ФС.2.1.0643. Фармакопейная статья. Валацикловира гидрохлорид. Валацикловир
(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 № 377)
(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XV издание»)
Примечание
Текст документа приведен в соответствии с публикацией на сайте https://minzdrav.gov.ru/ по состоянию на 18.08.2023. В соответствии с Приказом Минздрава России от 20.07.2023 № 377 данный документ введен в действие с 01.09.2023.
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
| Валацикловира гидрохлорид Валацикловир Valacicloviri hydrochloridum | ФС.2.1.0643 |
| Вводится впервые |
| C13H20N6O4·HCl [124832-27-5] |
М.м. 360,80 |
|---|
ОПРЕДЕЛЕНИЕ
{2-[(2-амино-6-оксо-1,6-дигидро-9H-пурин-9-ил)метокси]этил}[(2S)-2-амино-3-метилбутаноата] гидрохлорид (1:1).
Содержит не менее 95,0% и не более 102,0% валацикловира гидрохлорида C13H20N6O4·HCl в пересчете на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество.
СВОЙСТВА
Описание. Белый или почти белый мелкокристаллический порошок.
<*> Гигроскопичный, проявляет полиморфизм.
<*> Приводится для информации.
Растворимость. Легко растворим в воде, очень мало растворим в спирте 96%, практически не растворим в метиленхлориде.
ИДЕНТИФИКАЦИЯ
1. ИК-спектрометрия. (ОФС «Спектрометрия в средней инфракрасной области»). Инфракрасный спектр субстанции в области от 4000 до 400 см-1 по положению полос поглощения должен соответствовать спектру фармакопейного стандартного образца валацикловира гидрохлорида.
Если спектры различаются, испытуемую субстанцию и фармакопейный стандартный образец валацикловира гидрохлорида по отдельности растворяют в минимальном объеме этанола и выпаривают досуха в эксикаторе под вакуумом над фосфора(V) оксидом и записывают спектры сухих остатков.
2. ВЭЖХ. Время удерживания основного пика на хроматограмме испытуемого раствора должно соответствовать времени удерживания пика валацикловира на хроматограмме раствора стандартного образца валацикловира гидрохлорида (раздел «Количественное определение»).
3. Качественная реакция. В 4 мл воды растворяют 40 мг субстанции. Раствор должен давать характерную реакцию на хлориды (ОФС «Общие реакции на подлинность», реакция А).
ИСПЫТАНИЯ
Удельное вращение. От -8,5 до -11,5 в пересчете на безводное и свободное от органических растворителей вещество (4% раствор субстанции в воде, ОФС «Оптическое вращение»).
pH раствора. От 4,0 до 6,0 (1% раствор, ОФС «Ионометрия», метод 3).
Родственные примеси. Сумма примесей (метод 2 и 3) — не более 5,0%.
1. Примеси E, F, G. Определение проводят методом ТСХ (ОФС «Тонкослойная хроматография»).
Пластинка. ТСХ пластинка со слоем силикагеля F254.
Пластину предварительно обрабатывают метанолом. Когда фронт метанола пройдет около 4/5 длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат на воздухе до удаления следов растворителя.
Подвижная фаза (ПФ). Аммиака раствор концентрированный 25% — тетрагидрофуран — метанол — метиленхлорид 3:12:34:54.
Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 5 мл помещают 0,25 г субстанции (точная навеска), прибавляют 2 мл воды и доводят объем раствора спиртом 96% до метки.
Стандартный раствор. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают по 5 мг фармакопейных стандартных образцов примеси D валацикловира, примеси G валацикловира и примеси E валацикловира, 8,4 мг примеси F пара-толуенсульфоната, прибавляют 2 мл воды и 6 мл спирта 96% и доводят объем раствора спиртом 96% до метки.
Стандартный раствор А. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 3,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора спиртом 96% до метки.
Стандартный раствор Б. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 2,0 мл стандартного раствора и доводят объем раствора спиртом 96% до метки.
Стандартный раствор В. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 0,5 мл стандартного раствора и доводят объем раствора спиртом 96% до метки.
Реактив для детектирования. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 5 мг флуорескамина, растворяют в этиленхлориде и доводят объем раствора этиленхлоридом до метки.
Примесь E: {2-[(2-амино-6-оксо-1,6-дигидро-9H-пурин-9-ил) метокси]этил}[(2S)-2-{[(бензилокси)карбонил]амино}-3-метилбутаноат] [124832-31-1].
