ФС.2.1.0538. Фармакопейная статья. Октреотида ацетат. Октреотид

(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 № 377)

(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XV издание»)

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Октреотида ацетат Октреотид Octreotidi acetas	ФС.2.1.0538
	Взамен ВФС 42-3552-99

C49H66N10O10S2·xC2H4O2 [79517-01-4]	М.м. 1019,3 (основание)

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

S2,S7-Цикло{D-фенилаланил-L-цистеинил-L-фенилаланил-D-триптофил-L-лизил-L-треонил-N1-[(2R,3R)-1,3-дигидроксибутан-2-ил]-L-цистеинамида} ацетат.

Содержит не менее 95,0% и не более 105,0% октреотида C49H66N10O10S2 в пересчете на безводное и свободное от уксусной кислоты и остаточных органических растворителей вещество.

СВОЙСТВА

Описание. Белый порошок со слабым запахом уксусной кислоты.

<*> Гигроскопичен.

---

<*> Приводится для информации.

Растворимость. Легко растворим в воде, мало и медленно растворим в спирте 96%, практически нерастворим в хлороформе.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

Проводят определения 1 и 2 или 2 и 3.

1. 1H-ЯМР-спектроскопия (ОФС «Спектроскопия ядерного магнитного резонанса»).

Растворитель. Смесь дейтерированной уксусной кислоты и дейтерия оксида, содержащего 0,03 мг/мл дейтерированного триметилсилилпропионата натрия (ТСП) 10:90.

Испытуемый раствор. Раствор субстанции в растворителе с концентрацией 2 мг/мл.

Раствор стандартного образца октреотида ацетата. Раствор стандартного образца октреотида ацетата для ЯМР идентификации в растворителе с концентрацией 2 мг/мл.

Оборудование. Импульсный ЯМР-спектрометр с рабочей частотой на протонах не менее 300 МГц.

Параметры регистрации 1H ЯМР спектров

Ширина спектра	от 0 до 8 м.д;
Температура образца	25 °C.

Примечание - Спектры испытуемого раствора и раствора стандартного образца октреотида ацетата должны записываться без вращения образца и при одинаковой температуре.

Анализ 1H ЯМР спектров:

• спектр испытуемого раствора должен качественно соответствовать спектру раствора стандартного образца октреотида ацетата после нормализации обоих спектров с целью уравнивания их по интенсивности.

2. ВЭЖХ. Время удерживания основного пика на хроматограмме испытуемого раствора должно соответствовать времени удерживания пика октреотида на хроматограмме раствора стандартного образца октреотида ацетата (раздел «Количественное определение»).

3. Аминокислотный состав. Определение проводят в соответствии с ОФС «Аминокислотный анализ». Относительное содержание каждой аминокислоты рассчитывают в мольных долях, принимая за единицу одну третью суммарного мольного содержания фенилаланина и лизина, по формуле:

X = \frac{n_{i} \cdot 3}{\sum n(2Phe,1Lys)} ,

где ni — количество молей соответствующей аминокислоты, нмоль;

\sum n(2Phe,1Lys) — сумма мольного содержания фенилаланина и лизина, нмоль.

Относительное содержание аминокислот должно быть в следующих пределах: треонин — от 0,70 до 1,11; лизин — от 0,90 до 1,30; фенилаланин — от 1,80 до 2,20; цистеин — от 1,00 до 2,20; треонинол — от 0,60 до 1,30.

ИСПЫТАНИЯ

Удельное вращение. От -52,0 до -62,0 в пересчете на безводное, свободное от уксусной кислоты и остаточных органических растворителей вещество (0,5% раствор субстанции в уксусной кислоте ледяной, ОФС «Оптическое вращение»).

Прозрачность раствора. Раствор 10 мг субстанции в 100 мл воды должен быть прозрачным (ОФС «Прозрачность и степень опалесценции (мутности) жидкостей»).

Цветность раствора. Раствор, полученный в испытании «Прозрачность раствора», должен быть бесцветным (ОФС «Степень окраски жидкостей», метод 2).

pH раствора. От 4,5 до 6,5 (0,01% раствор, ОФС «Ионометрия», метод 3).

Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

Все растворы используют свежеприготовленными.

Подвижная фаза А (ПФА). Трифторуксусной кислоты раствор 0,02%.

Подвижная фаза Б (ПФБ). Ацетонитрил.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 50 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в ПФА и доводят объем раствора ПФА до метки.

Раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 5 мл помещают 10 мг фармакопейного стандартного образца маркера октреотида нециклического для проверки пригодности системы (D-фенилаланил-L-цистеинил-L-фенилаланил-D-триптофил-L-лизил-L-треонил-S-(ацетамидометил)-N-[(2R,3R)-1,3-дигидроксибут-2-ил]-L-цистеинамид [774239-80-4]), растворяют в ПФА и доводят объем раствора ПФА до метки (раствор А). В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 25 мг субстанции, растворяют в 40 мл ПФА, прибавляют 1,0 мл раствора А и доводят объем раствора ПФА до метки.

Раствор для проверки чувствительности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл испытуемого раствора и доводят объем раствора ПФА до метки. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора ПФА до метки.

Хроматографические условия

Колонка	250 x 4,6 мм, силикагель додецилсилильный для хроматографии, 4 мкм;
Температура колонки	40 °C;
Скорость потока	1,0 мл/мин;
Детектор	спектрофотометрический, 220 нм;
Объем пробы	10 мкл.

Режим хроматографирования

Время, мин	ПФА, %	ПФБ, %
0 — 25	90 \rightarrow 65	10 \rightarrow 35
25 — 30	65 \rightarrow 10	35 \rightarrow 90
30 — 35	10	90
35 — 40	10 \rightarrow 90	90 \rightarrow 10
40 — 45	90	10

Хроматографируют раствор для проверки чувствительности хроматографической системы, раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы и испытуемый раствор.

Относительное время удерживания соединений. Октреотид — 1 (около 16,5 мин); октреотид нециклический — около 1,1.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы отношение сигнал/шум (S/N) для пика октреотида должно быть не менее 10.

На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы разрешение (RS) между пиками октреотида и нециклического октреотида должно быть не менее 2,0.

Допустимое содержание примесей. Содержание каждой из примесей в субстанции в процентах вычисляют согласно методу нормирования (ОФС «Хроматография»):

• любая примесь — не более 0,5%;
• сумма примесей — не более 2,0%.

При оценке примесей не учитывают любой пик со временем удерживания менее 5 мин. Не учитывают пики, площадь которых менее площади основного пика на хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы (менее 0,1%).

Вода. Не более 10% (ОФС «Определение воды», метод 1). Для определения используют 20 мг (точная навеска) субстанции.

Уксусная кислота. От 5,0% до 12,8%. (ОФС «Определение уксусной кислоты в синтетических пептидах»).

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 10 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в воде и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС «Остаточные органические растворители».

<**> Бактериальные эндотоксины. Не более 11,67 ЕЭ на 1 мг субстанции (ОФС «Бактериальные эндотоксины»). Для проведения испытания готовят исходный раствор субстанции в воде с концентрацией октреотида 10 мг/мл, затем разводят его не менее чем в 100 раз.

---

<**> Испытания проводят для субстанции, предназначенной для производства лекарственных препаратов для парентерального применения.

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Определение проводят методом ВЭЖХ в условиях испытания «Родственные примеси» со следующими изменениями.

Раствор стандартного образца октреотида ацетата. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 50 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца октреотида ацетата, растворяют в ПФА и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Хроматографируют раствор стандартного образца октреотида ацетата и испытуемый раствор.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора стандартного образца октреотида ацетата:

• фактор асимметрии пика (AS) октреотида должен быть не менее 0,8 и не более 2,0;
• относительное стандартное отклонение площади пика октреотида должно быть не более 2,0% (6 введений).

Содержание октреотида C49H66N10O10S2 в субстанции в пересчете на безводное и свободное от уксусной кислоты и остаточных органических растворителей вещество в процентах (X) вычисляют по формуле:

X = \frac{S_{1} \cdot a_{0} \cdot P \cdot 100 \cdot 100}{S_{0} \cdot a_{1} \cdot 100 \cdot (100 - W - A)} ,

где S1 — площадь пика октреотида на хроматограмме испытуемого раствора;

S0 — площадь пика октреотида на хроматограмме раствора стандартного образца октреотида ацетата;

a1 — навеска субстанции, мг;

a0 — навеска фармакопейного стандартного образца октреотида ацетата, мг;

P — содержание октреотида в фармакопейном стандартном образце октреотида ацетата, %;

W — суммарное содержание воды и остаточных органических растворителей в субстанции, %;

A — содержание уксусной кислоты в субстанции, %.

ХРАНЕНИЕ

В сухом, защищенном от света месте, при температуре от 2 до 8 °C.

---