ФС.2.1.0673. Фармакопейная статья. Гризеофульвин

(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 13.03.2024 № 120)

(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XV издание»)

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Гризеофульвин Гризеофульвин Griseofulvinum	ФС.2.1.0673
	Взамен ФС 42-1878-97

C17H17ClO6 [126-07-8]	М.м. 352,77

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

(1'S,6'R)-6'-Метил-2',4,6-триметокси-7-хлор-3H-спиро[1-бензофуран-2,1'-циклогекс[2]ен]-3,4'-дион.

Субстанция образуется в результате роста определенных штаммов Penicillium griseofulvum.

Содержит не менее 94,0% и не более 102,0% гризеофульвина C17H17ClO6 в пересчете на сухое вещество.

СВОЙСТВА

Описание. Белый или желтовато-белый кристаллический порошок со слабым специфическим запахом.

<*> Проявляет полиморфизм.

---

<*> Приводится для информации.

Растворимость. Легко растворим в диметилформамиде, мало растворим в этаноле, практически нерастворим в воде.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

1. ИК-спектрометрия (ОФС «Спектрометрия в средней инфракрасной области»). Инфракрасный спектр субстанции, снятый в диске с калия бромидом, по положению полос поглощения должен соответствовать спектру фармакопейного стандартного образца гризеофульвина.

Если спектры различаются, испытуемую субстанцию и фармакопейный стандартный образец по отдельности растворяют в минимальных объемах ацетона, выпаривают досуха и записывают спектры сухих остатков.

2. ВЭЖХ. Время удерживания основного пика на хроматограмме испытуемого раствора должно соответствовать времени удерживания пика гризеофульвина на хроматограмме раствора стандартного образца гризеофульвина (раздел «Количественное определение»).

ИСПЫТАНИЯ

Размер частиц. Не более 4 мкм; отдельные частицы (не более 3 в поле зрения) не более 15 мкм (ОФС «Оптическая микроскопия). Для проведения испытания к 10 мг субстанции прибавляют 1 мл воды и 2 капли полисорбата-80.»

Температура плавления. От 217 до 224 °C (ОФС «Температура плавления»).

Удельное вращение. От +354 до +364 в пересчете на сухое вещество (1% раствор субстанции в диметилформамиде, ОФС «Оптическое вращение»).

Прозрачность раствора. Раствор 0,75 г субстанции в 10 мл диметилформамида должен быть прозрачным (ОФС «Прозрачность и степень опалесценции (мутности) жидкостей»).

Цветность раствора. Раствор, полученный в испытании «Прозрачность раствора», должен выдерживать сравнение с эталоном Y4 (ОФС «Степень окраски жидкостей», метод 2).

Кислотность. Суспендируют 0,25 г субстанции в 20 мл спирта 96%, прибавляют 0,1 мл фенолфталеина раствора 0,1%. Окраска раствора должна изменяться при прибавлении не более 1,0 мл 0,02 М раствора натрия гидроксида.

Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

Буферный раствор. К 950 мл воды прибавляют 1,0 мл муравьиной кислоты безводной и доводят pH раствора аммиака раствором 2 М до 4,5. Количественно переносят полученный раствор в мерную колбу вместимостью 1000 мл и доводят объем раствора водой до метки.

Подвижная фаза А (ПФА). Буферный раствор — вода 200:800.

Подвижная фаза Б (ПФБ). Вода — буферный раствор — ацетонитрил 150:200:650.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 25 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в ПФБ и доводят объем раствора ПФБ до метки.

Раствор сравнения. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл испытуемого раствора и доводят объем раствора ПФБ до метки.

Раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 5 мг фармакопейного стандартного образца гризеофульвина для проверки пригодности системы, содержащего примеси A, B и C, растворяют в ПФБ и доводят объем раствора ПФБ до метки.

Примечание

Примесь A: (1'S,6'R)-6'-метил-4,6-диметокси-7-хлор-3H-спиро[1-бензофуран-2,1'-циклогексан]-2',3,4'-трион.

Примесь B: (1'S,6'R)-6'-метил-2',4,6-триметокси-3H-спиро[1-бензофуран-2,1'-циклогекс[2]ен]-3,4'-дион.

