ФС.2.1.0544. Фармакопейная статья. Паклитаксел
(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 № 377)
(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XV издание»)
Примечание
Текст документа приведен в соответствии с публикацией на сайте https://minzdrav.gov.ru/ по состоянию на 22.08.2023. В соответствии с Приказом Минздрава России от 20.07.2023 № 377 данный документ введен в действие с 01.09.2023.
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
| Паклитаксел Паклитаксел Paclitaxelum | ФС.2.1.0544 |
| Вводится впервые |
| C47H51NO14 [33069-62-4] |
М.м. 853,9 |
|---|
ОПРЕДЕЛЕНИЕ
[ 4,10\beta -Бис(ацетилокси)- 13\alpha -{[(2R,3S)-3-бензамидо-2-гидрокси-3-фенилпропаноил]окси}- 1,7\beta -дигидрокси-9-оксо- 5\beta,20 -эпокситакс-11-ен- 2\alpha -ил]бензоат.
Содержит не менее 97,0% и не более 102,0% паклитаксела C47H51NO14 в пересчете на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество.
Субстанцию получают из природного сырья или производят полусинтетическим способом.
СВОЙСТВА
Описание. Белый или почти белый кристаллический порошок.
<*> Приводится для информации.
Растворимость. Легко растворим в метиленхлориде, растворим в метаноле, практически нерастворим в воде.
ИДЕНТИФИКАЦИЯ
1. ИК-спектрометрия (ОФС «Спектрометрия в средней инфракрасной области»). Инфракрасный спектр субстанции в области от 4000 до 400 см-1 по положению полос поглощения должен соответствовать спектру фармакопейного стандартного образца паклитаксела.
Если спектры различаются, растворяют по отдельности 10 мг испытуемой субстанции и 10 мг фармакопейного стандартного образца в 0,4 мл метиленхлорида, выпаривают досуха и записывают спектры сухих остатков.
2. ВЭЖХ. Время удерживания основного пика на хроматограмме испытуемого раствора должно соответствовать времени удерживания пика паклитаксела на хроматограмме раствора стандартного образца паклитаксела (раздел «Количественное определение»).
ИСПЫТАНИЯ
Удельное вращение. От -49,0 до -55,0 в пересчете на безводное вещество (1,0% раствор субстанции в метаноле, ОФС «Оптическое вращение»).
Прозрачность раствора. Раствор 0,1 г субстанции в 10 мл метанола должен быть прозрачным (ОФС «Прозрачность и степень опалесценции (мутности) жидкостей»).
Цветность раствора. Раствор, полученный в испытании «Прозрачность раствора», должен быть бесцветным (ОФС «Степень окраски жидкостей», метод 2).
Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).
1. Для субстанции, полученной полусинтетическим способом. Растворы, содержащие паклитаксел и его примеси, используют свежеприготовленными.
Подвижная фаза А (ПФА). Ацетонитрил — вода 200:300.
Подвижная фаза Б (ПФБ). Ацетонитрил.
Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 10 мг субстанции, растворяют в ацетонитриле, при необходимости используя ультразвуковую баню, и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.
Раствор стандартного образца примеси 8. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 7,5 мг фармакопейного стандартного образца примеси 8, растворяют в ацетонитриле, встряхивают 10 мин и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.
Раствор для проверки пригодности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 30 мг фармакопейного стандартного образца паклитаксела, прибавляют 1,0 мл раствора стандартного образца примеси 8, растворяют в ацетонитриле и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.
Раствор для проверки чувствительности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1,0 мл раствора для проверки пригодности хроматографической системы и доводят объем раствора ацетонитрилом до метки.
Примесь 1 (10-дезацетилбаккатин III): [4-(ацетилокси)- 1,7\beta,10\beta,13\alpha -тетрагидрокси-9-оксо- 5\beta,20 -эпокситакс-11-ен- 2\alpha -ил]бензоат [32981-86-5].
Примесь 2 (баккатин III): [ 4,10\beta -бис(ацетилокси)- 1,7\beta,13\alpha -тригидрокси-9-оксо- 5\beta,20 -эпокситакс-11-ен- 2\alpha -ил]бензоат [27548-93-2].
