ФС.2.5.0114. Фармакопейная статья. Диоскореи ниппонской корневища с корнями

(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 13.03.2024 № 120)

(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XV издание»)

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Диоскореи ниппонской корневища с корнями	ФС.2.5.0114
Dioscoreae nipponicae rhizomata cum radicibus	Взамен ФС 42-1521-80

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Собранные в течение всего вегетационного периода (начиная с конца апреля и до конца ноября), тщательно очищенные от земли, освобожденные от остатков стеблей, разрезанные на куски и высушенные корневища с корнями многолетнего дикорастущего или культивируемого травянистого растения диоскореи ниппонской — Dioscorea nipponica Makino, сем. диоскорейных — Dioscoreaceae.

Содержит не менее 1,0% диосгенина в сухом сырье.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

Внешние признаки. Определение проводят в соответствии с ОФС «Корни, корневища, луковицы, клубни, клубнелуковицы».

Цельное сырье. Куски корневищ длиной до 30 см и толщиной до 2 см, простые, цилиндрические, внутри сплошные, слегка изогнутые или перекрученные. Поверхность слабо продольно-морщинистая, с четко видными остатками отмерших стеблей, покрыта тонким слоем пробки, которая обычно легко отслаивается. От корневищ отходят немногочисленные упругие тонкие корни длиной до 40 см и толщиной около 1 мм. Излом корневищ ровный, белого или светло-желтого цвета. Корневища и корни светло-коричневые или желтовато-коричневые, после отслаивания пробки желтовато-коричневые. Запах слабый, характерный.

Измельченное сырье. Смесь кусочков корневищ и корней различной формы, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 7 мм. Цвет от белого до светло-желтого или светло-коричневого. Запах слабый, характерный.

Микроскопические признаки. Определение проводят в соответствии с ОФС «Микроскопический и микрохимический анализ лекарственного растительного сырья и лекарственных средств растительного происхождения».

Цельное сырье. При рассмотрении микропрепаратов поперечного среза корневища должна быть видна пробка, под ней — узкая полоска коры, состоящая из мелких, тангентально-вытянутых клеток с неодревесневшими оболочками. В крупных клетках коры находятся рафиды кальция оксалата, ориентированные вдоль корневища, одиночные кристаллы кальция оксалата. Эндодерма выражена неясно. Запасающая ткань представлена многоугольными, плотно прилегающими друг к другу клетками паренхимы, состоящими из многогранных или округлых клеток с утолщенными и ямчатыми стенками и содержащими в большом количестве зерна крахмала различной формы (простой, неправильной, яйцевидной, продолговатой, неправильной треугольной) и небольшие капли жирного масла. Оболочки клеток одревесневшие с многочисленными окаймленными крупными порами. В центральном цилиндре расположены закрытые коллатеральные пучки, по периферии мелкие, слегка радиально вытянутые, ближе к центру крупные, почти округлые в очертании. Стенки сосудов плотные, содержат многочисленные окаймленные поры. В ксилеме паренхима почти полностью отсутствует.

Измельченное сырье. При рассмотрении «давленых» препаратов должны быть видны: фрагменты пробки, представленные многогранными клетками; фрагменты паренхимы, состоящие из многогранных или округлых клеток с утолщенными и ямчатыми стенками; клетки, содержащие рафиды кальция оксалата и одиночные кристаллы кальция оксалата; сосуды с многочисленными мелкими, плотными и овальными порами; клетки паренхимы, содержащие в большом количестве зерна крахмала различной формы (простой, неправильной, яйцевидной, продолговатой, неправильной треугольной), имеющие эксцентрические центры наслоения и трещинки.

Рисунок 1 — Диоскореи ниппонской корневища с корнями

1 — поперечный срез корневищ с корнями (63x): а — пробка, б — кора, в — рафиды кальция оксалата, г — запасающая паренхима; 2 — проводящая система (100x): а — ксилема, б — флоэма; 3 — сосуды с многочисленными окаймленными порами (400x); 4 — рафиды оксалата кальция (400x); 5 — зерна крахмала различной формы (400x)

Определение основных групп биологически активных веществ

1. Тонкослойная хроматография. Определение проводят методом ТСХ (ОФС «Тонкослойная хроматография»).

Пластинка. ВЭТСХ пластинка со слоем силикагеля.

