ФС.2.1.0660. Фармакопейная статья. Десмопрессина ацетат. Десмопрессин

(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 № 377)

(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XV издание»)

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Десмопрессина ацетат Десмопрессин Desmopressini acetas	ФС.2.1.0660
	Вводится впервые

C46H64N14O12S2·xC2H4O2 [16679-58-6]	М.м. 1069,2 (основание)

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

S1,S6-Цикло[(3-сульфанилпропаноил)-L-тирозил-L-фенилаланил-L-глутаминил-L-аспарагинил-L-цистеинил-L-пролил-L-аргинилглицинамида] ацетат.

Содержит не менее 95,0% и не более 105,0% десмопрессина C46H64N14O12S2 в пересчете на безводное и свободное от остаточных органических растворителей и уксусной кислоты вещество.

СВОЙСТВА

Описание. Белый или почти белый аморфный порошок.

Растворимость. Растворим в воде, в спирте 96% и уксусной кислоте ледяной.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

1. ВЭЖХ. Время удерживания основного пика на хроматограмме испытуемого раствора должно соответствовать времени удерживания пика десмопрессина на хроматограмме раствора стандартного образца десмопрессина (раздел «Количественное определение»).

2. Аминокислотный состав. Определение проводят в соответствии с ОФС «Аминокислотный анализ» (гидролиз по методу 1, анализ по методу 1, 2, 3 или 4). Относительное содержание каждой аминокислоты рассчитывают в мольных долях, принимая за единицу одну шестую суммарного мольного содержания аспарагиновой кислоты, глутаминовой кислоты, пролина, глицина, аргинина и фенилаланина, по формуле:

X = \frac{n_{i} \cdot 6}{\sum n(Asp,Glu,Pro,Gly,Arg,Phe)} ,

где ni — количество молей соответствующей аминокислоты, мкмоль;

\sum n(Asp,Glu,Pro,Gly,Arg,Phe) — сумма мольного содержания аспарагиновой кислоты, глутаминовой кислоты, пролина, глицина, аргинина и фенилаланина, мкмоль

Относительное содержание аминокислот должно быть в следующих пределах: аспарагиновая кислота 0,90 до 1,10; глутаминовая кислота от 0,90 до 1,10; пролин от 0,90 до 1,10; глицин 0,90 до 1,10; аргинин от 0,90 до 1,10; фенилаланин 0,90 до 1,10; тирозин от 0,70 до 1,05; полуцистин 0,30 до 1,05. Лизин, изолейцин и лейцин должны отсутствовать (не более 0,01). Остальные аминокислоты (треонин, серин, аланин, валин, метионин и гистидин) могут присутствовать не более чем в следовых количествах (не более 0,03).

ИСПЫТАНИЯ

Удельное вращение. От -72 до -82 в пересчете на безводное и свободное от уксусной кислоты и остаточных органических растворителей вещество (0,2% раствор субстанции в уксусной кислоте раствора 1%, ОФС «Оптическое вращение»).

Прозрачность раствора. Раствор 50 мг субстанции в 20 мл воды должен быть прозрачным (ОФС «Прозрачность и степень опалесценции (мутности) жидкостей»).

Цветность раствора. Раствор, полученный в испытании «Прозрачность раствора» должен быть бесцветным (ОФС «Степень окраски жидкостей», метод 2).

pH раствора. От 3,5 до 6,5 (0,1% раствор, ОФС «Ионометрия», метод 3).

Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

Подвижная фаз А (ПФА). 0,067 М фосфатный буферный раствор pH 7,0.

Подвижная фаз Б (ПФБ). Ацетонитрил — ПФА 500:500.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 25 мг (точная навеска) субстанции, прибавляют 5 мл воды и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Раствор для проверки пригодности хроматографической системы. Содержимое флакона фармакопейного стандартного образца окситоцин/десмопрессин валидационной смеси растворяют в 0,5 мл воды.

