ФС.2.5.0118. Фармакопейная статья. Леспедецы двухцветной побеги

(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 13.03.2024 № 120)

(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XV издание»)

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Леспедецы двухцветной побеги	ФС.2.5.0118
Lespedezae bicoloris cormi	Взамен ВФС 42-1942-89

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Собранные в фазу цветения и высушенные побеги дикорастущего многолетнего кустарника леспедецы двухцветной — Lespedeza bicolor Turcz., сем. бобовых — Fabaceae.

Содержит не менее 0,25% суммы флавоноидов в пересчете на лютеолин-7-глюкозид в сухом сырье.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

Внешние признаки. Определение проводят в соответствии с ОФС «Травы».

Цельное сырье. Верхушки побегов длиной до 30 см, цельные или частично измельченные листья, бутоны, цветки и незрелые плоды. Стебли округлые, с неясными ребрами, опушенные прижатыми белыми волосками или голые. Листья длинночерешковые, тройчатые, с мелкими шиловидными прилистниками. Листочки овальные, эллиптические или яйцевидные с коротким шипиком, иногда с выемкой на верхушке, цельнокрайние, длиной до 7 см, шириной до 5 см. Соцветие — метелка из раскидистых негустых кистей. Цветки мотылькового типа, цветоносы опушенные. Чашечка короткоопушенная, длиной до 4 мм, с 4 долями. Венчик длиной около 10 мм. Плод — боб, длиной до 10 мм, плоский, односемянный, с сетью выступающих жилок.

Цвет стеблей желтовато-зеленый, листьев — сверху зеленый, снизу серовато-зеленый, венчик розовато-фиолетовый с темно-фиолетовым концом. Запах слабый, характерный.

Измельченное сырье. Смесь кусочков листьев, стеблей, соцветий, незрелых плодов различной формы, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 3 мм.

Цвет желтовато-зеленый, серовато-зеленый с розовато-фиолетовыми или темно-фиолетовыми вкраплениями. Запах слабый, характерный.

Микроскопические признаки. Определение проводят в соответствии с ОФС «Микроскопический и микрохимический анализ лекарственного растительного сырья и лекарственных средств растительного происхождения».

Цельное сырье, измельченное сырье. При рассмотрении микропрепарата листа с поверхности должны быть видны многоугольные клетки верхнего эпидермиса с прямыми или слабоизвилистыми стенками, нижнего — с извилистыми стенками. Устьица овальные, окружены 4 — 5 (реже 2 — 3) клетками эпидермиса (аномоцитный, реже парацитный тип), преобладают на нижней стороне листа. Волоски немногочисленные, преимущественно по жилкам, в большем числе на нижней стороне. Преобладают простые двухклеточные волоски с гладкой поверхностью, состоящие из округлой базальной клетки и верхней длинной терминальной клетки с утолщенными стенками и широкой полостью. Редко встречаются простые многоклеточные волоски с удлиненными или укороченными клетками, иногда с зеленовато-коричневым содержимым, и головчатые с одноклеточной головкой на одно-трехклеточной ножке. Клетки эпидермиса в местах прикрепления двухклеточных волосков расположены радиально и образуют розетку. Заметны валики — места прикрепления опавших волосков. Главная и крупные боковые жилки имеют кристаллоносную обкладку из призматических кристаллов оксалата кальция и тяжи механических волокон. Губчатая паренхима листа представлена аэренхимой. В губчатой паренхиме листа встречаются секреторные ходы с желто-коричневым содержимым.

Рисунок 1 — Леспедецы двухцветной побеги

1 — верхний эпидермис листа с простыми волосками (40x); 2 — нижний эпидермис листа с устьицами аномоцитного типа (200x); 3 — нижний эпидермис листа с простым волоском (200x); 4 — место прикрепления волоска (200x); 5 — кристаллоносная обкладка и кристаллический песок вдоль жилки листа (40x); 6 — призматические кристаллы оксалата кальция (200x); 7 — секреторные ходы (200x)

Определение основных групп биологически активных веществ

Тонкослойная хроматография. Определение проводят методом ТСХ (ОФС «Тонкослойная хроматография»).

Пластинка. ТСХ пластинка со слоем силикагеля.

Подвижная фаза (ПФ). Этилацетат — уксусная кислота ледяная — вода 10:2:2.

Испытуемый раствор. Аналитическую пробу сырья измельчают до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 2 мм. В коническую колбу со шлифом вместимостью 100 мл помещают 1,0 г измельченного сырья, прибавляют 10 мл спирта 70% и настаивают в течение 24 ч, после чего фильтруют через беззольный фильтр. Фильтрат упаривают на водяной бане до объема около 1 мл.

Раствор лютеолина-7-глюкозида. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 10 мг лютеолина-7-глюкозида, высушенного до постоянной массы, растворяют в спирте 70% и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Реактив для детектирования. Алюминия хлорида раствор 5% в спирте 70%.

На линию старта пластинки наносят 20 мкл испытуемого раствора и 10 мкл раствора лютеолина-7-глюкозида. Пластинку с нанесенными пробами сушат на воздухе, помещают в предварительно насыщенную в течение не менее 1 ч камеру с ПФ и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт ПФ пройдет около 80 — 90% длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат до удаления следов растворителей. Хроматограмму опрыскивают реактивом для детектирования, нагревают при температуре 100 — 105 °C в течение 5 мин и просматривают в УФ-свете при длине волны 365 нм.

