МУК 4.1.1473-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств десмедифама и фенмедифама в корнеплодах и ботве сахарной, столовой и кормовой свеклы методом капиллярной газожидкостной хроматографии

(утв. Минздравом России 24.06.2003)

24 июня 2003 года

4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ДЕСМЕДИФАМА И ФЕНМЕДИФАМА В КОРНЕПЛОДАХ И БОТВЕ САХАРНОЙ, СТОЛОВОЙ И КОРМОВОЙ СВЕКЛЫ МЕТОДОМ КАПИЛЛЯРНОЙ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

1. Методические указания подготовлены Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана (академик РАМН, проф. В.Н. Ракитский, проф. Т.В. Юдина) при участии Департамента госсанэпиднадзора Минздрава России (А.П. Веселов).

2. Методические указания рекомендованы к утверждению Комиссией по госсанэпиднормированию при Минздраве России.

3. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко 24 июня 2003 г.

4. Введены с 30 июня 2003 г.

5. Введены впервые.

1. ВВОДНАЯ ЧАСТЬ

Название препарата: Битал АМ, Синбетан Прогресс ОФ. Бифор Прогресс.

Фирма-производитель: ФМРус, РосАгроХим, АгроЭксперт групп.

Действующие вещества: десмедифам и фенмедифам.

1. Десмедифам (ISO).

3-этоксикарбониламинофенил фенилкарбамат (IUPAC).

Структурная формула (не приводится).

Эмпирическая формула: C H № O . 16 16 2 4

Молекулярная масса: 300,3.

Химически чистое вещество: бесцветные кристаллы. Температура плавления: 120 °С.

Растворимость (г/1000 мл) при 20 °С: в воде — 0,007, ацетоне — 400, метаноле — 180, этилацетате — 149, хлороформе — 80, дихлорметане — 17,8, бензоле — 1,6, гексане — 0,5.

2. Фенмедифам (ISO).

3-метоксикарбониламинофенил 3'метилкар-банилат (IUРАС).

Структурная формула (не приводится).

Эмпирическая формула: C H № O . 16 16 2 4

Молекулярная масса: 300,3.

Химически чистое вещество: бесцветные кристаллы. Температура плавления: 140 — 144 °С.

Растворимость (г/1000 мл) при 20 °С: в воде — 0,006, ацетоне — 200, метаноле — 50, этилацетате — 56,3, хлороформе — 20, дихлорметане — 16,7, бензоле — 2,5, гексане — 0,5.

Гигиенические нормативы: ВМДУ десмедифама в свекле сахарной, столовой и кормовой — 0,1 мг/кг; МДУ фенмедифама в свекле сахарной, столовой и кормовой — 0,2 мг/кг.

Область применения препарата: послевсходовый гербицид для борьбы с однолетними двудольными и некоторыми злаковыми сорными растениями на свекле.

2. МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДЕСМЕДИФАМА И ФЕНМЕДИФАМА В КОРНЕПЛОДАХ И БОТВЕ САХАРНОЙ, СТОЛОВОЙ И КОРМОВОЙ СВЕКЛЫ

2.1. Основные положения

2.1.1 Принцип метода.

Метод основан на извлечении остаточных количеств десмедифама и фенмедифама из анализируемого объекта ацетоном, проведении очистки экстракта перераспределением в системе растворителей, получении производных путем гидролитического расщепления десмедифама в анилин, а фенмедифама в метиланилин, их бромировании и газохроматографическом анализе с использованием капиллярной колонки и детектора электронного захвата (ДЭЗ).

2.1.2 Избирательность метода.

Метод специфичен в присутствии других применяемых пестицидов. Проведение очистки экстрактов, а также использование селективного детектора и капиллярной колонки позволяет устранять влияние на анализ коэкстрактивных веществ.

2.1.3 Метрологическая характеристика метода.

Метрологические параметры метода представлены в таблицах 1 и 2.

