ФС.2.1.0082.18. Фармакопейная статья. Гентамицина сульфат

(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 31.10.2018 № 749)

(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV издание. Том III»)

ИСТОРИЯ ИЗМЕНЕНИЙ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИХ АКТОВ

flowchart LR
  n0["ФС.2.1.0082.18"]:::rst
  click n0 "https://bukva.ai/docs/fs-2-1-0082-18" "ФС.2.1.0082.18. Фармакопейная статья. Гентамицина сульфат (утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 31.10.2018 N 749)"
  n1["ФС.2.1.0082"]:::doc
  click n1 "https://bukva.ai/docs/prikaz-fs-2-1-0082" "ФС.2.1.0082. Фармакопейная статья. Гентамицина сульфат. Гентамицин (утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 N 377)"
  n0 --> n1
classDef rst fill:#FFEBEB,stroke:#8B0000,color:#000;
classDef doc fill:#EBFFEB,stroke:#006400,color:#000;
classDef notEnt fill:#FFFFEB,stroke:#FF8C00,color:#000;

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Смесь сульфатов гентамицина C1, гентамицина C14, гентамицина C2A, гентамицина C2B и гентамицина C2, производимых Micromonospora purpurea.

C1A	R=CH2NH2	C19H39N5O7·H2SO4	М.м. 547,6
C1	R=CH(CH3)NHCH3	C21H43N5O7·H2SO4	М.м. 575,7
C2	R=(R)-CH(CH3)NH2	C20H41N5O7·H2SO4	М.м. 561,6
C2A	R=(S)-CH(CH3)NH2	C20H41N5O7·H2SO4	М.м. 561,6
C2B	R=CH2NHCH3	C20H41N5O7·H2SO4	М.м. 561,6

Гентамицин C1A:

Гентамицин C1:

Гентамицин C2:

Гентамицин C2A:

Гентамицин C2B:

Содержит не менее 590 МЕ/мг в пересчете на безводное вещество.

Описание. Белый или почти белый порошок, гигроскопичен.

Растворимость. Легко растворим в воде, практически нерастворим в этаноле 96% и эфире.

Подлинность

1. Тонкослойная хроматография (ОФС «Тонкослойная хроматография»)

Пластинка. ТСХ пластинка со слоем силикагеля.

Подвижная фаза (ПФ). Аммиак водный — метанол для жидкостной хроматографии — хлороформ 33:33:33. После смешивания используют нижний слой. Камеру предварительно насыщают парами аммиака в течение 1 ч.

Испытуемый раствор. 25 мг субстанции растворяют в 5 мл воды.

Раствор сравнения. Содержимое флакона со стандартным образцом гентамицина сульфата растворяют в 5 мл воды.

На линию старта пластинки наносят по 10 мкл испытуемого раствора и раствора сравнения. Пластинку с нанесенными пробами сушат на воздухе, помещают в камеру с ПФ и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт подвижной фазы пройдет около 80 — 90% длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат до удаления следов растворителей, опрыскивают 0,25% раствором нингидрина и выдерживают в сушильном шкафу при температуре 110 °C в течение 5 мин.

На хроматограмме испытуемого раствора должны наблюдаться три основные зоны адсорбции, соответствующие по положению, величине и интенсивности поглощения основным зонам адсорбции на хроматограмме раствора сравнения.

2. ВЭЖХ. На хроматограмме испытуемого раствора должны наблюдаться пять основных пиков (см. раздел «Компонентный состав»), времена удерживания которых соответствуют пяти основными пикам на хроматограмме раствора сравнения.

3. Качественная реакция. Субстанция дает характерную реакцию на сульфаты (ОФС «Общие реакции на подлинность»).

Удельное вращение. От +107 до +121 в пересчете на безводное и не содержащее остаточных органических растворителей вещество (10% раствор, ОФС «Поляриметрия»).

Прозрачность раствора. Раствор 0,8 г субстанции в 20 мл воды свободной от двуокиси углерода, должен быть прозрачным (ОФС «Прозрачность и степень мутности жидкостей»).