Примесь 3: [(2R,4S,5S,7R,10S,12S,13S,15S,16S)-2,10-бис(ацетилокси)-15-{[(2R,3S)-3-бензамидо-2-гидрокси-3-фенилпропаноил]окси}-5,13-дигидрокси-4,16,17,17-тетраметил-3-оксо-8-оксапентацикло[11.3.1.01,11.04,11.07,10]гептадекан-12-ил]бензоат [146139-03-9].
Примесь 4 (10-дезацетилпаклитаксел): [4-(ацетилокси)- 13\alpha -{[(2R,3S)-3-бензамидо-2-гидрокси-3-фенилпропаноил]окси}- 1,7\beta,10\beta -тригидрокси-9-оксо- 5\beta,20 -эпокситакс-11-ен- 2\alpha -ил]бензоат [78432-77-6].
Примесь 5 (2-дебензоилпаклитаксел-2-пентеноат): [ 4,10\beta -бис(ацетилокси)- 13\alpha -{[(2R,3S)-3-бензамидо-2-гидрокси-3-фенилпропаноил]окси}- 1,7\beta -дигидрокси-9-оксо- 5\beta,20 -эпокситакс-11-ен- 2\alpha -ил][(2E)-2-метилбут-2-еноат] [173101-54-7].
Примесь 6: [ 5\beta,10\beta -бис(ацетилокси)- 13\alpha -{[(2R,3S)-3-бензамидо-2-гидрокси-3-фенилпропаноил]окси}- 1,2\alpha,4,7\beta -тетрагидрокси-9-оксотакс-11-ен-20-ил]бензоат [932042-85-8].
Примесь 7 (10-ацетоацетилпаклитаксел): [4-(ацетилокси)- 13\alpha -{[(2R,3S)-3-бензамидо-2-гидрокси-3-фенилпропаноил]окси}- 1,7\beta -дигидрокси-9-оксо- 10\beta -[(3-оксобутаноил)окси]- 5\beta,20 -эпокситакс-11-ен- 2\alpha -ил]бензоат.
Примесь 8 (10-дезацетил-7-эпипаклитаксел): [4-(ацетилокси)- 13\alpha -{[(2R,3S)-3-бензамидо-2-гидрокси-3-фенилпропаноил]окси}- 1,7\beta,10\alpha -тригидрокси-9-оксо- 5\beta,20 -эпокситакс-11-ен- 2\alpha -ил]бензоат [78454-17-8].
Примесь 9 (7-эпипаклитаксел): [ 4,10\beta -бис(ацетилокси)- 13\alpha -{[(2R,3S)-3-бензамидо-2-гидрокси-3-фенилпропаноил]окси}- 1,7\alpha -дигидрокси-9-оксо- 5\beta,20 -эпокситакс-11-ен- 2\alpha -ил]бензоат [105454-04-4].
Примесь 10: [4-(ацетилокси)- 13\alpha -бис{[(2R,3S)-3-бензамидо-2-гидрокси-3-фенилпропаноил]окси}- 10\beta -бис{[(2S,3S)-3-бензамидо-2-гидрокси-3-фенилпропаноил]окси}- 1,7\beta -дигидрокси-2-гидрокси)окси]-9-оксо- 5\beta,20 -эпокситакс-11-ен- 2\alpha -ил]бензоат.
Примесь 11 (7-ацетилпаклитаксел): [ 4,7\beta,10\beta -трис(ацетилокси)- 13\alpha -{[(2R,3S)-3-бензамидо-2-гидрокси-3-фенилпропаноил]окси}-1-гидрокси-9-оксо- 5\beta,20 -эпокситакс-11-ен- 2\alpha -ил]бензоат [92950-39-5].
Примесь 12 (13-O-триэтилсилилбаккатин III): [ 4,10\beta -бис(ацетилокси)- 1,7\beta -дигидрокси-9-оксо- 13\alpha -[(триэтилсилил)окси]- 5\beta,20 -эпокситакс-11-ен- 2\alpha -ил]бензоат [208406-86-4].
