТ 24363, ч.д.а.
Катализатор для сульфатной минерализации при определении белка или таблетка катализатора Cu/3,5 Кьельтабс (далее — таблетка катализатора).
Кислота борная по ГОСТ 9656, х.ч.
Кислота серная концентрированная (плотность 1,80 — 1,84 г/см3) по ГОСТ 4204, ч.д.а.
Кислота соляная (плотность 1,19 г/см3) по ГОСТ 3118, х.ч. или по ГОСТ 14261, ос.ч.
Кислота соляная стандарт-титр с молярной концентрацией c(HCl) = 0,1 моль/дм3.
Медь (II) сернокислая 5-водная по ГОСТ 4165, ч.д.а.
Натрий сернокислый по ГОСТ 4166, х.ч.
Натрий углекислый по ГОСТ 83, х.ч.
Натрия гидроокись по ГОСТ 4328, х.ч.
Спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962.
Бумага фильтровальная лабораторная ФМ-III по ГОСТ 12026.
Воронки В-36-80 ХС по ГОСТ 25336.
Пипетки градуированные 8-2-0,1 или 8-2-0,2 по ГОСТ 29228.
Пипетки градуированные 6-1-10 или 6-2-10 по ГОСТ 29228.
Пробирки для минерализации дигесторные на 250 см3.
Стаканчики СВ-14/8 по ГОСТ 25336.
Ступка фарфоровая с пестиком по ГОСТ 9147.
Допускается применение других средств измерений и оборудования, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам, а также реактивов и материалов по качеству не ниже указанных.
8.9.1а.3 Приготовление растворов
Приготовление 40%-ного раствора гидроокиси натрия
400 г гидроокиси натрия растворяют в 600 см3 дистиллированной воды.
Раствор хранят в емкости из стекла не более 1 мес при температуре (20 +/- 5) °C.
Мелко растертый безводный натрий сернокислый (калий сернокислый) тщательно смешивают с тонко растертой медью (II) сернокислой в весовом соотношении 10:1. Компоненты смеси, взвешенные с погрешностью не более 0,1 г, растирают в ступке.
Смесь хранят в герметически закрытой емкости и предохраняют от влаги в течение 1 мес при температуре (20 +/- 5) °C.
Допускается применение таблеток катализатора Cu/3,5 Кьельтабс или аналогичных согласно руководству к используемому оборудованию.
Предварительная подготовка (сушка/обезвоживание) реактивов
Натрий сернокислый (Na2SO4) высушивают до постоянной массы при температуре от 100 °C до 105 °C в соответствии с ГОСТ 4212.
Натрий углекислый (Na2CO3) прокаливают до постоянной массы при температуре от 250 °C до 300 °C в соответствии с ГОСТ 4212.
Процедуру сушки/обезвоживания реактивов проводят перед каждым приготовлением растворов.
Приготовление раствора борной кислоты с массовой долей H3BO3 4 г/100 см3 с индикаторами (бромкрезоловый зеленый и метиловый красный)
40,0 г борной кислоты растворяют в 500 — 600 см3 дистиллированной воды, перемешивают и добавляют дистиллированную воду, доводят объем примерно до 900 см3. Полученный раствор охлаждают до комнатной температуры.
0,1 г метилового красного (C15H15N3O2) растворяют в 100 см3 этилового спирта.
Раствор бромкрезолового зеленого
0,1 г бромкрезолового зеленого (C21H14Br4O5S) растворяют в 100 см3 этилового спирта.
10,0 см3 раствора бромкрезолового зеленого добавляют в приготовленный раствор борной кислоты и после смешивания добавляют 7,0 см3 раствора метилового красного. Доводят объем до 1,0 дм3. Тщательно перемешивают.
Приготовленный раствор используется для поглощения аммиака.
Раствор хранят в емкости из темного стекла в течение 1 мес при температуре (20 +/- 5) °C.
Приготовление раствора соляной кислоты концентрации 0,1 моль/дм3
8,35 см3 соляной кислоты плотностью 1,19 г/см3 переносят в мерную колбу вместимостью 1000 см3, доводят объем в колбе дистиллированной водой до метки и перемешивают. Работу проводят в вытяжном шкафу.
Раствор хранят 3 мес при температуре (20 +/- 5) °C.