<*> Цветность раствора. Окраска раствора, полученного в испытании «Прозрачность раствора», не должна превышать интенсивности наиболее близко подходящего по цвету эталона сравнения 6 (ОФС «Степень окраски жидкостей»).

pH. От 3,5 до 5,5 (раствор, полученный в испытании «Прозрачность раствора», ОФС «Ионометрия», метод 3).

Компонентный состав. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

Подвижная фаза (ПФ). К 900 мл воды прибавляют 7,0 мл трифторуксусной кислоты, 0,250 мл пентафторпропановой кислоты, 4,0 мл свежеприготовленного 20% раствора натрия гидроксида, перемешивают и доводят pH раствора до 2,6 свежеприготовленным 20% раствором натрия гидроксида. Прибавляют 15 мл ацетонитрила и доводят водой до 1 л.

Испытуемый раствор А. Растворяют 25,0 мг субстанции в 25,0 мл ПФ.

Испытуемый раствор Б. 5,0 мл испытуемого раствора А доводят ПФ до 25,0 мл.

Раствор сравнения А. Растворяют 5 мг стандартного образца гентамицина для идентификации пиков, содержащего примесь B, в 25 мл ПФ.

Раствор сравнения Б. Растворяют 20,0 мг стандартного образца примеси A в 20,0 мл ПФ.

Раствор сравнения В. 1,0 мл раствора сравнения Б доводят ПФ до 100,0 мл.

Раствор для проверки пригодности хроматографической системы. Смешивают 1 мл раствора сравнения Б с 5 мл испытуемого раствора А и доводят ПФ до 50 мл.

Примечание.

Примесь A:

примесь B:

Хроматографические условия

Примечание. Если при проведении испытания наблюдается значительный дрейф времен удерживания компонентов растворов, предусмотреть промывку колонки между инжекциями смесью ацетонитрил — вода очищенная (80:20) в течение 15 — 30 мин с последующим уравновешиванием колонки подвижной фазой.

Хроматографируют раствор для проверки пригодности хроматографической системы, испытуемый раствор Б и растворы сравнения А, В.

Пригодность хроматографической системы:

• разрешение между пиками примеси А и гентамицина C1A на хроматограмме раствора для проверки пригодности хроматографической системы должно быть не менее 1,2 (при необходимости увеличивают долю ацетонитрила в ПФ до 50 мл/л);
• разрешение между пиками гентамицина C2 и гентамицина C2B на хроматограмме раствора для проверки пригодности хроматографической системы должно быть не менее 1,5 (при необходимости увеличивают долю ацетонитрила в ПФ до дополнительных 50 мл/л);
• отношение сигнал/шум для основного пика на хроматограмме раствора сравнения В должно быть не менее 20.

Идентификация пиков. Для идентификации пиков гентамицина C1, C1A, C2, C2A, C2B используют хроматограмму, прилагаемую к стандартному образцу гентамицина для идентификации пиков.

Относительные времена удерживания компонентов. Примесь A — 1,0 (около 23 мин); гентамицин C1A — 1,1; гентамицин C2 — 1,8; гентамицин C2B — 2,0; гентамицин C2A — 2,3; гентамицин C1 — 3,0.

Допустимое содержание компонентов.

• Гентамицин C1: от 25,0 до 45,0%;
• гентамицин C1A: от 10,0 до 30,0%;
• сумма гентамицинов C2, C2A и C2B: от 35,0 до 55,0%.

Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ в условиях испытания «Компонентный состав» со следующими изменениями:

Хроматографируют испытуемый раствор А и раствор сравнения В.

Допустимое содержание примесей.

• Площадь пика любой примеси должна быть не более 3 площадей основного пика на хроматограмме раствора сравнения В (не более 3%);
• суммарная площадь пиков всех примесей не должна более, чем в 10 раз превышать площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения В (не более 10%).

Не учитывают пики, площадь которых составляет менее 0,5 площади основного пика на хроматограмме раствора сравнения В (менее 0,5%).

Метанол. Не более 1,0%. Определение проводят методом ГХ.

Раствор внутреннего стандарта. Около 0,2 г (точная навеска) пропанола помещают в мерную колбу вместимостью 200 мл, прибавляют 20 мл воды, перемешивают и доводят объем раствора водой до метки.

