ФС.2.1.0449. Фармакопейная статья. Лопинавир
(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 № 377)
(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XV издание»)
Примечание
Текст документа приведен в соответствии с публикацией на сайте https://minzdrav.gov.ru/ по состоянию на 21.08.2023. В соответствии с Приказом Минздрава России от 20.07.2023 № 377 данный документ введен в действие с 01.09.2023.
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
| Лопинавир Лопинавир Lopinavirum | ФС.2.1.0449 |
| Вводится впервые |
| C37H48N4O5 [192725-17-0] |
М.м. 628,8 |
|---|
ОПРЕДЕЛЕНИЕ
(2S)-N-[(2S,4S,5S)-4-Гидрокси-5-[2-(2,6-диметилфенокси)ацетамидо]-1,6-дифенилгексан-2-ил]-3-метил-2-(2-оксо-1,3-диазинан-1-ил)бутанамид.
Содержит не менее 98,0% и не более 102,0% лопинавира C37H48N4O5 в пересчете на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество.
СВОЙСТВА
Описание. Белый или желтовато-белый кристаллический порошок.
<*> Проявляет полиморфизм. Гигроскопичен.
<*> Приводится для информации.
Растворимость. Очень легко или легко растворим в метаноле, легко растворим спирте 96%, легко растворим или растворим в 2-пропаноле, практически нерастворим в воде.
ИДЕНТИФИКАЦИЯ
1. ИК-спектрометрия (ОФС «Спектрометрия в средней инфракрасной области»). Инфракрасный спектр субстанции, снятый в диске с калия бромидом, в области от 4000 до 400 см-1 по положению полос поглощения должен соответствовать спектру фармакопейного стандартного образца лопинавира.
Если спектры различаются, субстанцию и стандартный образец лопинавира по отдельности растворяют в метаноле, выпаривают досуха и записывают спектры сухих остатков.
2. ВЭЖХ. Время удерживания основного пика на хроматограмме испытуемого раствора должно соответствовать времени удерживания пика лопинавира на хроматограмме раствора стандартного образца лопинавира (А) (раздел «Количественное определение»).
ИСПЫТАНИЯ
Удельное вращение. От -22,0 до -27,0 в пересчете на безводное вещество (0,8% раствор субстанции в метаноле, ОФС «Оптическое вращение»).
Сумма примесей, определенная методами А и Б - не более 0,7%.
1. Метод А. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).
Буферный раствор. Растворяют 0,9 г дикалия гидрофосфата и 2,7 г калия дигидрофосфата в 900 мл воды, доводят значение pH фосфорной кислотой концентрированной до 6,0, количественно переносят полученный раствор в мерную колбу вместимостью 1000 мл и доводят объем раствора водой до метки.
Подвижная фаза А (ПФА). Ацетонитрил — буферный раствор 450:550.
Подвижная фаза Б (ПФБ). Буферный раствор — ацетонитрил 250:750.
Растворитель. Вода — ацетонитрил 50:50.
Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 25 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в растворителе и доводят объем раствора растворителем до метки.
Раствор стандартного образца лопинавира (А). В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 25 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца лопинавира, растворяют в растворителе и доводят объем раствора растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора растворителем до метки.
Раствор стандартного образца лопинавира (Б). В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 1,0 мл раствора стандартного образца лопинавира (А) и доводят объем раствора растворителем до метки.
Раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы. Растворяют 2,5 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца лопинавира для проверки пригодности системы, содержащего примеси A, B, C, F, G, I, N, Q, R, S и T в 5 мл растворителя.
Раствор для проверки чувствительности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 5,0 мл раствора стандартного образца лопинавира (Б) и доводят объем раствора растворителем до метки.
Примесь A: (2S)-N-[(2S,4S,5S)-5-амино-4-гидрокси-1,6-дифенилгексан-2-ил]-3-метил-2-(2-оксо-1,3-диазинан-1-ил)бутанамид [192726-05-9].
Примесь B: (2S)-N-[(2S,4S,5S)-4-гидрокси-1,6-дифенил-5-формамидогексан-2-ил]-3-метил-2-(2-оксо-1,3-диазинан-1-ил)бутанамид [76966392].