Приготовление раствора соляной кислоты при использовании стандарт-титра соляной кислоты молярной концентрации c(HCl) = 0,1 моль/дм3 (0,1 Н)
Содержимое одной ампулы стандарт-титра соляной кислоты вносят в мерную колбу вместимостью 1000 см3, доводят дистиллированной водой объем до метки и перемешивают. Раствор хранят 3 мес при температуре (20 +/- 5) °C.
Допускается готовить раствор соляной кислоты с концентрацией, предусмотренной согласно руководству к используемому оборудованию.
Определение точной молярной концентрации соляной кислоты проводят в соответствии с требованиями ГОСТ 25794.1 не реже одного раза в месяц.
8.9.1а.4 Проверка правильности работы оборудования
Принцип дистилляции заключается в превращении аммония (NH4) в аммиак (NH3) с помощью щелочи, дальнейшей отгонке паром в приемный сосуд, содержащий борную кислоту, и титровании стандартным раствором кислоты.
Используют аммония сульфат (NH4)2SO4 с чистотой не менее 99,5%. Молекулярный вес (NH4)2SO4 равен 132,14 г/моль.
Процентное содержание азота в аммонии сульфате (чистотой 99,5%) составляет 21,09%.
Допускается использовать аммония сульфат в качестве стандарта, позволяющего судить об уровне восстановления в дистилляционной системе.
0,15 г аммония сульфата, взвешенного с точностью 0,01 г, помещают в пробирку для минерализации. Добавляют 75 см3 дистиллированной воды и проводят дистилляцию.
Процентное содержание азота вычисляют по формуле
\%\text{азота} = \frac{(V_{\text{оп}} - V_{\text{хол}}) \cdot c \cdot 1,40}{m} , (1)
где Vоп — объем соляной кислоты концентрацией 0,1 моль/дм3, израсходованный на титрование образца;
Vхол — объем соляной кислоты концентрацией 0,1 моль/дм3, израсходованный на титрование при контрольном измерении;
c — фактическая молярная концентрация соляной кислоты, моль/дм3, определенная до четвертого знака;
m — масса сульфата аммония, взятая для проведения дистилляции, г.
Процент восстановления азота вычисляют по формуле
\%\text{восстановления} = \frac{\text{Реальныйпроцентазота}}{21,09} \cdot 100. (2)
При получении процента восстановления азота более 99,0% установку считают пригодной к эксплуатации (для проведения исследований).
Образец массой 0,3 — 0,4 г взвешивают с точностью до 0,01 г и помещают в каждую пробирку для минерализации.
Добавляют 1 таблетку катализатора, используемого для сульфатной минерализации (или 8 г катализатора, приготовленного по п. 8.9.1а.3), в пробирку для минерализации.
Для некоторых типов образцов из-за низкой точки кипения требуется длительное время сжигания. В этом случае необходимо добавить еще одну таблетку катализатора.
В пробирку для минерализации с образцом и катализатором осторожно добавляют 12,5 см3 концентрированной серной кислоты и перемешивают. Если анализируемые образцы имеют высокое содержание жира и углеводов, может иметь место кристаллизация, в этом случае добавляют дополнительно 2 — 3 см3 концентрированной серной кислоты перед сжиганием. Кристаллизация во время сжигания может быть причиной потери азота.
Для образцов с высоким содержанием жира или углеводов используют 15 см3 серной кислоты и пероксид водорода, который является противопенным агентом и сдерживает вспенивание различных типов образцов в процессе сжигания (минерализации).
Присоединяют скруббер к пробиркам для минерализации в штативе и устанавливают водоструйный насос на полный поток.
Устанавливают штатив вместе со скруббером в дигестор для минерализации проб и включают нагрев. Минерализацию проводят при температуре 400 — 420 °C.
Примерно через 5 мин уменьшают поток в водоструйном насосе до появления паров кислоты в головке скруббера.
Продолжают процесс сжигания, пока образцы не осветлятся до голубовато-зеленоватого цвета раствора. Окончание процесса минерализации определяют по отсутствию темных включений, а также цвету жидкости в минерализационной пробирке, которая должна быть бесцветной (или с зеленовато-голубым оттенком).
Вынимают штатив с пробирками вместе со скруббером и переносят в подставку для охлаждения на 10 — 20 мин.
Одновременно аналогично проводят контрольный (холостой) анализ без навески.