Примесь F: (2-гидроксиэтил)[(2S)-2-амино-3-метилбутаноат] [86150-60-9].
Примесь G: N,N-диметилпиридин-4-амин [1122-58-3].
На линию старта пластинки наносят по 4 мкл испытуемого раствора (200 мкг), стандартного раствора, стандартного раствора А, стандартного раствора Б и стандартного раствора В. Пластинку с нанесенными пробами высушивают на воздухе в течение 5 мин, помещают в камеру с ПФ и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт ПФ пройдет около 80 — 90% длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат в потоке воздуха до удаления следов растворителей, просматривают в УФ-свете при 254 нм и определяют зоны адсорбции примеси E и примеси G. Затем пластинку опрыскивают реактивом для детектирования, просматривают в УФ-свете при длине волны 365 нм и определяют зону адсорбции примеси F.
Фактор удерживания (Rf) соединений. Примесь A — около 0; примесь B — около 0,2; валацикловир — около 0,3; примесь C — около 0,5; примесь D — около 0,6; примесь E — около 0,7; примесь F — около 0,75; примесь G — около 0,79; примесь C маскируется передним краем пятна из-за валацикловира; примеси F и G могут совместно элюироваться, но это не оказывает отрицательного влияния на их количественную оценку, поскольку они визуализируются по-разному.
Пригодность хроматографической системы. На хроматограммах стандартного раствора А, стандартного раствора Б и стандартного раствора В четко видны по три зоны адсорбции.
Зона адсорбции примеси E на хроматограмме испытуемого раствора по совокупности величины и степени подавления флуоресценции не должна превышать зону адсорбции соответствующей примеси на хроматограмме стандартного раствора Б (не более 0,20%).
Зона адсорбции примеси F на хроматограмме испытуемого раствора по совокупности величины и степени подавления флуоресценции не должна превышать зону адсорбции соответствующей примеси F на хроматограмме стандартного раствора А (не более 0,3% в пересчете на гидрохлорид).
Зона адсорбции примеси G на хроматограмме испытуемого раствора по совокупности величины и интенсивности поглощения окраски не должна превышать зону адсорбции соответствующей примеси G на хроматограмме стандартного раствора В (не более 0,05%).
2. Примеси A, B, I и R. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»). Все растворы используют свежеприготовленными.
Подвижная фаза (ПФ). Хлорная кислота — метанол — вода 5:50:950.
Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 50 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в 50 мл хлористоводородной кислоты 0,5% и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.
Раствор стандартного образца валацикловира гидрохлорида. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 50 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца валацикловира гидрохлорида, растворяют в хлористоводородной кислоте 0,5% и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.
Раствор сравнения. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 3,0 мл испытуемого раствора и доводят объем раствора хлористоводородной кислотой 0,5% до метки. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1 мл полученного раствора и доводят объем раствора хлористоводородной кислотой 0,5% до метки.
Раствор для проверки пригодности хроматографической системы. Растворяют 2,5 мг фармакопейного стандартного образца валацикловира для проверки пригодности хроматографической системы, содержащего примеси A, B, C, D, H, I, J, M и R в 5,0 мл хлористоводородной кислоты 0,5%.
Примесь A (гуанин): 2-амино-1,7-дигидро-6H-пурин-6-он [73-40-5].
Примесь B (ацикловир): 2-амино-[(2-гидроксиэтокси)метил]-1,9-дигидро-6H-пурин-6-он [59277-89-3].
Примесь I (ацетат ацикловира): {2-[(2-амино-6-оксо-1,6-дигидро-9H-пурин-9-ил)метокси]этил}ацетат [102728-64-3].
Примесь R (D-валацикловир): {2-[(2-амино-6-оксо-1,6-дигидро-9H-пурин-9-ил)метокси]этил}[(2R)-2-амино-3-метилбутаноат] [142963-60-8].
Хроматографируют раствор для проверки пригодности хроматографической системы, раствор сравнения и испытуемый раствор.
Относительное время удерживания соединений. Валацикловир — 1 (около 21 мин); примесь A — около 0,2; примесь B — около 0,2; примесь I — около 0,4; примесь R — около 0,6; примесь C — около 0,6; примесь D — около 0,7; примесь M — около 1,3.
Идентификация примесей. Для идентификации пиков примесей A, B, C, D, I, M и R используют относительное время удерживания соединений, хроматограмму раствора для проверки пригодности хроматографической системы и хроматограмму, прилагаемую к фармакопейному стандартному образцу валацикловира для проверки пригодности хроматографической системы.