Примесь C: (1'S)-6'-метил-2',4,6-триметокси-7-хлор-3H-спиро[1-бензофуран-2,1'-циклогекса[2,5]диен]-3,4'-дион.

Хроматографические условия

Колонка	250 x 4,6 мм, силикагель октадецилсилильный, эндкепированный, для хроматографии, 5 мкм;
Температура колонки	30 °C;
Скорость потока	1,0 мл/мин;
Детектор	спектрофотометрический, 290 нм;
Объем пробы	10 мкл.

Режим хроматографирования

Время, мин	ПФА, %	ПФБ, %
0 — 3	50	50
3 — 13	50 \rightarrow 40	50 \rightarrow 60
13 — 16	40 \rightarrow 10	60 \rightarrow 90
16 — 24	10	90
24 — 30	10 \rightarrow 50	90 \rightarrow 50

Хроматографируют раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы, раствор сравнения и испытуемый раствор.

Относительное время удерживания соединений. Гризеофульвин — 1 (около 16 мин); примесь A — около 0,4; примесь B — около 0,7; примесь C — около 1,1.

Идентификация примесей. Для идентификации пиков примесей A, B и C используют относительное время удерживания соединений и хроматограмму раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы отношение максимум/минимум (p/v) между пиками гризеофульвина и примеси C должно быть не менее 3,0.

Поправочные коэффициенты. Для расчета содержания площадь пика примеси A умножают на 0,6.

Допустимое содержание примесей. На хроматограмме испытуемого раствора:

• площадь пика примеси B не должна более чем в 3 раза превышать площадь пика гризеофульвина на хроматограмме раствора сравнения (не более 3,0%);
• площадь пика примеси A не должна более чем в 2 раза превышать площадь пика гризеофульвина на хроматограмме раствора сравнения (не более 2,0%);
• площадь пика примеси C не должна превышать 0,75 площади пика гризеофульвина на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,75%);
• площадь пика любой другой примеси не должна превышать 0,15 площади пика гризеофульвина на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,15%);
• сумма площадей пиков всех примесей не должна превышать пятикратную площадь пика гризеофульвина на хроматограмме раствора сравнения (не более 5,0%).

Не учитывают пики, площадь которых менее 0,1 площади основного пика на хроматограмме раствора сравнения (менее 0,1%).

Потеря в массе при высушивании. Не более 1,0% (ОФС «Потеря в массе при высушивании», способ 1). Для определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.

Сульфатная зола. Не более 0,2% (ОФС «Сульфатная зола»). Для определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.

Тяжелые металлы. Не более 0,0025%. Определение проводят в соответствии с ОФС «Тяжелые металлы» (метод 3А) в зольном остатке, полученном после сжигания 0,4 г субстанции, с использованием эталонного раствора 1.

Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС «Остаточные органические растворители».

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Определение проводят методом ВЭЖХ в условиях испытания «Родственные примеси» со следующими изменениями.

Раствор стандартного образца гризеофульвина. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 25 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца гризеофульвина, растворяют в ПФБ и доводят объем раствора ПФБ до метки.

Хроматографируют раствор стандартного образца гризеофульвина и испытуемый раствор.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора стандартного образца гризеофульвина относительное стандартное отклонение площади пика гризеофульвина должно быть не более 2,0% (6 введений).

Содержание гризеофульвина C17H17ClO6 в субстанции в пересчете на сухое вещество в процентах (X) вычисляют по формуле:

X = \frac{S_{1} \cdot a_{0} \cdot P \cdot 50 \cdot 100}{S_{0} \cdot a_{1} \cdot 50 \cdot (100 - W)} ,

где S1 — площадь пика гризеофульвина на хроматограмме испытуемого раствора;

S0 — площадь пика гризеофульвина на хроматограмме раствора стандартного образца гризеофульвина;

a1 — навеска субстанции, мг;

a0 — навеска фармакопейного стандартного образца гризеофульвина, мг;

P — содержание гризеофульвина в фармакопейном стандартном образце гризеофульвина, %;

W — потеря в массе при высушивании субстанции, %.

ХРАНЕНИЕ

В плотно укупоренной упаковке.

---