Устанавливают пробирку для минерализации с образцом в блок системы паровой дистилляции и закрывают защитную дверцу.
При измерении массовой доли общего азота дистилляционная система добавляет дистиллированную воду автоматически перед началом цикла дистилляции.
Введение щелочи и цикл дистилляции (5 — 8 мин, в зависимости от прибора) контролируются автоматически.
Приемный раствор в дистилляционной колбе должен стать зеленым, показывая наличие щелочи — аммония.
После прохождения цикла дистилляции дистиллят титруют раствором соляной кислоты 0,1 моль/дм3 (или раствором соляной кислоты с концентрацией, предусмотренной согласно руководству к используемому оборудованию). Конечная точка титрования достигается при серо-розовом цвете приемного раствора и фиксируется блоком автоматического фотометрического титрования.
Отмечают объем кислоты, использованный для титрования.
Аналогично проводят дистилляцию и титрование для контрольного (холостого) анализа.
8.9.1а.6 Обработка результатов
Массовую долю белка X, %, вычисляют по формуле
X = \frac{14,0067 \cdot (V_{1} - V_{2}) \cdot c \cdot 100}{m \cdot 1000} \cdot 6,25, (3)
где V1 — объем раствора соляной кислоты, затраченный на титрование анализируемого образца, см3;
V2 — объем раствора соляной кислоты, затраченный на титрование при контрольном измерении, см3;
c — фактическая молярная концентрация соляной кислоты, моль/дм3;
14,0067 — масса азота, эквивалентная 1 дм3 раствора соляной кислоты молярной концентрации c(HCl) = 1 моль/дм3, г;
m — масса навески продукта, г;
100 — коэффициент перерасчета результатов, %;
1000 — коэффициент перерасчета см3 в дм3;
6,25 — коэффициент перерасчета азота на белок.
Вычисление проводят до третьего десятичного знака. За окончательный результат принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных измерений, округленное до второго десятичного знака, если удовлетворяются условия повторяемости.
8.9.1а.7 Метрологические характеристики
При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в таблице 6а, для соответствующих диапазонов концентраций.
8.9.1а.8 Контроль точности результатов
За результат анализа принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости:
\frac{2 \cdot |X_{1} - X_{2}| \cdot 100}{(X_{1} + X_{2})} \leq r, (4)
где X1, X2 - результаты параллельных определений, %;
r — значение предела повторяемости (п. 8.9.1а.7, таблица 6а), при этом r = 2,8\sigma_{r} .
При невыполнении условия (4) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
Процедуру контроля стабильности показателей качества, результатов анализа (повторяемости, промежуточной прецизионности и погрешности) проводят в соответствии с порядком, установленным в лаборатории, по нормативным документам, действующим на территории государства, принявшего стандарт.
8.9.1а.9 Оформление результатов
Результат анализа представляют в виде
(\overline{X} \pm \Delta) , %, при вероятности P = 0,95,
где \overline{X} — среднеарифметическое значение результатов определений, признанных приемлемыми, %;
\Delta — граница абсолютной погрешности, %.
\Delta = \frac{\delta \cdot \overline{X}}{100} , (5)
где \delta — граница относительной погрешности методики [показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций (п. 8.9.1а.7, таблица 6а)], %».
Пункт 8.9.5. Заменить ссылку: «ГОСТ 13496.4-93 <*>» на «ГОСТ 13496.4»;
Подпункт 13.3.1.1.2. Второй, третий, последний абзацы изложить в новой редакции:
«Фотоэлектроколориметр с пределами измерений оптической плотности от 0 до 1,3 по нормативным документам, действующим на территории государства, принявшего стандарт»;
«Центрифуга лабораторная, v = 4000 об/мин, по нормативным документам, действующим на территории государства, принявшего стандарт»;
«Хлороформ по нормативным документам, действующим на территории государства, принявшего стандарт».
Подпункт 13.3.2.1.2. Четвертый абзац изложить в новой редакции:
«Центрифуга лабораторная, v = 4000 об/мин, по нормативным документам, действующим на территории государства, принявшего стандарт».
Подпункт 13.3.2.2.3.2. Первый абзац изложить в новой редакции:
«Центрифуга лабораторная, по нормативным документам, действующим на территории государства, принявшего стандарт».