Метрологические параметры, р = 0,95, n = 6
Анализируемый объект	Предел обнаружения, мг/кг	Диапазон определяемых концентраций, мг/кг	Среднее значение определения, %	Стандартное отклонение, %	Доверительный интервал среднего результата, %
Корнеплоды	0,02	0,02 — 0,16	82,7	6,1	+/- 5,6
Ботва	0,02	0,02 — 0,16	85,3	4,7	+/- 4,3

Анализируемый объект	Внесено, мг/кг	Найдено, мг/кг	Стандартное отклонение, +/-	Полнота определения, %
Корнеплоды свеклы	0,020 0,040 0,080 0,160	0,015 0,032 0,068 0,141	0,0015 (7,3%) 0,0026 (6,4%) 0,0045 (5,6%) 0,0082 (5,1%)	77,0 80,8 85,0 88,2
Ботва свеклы	0,020 0,040 0,080 0,160	0,016 0,033 0,069 0,145	0,0011 (5,4%) 0,0019 (4,9%) 0,0036 (4,5%) 0,0064 (4,0%)	80,7 83,3 86,7 90,5

2.2. Реактивы, материалы

Аналитические стандарты десмедифама и фенмедифама.

Азот газообразный высокой чистоты, ТУ 301-07-25-89.

Ацетон, осч, ТУ 2633-004-11291058-94.

Вода дистиллированная и перегнанная над KMnO и щелочью. 4

Калий бромистый, ч, ГОСТ 4160-74.

Калий бромноватокислый, ч, ГОСТ 4457-74.

Калия гидроокись, чда, ГОСТ 24363-80.

Кислота серная, хч, ГОСТ 4204-77.

Натрий сернистокислый (сульфит), чда, ГОСТ 195-77.

Натрий сернокислый б/в (сульфат), чда, ГОСТ 4166-76.

Натрий хлористый, чда, ГОСТ 4233-77.

Этиленгликоль, чда, ГОСТ 10164-75.

Эфир этиловый (серный), ГОСТ ФС 42-3643-98.

Фильтры бумажные, красная лента, ТУ 2642-001-42624157-98.

Фильтры бумажные, белая лента, ТУ 2642-001-42624157-98.

2.3. Приборы, аппаратура, посуда

Газовый хроматограф с ДЭЗ и хроматографической колонкой капиллярной кварцевой длиной 15 м, внутренним диаметром 0,32 мм с неподвижной фазой SE-52 толщиной слоя 0,4 мкм.

Аппарат для встряхивания, ТУ 64-1-1081-73, или аналогичный.

Весы аналитические типа ВЛА-200, ГОСТ 34104-80.

Весы лабораторные типа ВЛКТ-500, ГОСТ 24104-80.

Воронки делительные емкостью 500 мл, ГОСТ 25336-82.

Воронки для фильтрования стеклянные, ГОСТ 25336-82.

Инструментарий для первичной подготовки проб к определению (нож, ножницы, шпатели, кюветы и др.).

Колбы-концентраторы емкостью 100, 250 мл, ГОСТ 25336-82.

Колбы плоскодонные емкостью 300 мл, ГОСТ 25336-82.

Колбы мерные со шлифом емкостью 25, 100 мл, ГОСТ 1770-74.

Микрошприц МШ-10, ТУ 2-833-106.

Насос водоструйный, ГОСТ 10696-75.

Приспособление для обжима колпачков на флаконах, ТУ 42-2-2442-73.

Ротационный вакуумный испаритель типа ИР-1 или аналогичный.

Пипетки мерные емкостью 1, 2, 5 и 10 мл, ГОСТ 20292-74.

Стаканы химические емкостью 500 мл, ГОСТ 25336-82.

Установка для перегонки растворителей при атмосферном давлении.

Установка для упаривания растворителей в токе азота.

Установка ультразвуковая «Серьга» УЗМ002 или аналогичная.

Флаконы стеклянные (типа пенициллиновых) емкостью 20,0 мл.

Шкаф сушильный, ТУ 64-1-1411-76.

Электроплитка, ГОСТ 14919-83.

2.4. Подготовка к определению

2.4.1 Очистка органических растворителей и воды.

Перед началом работы рекомендуется проверить чистоту применяемых органических растворителей. Для этого 100 мл растворителя упаривают в ротационном испарителе при температуре 40 °С до объема 1,0 мл и хроматографируют. При обнаружении мешающих определению примесей очистку растворителей производят в соответствии с общепринятыми методиками.