Контрольный раствор. Помещают 1,0 мл воды во флакон для парофазного анализа вместимостью 10 мл и герметично закрывают.

Стандартный раствор. Около 0,1 г (точная навеска) метанола помещают в мерную колбу объемом 100 мл, прибавляют 20 мл воды, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. В мерную колбу вместимостью 100,0 мл помещают 10,0 мл полученного раствора, прибавляют 1,0 мл раствора внутреннего стандарта, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. Помещают 1,0 мл полученного раствора во флакон для парофазного анализа вместимостью 10 мл и герметично закрывают.

Испытуемый раствор. Около 0,1 г (точная навеска) испытуемой субстанции помещают в мерную колбу вместимостью 10 мл, растворяют в 5 мл воды, прибавляют 1,0 мл раствора внутреннего стандарта, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. Помещают 1,0 мл полученного раствора во флакон для парофазного анализа вместимостью 10 мл и герметично закрывают.

Хроматографические условия

Хроматографируют контрольный раствор, стандартный раствор и испытуемые растворы.

Содержание метанола в субстанции в процентах (X) вычисляют по формуле:

X = \frac{S_{1} \cdot A_{0} \cdot a_{0} \cdot 10 \cdot 10 \cdot 100\%}{S_{0} \cdot A_{1} \cdot a_{1} \cdot 100 \cdot 100} ,

где S1 — площадь пика метанола на хроматограмме испытуемого раствора;

S0 — площадь пика метанола на хроматограмме стандартного раствора;

A1 — площадь пика пропанола на хроматограмме испытуемого раствора;

A0 — площадь пика пропанола на хроматограмме стандартного раствора;

a1 — навеска испытуемой субстанции, г;

a0 — навеска метанола, взятая для приготовления стандартного раствора, г.

Сульфаты. От 32,0 до 35,0% в пересчете на безводное вещество. Около 0,250 г (точная навеска) субстанции растворяют в 100 мл воды и доводят значение pH до 11 аммиаком водным. Прибавляют 10,0 мл 0,1 М раствора бария хлорида и около 0,5 мг фталеинового пурпурного. Титруют 0,1 М раствором натрия эдетата, прибавив 50 мл спирта 96% при начале изменения окраски, до исчезновения фиолетово-синего окрашивания.

Параллельно проводят контрольный опыт.

1 мл 0,1 М раствора бария хлорида соответствует 9,606 мг сульфат-иона SO4.

Сульфатная зола. Не более 1,0% (ОФС «Сульфатная зола»). Для определения используют около 0,5 г (точная навеска) субстанции.

Вода. Не более 15,0% (ОФС «Определение воды»). Для определения используют 0,3 г (точная навеска) субстанции.

Остаточные органические растворители. В соответствии с требованиями ОФС «Остаточные органические растворители».

<*> Аномальная токсичность. Субстанция должна быть нетоксичной (ОФС «Аномальная токсичность»). Тест-доза — 0,5 мг активного вещества субстанции в 0,5 мл воды для инъекций на мышь, внутривенно. Срок наблюдения 48 ч.

<*> Пирогенность. Субстанция должна быть апирогенной (ОФС «Пирогенность»). Тест-доза — 10 мг гентамицина в 1 мл воды для инъекций на 1 кг массы кролика. Срок наблюдения — 48 ч.

<*> Бактериальные эндотоксины. Не более 0,71 ЕЭ на 1 мг активного вещества субстанции (ОФС «Бактериальные эндотоксины»).

<*> Контроль по показателям качества «Прозрачность раствора», «Цветность раствора», «Аномальная токсичность», «Пирогенность» и «Бактериальные эндотоксины» проводят в субстанции, предназначенной для производства лекарственных препаратов для парентерального применения.

Микробиологическая чистота. В соответствии с требованиями ОФС «Микробиологическая чистота».

Количественное определение. Определение проводят в соответствии с требованиями ОФС «Определение антимикробной активности антибиотиков методом диффузии в агар».

Хранение. В защищенном от света месте.