Результат

На хроматограмме раствора лютеолина-7-глюкозида должна обнаруживаться зона адсорбции с флуоресценцией желто-коричневого цвета.

На хроматограмме испытуемого раствора должны обнаруживаться две зоны адсорбции с флуоресценцией желтого цвета, выше две зоны адсорбции с флуоресценцией желтовато-коричневого цвета, над ними зона адсорбции с флуоресценцией желтовато-коричневого цвета на уровне зоны адсорбции лютеолина-7-глюкозида; допускается обнаружение других зон адсорбции.

ИСПЫТАНИЯ

Влажность. Не более 11,0% (ОФС «Определение влажности лекарственного растительного сырья и лекарственных средств растительного происхождения»).

Зола общая. Не более 7,0% (ОФС «Зола общая»).

Измельченность сырья. Определение проводят в соответствии с ОФС «Определение подлинности, измельченности и содержания примесей в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Измельченное сырье: частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями размером 3 мм — не более 20%.

Допустимые примеси. Определение проводят в соответствии с ОФС «Определение подлинности, измельченности и содержания примесей в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Стебли толще 3 мм. Цельное сырье — не более 10%.

Органическая примесь. Не более 1,5%.

Минеральная примесь. Не более 0,5%.

Тяжелые металлы и мышьяк. В соответствии с ОФС «Определение содержания тяжелых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Радионуклиды. В соответствии с ОФС «Определение содержания радионуклидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Зараженность вредителями запасов. В соответствии с ОФС «Определение степени зараженности лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов вредителями запасов».

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Определение проводят методом спектрофотометрии (ОФС «Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях»).

Приготовление хроматографической колонки. В стеклянную колонку диаметром 2 см и высотой 50 см с пористым фильтром № 2 помещают ватный тампон, пропитанный водой, после чего помещают 3,0 г полиамида 6 порошка. Промывают колонку водой, оставляя слой воды высотой 3 см.

Растворитель. Вода — 1,4-диоксан 1:1.

Испытуемый раствор. Аналитическую пробу сырья измельчают до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 2 мм. В колбу вместимостью 500 мл помещают 3,0 г (точная навеска) измельченного сырья, прибавляют 300 мл спирта 96% и экстрагируют при постоянном перемешивании с помощью магнитной мешалки в течение 3 ч. Полученное извлечение фильтруют через беззольный фильтр в колбу вместимостью 500 мл, отбрасывая первые 5 мл. В круглодонную колбу вместимостью 50 мл переносят 10 мл фильтрата, прибавляют 10 мл натрия хлорида раствора 5%, упаривают до 1/4 первоначального объема на водяной бане при температуре 80 °C под вакуумом и охлаждают. Охлажденный остаток количественно переносят на колонку с полиамидным сорбентом, фильтруя его через воронку с небольшим ватным тампоном. Остаток упаренного извлечения смывают со стенок колбы 20 мл воды, предназначенной для промывания колонки. Колонку промывают 80 мл воды со скоростью элюирования не более 4 мл/мин. Водный элюат отбрасывают. По окончании промывки колонки водой уровень жидкости не должен превышать уровня ватного тампона. Затем колонку промывают с той же скоростью 100 мл спирта 70%, отбрасывая первые 10 мл элюата, последующий элюат собирают в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 1 мл хлористоводородной кислоты концентрированной и доводят объем элюата спиртом 70% до метки.

Раствор стандартного образца лютеолина-7-глюкозида. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 0,04 г (точная навеска) фармакопейного стандартного образца лютеолина-7-глюкозида, растворяют в растворителе и доводят объем раствора тем же растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл раствора стандартного образца лютеолина-7-глюкозида, прибавляют 1 мл хлористоводородной кислоты концентрированной и доводят объем раствора спиртом 70% до метки.

Раствор сравнения. Промывают подготовленную колонку с полиамида 6 порошком 100 мл воды со скоростью не более 4 мл/мин, водный элюат отбрасывают. Колонку промывают 100 мл спирта 70%, отбрасывая первые 10 мл, а последующий элюат собирают в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 1 мл хлористоводородной кислоты концентрированной и доводят объем раствора спиртом 70% до метки.

Измеряют оптическую плотность испытуемого раствора и раствора стандартного образца лютеолина-7-глюкозида на спектрофотометре при длине волны 354 нм в кювете с толщиной слоя 1 см относительно раствора сравнения.

Содержание суммы флавоноидов в пересчете на лютеолин-7-глюкозид в сухом сырье в процентах (X) вычисляют по формуле:

X = \frac{A \cdot a_{0} \cdot P \cdot 300 \cdot 100 \cdot 1 \cdot 100 \cdot 100}{A_{0} \cdot a \cdot 50 \cdot 10 \cdot 100 \cdot 100 \cdot (100 - W)} ,

где A — оптическая плотность испытуемого раствора;

A0 — оптическая плотность раствора стандартного образца лютеолина-7-глюкозида;

a — навеска сырья, г;

a0 — навеска фармакопейного стандартного образца лютеолина-7-глюкозида, г;

P — содержание лютеолин-7-глюкозида в фармакопейном стандартном образце лютеолин-7-глюкозида, %;

W — влажность сырья, %.

УПАКОВКА, МАРКИРОВКА И ПЕРЕВОЗКА

В соответствии с ОФС «Упаковка, маркировка и перевозка лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов».

ХРАНЕНИЕ

В соответствии с ОФС «Хранение лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов».

---