ФС.2.1.0540. Фармакопейная статья. Орлистат

(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 № 377)

(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XV издание»)

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

[(2S)-1-[(2S,3S)-3-Гексил-4-оксооксетан-2-ил]тридекан-2-ил][(2S)-4-метил-2-формамидопентаноат].

Содержит не менее 98,0% и не более 101,5% орлистата C₂₉H₅₃NO₅ в пересчете на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество.

СВОЙСТВА

Описание. Белый или почти белый кристаллический порошок.

Растворимость. Легко растворим в этаноле и метаноле, практически нерастворим в воде.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

1. ИК-спектрометрия (ОФС «Спектрометрия в средней инфракрасной области»). Инфракрасный спектр субстанции в области от 4000 до 400 см-1 по положению полос поглощения должен соответствовать спектру фармакопейного стандартного образца орлистата.

2. ВЭЖХ. Время удерживания основного пика на хроматограмме испытуемого раствора должно соответствовать времени удерживания пика орлистата на хроматограмме раствора стандартного образца орлистата (раздел «Количественное определение»).

ИСПЫТАНИЯ

Удельное вращение. От -48 до -51 в пересчете на безводное вещество (3% раствор субстанции в этаноле, ОФС «Оптическое вращение»).

Родственные примеси.

1. Примесь 1. Определение проводят методом ТСХ (ОФС «Тонкослойная хроматография»).

Все растворы используют свежеприготовленными.

Пластинка. ТСХ пластинка со слоем силикагеля.

Подвижная фаза (ПФ). Этилацетат — толуол 20:80.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 0,5 г (точная навеска) субстанции, растворяют в ацетоне и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Раствор стандартного образца примеси 1. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 2 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца примеси 1 ((3S,4S)-3-гексил-4-[(2R)-2-гидрокситридецил]оксетан-2-он [104872-06-2]), растворяют в ацетоне и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Раствор для проверки пригодности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 5 мл раствора стандартного образца примеси 1 и доводят объем раствора ацетоном до метки.

Реактив для детектирования. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 2,5 г фосфорномолибденовой кислоты, 1 г церия сульфата, прибавляют метанол, обрабатывают ультразвуком в течение 30 мин, и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

На линию старта пластинки наносят по 10 мкл испытуемого раствора (500 мкг), раствора стандартного образца примеси 1 (1 мкг) и раствора для проверки пригодности хроматографической системы (0,5 мкг). Пластинку с нанесенными пробами сушат на воздухе, помещают в предварительно насыщенную камеру с ПФ и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт ПФ пройдет около 80 — 90% длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат до удаления следов растворителей, опрыскивают реактивом для детектирования, выдерживают в сушильном шкафу при температуре 120 °C в течение 30 мин и просматривают в видимом свете.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки пригодности хроматографической системы должна обнаруживаться четкая зона адсорбции примеси 1.

Допустимое содержание примесей. На хроматограмме испытуемого раствора зона адсорбции примеси 1 по совокупности величины и интенсивности окраски не должна превышать зону адсорбции на хроматограмме раствора стандартного образца примеси 1 (не более 0,2%).

2. Примесь 2. Определение проводят методом ГХ (ОФС «Газовая хроматография»).

Все растворы используют свежеприготовленными и защищают от света.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 0,5 г (точная навеска) субстанции, растворяют в метиленхлориде и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Раствор стандартного образца примеси 2. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 5 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца примеси 2, растворяют в метиленхлориде и доводят объем раствора тем же растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 5 мл полученного раствора и доводят объем раствора метиленхлоридом до метки.

Раствор сравнения. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 0,5 г (точная навеска) субстанции, растворяют в растворе стандартного образца примеси 2 и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Примечание

Примесь 2: ди(пропан-2-ил)гидразин-1,2-дикарбоксилат [19740-72-8].

Хроматографические условия

Температурная программа

Хроматографируют раствор стандартного образца примеси 2, раствор сравнения и испытуемый раствор.

Относительное время удерживания соединений. Примесь 2 — около 26 мин.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора стандартного образца примеси 2:

• относительное стандартное отклонение площади пика примеси 2 должно быть не более 10,0% (6 введений).

