ФС.2.1.0590. Фармакопейная статья. Тетрациклин

(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 № 377)

(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XV издание»)

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Тетрациклин Тетрациклин Tetracyclinum	ФС.2.1.0590
	Взамен ФС 42-2672-97

C22H24N2O8 [60-54-8]	М.м. 444,44

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

(4S,4aS,5aS,6S,12aS)-3,6,10,12,12a-Пентагидрокси-4-(диметиламино)-6-метил-1,11-диоксо-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-октагидротетрацен-2-карбоксамид.

Содержит не менее 88,0% и не более 102,0% тетрациклина C22H24N2O8 в пересчете на сухое вещество.

<*> Субстанция образуется определенными штаммами Streptomyces aerofaciens или получается другими способами.

СВОЙСТВА

Описание. Желтый кристаллический порошок.

<*> Гигроскопичен. При хранении на свету темнеет.

Растворимость. Растворим в спирте 96% и метаноле, очень мало растворим в воде.

<*> Растворяется в разбавленных растворах кислот и щелочей.

---

<*> Приводится для информации.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

1. Тонкослойная хроматография. (ОФС «Тонкослойная хроматография»).

Пластинка. ТСХ пластинка со слоем силикагеля октадецилсилильного F254.

Подвижная фаза (ПФ). Ацетонитрил — метанол — щавелевой кислоты раствор 6,3%, доведенный до pH 2 аммиака раствором концентрированным 25% 20:20:60.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 5,0 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в метаноле и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Раствор стандартного образца тетрациклина гидрохлорида. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 5,0 мг фармакопейного стандартного образца тетрациклина гидрохлорида, растворяют в метаноле и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 5,0 мг фармакопейного стандартного образца тетрациклина гидрохлорида, 5 мг демеклоциклина гидрохлорида и 5 мг окситетрациклина гидрохлорида, растворяют в метаноле и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

На линию старта пластинки наносят по 1 мкл испытуемого раствора, раствора стандартного образца тетрациклина гидрохлорида и раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы. Пластинку с нанесенными пробами сушат на воздухе, помещают в камеру с ПФ и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт ПФ пройдет около 80 — 90% длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат до удаления следов растворителей и просматривают в УФ-свете при длине волны 254 нм.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы должны обнаруживаться три четко разделенные зоны адсорбции.

Результат. Основная зона адсорбции на хроматограмме испытуемого раствора по положению, интенсивности поглощения и величине должна соответствовать зоне адсорбции на хроматограмме раствора стандартного образца тетрациклина гидрохлорида.

2. Качественная реакция. Растворяют 2 мг субстанции в 5 мл серной кислоты концентрированной; должно появиться фиолетово-красное окрашивание. После прибавления 2,5 мл воды окраска должна измениться на желтую.

3. Качественная реакция. Растворяют 10,0 мг субстанции в смеси 1,0 мл азотной кислоты разведенной 12,5% и 5,0 мл воды. Встряхивают и прибавляют 1,0 мл серебра нитрата раствора 1,7%. Опалесценция полученного раствора не должна превышать опалесценцию смеси 1,0 мл азотной кислоты разведенной 12,5%, 5,0 мл воды и 1 мл серебра нитрата раствора 1,7%.

ИСПЫТАНИЯ

Удельное вращение от -260 до -280 в пересчете на сухое вещество (0,5% раствор субстанции в 0,1 М растворе хлористоводородной кислоты, ОФС «Оптическое вращение»).

Оптическая плотность. Оптическая плотность испытуемого раствора, измеренная при длине волны 430 нм в кювете с толщиной слоя 1 см (относительно раствора сравнения), в течение 1 ч после приготовления раствора, не должна превышать 0,5 (ОФС «Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях»).

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 20 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в хлористоводородной кислоты растворе 0,01 М и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Раствор сравнения. Хлористоводородной кислоты раствор 0,01 М.

pH раствора. От 3,0 до 7,0 (1% суспензия, ОФС «Ионометрия», метод 3).

Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

Растворы готовят непосредственно перед использованием.

Раствор дикалия гидрофосфата. В химический стакан вместимостью 1000 мл помещают 35 г дикалия гидрофосфата, растворяют воде, доводят значение pH фосфорной кислотой разведенной 10% до 9,00, переносят раствор в мерную колбу вместимостью 1000 мл и доводят объем раствора водой до метки.

Раствор тетрабутиламмония гидросульфата. В химический стакан вместимостью 1000 мл помещают 10 г тетрабутиламмония гидросульфата, растворяют в воде, доводят значение pH натрия гидроксида раствором 8,5% до 9,00, переносят раствор в мерную колбу вместимостью 1000 мл и доводят объем раствора водой до метки.

Раствор динатрия эдетата. В химический стакан вместимостью 1000 мл помещают 40 г динатрия эдетата дигидрата, растворяют в воде, доводят значение pH натрия гидроксида раствором 8,5% до 9,00, переносят раствор в мерную колбу вместимостью 1000 мл и доводят объем раствора водой до метки.

Подвижная фаза (ПФ). В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают раствор 80,0 г трет-бутилового спирта в 200 мл воды, прибавляют 100 мл раствора дикалия гидрофосфата, 200 мл раствор тетрабутиламмония гидросульфата, 10 мл раствора динатрия эдетата и доводят объем раствора водой до метки.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 25,0 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в хлористоводородной кислоты растворе 0,01 М и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Раствор стандартного образца тетрациклина гидрохлорида. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 25 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца тетрациклина гидрохлорида, растворяют в хлористоводородной кислоты растворе 0,01 М и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Раствор стандартного образца примеси A. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 15 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца примеси A, растворяют в хлористоводородной кислоты растворе 0,01 М и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Раствор стандартного образца примеси C. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 10 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца примеси C, растворяют в хлористоводородной кислоты растворе 0,01 М и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Раствор стандартного образца примеси D. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 10 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца примеси D, растворяют в хлористоводородной кислоты растворе 0,01 М и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Раствор сравнения. В мерную колбу вместимостью 200 мл помещают 20,0 мл раствора стандартного образца примеси A, 10,0 мл раствора стандартного образца примеси C, 5,0 мл раствора стандартного образца примеси D и доводят объем раствора хлористоводородной кислоты раствором 0,01 М до метки.

Раствор для проверки пригодности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 1,0 мл раствора стандартного образца тетрациклина гидрохлорида, 2,0 мл раствора стандартного образца примеси A, 5,0 мл раствора стандартного образца примеси D и доводят объем раствора хлористоводородной кислоты раствором 0,01 М до метки.

Раствор для проверки чувствительности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 1,0 мл раствора стандартного образца примеси C и доводят объем раствора хлористоводородной кислоты раствором 0,01 М до метки.

Примечание

Примесь A (4-эпитетрациклин): (4R,4aS,5aS,6S,12aS)-3,6,10,12,12a-пентагидрокси-4-(диметиламино)-6-метил-1,11-диоксо-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-октагидротетрацен-2-карбоксамид [79-85-6].

Примесь B: (4S,4aS,5aS,6S,12aS)-2-Ацетил-3,6,10,12,12a-пентагидрокси-4-(диметиламино)-6-метил-4a,5a,6,12a-тетрагидротетрацен-1,11(4H,5H)-дион [6542-44-5].

Примесь C (ангидротетрациклин): (4S,4aS,12aS)-3,10,11,12a-тетрагидрокси-4-(диметиламино)-6-метил-1,12-диоксо-1,4,4a,5,12,12a-гексагидротетрацен-2-карбоксамид [1665-56-1].

Примесь D (4-эпиангидротетрациклин): (4R,4aS,12aS)-3,10,11,12a-тетрагидрокси-4-(диметиламино)-6-метил-1,12-диоксо-1,4,4a,5,12,12a-гексагидротетрацен-2-карбоксамид [7518-17-4].