Примесь 13 (7-O-триэтилсилилпаклитаксел): [ 4,10\beta -бис(ацетилокси)- 13\alpha -{[(2R,3S)-3-бензамидо-2-гидрокси-3-фенилпропаноил]окси}-1-гидрокси-9-оксо- 7\beta -[(триэтилсилил)окси]- 5\beta,20 -эпокситакс-11-ен- 2\alpha -ил]бензоат [148930-55-6].
| Колонка | 100 x 4,6 мм, силикагель октадецилсилильный для хроматографии, 3 мкм; |
|---|---|
| Температура колонки | 35 °C; |
| Скорость потока | 1,2 мл/мин; |
| Детектор | спектрофотометрический, 227 нм; |
| Объем пробы | 10 мкл. |
| Время, мин | ПФА, % | ПФБ, % |
|---|---|---|
| 0 — 26 | 100 | 0 |
| 26 — 60 | 100 \rightarrow 17 | 0 \rightarrow 83 |
| 60 — 67 | 17 \rightarrow 100 | 83 \rightarrow 0 |
| 67 — 75 | 100 | 0 |
Хроматографируют раствор для проверки чувствительности хроматографической системы, раствор для проверки пригодности хроматографической системы, и испытуемый раствор.
Относительное время удерживания соединений. Паклитаксел — 1 (около 21 мин); примесь 1 — около 0,11; примесь 2 — около 0,19; примесь 3 — около 0,42; примесь 4 — около 0,47; примесь 5 — около 0,80; примеси 6 и 7 — около 0,92; примесь 8 — около 0,94; примесь 9 — около 1,37; примесь 10 — около 1,45; примесь 11 — около 1,54; примесь 12 — около 1,80; примесь 13 — около 2,14.
Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы отношение сигнал/шум (S/N) для пика примеси 8 должно быть не менее 10.
На хроматограмме раствора для проверки пригодности хроматографической системы:
- разрешение (RS) между пиками примеси 8 и паклитаксела должно быть не менее 1,2;
- фактор асимметрии пика (AS) паклитаксела должен быть не более 2,0;
- относительное стандартное отклонение площади пика паклитаксела должно быть не более 2,0% (6 введений).
Поправочные коэффициенты. Для расчета содержания площади пиков следующих примесей умножают на соответствующие поправочные коэффициенты: примесь 1 — 1,24; примесь 2 — 1,29; примесь 3 — 1,39; примесь 12 — 1,75.
Допустимое содержание примесей. Содержание каждой из примесей в субстанции в процентах вычисляют согласно методу нормирования (ОФС «Хроматография»):
- примесь 5 — не более 0,7%;
- примесь 11 — не более 0,6%;
- примеси 4, 9 и 10 — не более 0,5% каждая;
- примесь 13 — не более 0,3%;
- примесь 2 — не более 0,2%;
- примеси 1, 3 и 12 — не более 0,1% каждая;
- сумма примесей 6, 7 и 8 — не более 0,4%;
- любая другая примесь — не более 0,1%;
- сумма примесей — не более 2,0%.
Не учитывают пики, площадь которых менее площади пика примеси 8 на хроматограмме раствора для оценки чувствительности хроматографической системы (менее 0,06%).
2. Для субстанции, полученной из природного сырья. Растворы, содержащие паклитаксел и его примеси, используют свежеприготовленными.
Подвижная фаза А (ПФА). Ацетонитрил.
Растворитель. Уксусная кислота — метанол 1:200.
Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 10 мг субстанции, растворяют в растворителе, при необходимости используя ультразвуковую баню, и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.
Раствор стандартного образца паклитаксела. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 5,0 мг фармакопейного стандартного образца паклитаксела, растворяют в растворителе и доводят объем раствора тем же растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора растворителем до метки.
Раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают по 10 мг фармакопейного стандартного образца примеси 15 и фармакопейного стандартного образца примеси 8, растворяют в метаноле и доводят объем раствора тем же растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора метанолом до метки. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 5,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора растворителем до метки.
Раствор для проверки чувствительности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 5,0 мл раствора стандартного образца паклитаксела и доводят объем раствора растворителем до метки.
Примесь 2 (баккатин III): [ 4,10\beta -бис(ацетилокси)- 1,7\beta,13\alpha -тригидрокси-9-оксо- 5\beta,20 -эпокситакс-11-ен- 2\alpha -ил]бензоат [27548-93-2].