Содержание примеси 2 в субстанции в процентах (X) вычисляют по формуле:

X = \frac{S_{1} \cdot a_{1} \cdot a_{0} \cdot 5 \cdot 10 \cdot P \cdot 100}{(S_{2} \cdot a_{1} - S_{1} \cdot a_{2}) \cdot a_{1} \cdot 50 \cdot 20 \cdot (100 - W)} ,

где S1 — площадь пика примеси 2 на хроматограмме испытуемого раствора;

S2 — площадь пика примеси 2 на хроматограмме раствора сравнения;

a0 — навеска фармакопейного стандартного образца примеси 2, мг;

a1 — навеска субстанции, мг;

a2 — навеска субстанции, взятая для приготовления раствора сравнения, мг;

P — содержание орлистата в фармакопейном стандартном образце орлистата, %;

W — суммарное содержание воды и остаточных органических растворителей в субстанции, %.

Допустимое содержание примесей:

• примесь 2 — не более 0,05%.

3. Примесь 4 и 8. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

Испытуемый раствор и раствор стандартного образца орлистата хранят при температуре 8 °C.

Подвижная фаза (ПФ). Вода — метанол 170:830.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 50 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в ацетонитриле, обрабатывают ультразвуком, охлаждают до комнатной температуры и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Раствор стандартного образца орлистата. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 50 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца орлистата, растворяют в ацетонитриле, обрабатывают ультразвуком в течение 10 мин, охлаждают до комнатной температуры и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Раствор стандартного образца примеси 4. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 2,4 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца примеси 4, растворяют в ацетонитриле и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Раствор для проверки пригодности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 40 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца орлистата, растворяют в ацетонитриле, обрабатывают ультразвуком, охлаждают до комнатной температуры, прибавляют 1 мл раствора стандартного образца примеси 4 и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Примечание

Примесь 4: [(3S,4R,6S)-3-гексил-2-оксо-6-ундецилтетрагидро-2H-пиран-4-ил][(2S)-4-метил-2-формамидопентаноат] [130793-27-0].

Примесь 8: [(7S,8S,10S)-8-гидрокси-7-[(1R)-1-фенилэтил)карбамоил]генэйкозан-10-ил][(2S,3S)-3-метил-2-формамидопентаноат].

Хроматографические условия

Хроматографируют раствор для проверки пригодности хроматографической системы, раствор стандартного образца примеси 4, раствор стандартного образца орлистата и испытуемый раствор.

Относительное время удерживания соединений. Орлистат — 1 (около 40 мин); примесь 4 — около 0,94; примесь 8 — около 1,25.

Идентификация примесей. Для идентификации пика примеси 4 используют относительное время удерживания соединений и хроматограмму раствора стандартного образца примеси 4. Для идентификации пика примеси 8 используют относительное время удерживания соединений.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки пригодности хроматографической системы отношение сигнал/шум (S/N) для пика примеси 4 должно быть не менее 3.

На хроматограмме раствора стандартного образца орлистата относительное стандартное отклонение площади пика орлистата должно быть не более 2,0% (6 введений);

Поправочные коэффициенты. Для расчета содержания площадь пика примеси 8 умножают на 0,23.

Содержание примеси 4 и 8 в субстанции в процентах (X) вычисляют по формуле:

X = \frac{S_{1} \cdot a_{0} \cdot P \cdot 10}{S_{0} \cdot a_{1} \cdot 10} ,

где S1 — площадь пика каждой из примесей на хроматограмме испытуемого раствора;

S0 — площадь пика основного вещества на хроматограмме раствора стандартного образца орлистата;

a1 — навеска субстанции, мг;

a0 — навеска фармакопейного стандартного образца орлистата, мг;

P — содержание орлистата в фармакопейном стандартном образце орлистата, %.

Допустимое содержание примесей:

• примесь 4 — не более 0,2%;
• примесь 8 — не более 0,1%.

4. Примесь 5. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

Все растворы используют свежеприготовленными и хранят в защищенном от света месте.

Подвижная фаза А (ПФА). Растворяют 4,1 г натрия ацетата и 40 мг ЭДТА в 950 мл воды, доводят значение pH натрия гидроксида раствором 0,1 М до 7,2, количественно переносят полученный раствор в мерную колбу вместимостью 1000 мл, доводят объем раствора водой до метки и прибавляют 2,5 мл тетрагидрофурана.

