ФС.2.1.0082. Фармакопейная статья. Гентамицина сульфат. Гентамицин

(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 № 377)

(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XV издание»)

ИСТОРИЯ ИЗМЕНЕНИЙ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИХ АКТОВ

flowchart LR
  n0["ФС.2.1.0082.18"]:::rst
  click n0 "https://bukva.ai/docs/fs-2-1-0082-18" "ФС.2.1.0082.18. Фармакопейная статья. Гентамицина сульфат (утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 31.10.2018 N 749)"
  n1["ФС.2.1.0082"]:::doc
  click n1 "https://bukva.ai/docs/prikaz-fs-2-1-0082" "ФС.2.1.0082. Фармакопейная статья. Гентамицина сульфат. Гентамицин (утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 N 377)"
  n0 --> n1
classDef rst fill:#FFEBEB,stroke:#8B0000,color:#000;
classDef doc fill:#EBFFEB,stroke:#006400,color:#000;
classDef notEnt fill:#FFFFEB,stroke:#FF8C00,color:#000;

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Смесь сульфатов гентамицина C1, гентамицина C1A, гентамицина C2A, гентамицина C2B и гентамицина C2, производимых Micromonospora purpurea.

Гентамицин C1a: O-3-Дезокси-4-C-метил-3-(метиламино)- \beta -L-арабинопиранозил-(1 \rightarrow 6)-O-[2,6-диамино-2,3,4,6-тетрадезокси- \alpha -D-эритро-гексопиранозил-(1 \rightarrow 4)]-2-дезокси-D-стрептамина сульфат (1:1).

Гентамицин C1: O-3-дезокси-4-C-метил-3-(метиламино)- \beta -L-арабинопиранозил-(1 \rightarrow 6)-O-[2-амино-2,3,4,6,7-пентадезокси-6-(метиламино)- \alpha -D-эритро-гептопиранозил-(1 \rightarrow 6)]-2-дезокси-D-стрептамина сульфат (1:1).

Гентамицин C2: O-3-дезокси-4-C-метил-3-(метиламино)- \beta -L-арабинопиранозил-(1 \rightarrow 6)-O-[(6R)-2,6-диамино-2,3,4,6,7-пентадезокси- \alpha -D-эритро-гептопиранозил-(1 \rightarrow 4)]-2-дезокси-D-стрептамина сульфат (1:1).

Гентамицин C2a: O-3-дезокси-4-C-метил-3-(метиламино)- \beta -L-арабинопиранозил-(1 \rightarrow 6)-O-[(6S)-2,6-диамино-2,3,4,6,7-пентадезокси- \alpha -D-эритро-гептопиранозил-(1 \rightarrow 4)]-2-дезокси-D-стрептамина сульфат (1:1).

Гентамицин C2b: O-3-дезокси-4-C-метил-3-(метиламино)- \beta -L-арабинопиранозил-(1 \rightarrow 6)-O-[2-амино-2,3,4,6-тетрадезокси-6-метил-6-(метиламино)- \alpha -D-эритро-гексопиранозил-(1 \rightarrow 4)]-2-дезокси-D-стрептамина сульфат (1:1).

1 мкг гентамицина сульфата соответствует специфической активности, равной одной единице действия (ЕД).

СВОЙСТВА

Описание. Белый или почти белый порошок.

<*> Гигроскопичен.

Растворимость. Легко растворим в воде, практически нерастворим в спирте 96%.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

1. ВЭЖХ. Время удерживания пяти основных пиков на хроматограмме испытуемого раствора Б должно соответствовать времени удерживания пяти основных пиков гентамицина, на хроматограмме раствора для идентификации пиков (раздел «Компонентный состав»).

2. Тонкослойная хроматография (ОФС «Тонкослойная хроматография»)

Пластинка. ТСХ пластинка со слоем силикагеля.

Подвижная фаза (ПФ). Аммиака раствор концентрированный 25% — метанол — хлороформ 33:33:33. После смешивания используют нижний слой.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 5 мл помещают около 25 мг субстанции, растворяют в воде и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Раствор стандартного образца гентамицина сульфата. В мерную колбу вместимостью 5 мл помещают около 25 мг фармакопейного стандартного образца гентамицина сульфата, растворяют в воде и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

На линию старта пластинки наносят по 10 мкл (50 мкг) испытуемого раствора и раствора стандартного образца гентамицина сульфата. Пластинку с нанесенными пробами сушат на воздухе, помещают в камеру с ПФ и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт подвижной фазы пройдет около 80 — 90% длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат до удаления следов растворителей, опрыскивают нингидрина раствором 0,25%, выдерживают в сушильном шкафу при температуре 110 °C в течение 5 мин и просматривают в видимом свете.