Пригодность хроматографической системы.
На хроматограмме раствора для проверки пригодности хроматографической системы отношение максимум/минимум (p/v) должно быть не менее 1,5, где p — высота пика примеси D по отношению к базовой линии, v — высота над базовой линией самой низкой точки кривой, отделяющей этот пик от пика, обусловленного примесями C и R.
Поправочные коэффициенты. Для расчета содержания площади пиков следующих примесей на хроматограмме испытуемого раствора умножают на поправочный коэффициент: примесь A — 0,7; примесь B — 0,7.
Допустимое содержание примесей. На хроматограмме испытуемого раствора:
- площадь пика примеси I — не более 0,2%;
- площадь пика примеси R — не более 3,0%; разность между содержанием примеси C (тест B), и соэлюирующих примесей C и R, определенных в этом тесте;
- сумма площадей пиков примесей A и B — не более 2,0%.
Не учитывают любые пики примесей кроме пиков A + B, C + R или I; а также пики данных примесей, площадь которых не превышает площадь основного пика валацикловира на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,03%).
3. Другие примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).
Все растворы используют свежеприготовленными.
Подвижная фаза А (ПФА). Трифторуксусная кислота — вода 2:1000.
Подвижная фаза Б (ПФБ). Трифторуксусная кислота — метанол 2:1000.
Растворитель. Спирт 96% — вода 1:4.
Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 20 мг субстанции, растворяют в растворителе и доводят объем раствора этим же растворителем до метки.
Раствор стандартного образца валацикловира для проверки пригодности хроматографической системы (содержит примеси A, B, C, D, H, I, J, M и R). В мерную колбу вместимостью 5 мл помещают 2,5 мг фармакопейного стандартного образца валацикловира для проверки пригодности хроматографической системы (содержит примеси A, B, C, D, H, I, J, M и R), растворяют в растворителе и доводят объем раствора растворителем до метки.
Раствор сравнения. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл испытуемого раствора и доводят объем раствора растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора растворителем до метки.
Примесь C (N-метилацикловир): {2-[(2-амино-6-оксо-1,6-дигидро-9H-пурин-9-ил)метокси]этил}[(2S)-3-метил-2-(метиламино)бутаноат] [1346747-65-6].
Примесь D: {2-[(2-амино-6-оксо-1,6-дигидро-9H-пурин-9-ил)метокси]этил}[(2S)-3-метил-2-(этиламино)бутаноат] [1346747-69-0].
Примесь H (аланинат ацикловира): {2-[(2-амино-6-оксо-1,6-дигидро-9H-пурин-9-ил)метокси]этил}[(2S)-2-аминопропаноат] [84499-64-9].
Примесь J (ацикловир L-изолейцинат): {2-[(2-амино-6-оксо-1,6-дигидро-9H-пурин-9-ил)метокси]этил}[(2S,3S)-2-амино-3-метилпентаноат] [142963-63-1].
Примесь M (N-формилвалацикловир): {2-[(2-амино-6-оксо-1,6-дигидро-9H-пурин-9-ил)метокси]этил}[(2S)-3-метил-2-формамидобутаноат] [847670-62-6].
| Колонка | 250 x 4,6 мм, силикагель фенилгексилсилильный для хроматографии, 5 мкм; |
|---|---|
| Температура колонки | 15 °C; |
| Скорость потока | 0,8 мл/мин; |
| Детектор | спектрофотометрический, 254 нм; |
| Объем пробы | 10 мкл. |
| Время, мин | ПФА, % | ПФБ, % |
|---|---|---|
| 0 — 5 | 90 | 10 |
| 5 — 35 | 90 \rightarrow 60 | 10 \rightarrow 40 |
Хроматографируют раствор сравнения, раствор стандартного образца валацикловира для проверки пригодности хроматографической системы и испытуемый раствор.
Относительное время удерживания соединений. Валацикловир — 1 (около 19 мин); примесь A — около 0,3; примесь B — около 0,4; примесь H — около 0,5; примесь C — около 1,06; примесь I — около 1,09; примесь D — около 1,2; примесь J — около 1,3; примесь M — около 1,6.
Идентификация примесей. Для идентификации примесей A, B, C, D, H, I, J и M используют относительное время удерживания соединений, хроматограмму, прилагаемую к фармакопейному стандартному образцу валацикловира для проверки пригодности хроматографической системы, и хроматограмму раствора стандартного образца валацикловира для проверки пригодности хроматографической системы.