Подвижная фаза Б (ПФБ). Растворяют 2,7 г натрия ацетата и 40 мг ЭДТА в 200 мл воды, доводят значение pH натрия гидроксида раствором 0,1 М до 7,2, количественно переносят полученный раствор в мерную колбу вместимостью 1000 мл и доводят объем раствора ацетонитрилом до метки.

Дериватизирующий реагент. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 0,5 г (точная навеска) фталевого альдегида и 0,5 мл меркаптопропионовой кислоты, прибавляют 40 мл боратного буферного раствора pH 10,4, обрабатывают ультразвуком, охлаждают до комнатной температуры и доводят объем раствора тем же растворителем до метки и перемешивают.

Испытуемый раствор. В мерную колбу с притертой крышкой вместимостью 20 мл помещают 25 мг (точная навеска) субстанции, прибавляют 10 мл натрия гидроксида раствора 4 М, герметично закрывают, выдерживают на кипящей водяной бане в течение 1 ч, охлаждают до комнатной температуры и перемешивают. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 2 мл полученного раствора и доводят объем раствора водой до метки. Смешивают 1,0 мл полученного раствора, 4 мл боратного буферного раствора pH 10,4 и 1 мл дериватизирующего реагента.

Раствор стандартного образца примеси 5. В мерную колбу с притертой крышкой вместимостью 20 мл помещают 2 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца примеси 5, прибавляют 10 м натрия гидроксида раствора 4 М, герметично закрывают, выдерживают на кипящей водяной бане в течение 1 ч, охлаждают до комнатной температуры и перемешивают. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 2 мл полученного раствора и доводят объем раствора водой до метки. Смешивают 1 мл полученного раствора, 4 мл боратного буферного раствора pH 10,4 и 1 мл дериватизирующего реагента.

Контрольный раствор. В мерную колбу с притертой крышкой помещают 10 мл натрия гидроксида раствора 4 М, герметично закрывают, выдерживают на кипящей водяной бане в течение 1 ч и охлаждают до комнатной температуры. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 2 мл полученного раствора и доводят объем раствора водой до метки. Смешивают 1,0 мл полученного раствора, 4 мл боратного буферного раствора pH 10,4 и 1 мл дериватизирующего реагента.

Примечание

Примесь 5: [(2S)-1-[(2S,3S)-3-гексил-4-оксооксетан-2-ил]тридекан-2-ил][(2S,3S)-3-метил-2-формамидопентаноат] [1072902-75-0].

Хроматографические условия

Режим хроматографирования

Хроматографируют раствор стандартного образца примеси 5, испытуемый раствор и контрольный раствор.

Относительное время удерживания соединений. Примесь 5 — около 15 мин.

Идентификация примесей. Для идентификации пика примеси 5 используют относительное время удерживания соединений и хроматограмму раствора стандартного образца примеси 5.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора стандартного образца примеси 5 фактор асимметрии пика (AS) примеси 5 должен быть не более 2,0.

Содержание примеси 5 в субстанции в процентах (X) вычисляют по формуле:

X = \frac{S_{1} \cdot a_{0} \cdot P \cdot 2 \cdot 10 \cdot 50}{S_{0} \cdot a_{1} \cdot 2 \cdot 10 \cdot 50} ,

где S1 — площадь пика примеси 5 на хроматограмме испытуемого раствора;

S0 — площадь пика примеси 5 на хроматограмме раствора стандартного образца примеси 5;

a1 — навеска субстанции, мг;

a0 — навеска фармакопейного стандартного образца примеси 5, мг;

P — содержание примеси 5 в фармакопейном стандартном образце примеси 5, %.

Допустимое содержание примесей:

• примесь 5 — не более 0,2%.

Не учитывают пики, площадь которых составляет менее площади пика примеси 5 на хроматограмме контрольного раствора.

5. Другие примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

Испытуемый раствор и раствор фармакопейного стандартного образца орлистата хранят при температуре 5 °C.

Подвижная фаза. Фосфорная кислота концентрированная — вода — ацетонитрил 0,05:140:860.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 5 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в ПФ и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Раствор стандартного образца орлистата. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 5 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца орлистата, растворяют в ПФ и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Раствор для проверки пригодности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 0,5 мг фармакопейного стандартного образца примеси 3, растворяют в ПФ и доводят объем раствора тем же растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1 мл полученного раствора, 2 мл раствора стандартного образца орлистата и доводят объем раствора ПФ до метки.