Примесь 4 (10-дезацетилпаклитаксел): [4-(ацетилокси)- 13\alpha -{[(2R,3S)-3-бензамидо-2-гидрокси-3-фенилпропаноил]окси}- 1,7\beta,10\beta -тригидрокси-9-оксо- 5\beta,20 -эпокситакс-11-ен- 2\alpha -ил]бензоат [78432-77-6].
Примесь 8 (10-дезацетил-7-эпипаклитаксел): [4-(ацетилокси)- 13\alpha -{[(2R,3S)-3-бензамидо-2-гидрокси-3-фенилпропаноил]окси}- 1,7\beta,10\alpha -тригидрокси-9-оксо- 5\beta,20 -эпокситакс-11-ен- 2\alpha -ил]бензоат [78454-17-8].
Примесь 9 (7-эпипаклитаксел): [ 4,10\beta -бис(ацетилокси)- 13\alpha -{[(2R,3S)-3-бензамидо-2-гидрокси-3-фенилпропаноил]окси}- 1,7\alpha -дигидрокси-9-оксо- 5\beta,20 -эпокситакс-11-ен- 2\alpha -ил]бензоат [105454-04-4].
Примесь 14 (7-ксилозилпаклитаксел): [ 4,10\beta -бис(ацетилокси)- 13\alpha -{[(2R,3S)-3-бензамидо-2-гидрокси-3-фенилпропаноил]окси}-1-гидрокси- 7\beta -[( \beta -D-ксилопиранозил)окси]-9-оксо- 5\beta,20 -эпокситакс-11-ен- 2\alpha -ил]бензоат [90332-66-4].
Примесь 15 (цефаломанин): [ 4,10\beta -бис(ацетилокси)- 1,7\beta -дигидрокси- 13\alpha -{[(2R,3S)-2-гидрокси-3-[(2E)-2-метилбут-2-енамидо]-3-фенилпропаноил]окси}-9-оксо- 5\beta,20 -эпокситакс-11-ен- 2\alpha -ил]бензоат [71610-00-9].
Примесь 16 (2»,3»-дигидроцефаломанин): [ 4,10\beta -бис(ацетилокси)- 13\alpha -{[(2R,3S)-2-гидрокси-3-[(2RS)-2-метилбутанамидо]-3-фенилпропаноил]окси}- 1,7\beta -дигидрокси-9-оксо- 5\beta,20 -эпокситакс-11-ен- 2\alpha -ил]бензоат [159001-25-9].
Примесь 17: [ 4,10\beta -бис(ацетилокси)- 13\alpha -{[(2R,3S)-2-гидрокси-3-фенил-3-(2-фенилацетамидо)пропаноил]окси}- 1,7\beta -дигидрокси-9-оксо- 5\beta,20 -эпокситакс-11-ен- 2\alpha -ил]бензоат [173101-56-9].
Примесь 18 (3»,4»-дегидропаклитаксел C): [ 4,10\beta -бис(ацетилокси)- 13\alpha -{[(2R,3S)-3-[(3E)-гекс-3-енамидо]-2-гидрокси-3-фенилпропаноил]окси}- 1,7\beta -дигидрокси-9-оксо- 5\beta,20 -эпокситакс-11-ен- 2\alpha -ил]бензоат [502626-06-4].
Примесь 19 (7-эпицефаломаннин): [ 4,10\beta -бис(ацетилокси)- 1,7\alpha -дигидрокси- 13\alpha -{[(2R,3S)-2-гидрокси-3-[(2E)-2-метилбут-2-енамидо]-3-фенилпропаноил]окси}-9-оксо- 5\beta,20 -эпокситакс-11-ен- 2\alpha -ил]бензоат [150547-36-7].
| Колонка | 250 x 4,6 мм, силикагель пентафторфенилпропильный для хроматографии, 5 мкм; |
|---|---|
| Температура колонки | 30 °C; |
| Скорость потока | 2,6 мл/мин; |
| Детектор | спектрофотометрический, 227 нм; |
| Объем пробы | 15 мкл. |
| Время, мин | ПФА, % | ПФБ, % |
|---|---|---|
| 0 — 35 | 35 | 65 |
| 35 — 60 | 35 \rightarrow 80 | 65 \rightarrow 20 |
| 60 — 70 | 80 \rightarrow 35 | 20 \rightarrow 65 |
| 70 — 80 | 35 | 65 |
Хроматографируют раствор для проверки чувствительности хроматографической системы, раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы, раствор стандартного образца паклитаксела и испытуемый раствор.