Хроматографические условия

Колонка	25,0 x 4,6 см, сополимер стирол-дивинилбензола, 8 мкм;
Температура колонки	60 °C;
Скорость потока	1,0 мл/мин;
Детектор	спектрофотометрический, 254 нм;
Объем пробы	20 мкл;

Хроматографируют раствор для проверки чувствительности хроматографической системы, раствор для проверки пригодности хроматографической системы, раствор сравнения и испытуемый раствор.

Идентификация примесей. Для идентификации пиков примесей используются хроматограммы растворов для проверки пригодности и чувствительности хроматографической системы.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки пригодности хроматографической системы:

• разрешение (RS) между пиками примеси A (пик 1) и тетрациклина (пик 2) должно быть не менее 2,5;
• разрешение (RS) между пиками тетрациклина (пик 2) и примеси D (пик 3) должно быть не менее 8,0;
• фактор асимметрии пика (AS) тетрациклина должен быть не более 1,25;
• на хроматограмме раствора для проверки пригодности хроматографической системы отношение сигнал/шум (S/N) для основного пика должно быть не менее 3.

Допустимое содержание примесей. На хроматограмме испытуемого раствора:

• площадь пика примеси A не должна превышать площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 5,0%);
• площадь пика примеси B (выходит на хвосте основного пика) не должна превышать 0,4 площади пика примеси A на хроматограмме раствора сравнения (не более 2,0%);
• площадь пика примеси C не должна превышать площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 1,0%);
• площадь пика примеси D не должна превышать площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,5%).

Потеря в массе при высушивании

Не более 13,0% (ОФС «Потеря в массе при высушивании», способ 1). Для определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.

Сульфатная зола. Не более 0,5% (ОФС «Сульфатная зола»). Для определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.

Тяжелые металлы. Не более 0,001%. Определение проводят в соответствии с ОФС «Тяжелые металлы» (метод 3А), в зольном остатке, полученном после сжигания 1 г субстанции, с использованием эталонного раствора 1.

Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС «Остаточные органические растворители».

<**> Аномальная токсичность. Субстанция должна быть нетоксичной (ОФС «Аномальная токсичность»). Тест-доза — 1 мг тетрациклина в 0,5 мл воды для инъекций на мышь. Срок наблюдения 48 ч.

<**> Бактериальные эндотоксины. Не более 0,5 ЕЭ/мг тетрациклина (ОФС «Бактериальные эндотоксины»).

---

<**> Испытание проводят для субстанции, предназначенной для производства лекарственных препаратов для парентерального применения.

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Определение проводят методом ВЭЖХ в условиях испытания «Родственные примеси» со следующими изменениями.

Хроматографируют испытуемый раствор и раствор стандартного образца тетрациклина гидрохлорида.

Содержание тетрациклина C22H24N2O8 в субстанции в процентах (X) в пересчете на сухое вещество вычисляют по формуле:

X = \frac{S_{1} \cdot a_{0} \cdot 25 \cdot P \cdot 0,9241 \cdot 100}{S_{0} \cdot a_{1} \cdot 25 \cdot (100 - W)} ,

где S1 — площадь пика тетрациклина на хроматограмме испытуемого раствора;

S0 — площадь пика тетрациклина на хроматограмме стандартного раствора А;

a1 — навеска субстанции, мг;

a0 — навеска фармакопейного стандартного образца тетрациклина гидрохлорида, мг;

W — потеря в массе при высушивании, %;

P — содержание тетрациклина гидрохлорида в фармакопейном стандартном образце тетрациклина гидрохлорида, %.

0,9241 — коэффициент пересчета тетрациклина гидрохлорида в тетрациклин.

ХРАНЕНИЕ

В укупоренной упаковке, в защищенном от света месте.

---