Пригодность хроматографической системы
На хроматограмме раствора стандартного образца валацикловира для проверки пригодности хроматографической системы:
- отношение максимум/минимум (p/v) должно быть не менее 2,5, где p — высота пика примеси C по отношению к базовой линии, v — высота над базовой линией самой низкой точки кривой, отделяющей этот пик от пика валацикловира;
- полученная хроматограмма идентична хроматограмме, прилагаемой к фармакопейному стандартному образцу валацикловира для проверки пригодности хроматографической системы.
Содержание каждой из примесей в субстанции в процентах вычисляют согласно методу нормирования (ОФС «Хроматография»).
Допустимое содержание примесей:
- примесь M — не более 1,5%;
- примесь D — не более 0,5%;
- примесь C — не более 0,3%;
- примеси H — не более 0,1%;
- примесь J — не более 0,1%;
- любая другая примесь — не более 0,05%;
- сумма всех примесей — не более 5,0%.
Не учитывают пики, площадь которых составляет менее 0,6 площади основного пика на хроматограмме раствора сравнения (менее 0,03%).
Не учитывают пики примесей A, B и I.
Вода. Не более 2,0% (ОФС «Определение воды», способ 1). Для определения используют 0,25 г (точная навеска) субстанции.
Палладий. Не более 0,001%. (ОФС «Атомно-эмиссионная спектрометрия»).
Растворитель. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 5,6 г хлористоводородной кислоты концентрированной, растворяют в 90 мл диметилсульфоксида и доводят объем раствора диметилсульфоксидом до метки.
Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 0,1 г субстанции, растворяют в растворителе и доводят объем раствора растворителем до метки.
Калибровочные растворы. Готовят калибровочные растворы, содержащие 2 мкг/мл, 1 мкг/мл и 0,2 мкг/мл палладия путем доведения соответственно 2,0 мл, 1,0 мл и 0,2 мл стандартного раствора палладия 20 мкг/мл до 20,0 мл.
Источник излучения. Палладиевая лампа с полым катодом.
Определяют эффективные значения атомной абсорбции испытуемого раствора и калибровочных растворов. По калибровочной прямой рассчитывают концентрацию палладия в субстанции.
Хлориды. От 9,4% до 9,9% в пересчете на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество.
Растворяют 0,35 г (точная навеска) субстанции в 100 мл воды, прибавляют 0,2 мл азотной кислоты концентрированной и титруют 0,1 М раствором серебра нитрата. Точку эквивалентности определяют потенциометрически (ОФС «Потенциометрическое титрование»), используя серебряный и серебряно-хлорсеребряный электрод сравнения или комбинированный серебряный электрод. Не учитывают результаты первого титрования, которое проводят для кондиционирования электродов.
Параллельно проводят контрольный опыт.
1 мл 0,1 М раствора серебра нитрата соответствует 3,543 мг Cl.
Сульфатная зола. Не более 0,1% (ОФС «Сульфатная зола»). Для определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.
Тяжелые металлы. Не более 0,002%. Определение проводят в соответствии с ОФС «Тяжелые металлы» (метод 3Б) в зольном остатке, полученном в испытании «Сульфатная зола», с использованием эталонного раствора 2.
Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС «Остаточные органические растворители».
Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».
КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ
Определение проводят методом ВЭЖХ в условиях испытания «Родственные примеси. Примеси A, B, I и R.» со следующими изменениями:
Хроматографируют раствор стандартного образца валацикловира гидрохлорида и испытуемый раствор.
Содержание валацикловира гидрохлорида C13H20N6O4·HCl в субстанции в процентах (X) в пересчете на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество вычисляют по формуле:
X = \frac{S_{1} \cdot a_{0} \cdot P \cdot 100 \cdot 100}{S_{0} \cdot a_{1} \cdot 100 \cdot (100 - W)} ,
где S1 — площадь пика валацикловира на хроматограмме испытуемого раствора;
S0 — площадь пика валацикловира на хроматограмме раствора стандартного образца валацикловира гидрохлорида;
a0 — навеска фармакопейного стандартного образца валацикловира гидрохлорида, мг;
W — суммарное содержание воды и остаточных органических растворителей в субстанции, %;
P — содержание валацикловира гидрохлорида в фармакопейном стандартном образце валацикловира гидрохлорида, %.
ХРАНЕНИЕ
В плотно укупоренной упаковке.