ОФС.1.2.3.0035. Общая фармакопейная статья. Определение уксусной кислоты в синтетических пептидах

(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 № 377)

(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XV издание»)

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

Определение уксусной кислоты в синтетических пептидах	ОФС.1.2.3.0035
	Вводится впервые

Настоящая общая фармакопейная статья распространяется на определение уксусной кислоты в лекарственных средствах синтетических пептидов.

Испытание проводят для установления количественного содержания уксусной кислоты в синтетических пептидах с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии.

Приготовление растворов

Подвижная фаза А (ПФА). В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают 0,7 мл фосфорной кислоты концентрированной. Доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. Значение pH полученного раствора доводят до 3,00 натрия гидроксида раствором концентрированным.

Подвижная фаза Б (ПФБ). Метанол.

Растворитель. ПФБ — ПФА 5:95.

Испытуемый раствор. Готовят, как указано в фармакопейной статье.

Стандартный раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 25 мл растворителя, прибавляют 10 мг (точная навеска) стандартного образца уксусной кислоты ледяной, доводят объем раствора тем же растворителем до метки и перемешивают (0,1 мг/мл).

Проверка пригодности хроматографической системы. Хроматографическая система считается пригодной, если выполняются следующие условия:

• фактор асимметрии пика (AS) пика уксусной кислоты на хроматограмме стандартного раствора должен быть не более 2,0;
• относительное стандартное отклонение (RSD) площади пика уксусной кислоты на хроматограмме стандартного раствора должно быть не более 2,0% (6 введений);
• эффективность хроматографической колонки (N), рассчитанная по пику уксусной кислоты на хроматограмме стандартного раствора, должна быть не менее 500 теоретических тарелок.

Условия хроматографирования

Колонка	250 мм x 4,6 мм, силикагель октадецилсилильный для хроматографии (C18), 5 мкм
Скорость потока, мл/мин	1,2
Температура колонки, °C	25
Детектор	спектрофотометрический
Длина волны, нм	210
Объем вводимой пробы, мкл	10

Время, мин	ПФА, об. %	ПФБ, об. %
0 — 5	95	5
5 — 10	95 \rightarrow 50	5 \rightarrow 50
10 — 20	50	50
20 — 22	50 \rightarrow 95	50 \rightarrow 5
22 — 30	95	5

Время удерживания уксусной кислоты около 3 — 4 мин. Базовая линия представляет собой крутой подъем в начале линейного градиента, который соответствует выходу пептидов из колонки.

Хроматографируют испытуемый и стандартный растворы.

Содержание уксусной кислоты в лекарственных средствах в процентах (X) вычисляют по формуле:

X = \frac{S \cdot C_{0} \cdot 100}{S_{0} \cdot C} ,

где S — площадь пика уксусной кислоты на хроматограмме испытуемого раствора;

S0 — площадь пика уксусной кислоты на хроматограмме стандартного раствора;

C — концентрация испытуемого раствора, мг/мл;

C0 — концентрация уксусной кислоты в стандартном растворе, мг/мл.

---