На хроматограмме испытуемого раствора должны наблюдаться три основные зоны адсорбции, соответствующие по положению, величине и интенсивности поглощения основным зонам адсорбции на хроматограмме раствора стандартного образца гентамицина сульфата.

3. Качественная реакция. Субстанция должна давать характерную реакцию на сульфаты (ОФС «Общие реакции на подлинность»).

ИСПЫТАНИЯ

Удельное вращение. От +107 до +121 в пересчете на безводное вещество (10% раствор субстанции в воде, ОФС «Оптическое вращение»).

Прозрачность раствора. Раствор 0,8 г субстанции в 20 мл воды должен быть прозрачным (ОФС «Прозрачность и степень опалесценции (мутности) жидкостей»).

Цветность раствора. Окраска раствора, полученного в испытании «Прозрачность раствора», не должна превышать интенсивности наиболее близко подходящего по цвету эталона сравнения 6 (ОФС «Степень окраски жидкостей»).

pH раствора. От 3,5 до 5,5 (раствор, полученный в испытании «Прозрачность раствора», ОФС «Ионометрия», метод 3).

Компонентный состав. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

Раствор А. Натрия гидроксида раствор насыщенный, свободный от карбонатов — вода 1:25.

Подвижная фаза (ПФ). К 900 мл воды прибавляют 7,0 мл трифторуксусной кислоты, 0,25 мл пентафторпропановой кислоты, 4,0 мл натрия гидроксида раствора насыщенного, свободного от карбонатов, перемешивают и доводят pH раствором А до 2,60. Полученный раствор количественно переносят в мерную колбу вместимостью 1000 мл, прибавляют 15 мл ацетонитрила и доводят объем раствора водой до метки.

Испытуемый раствор А. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 0,25 г гентамицина сульфата, растворяют в ПФ и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Испытуемый раствор Б. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 5,0 мл испытуемого раствора А и доводят объем раствора ПФ до метки.

Раствор для идентификации пиков. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 5 мг фармакопейного стандартного образца гентамицина для идентификации пиков, содержащего примесь B, растворяют в ПФ и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Раствор стандартного образца сизомицина сульфата. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 20 мг фармакопейного стандартного образца сизомицина сульфата (примесь A), растворяют в ПФ и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Раствор для проверки чувствительности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл раствора стандартного образца сизомицина сульфата и доводят объем раствора ПФ до метки.

Раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 1,0 мл раствора стандартного образца сизомицина сульфата, прибавляют 5,0 мл испытуемого раствора А и доводят объем раствора ПФ до метки.

Раствор для постколоночной дериватизации. Раствор А, предварительно дегазированный, безымпульсно добавляется к элюату колонки с помощью смешивающей полимерной петли объемом 375 мкл.

Примечание

Примесь A: O-3-дезокси-4-C-метил-3-(метиламино)- \beta -L-арабинопиранозил-(1 \rightarrow 6)-O-[2,6-диамино-2,3,4,6-тетрадезокси- \alpha -D-эритро-гекс-4-енопиранозил-(1 \rightarrow 4)]-2-дезокси-D-стрептамин [32385-11-8].

Примесь B: O-3-дезокси-4-C-метил-3-(метиламино)- \beta -L-арабинопиранозил-(1 \rightarrow 4)-2-дезокси-L-стрептамин [49751-51-1].

Хроматографические условия

Примечание - Если при проведении испытания наблюдается значительный дрейф времени удерживания компонентов растворов, следует предусмотреть промывку колонки между инжекциями смесью ацетонитрил — вода очищенная 80:20 в течение 15 — 30 мин с последующим уравновешиванием колонки подвижной фазой.

Хроматографируют раствор для проверки чувствительности хроматографической системы, раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы, раствор для идентификации пиков и испытуемый раствор Б.

Относительное время удерживания. Примесь A — 1,0 (около 23 мин); гентамицин C1A — около 1,1; гентамицин C2 — около 1,8; гентамицин C2B — около 2,0; гентамицин C2A — около 2,3; гентамицин C1 — около 3,0.

Идентификация примесей. Для идентификации пиков гентамицина C1, C1A, C2, C2A, C2B используют хроматограмму раствора для идентификации пиков и хроматограмму, прилагаемую к фармакопейному стандартному образцу гентамицина для идентификации пиков.

Пригодность хроматографической системы

На хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы отношение сигнал/шум (S/N) для пика сизомицина должно быть не менее 10.

На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы:

• разрешение (RS) между пиками сизомицина и гентамицина C1A должно быть не менее 1,2 (при необходимости увеличивают долю ацетонитрила в ПФ до 50 мл/л);
• разрешение (RS) между пиками гентамицина C2 и гентамицина C2B должно быть не менее 1,5 (при необходимости увеличивают долю ацетонитрила в ПФ до дополнительных 50 мл/л).