    В  обязательном  порядке проводят дополнительную очистку воды,
используемой  при  обработке  проб  к  проведению определения. Для

этого 150 мл (из расчета обработки 1 пробы) дистиллированной воды, перегнанной над KMnO и щелочью, помещают в делительную воронку 4 емкостью 500 мл. В воронку вносят 50 мл насыщенного водного раствора хлористого натрия, 1,0 мл 10% водного раствора гидроокиси

калия и  после  перемешивания - 50 мл этилового  эфира. Содержимое
воронки  встряхивают  в  течение 2-х минут. После разделения слоев
нижний  водно-солевой  слой  сливают в плоскодонную колбу емкостью
250  мл,  а  верхний  эфирный  слой  отбрасывают.  К водно-солевой
фракции, находящейся в  колбе, добавляют (до рН 3 - 4) ~ 1,5 мл 5%
водного  раствора  серной  кислоты.  Содержимое колбы перемешивают
встряхиванием,  переносят  в делительную воронку емкостью 500 мл и
добавляют  50 мл этилового эфира. Содержимое воронки встряхивают в
течение  2-х  минут.  После  разделения слоев нижний водно-солевой
слой  сливают  в  плоскодонную  колбу  емкостью  250 мл, а верхний
эфирный   слой   отбрасывают.   Очищенный   водно-солевой  раствор

используют при обработке пробы к проведению определения по п. 2.6.

2.4.2 Приготовление щелочного этиленгликоля.

В мерной колбе емкостью 25 мл растворяют 1,0 г гидроокиси калия в 1,0 мл дистиллированной воды и доводят объем до 25 мл этиленгликолем.

2.4.3 Приготовление стандартных растворов десмедифама и фенмедифама.

Основные растворы десмедифама и фенмедифама с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением в ацетоне 0,01 г каждого препарата в мерных колбах на 100 мл. Растворы хранят в холодильнике при 4 — 6 °С не более 3-х месяцев.

Смеси рабочих стандартных растворов десмедифама и фенмедифама с концентрациями 4,0, 2,0, 1,0 и 0,5 мкг/мл готовят во флаконах емкостью 20 мл (типа пенициллиновых) из основных стандартных растворов соответствующим последовательным разбавлением ацетоном. Ацетон упаривают в токе азота досуха и проводят гидролиз стандартных веществ с получением их бромпроизводных по п. 2.6.2.

Экстракты, приготовленные по п. 2.6.2 для построения калибровочного графика, хранят в холодильнике при 4 — 6 °С не более месяца.

2.4.4 Построение калибровочного графика.

Для построения калибровочного графика в инжектор хроматографа вводят по 1 мкл приготовленных по пп. 2.4.3 и 2.6.2 экстрактов, содержащих смеси стандартных растворов десмедифама и фенмедифама (в виде бромпроизводных) с концентрациями 0,5; 1,0; 2,0 и 4,0 мкг/мл. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений и находят среднее значение высоты (площади) хроматографического пика для каждой концентрации. Строят калибровочный график зависимости высоты (площади) хроматографического пика в мм (кв. мм) от концентрации десмедифама и фенмедифама в растворе в мкг/мл.

2.5. Отбор и хранение проб

Отбор проб для анализа проводят в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов», утвержденными 21.08.1979 № 2051-79.

Для длительного хранения пробы помещают в морозильную камеру с температурой -18 °С.

2.6. Проведение определения

2.6.1 Экстракция десмедифама и фенмедифама.

Аналитическую пробу корнеплодов или ботвы массой 25,0 +/- 0,1 г помещают в плоскодонную колбу емкостью 300 мл, добавляют 150 мл ацетона, слегка встряхивают и подвергают обработке ультразвуком в УЗ-бане два раза по 5 мин. Ацетоновый экстракт фильтруют через бумажный фильтр красная лента в колбу-концентратор емкостью 250 мл. Внутренние стенки колбы с пробой ополаскивают 20 мл ацетона и экстрагент фильтруют в колбу-концентратор.

При использовании аппарата для встряхивания в плоскодонную колбу с аналитической пробой массой 25,0 +/- 0,1 г вносят 150 мл ацетона и содержимое колбы встряхивают в течение 60 мин. После этого экстракт фильтруют через бумажный фильтр красная лента в колбу-концентратор емкостью 250 мл. Внутренние стенки колбы с пробой ополаскивают 20 мл ацетона и экстрагент фильтруют в колбу-концентратор.

