ФС.2.1.0596. Фармакопейная статья. Зидовудин
(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 № 377)
(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XV издание»)
Примечание
Текст документа приведен в соответствии с публикацией на сайте https://minzdrav.gov.ru/ по состоянию на 21.08.2023. В соответствии с Приказом Минздрава России от 20.07.2023 № 377 данный документ введен в действие с 01.09.2023. Взамен ФС 42-3412-97.
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
| Зидовудин Зидовудин Zidovudinum | ФС.2.1.0596 |
| Взамен ФС 42-3412-97 |
| C10H13N5O4 [30516-87-1] |
М.м. 267,24 |
|---|
ОПРЕДЕЛЕНИЕ
1-(3-Азидо-2,3-дидезокси- \beta -D-эритро-пентофуранозил)-5-метилпиримидин-2,4(1H,3H)-дион.
Содержит не менее 97,0% и не более 102,0% зидовудина C10H13N5O4 в пересчете на безводное и свободное от остаточных растворителей вещество.
СВОЙСТВА
Описание. Белый или почти белый с коричневатым оттенком кристаллический порошок.
<*> Приводится для информации.
Растворимость. Легко растворим в метаноле, растворим в спирте 96%, умеренно растворим в воде.
ИДЕНТИФИКАЦИЯ
1. ИК-спектрометрия (ОФС «Спектрометрия в средней инфракрасной области»). Инфракрасный спектр субстанции в области от 4000 до 400 см-1 по положению полос поглощения должен соответствовать спектру фармакопейного стандартного образца зидовудина.
Если спектры различаются, субстанцию и фармакопейный стандартный образец зидовудина по отдельности растворяют в минимальном количестве воды, упаривают в вакууме, высушивают в вакуумном эксикаторе над фосфора(V) оксидом и записывают спектры сухих остатков.
2. ВЭЖХ. Время удерживания основного пика на хроматограмме испытуемого раствора должно соответствовать времени удерживания пика зидовудина на хроматограмме стандартного раствора (раздел «Количественное определение»).
ИСПЫТАНИЯ
Удельное вращение. От +60,5 до +63,0 в пересчете на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество (1% раствор субстанции в спирте 96%, ОФС «Оптическое вращение»).
Прозрачность раствора. Раствор 0,25 г субстанции в 25 мл воды должен быть прозрачным (ОФС «Прозрачность и степень опалесценции (мутности) жидкостей»). При необходимости раствор подогревают.
Цветность раствора. Раствор, полученный в испытании «Прозрачность раствора», должен выдерживать сравнение с эталоном BY5 (ОФС «Степень окраски жидкостей», метод 2).
pH раствора. От 5,0 до 7,0 (1% раствор, ОФС «Ионометрия», метод 3).
Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).
Сумма примесей, определенная методами 1 и 2, — не более 1,0%.
Буферный раствор. Растворяют 2,0 г ацетата аммония в 850 мл воды, доводят pH до 6,80 уксусной кислотой разведенной 12%. Переносят полученный раствор в мерную колбу вместимостью 1000 мл и доводят объем раствора водой до метки.
Подвижная фаза А (ПФА). Буферный раствор.
Подвижная фаза Б (ПФБ). Ацетонитрил.
Растворитель. Ацетонитрил — метанол — буферный раствор 4:20:76.
Испытуемый раствор А. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 20 мг субстанции, растворяют в растворителе и доводят объем раствора растворителем до метки.
Раствор стандартного образца примеси B. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 2 мг фармакопейного стандартного образца примеси B, растворяют в растворителе и доводят объем раствора растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.
Раствор для проверки пригодности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 5 мл помещают 5 мг фармакопейного стандартного образца зидовудина для проверки пригодности системы, содержащего примесь G, растворяют в растворе стандартного образца примеси B и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.
Раствор сравнения. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл испытуемого раствора А и доводят объем раствора растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора растворителем до метки.
Раствор стандартного образца примеси D. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 1 мг фармакопейного стандартного образца примеси D, растворяют в смеси растворителей (ацетонитрил — метанол — буферный раствор 4:40:56) и доводят объем раствора тем же растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 5,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора той же смесью растворителей до метки.
Раствор для проверки чувствительности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл испытуемого раствора и доводят объем раствора растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора растворителем до метки.
Примесь A: 1-(2,3-дидезокси- \beta -D-глицеро-пент-2-ен-фуранозил)-5-метилпиримидин-2,4(1H,3H)-дион [3056-17-5].
Примесь B: 3'-хлор-3'-дезокситимидин [25526-94-7].
Примесь C: 5-метилпиримидин-2,4(1H,3H)-дион [65-71-4].
Примесь D: трифенилметанол [76-84-6].
Примесь E: 1-(2-дезокси- \beta -D-эритро-пентофуранозил)-5-метилпиримидин-2,4(1H,3H)-дион [50-89-5].
Примесь F: 1-(2-Дезокси- \beta -D-трео-пентофуранозил)-5-метилпиримидин-2,4(1H,3H)-дион [16053-52-4].
Примесь G: 3'-(3'-азидо-3'-дезокситимидин-3-ил)-3'-дезокситимидин [148665-49-0].
| Время, мин | ПФА, % | ПФБ, % |
|---|---|---|
| 0 — 3 | 95 | 5 |
| 3 — 18 | 95 \rightarrow 85 | 5 \rightarrow 15 |
| 18 — 28 | 85 \rightarrow 30 | 15 \rightarrow 70 |
| 28 — 43 | 30 | 70 |
Хроматографируют раствор для проверки чувствительности хроматографической системы, раствор для проверки пригодности хроматографической системы, раствор стандартного образца примеси D, раствор сравнения и испытуемый раствор.