Примесь C: (2R)-N-[(2S,3S,5S)-3-гидрокси-5-[(2S)-3-метил-2-(2-оксо-1,3-диазинан-1-ил)бутанамидо]-1,6-дифенилгексан-2-ил]-3-метил-2-(2-оксо-1,3-диазинан-1-ил)бутанамид [76962186].
Примесь D: [(2S,3S,5S)-2-[2-(2,6-диметилфенокси)ацетамидо]-5-[(2S)-3-метил-2-(2-оксо-1,3-диазинан-1-ил)бутанамидо]-1,6-дифенилгексан-3-ил]сульфат [76969994].
Примесь E: N-[(2S,3S,5S)-5-амино-3-гидрокси-1,6-дифенилгексан-2-ил]-2-(2,6-диметилфенокси)ацетамид [192725-49-8].
Примесь F: N-[(2S,3S,5S)-3-гидрокси-1,6-дифенилгексан-5-формамидо-2-ил]-2-(2,6-диметилфенокси)ацетамид [76971469].
Примесь G: N-[(2S,3S,5S)-5-ацетамидо-3-гидрокси-1,6-дифенилгексан-2-ил]-2-(2,6-диметилфенокси)ацетамид [76965218].
Примесь H: N-[(1S)-1-[(2S,6S)-4-бензил-2-оксо-1,3-оксазинан-6-ил]-2-фенилэтил]-2-(2,6-диметилфенокси)ацетамид [76968681].
Примесь I: (2S)-N-[(2S,3S,5S)-3-гидрокси-5-[2-(2,6-диметилфенокси)ацетамидо]-1,6-дифенилгексан-2-ил]-3-метил-2-(2-оксо-1,3-диазинан-1-ил)бутанамид [76966912].
Примесь J: (2S)-N-[(2S,4S,5S)-4-гидрокси-5-[2-(2,4-диметилфенокси)ацетамидо]-1,6-дифенилгексан-2-ил]-3-метил-2-(2-оксо-1,3-диазинан-1-ил)бутанамид [76960930].
Примесь K: (2R)-N-[(2S,4S,5S)-4-гидрокси-5-[2-(2,6-диметилфенокси)ацетамидо]-1,6-дифенилгексан-2-ил]-3-метил-2-(2-оксо-1,3-диазинан-1-ил)бутанамид [1623021-24-8].
Примесь L: N,N'-[(Z)-этен-1,2-диил]бис[2-(2,6-диметилфенокси)ацетамид] [76969209].
Примесь M: (2S)-N-[(2R,4R,5S)-4-гидрокси-5-[2-(2,6-диметилфенокси)ацетамидо]-1,6-дифенилгексан-2-ил]-3-метил-2-(2-оксо-1,3-диазинан-1-ил)бутанамид [76968402].
Примесь N: (2S)-N-[(2S,4R,5S)-4-гидрокси-5-[2-(2,6-диметилфенокси)ацетамидо]-1,6-дифенилгексан-2-ил]-3-метил-2-(2-оксо-1,3-диазинан-1-ил)бутанамид [1798014-18-2].
| Время, мин | ПФА, % | ПФБ, % |
|---|---|---|
| 0 — 60 | 100 | 0 |
| 60 — 61 | 100 \rightarrow 0 | 0 \rightarrow 100 |
| 61 — 81 | 0 | 100 |
| 81 — 82 | 0 \rightarrow 100 | 100 \rightarrow 0 |
| 82 — 100 | 100 | 0 |
Хроматографируют раствор для проверки чувствительности хроматографической системы, раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы, раствор стандартного образца лопинавира (Б) и испытуемый раствор.
Относительное время удерживания соединений. Лопинавир — 1; примесь A — около 0,03; примесь B — около 0,07; примесь C — около 0,10; примесь D — около 0,13; примесь E — около 0,25; примесь F — около 0,59; примесь G — около 0,62; примесь H — около 0,90; примесь I — около 1,10; примесь J — около 1,13; примесь K — около 1,25; примесь L — около 1,28; примесь M — около 1,32; примесь N — около 1,38.