Относительное время удерживания соединений. Паклитаксел — 1; примесь 2 — около 0,24; примесь 4 — около 0,53; примесь 14 — около 0,57; примеси 15 и 16 — около 0,78; примесь 8 — около 0,86; примеси 17 и 18 — около 1,10; примесь 19 — около 1,40; примесь 9 — около 1,85.
Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы отношение сигнал/шум (S/N) для пика паклитаксела должно быть не менее 10.
На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы разрешение (RS) между пиками примеси 15 и примеси 8 должно быть не менее 1,0.
На хроматограмме раствора стандартного образца паклитаксела относительное стандартное отклонение площади пика паклитаксела должно быть не более 2,0% (6 введений).
Поправочные коэффициенты. Для расчета содержания площади пиков следующих примесей умножают на соответствующие поправочные коэффициенты: примеси 15 и 16 — 1,26; примесь 2 — 1,29.
Допустимое содержание примесей. Содержание каждой из примесей в субстанции в процентах вычисляют согласно методу нормирования (ОФС «Хроматография»):
- примеси 4, 8 и 9 — не более 0,5% каждая;
- примесь 19 — не более 0,3%;
- примеси 2 и 14 — не более 0,2% каждая;
- сумма примесей 15 и 16 — не более 0,5%;
- сумма примесей 17 и 18 — не более 0,5%;
- любая другая примесь — не более 0,1%;
- сумма примесей — не более 2,0%.
Не учитывают пики, площадь которых составляет менее 0,05% от суммы площадей всех пиков.
Вода. Не более 3,0% (ОФС «Определение воды», метод 1). Для определения используют 0,05 г (точная навеска) субстанции.
Сульфатная зола. Не более 0,2% (ОФС «Сульфатная зола»). Для определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.
Тяжелые металлы. Не более 0,002%. Определение проводят в соответствии с ОФС «Тяжелые металлы» (метод 3Б), в зольном остатке, полученном в испытании «Сульфатная зола», с использованием эталонного раствора 2.
Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС «Остаточные органические растворители».
Бактериальные эндотоксины. Не более 0,4 ЕЭ на 1 мг паклитаксела (ОФС «Бактериальные эндотоксины»). Для проведения испытания готовят исходный раствор субстанции с концентрацией 5 мг паклитаксела в 1 мл этилового спирта 96%.
Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».
КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ
Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).
Подвижная фаза (ПФ). Ацетонитрил — вода 450:550.
Растворитель. Уксусная кислота — метанол 1:200.
Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 10 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в растворителе, при необходимости используя ультразвуковую баню, и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.
Раствор стандартного образца паклитаксела. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 10 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца паклитаксела, растворяют в растворителе, при необходимости используя ультразвуковую баню, и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.
Хроматографируют раствор стандартного образца паклитаксела и испытуемый раствор.
Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора стандартного образца паклитаксела:
- фактор асимметрии пика (AS) паклитаксела должен быть не более 1,3;
- относительное стандартное отклонение площади пика паклитаксела должно быть не более 1,5% (6 введений);
Содержание паклитаксела C47H51NO14 в субстанции в процентах (X) в пересчете на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество вычисляют по формуле:
X = \frac{S_{1} \cdot a_{0} \cdot P \cdot 10 \cdot 100}{S_{0} \cdot a_{1} \cdot 10 \cdot (100 - W)} ,
где S1 — площадь пика паклитаксела на хроматограмме испытуемого раствора;
S0 — площадь пика паклитаксела на хроматограмме раствора стандартного образца паклитаксела;
a0 — навеска фармакопейного стандартного образца паклитаксела, мг;
W — суммарное содержание воды и остаточных органических растворителей в субстанции, %;
P — содержание паклитаксела в фармакопейном стандартном образце паклитаксела, %.