Допустимое содержание компонентов. Содержание каждого компонента в субстанции в процентах вычисляют методом нормирования (ОФС «Хроматография»):

• гентамицин C1 — от 25,0 до 45,0%;
• гентамицин C1A — от 10,0 до 30,0%;
• сумма гентамицинов C2, C2A и C2B — от 35,0 до 55,0%.

Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ в условиях испытания «Компонентный состав» со следующими изменениями.

Хроматографируют раствор для проверки чувствительности хроматографической системы и испытуемый раствор А.

Допустимое содержание примесей:

• площадь пика каждой из примесей A и B не должна более чем в 3 раза превышать площадь основного пика на хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы (не более 3%);
• площадь пика любой другой примеси не должна более чем в 3 раза превышать площадь основного пика на хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы (не более 3%);
• сумма площадей пиков всех примесей не должна более чем в 10 раз превышать площадь основного пика на хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы (не более 10%).

Не учитывают пики, площадь которых составляет менее 0,5 площади основного пика на хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы (менее 0,5%).

Метанол. Не более 1,0%. Определение проводят методом ГХ (ОФС «Газовая хроматография»).

Раствор внутреннего стандарта. В мерную колбу вместимостью 200 мл помещают 0,2 г пропанола, прибавляют 20 мл воды, перемешивают и доводят объем раствора водой до метки.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 0,1 г (точная навеска) субстанции, растворяют в 5 мл воды, прибавляют 1,0 мл раствора внутреннего стандарта, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. Помещают 1,0 мл полученного раствора во флакон для парофазного анализа вместимостью 10 мл и герметично закрывают.

Стандартный раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 0,1 г (точная навеска) метанола, прибавляют 20 мл воды, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 10,0 мл полученного раствора, прибавляют 1,0 мл раствора внутреннего стандарта, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. Помещают 1,0 мл полученного раствора во флакон для парофазного анализа вместимостью 10 мл и герметично закрывают.

Контрольный раствор. Помещают 1,0 мл воды во флакон для парофазного анализа вместимостью 10 мл и герметично закрывают.

Хроматографические условия

Температурная программа

Условия парофазного анализа

Хроматографируют контрольный раствор, стандартный и испытуемый растворы.

Содержание метанола в субстанции в процентах (X) вычисляют по формуле:

X = \frac{B_{1} \cdot a_{0} \cdot 10 \cdot 10 \cdot P}{B_{0} \cdot a_{1} \cdot 100 \cdot 100} ,

где B1 — отношение площади пика метанола к площади пика пропанола на хроматограмме испытуемого раствора;

B0 — отношение площади пика метанола к площади пика пропанола на хроматограмме стандартного раствора;

a1 — навеска испытуемой субстанции, г;

a0 — навеска метанола, взятая для приготовления стандартного раствора, г;

P — чистота метанола, %.

Сульфаты. От 32,0 до 35,0% в пересчете на безводное вещество. Растворяют 0,25 г (точная навеска) субстанции в 100 мл воды и доводят значение pH до 11,0 аммиака раствором концентрированным 32%. Прибавляют 10,0 мл 0,1 М раствора бария хлорида и около 0,5 мг фталеинового пурпурного. Титруют 0,1 М раствором натрия эдетата, прибавляя 50 мл спирта 96% при начале изменения окраски, до исчезновения фиолетово-синего окрашивания.

Параллельно проводят контрольный опыт.

1 мл 0,1 М раствора бария хлорида соответствует 9,606 мг сульфат-иона SO4.

Сульфатная зола. Не более 1,0% (ОФС «Сульфатная зола»). Для определения используют 0,5 г (точная навеска) субстанции.

Вода. Не более 15,0% (ОФС «Определение воды»). Для определения используют 0,3 г (точная навеска) субстанции.

Остаточные органические растворители. В соответствии с требованиями ОФС «Остаточные органические растворители».

<*> Аномальная токсичность. Субстанция должна быть нетоксичной (ОФС «Аномальная токсичность»). Тест-доза — 0,5 мг гентамицина в 0,5 мл воды для инъекций на мышь, внутривенно. Скорость введения — 0,1 мл/с. Срок наблюдения — 48 ч.

<*> Бактериальные эндотоксины. Не более 0,71 ЕЭ на 1 мг гентамицина (ОФС «Бактериальные эндотоксины»).

Микробиологическая чистота. В соответствии с требованиями ОФС «Микробиологическая чистота».

<*> Стерильность. Субстанция должна быть стерильной (ОФС «Стерильность»).

<*> Испытание проводят для субстанции, предназначенной для производства лекарственных препаратов для парентерального применения.

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Определение проводят в соответствии с требованиями ОФС «Определение антимикробной активности антибиотиков методом диффузии в агар».

ХРАНЕНИЕ

В защищенном от света месте в герметично закрытой упаковке.