Идентификация примесей. Для идентификации пиков примесей A, B, C, F, G, I, N, Q, R, S и T используют относительное время удерживания соединений и хроматограмму раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы. Для идентификации пиков примесей D, E, H, I, J, K, L, M и № используют относительное время удерживания соединений.
Пригодность хроматографической системы
На хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы отношение сигнал/шум (S/N) для пика лопинавира должно быть не менее 10.
На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы разрешение (RS) между пиками примеси F и примеси G должно быть не менее 1,2.
На хроматограмме раствора стандартного образца лопинавира (Б):
- коэффициент емкости (k'), рассчитанный по пику лопинавира, должен быть не менее 15,0;
- фактор асимметрии пика (AS) лопинавира должен быть от 0,8 до 1,5;
Поправочные коэффициенты. Для расчета содержания примесей площади пиков следующих примесей умножают на соответствующие поправочные коэффициенты: примесь A — 1,64; примесь B — 1,25; примесь C — 1,54; примесь D — 1,32; примесь F — 0,77; примесь L — 0,71.
Содержание каждой из примесей в субстанции в процентах (X) вычисляют по формуле:
X = \frac{S_{1} \cdot a_{0} \cdot P \cdot 50 \cdot 1 \cdot 1}{S_{0} \cdot a_{1} \cdot 50 \cdot 20 \cdot 50} ,
где S1 — площадь пика каждой из примесей на хроматограмме испытуемого раствора;
S0 — площадь пика лопинавира на хроматограмме раствора стандартного образца лопинавира (Б);
a0 — навеска стандартного образца лопинавира, мг;
P — содержание лопинавира в стандартном образце лопинавира, %.
Допустимое содержание примесей:
- примесь B — не более 0,2%;
- примесь I — не более 0,2%;
- примесь A, C, D, E, F, G, H, J, K, L, M, № и любая другая — не более 0,15% каждая.
Не учитывают пики, элюирующиеся после пика примеси № и пики, площадь которых менее площади основного пика на хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы (менее 0,05%).
2. Метод Б. Определение проводят методом ВЭЖХ в условиях испытания «Родственные примеси. Метод А» со следующими изменениями.
Подвижная фаза (ПФ). ПФА — ПФБ 300:700.
Примесь O: [(2S,3S,5S)-2-[2-(2,6-диметилфенокси)ацетамидо]-5-[(2S)-3-метил-2-(2-оксо-1,3-диазинан-1-ил)бутанамидо]-1,6-дифенилгексан-3-ил][(2S)-3-метил-2-(2-оксо-1,3-диазинан-1-ил)бутаноат] [76962151].
Примесь P: (2S)-N-[(2R,4S,5S)-4-гидрокси-5-[2-(2,6-диметилфенокси)ацетамидо]-1,6-дифенилгексан-2-ил]-3-метил-2-(2-оксо-1,3-диазинан-1-ил)бутанамид [1217628-64-2].
Примесь Q: N,N'-[(2S,4S,5S)-4-гидрокси-1,6-дифенилгексан-2,5-диил]бис[2-(2,6-диметилфенокси)ацетамид] [667904-94-1].
Примесь R: (2S)-N-[(2S,4S,5S)-4-гидрокси-5-[2-(2,6-диметилфенокси)ацетамидо]-1,6-дифенилгексан-2-ил]-3-метил-2-{3-[(диметилфенокси)ацетил]-2-оксо-1,3-диазинан-1-ил}бутанамид [943250-66-6].
Примесь S: [(2S,3S,5S)-2-[2-(2,6-диметилфенокси)ацетамидо]-5-[(2S)-3-метил-2-(2-оксо-1,3-диазинан-1-ил)бутанамидо]-1,6-дифенилгексан-3-ил][(2,6-диметилфенокси)ацетат] [943250-65-5].
Примесь T: N,N'-бис[(2S,4S,5S)-4-гидрокси-5-[2-(2,6-диметилфенокси)ацетамидо]-1,6-дифенилгексан-2-ил]мочевина [1797024-56-6].
| Время хроматографирования | 50 мин. |
|---|
Хроматографируют раствор для проверки чувствительности хроматографической системы, раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы, раствор стандартного образца лопинавира (Б) и испытуемый раствор.