Колбу-концентратор с объединенным экстрактом устанавливают в ротационный вакуумный испаритель и упаривают ацетон при температуре 40 °С до объема экстракта 20 — 30 мл. К остатку экстракта в колбе добавляют 200 мл водно-солевого раствора, приготовленного по п. 2.4.1. Содержимое колбы-концентратора фильтруют через бумажный фильтр белая лента в делительную воронку емкостью 500 мл. Затем в делительную воронку вносят 50 мл этилового эфира, содержимое воронки встряхивают в течение 2-х минут и после разделения слоев нижний водно-солевой слой сливают в плоскодонную колбу емкостью 250 мл, а верхний эфирный слой в колбу-концентратор емкостью 100 мл. Процедуру экстрагирования десмедифама и фенмедифама из водно-солевого раствора повторяют с использованием 25 мл этилового эфира.

Колбу-концентратор с объединенным эфирным экстрактом устанавливают в ротационный испаритель и упаривают этиловый эфир при температуре 40 °С до объема экстракта 10 — 15 мл. Остаток экстракта количественно переносят во флакон (типа пенициллинового) емкостью 20 мл и упаривают этиловый эфир в токе азота.

2.6.2. Проведение гидролиза и бромирования производных десмедифама и фенмедифама.

К остатку во флаконе прибавляют 1 мл щелочного этиленгликоля, приготовленного по п. 2.4.2, флакон герметизируют и термостатируют при 150 °С в течение 30 мин. После охлаждения во флакон последовательно добавляют 10 мл 1н водного раствора серной кислоты, 0,25 мл 20% раствора (в 1н водном растворе серной кислоты) бромистого калия и 0,25 мл 1% водного раствора бромноватокислого калия (хранят в темноте). Содержимое флакона перемешивают, флакон закрывают пробкой и выдерживают в темноте 15 мин. После этого во флакон последовательно добавляют небольшое количество («на кончике шпателя») порошкообразного сульфита натрия до обесцвечивания содержимого, 1,0 мл 50% водного раствора гидрооксида калия и после перемешивания — 2,5 мл толуола. Флакон закрывают пробкой, интенсивно встряхивают в руке и оставляют в покое на 10 — 15 минут до разделения слоев содержимого флакона. Аликвотную часть верхнего толуольного слоя хроматографируют по п. 2.7.

В том случае, если через 10 — 15 минут верхний толуольный слой остается мутным, аликвотную его часть (1,5 — 2,0 мл) пропускают через слой (толщина 0,3 — 0,5 см) безводного сульфата натрия и затем анализируют на содержание десмедифама и фенмедифама по п. 2.7.

2.7. Условия хроматографирования

Газовый хроматограф с ДЭЗ.

Колонка хроматографическая капиллярная длиной 15 м, внутренним диаметром 0,32 мм с неподвижной фазой SE-52 толщиной слоя 0,4 мкм.

Температура колонки с программированием от 80 °С (3 мин.) до 280 °С (15 мин.) со скоростью 10 °С/мин.

Температура испарителя: 250 °С.

Температура детектора: 300 °С.

Расход газов: газа-носителя (азот в/ч) — 2,0 куб. см/мин., дополнительного газа (азот в/ч) к ДЭЗ — 40 куб. см/мин.

Объем хроматографируемой пробы: 1 мкл.

Время удерживания: десмедифама (в виде бромпроизводного) — 14,3 +/- 0,1 мин., фенмедифама (в виде бромпроизводного) — 15,9 +/- 0,1 мин.

Линейный диапазон детектирования (по бромпроизводным): 0,25 — 8,0 нг.

2.8. Обработка результатов анализа

Содержание десмедифама или фенмедифама рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:

                          Н  х А х V
                           1

Х = ----------, Н х m 0

где:

    Х  - содержание десмедифама или фенмедифама в пробе, мг/кг;
    Н  -  высота  (площадь)  пика анализируемого вещества, мм (кв.

 1

мм); Н — высота (площадь) пика стандартного вещества, мм (кв. мм); 0 А — концентрация смеси стандартных растворов десмедифама и фенмедифама, мкг/мл; V — объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, мл; m — масса (г) аналитической пробы.

3. КОНТРОЛЬ ПОГРЕШНОСТИ ИЗМЕРЕНИЙ

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости результатов измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95 «Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа».

4. ТРЕБОВАНИЯ ТЕХНИКИ БЕЗОПАСНОСТИ

Необходимо соблюдать общепринятые правила техники безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами и сжатыми газами, а также требования, изложенные в документации к приборам.

5. РАЗРАБОТЧИКИ

П.А. Тарарин, Т.А. Маханькова, Л.В. Григорьева (ВНИИ защиты растений).

---