Относительное время удерживания соединений. Зидовудин — 1 (около 16 мин); примесь B — около 1,05; примесь G — около 1,5; примесь D — около 2,0.
Идентификация примесей. Для идентификации пиков примесей B и G используют хроматограмму раствора для проверки пригодности хроматографической системы и хроматограмму, прилагаемую к фармакопейному стандартному образцу зидовудина для пригодности системы. Для идентификации пика примеси D используют хроматограмму раствора стандартного образца примеси трифенилметанола.
Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки пригодности хроматографической системы разрешение (RS) между пиками зидовудина и примеси B должно быть не менее 2,0.
Допустимое содержание примесей. На хроматограмме испытуемого раствора:
- площадь пика примеси G не должна превышать двукратную площадь пика зидовудина на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,2%);
- площадь пика любой другой примеси не должна превышать площадь пика зидовудина на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,1%).
Не учитывают пики, обусловленные примесью D, пики, элюирующиеся после пика примеси D, и пики, площадь которых менее 0,5 площади пика зидовудина на хроматограмме раствора сравнения (менее 0,05%).
Подвижная фаза (ПФ). Вода — ацетонитрил 300:700.
Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 0,5 г (точная навеска) субстанции, растворяют в 10 мл ацетонитрила и доводят объем раствора ПФ до метки.
Раствор стандартного образца примеси D. В мерную колбу вместимостью 10 мл добавляют 5,0 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца примеси D и доводят объем раствора ацетонитрилом до метки.
Раствор сравнения. В мерную колбу вместимостью 100 мл добавляют 1,0 мл раствора стандартного образца примеси D и доводят объем раствора ПФ до метки.
Раствор для проверки пригодности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 50 мл добавляют 1,0 мл раствора стандартного образца примеси D и доводят объем раствора испытуемым раствором до метки.
Примесь D: трифенилметанол [76-84-6].
Примесь J: 1-[3-азидо-5-O-(трифенилметил)-2,3-дидезокси- \beta -D-эритро-пентофуранозил]-5-метилпиримидин-2,4(1H,3H)-дион [29706-84-1].
Примесь K: 1,1',1»-(метоксиметантриил)трибензол [596-31-6].
Хроматографируют раствор для проверки пригодности хроматографической системы, раствор сравнения и испытуемый раствор.
Относительное время удерживания соединений. Зидовудин — 1 (около 1,5 мин); примесь D — около 2,5.
Идентификация примесей. Для идентификации пика примеси D используют хроматограмму раствора сравнения.
Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки пригодности хроматографической системы разрешение (RS) между пиками зидовудина и примеси D должно быть не менее 5,0.
Содержание примеси D в субстанции в процентах (X) вычисляют по формуле:
X = \frac{S_{1} \cdot a_{1} \cdot 100 \cdot 100}{S_{0} \cdot a_{1} \cdot 10} ,
где S1 — площадь пика любой примеси на хроматограмме испытуемого раствора;
S0 — площадь пика примеси D на хроматограмме раствора стандартного образца примеси D;
Допустимое содержание примесей:
Не учитывают пики, элюирующиеся до пика примеси D, и пики, содержание каждой из которых менее 0,05%.
Вода. Не более 1,0% (ОФС «Определение воды», метод 1). Для определения используют 0,5 г (точная навеска) субстанции.
Сульфатная зола. Не более 0,25% (ОФС «Сульфатная зола»). Для определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.
Тяжелые металлы. Не более 0,001%. Определение проводят в соответствии с ОФС «Тяжелые металлы» (метод 3Б) в зольном остатке, полученном после сжигания 1 г субстанции, с использованием эталонного раствора 1.
Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС «Остаточные органические растворители».
<**> Бактериальные эндотоксины. Не более 0,5 ЕЭ на 1 мг субстанции (ОФС «Бактериальные эндотоксины»). Для проведения испытания готовят исходный раствор субстанции с концентрацией 1 мг зидовудина в 1 мл воды для БЭТ.
<**> Испытание проводят для субстанции, предназначенной для производства лекарственных препаратов для парентерального применения.
Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».
КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ
Определение проводят методом ВЭЖХ в условиях испытания «Родственные примеси. Примеси A, B, C, E, F, G» со следующими изменениями.
Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 50 мл добавляют 10,0 мл испытуемого раствора из раздела «Родственные примеси» и доводят объем раствора растворителем до метки.
Раствор стандартного образца зидовудина. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 20 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца зидовудина, растворяют в растворителе и доводят объем раствора растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 10,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора растворителем до метки.
Хроматографируют раствор стандартного образца зидовудина и испытуемый раствор.
Содержание зидовудина C10H13N5O4 в субстанции в процентах в пересчете на безводное и свободное от остаточных растворителей вещество (X) вычисляют по формуле:
X = \frac{S_{1} \cdot a_{0} \cdot 20 \cdot 10 \cdot 50 \cdot 100 \cdot P}{S_{0} \cdot a_{1} \cdot 50 \cdot 20 \cdot 10 \cdot (100 - W)} ,
где S1 — площадь пика зидовудина на хроматограмме испытуемого раствора;
S0 — площадь пика зидовудина на хроматограмме стандартного раствора;
a0 — навеска фармакопейного стандартного образца зидовудина, мг;
W — суммарное содержание воды и остаточных органических растворителей в субстанции, %;
P — содержание зидовудина в фармакопейном стандартном образце зидовудина, %.