Относительное время удерживания соединений. Лопинавир — 1 (около 6 мин); примесь O — около 1,49; примесь P — около 1,91; примесь Q — около 4,39; примесь R — около 6,01; примесь S — около 7,14; примесь T — около 8,46.
Идентификация примесей. Для идентификации пиков примесей O, P, Q, R, S и T используют относительное время удерживания соединений.
Пригодность хроматографической системы
На хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы отношение сигнал/шум (S/N) для пика лопинавира должно быть не менее 10.
На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы разрешение (RS) между пиками примеси S и примеси T должно быть не менее 3,0.
На хроматограмме раствора стандартного образца лопинавира (Б):
- коэффициент емкости (k'), рассчитанный по пику лопинавира, должен быть не менее 1,5;
- фактор асимметрии пика (AS) лопинавира должен быть от 0,8 до 1,5;
Поправочные коэффициенты. Для расчета содержания примесей площади пиков следующих примесей умножают на соответствующие поправочные коэффициенты: примесь O — 1,30; примесь Q — 0,71; примесь R — 0,77; примесь T — 0,77.
Содержание каждой из примесей в субстанции в процентах (X) вычисляют по формуле:
X = \frac{S_{1} \cdot a_{0} \cdot P \cdot 50 \cdot 1 \cdot 1}{S_{0} \cdot a_{1} \cdot 50 \cdot 20 \cdot 50} ,
где S1 — площадь пика каждой из примесей на хроматограмме испытуемого раствора;
S0 — площадь пика лопинавира на хроматограмме раствора стандартного образца лопинавира (Б);
a0 — навеска стандартного образца лопинавира, мг;
P — содержание лопинавира в стандартном образце лопинавира, %.
Допустимое содержание примесей:
Не учитывают пики, элюирующиеся до пика примеси N, пик примеси № и пики, площадь которых менее площади основного пика на хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы (менее 0,05%).
Вода. Не более 4,4% (ОФС «Определение воды», метод 1). Для определения используют 0,1 г (точная навеска) субстанции.
Сульфатная зола. Не более 0,2% (ОФС «Сульфатная зола»). Для определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.
Тяжелые металлы. Не более 0,002%. Определение проводят в соответствии с ОФС «Тяжелые металлы» (метод 3Б) в зольном остатке, полученном после сжигания 1 г субстанции, с использованием эталонного раствора 2.
Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС «Остаточные органические растворители».
Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».
КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ
Определение проводят методом ВЭЖХ в условиях испытания «Родственные примеси. Метод А» со следующими изменениями.
Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 1,0 мл испытуемого раствора, полученного в испытании «Родственные примеси. Метод А» и доводят объем раствора растворителем до метки.
| Время хроматографирования | 60 мин. |
|---|
Хроматографируют раствор стандартного образца лопинавира (А) и испытуемый раствор.
Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора стандартного образца лопинавира (А):
- коэффициент емкости (k'), рассчитанный по пику лопинавира, должен быть не менее 15,0;
- фактор асимметрии пика (AS) лопинавира должен быть от 0,8 до 1,5.
Содержание лопинавира C37H48N4O5 в субстанции в пересчете на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество в процентах (X) вычисляют по формуле:
X = \frac{S_{1} \cdot a_{0} \cdot P \cdot 50 \cdot 20 \cdot 1 \cdot 100}{S_{0} \cdot a_{1} \cdot (100 - W) \cdot 1 \cdot 50 \cdot 20} ,
где S1 — площадь пика лопинавира на хроматограмме испытуемого раствора;
S0 — площадь пика лопинавира на хроматограмме раствора стандартного образца лопинавира (А);
a0 — навеска фармакопейного стандартного образца лопинавира, мг;
P — содержание лопинавира в фармакопейном стандартном образце лопинавира, %;
W — суммарное содержание воды и остаточных органических растворителей в субстанции, %.
ХРАНЕНИЕ
В сухом защищенном от света месте.