Раствор для проверки чувствительности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 1,0 мл испытуемого раствора и доводят объем раствора водой до метки. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Хроматографические условия

Колонка	120 x 4 мм, силикагель октадецилсилильный для хроматографии, 5 мкм;
Температура колонки	25 °C;
Скорость потока	1,5 мл/мин;
Детектор	спектрофотометрический, 220 нм;
Объем пробы	50 мкл.

Режим хроматографирования

Время, мин	ПФА, %	ПФБ, %
0 — 4	76	24
4 — 18	76 \rightarrow 58	24 \rightarrow 42
18 — 35	58 \rightarrow 48	42 \rightarrow 52
35 — 40	48 \rightarrow 76	52 \rightarrow 24
40 — 50	76	24

Хроматографируют раствор для проверки чувствительности хроматографической системы, раствор для проверки пригодности хроматографической системы и испытуемый раствор.

Относительное время удерживания соединений. Десмопрессин — 1 (около 16 мин); окситоцин — около 1,06.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки пригодности хроматографической системы:

• разрешение (RS) между пиками десмопрессина и окситоцина должно быть не менее 1,5;
• фактор асимметрии пика (AS) десмопрессина должен быть не более 2,0;
• относительное стандартное отклонение площади пика десмопрессина должно быть не более 10,0% (5 введений);
• относительное стандартное отклонение площади пика окситоцина должно быть не более 10,0% (5 введений).

Допустимое содержание примесей. Содержание любой другой примеси в субстанции в процентах вычисляют согласно методу нормирования (ОФС «Хроматография»):

• любая примесь — не более 0,5%;
• сумма примесей — не более 1,5%.

Не учитывают пики, площадь которых составляет менее 0,05% от суммы площадей всех пиков.

Вода. Не более 6,0% (ОФС «Определение воды», метод 2). Для определения используют 20 мг (точная навеска) субстанции.

Уксусная кислота. От 3,0 до 8,0% (ОФС «Определение уксусной кислоты в синтетических пептидах»).

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 20 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в смеси ПФБ — ПФА 5:95 и доводят объем раствора той же смесью до метки.

Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС «Остаточные органические растворители».

<*> Бактериальные эндотоксины. Не более 500 ЕЭ на 1 мг субстанции (ОФС «Бактериальные эндотоксины»).

---

<*> Испытания проводят для субстанции, предназначенной для производства лекарственных препаратов для парентерального применения.

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Определение проводят методом ВЭЖХ в условиях испытания «Родственные примеси» со следующими изменениями:

Подвижная фаза. ПФА — ПФБ 60:40.

Раствор стандартного образца десмопрессина. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 25 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца десмопрессина, прибавляют 15 мл воды и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Хроматографические условия:

Скорость потока	2,0 мл/мин.

Хроматографируют раствор стандартного образца десмопрессина и испытуемый раствор.

Время удерживания десмопрессина — около 5 мин.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора стандартного образца десмопрессина:

• фактор асимметрии пика (AS) десмопрессина должен быть не более 2,0;
• относительное стандартное отклонение площади пика десмопрессина должно быть не более 10,0% (5 введений);
• эффективность хроматографической колонки (N), рассчитанная по пику десмопрессина, должна составлять не менее 500 теоретических тарелок.

Содержание десмопрессина C46H64N14O12S2 в субстанции в процентах в пересчете на безводное и свободное от остаточных органических растворителей и уксусной кислоты вещество (X) вычисляют по формуле:

X = \frac{S_{1} \cdot a_{0} \cdot 50 \cdot P \cdot 100}{S_{0} \cdot a_{1} \cdot 50 \cdot (100 - W - A)} ,

где S1 — площадь пика десмопрессина на хроматограмме испытуемого раствора;

S0 — площадь пика десмопрессина на хроматограмме раствора стандартного образца десмопрессина;

a1 — навеска субстанции, мг;

a0 — навеска фармакопейного стандартного образца десмопрессина, мг;

W — содержание воды и остаточных органических растворителей в субстанции, %;

A — содержание уксусной кислоты в субстанции, %;

P — содержание десмопрессина в фармакопейном стандартном образце десмопрессина, %.

ХРАНЕНИЕ

В сухом защищенном от света месте при температуре от 2 до 8 °C.

---