Примечание

Примесь 3: \text{трифенил} - \lambda^{5} - \text{фосфанон} [791-28-6].

Примесь 6: (2S)-4-метил-2-формамидопентановая кислота [6113-61-7].

Примесь 7: (2S,3R,5S)-2-гексил-3-гидрокси-5-{[(2S)-2-формамидо-4-метилпентаноил]окси}гексадекановая кислота [130793-28-1].

Примесь 9: [(2S)-1-[(2S,3S)-3-гексил-4-оксооксетан-2-ил]тридекан-2-ил][(2R)-4-метил-2-формамидопентаноат] [104872-28-8].

Хроматографические условия

Хроматографируют раствор для проверки пригодности хроматографической системы, раствор стандартного образца орлистата и испытуемый раствор.

Относительное время удерживания соединений. Орлистат — 1 (около 10,5 мин); примесь 6 — около 0,10; примесь 3 — около 0,13; примесь 7 — около 0,44; примесь 4 — около 0,90; примесь 8 — около 0,90; примесь 9 — около 1,18.

Идентификация примесей. Для идентификации пика примеси 3 используют относительное время удерживания соединений и хроматограмму раствора для проверки пригодности хроматографической системы. Для идентификации пиков примесей 4, 6, 7 и 8 используют относительное время удерживания соединений.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки пригодности хроматографической системы отношение сигнал/шум (S/N) для пика примеси 3 должно быть не менее 3.

Поправочные коэффициенты. Для расчета содержания примесей площади пиков следующих примесей умножаются на соответствующие поправочные коэффициенты: примесь 6 — 0,25; примесь 3 — 0,03.

Содержание каждой из примесей в субстанции в процентах (X) вычисляют по формуле:

X = \frac{S_{1} \cdot a_{0} \cdot P \cdot 10}{S_{0} \cdot a_{1} \cdot 10} ,

где S1 — площадь пика каждой из примесей на хроматограмме испытуемого раствора;

S0 — площадь пика орлистата на хроматограмме раствора стандартного образца орлистата;

a1 — навеска субстанции, мг;

a0 — навеска фармакопейного стандартного образца орлистата, мг;

P — содержание орлистата в фармакопейном стандартном образце орлистата, %.

Допустимое содержание примесей:

• примесь 3 — не более 0,05%;
• примесь 6 — не более 0,2%;
• примесь 7 — не более 0,2%;
• примесь 9 — не более 0,2%;
• любая другая примесь — не более 0,1%;
• сумма примесей — не более 1,0%.

Вода. Не более 0,2%. (ОФС «Определение воды», метод 1). Для определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.

Сульфатная зола. Не более 0,1% (ОФС «Сульфатная зола»). Для определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.

Тяжелые металлы. Не более 0,002%. Определение проводят в соответствии с ОФС «Тяжелые металлы» (метод 3Б) в зольном остатке, полученном в испытании «Сульфатная зола», с использованием эталонного раствора 2.

Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС «Остаточные органические растворители».

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Определение проводят методом ВЭЖХ одновременно с испытанием «Родственные примеси. Другие примеси».

Хроматографируют раствор стандартного образца орлистата и испытуемый раствор.

Содержание орлистата C₂₉H₅₃NO₅ в субстанции в пересчете на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество в процентах (X) вычисляют по формуле:

X = \frac{S_{1} \cdot a_{0} \cdot 10 \cdot P \cdot 100}{S_{0} \cdot a_{1} \cdot 10 \cdot (100 - W)} ,

где S1 — площадь пика орлистата на хроматограмме испытуемого раствора;

S0 — площадь пика основного вещества на хроматограмме раствора стандартного образца орлистата;

a1 — навеска субстанции, мг;

a0 — навеска фармакопейного стандартного образца орлистата, мг;

P — содержание орлистата в фармакопейном стандартном образце орлистата, %;

W — суммарное содержание воды и остаточных органических растворителей в субстанции, %.

ХРАНЕНИЕ

В плотно укупоренной упаковке, при температуре от 2 до 8 °C.