Подвижная фаза (ПФ). Вода — метанол — метиленхлорид 10:50:64.

Испытуемый раствор. В коническую колбу с пробкой вместимостью 50 мл помещают 0,5 г сырья, измельченного до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,5 мм, прибавляют 5 мл метанола и выдерживают на ультразвуковой бане в течение 10 мин, центрифугируют и используют надосадочную жидкость.

Стандартный раствор. Растворяют в 1 мл метанола 1 мг эсцина и 1 мг глюкозы.

Реактив для детектирования. Анисового альдегида раствор уксуснокислый в этаноле.

На линию старта пластинки полосами длиной 8 мм и шириной не более 2 мм наносят по 8 мкл испытуемого раствора и стандартного раствора. Пластинку с нанесенными пробами сушат на воздухе, помещают в камеру, предварительно насыщенную ПФ в течение 1 ч, и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт ПФ пройдет около 80 — 90% длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат до удаления следов растворителей. Затем пластинку опрыскивают реактивом для детектирования, сушат в сушильном шкафу при 100 — 105 °C в течение 3 мин и просматривают при дневном свете.

Результат. На хроматограмме стандартного раствора должны обнаруживаться в средней трети зона адсорбции желтого или коричневого цвета (глюкоза) и над ней зона адсорбции фиолетового цвета (эсцин).

На хроматограмме испытуемого раствора должно обнаруживаться: в нижней трети зона адсорбции желтого цвета; в средней трети зона адсорбции светло-коричневого цвета ниже зоны адсорбции глюкозы, на уровне зоны адсорбции глюкозы зона адсорбции желто-коричневого цвета, между зонами адсорбции глюкозы и эсцина 2 зоны адсорбции зеленого цвета; в верхней трети 3 зоны адсорбции желтовато-зеленого или зеленого цвета; допускается обнаружение других зон адсорбции.

2. ВЭЖХ. Время удерживания основного пика на хроматограмме испытуемого раствора должно соответствовать времени удерживания пика диосгенина на хроматограмме раствора стандартного образца диосгенина (раздел «Количественное определение»).

ИСПЫТАНИЯ

Влажность. Не более 12,0% (ОФС «Определение влажности лекарственного растительного сырья и лекарственных средств растительного происхождения»).

Зола общая. Не более 5,0% (ОФС «Зола общая»).

Зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте. Не более 1,0% (ОФС «Зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте»).

Измельченность. Определение проводят в соответствии с ОФС «Определение подлинности, измельченности и содержания примесей в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Цельное сырье: частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,5 мм, — не более 5%.

Измельченное сырье: частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями размером 7 мм, — не более 5%, частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,5 мм, — не более 5%.

Допустимые примеси. Определение проводят в соответствии с ОФС «Определение подлинности, измельченности и содержания примесей в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Отшелушившейся пробки и обломков мелких корней. Цельное сырье: не более 1,5%.

Органическая примесь. Не более 1,5%.

Минеральная примесь. Не более 0,5%.

Тяжелые металлы и мышьяк. В соответствии с ОФС «Определение содержания тяжелых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Радионуклиды. В соответствии с ОФС «Определение содержания радионуклидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Зараженность вредителями запасов. Испытание проводят в соответствии с ОФС «Определение степени зараженности лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов вредителями запасов».

Остаточные количества пестицидов. В соответствии с ОФС «Определение содержания остаточных пестицидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

Подвижная фаза (ПФ). Вода — ацетонитрил 150:850.

Испытуемый раствор. Аналитическую пробу сырья измельчают до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 3 мм. В круглодонную колбу вместимостью 100 мл помещают 2,0 г (точная навеска) измельченного сырья, прибавляют 40 мл смеси серная кислота — вода 15:85, нагревают на водяной бане с обратным холодильником в течение 3 ч, затем охлаждают и фильтруют. Сырье на фильтре промывают водой до нейтральной реакции среды. Фильтр с сырьем переносят в колбу вместимостью 250 мл, прибавляют 80 мл метанола, обрабатывают на ультразвуковой бане в течение 30 мин и фильтруют в мерную колбу вместимостью 100 мл. Фильтр промывают 20 мл метанола, собирая фильтрат в ту же мерную колбу, доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Раствор стандартного образца диосгенина. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 0,005 г (точная навеска) фармакопейного стандартного образца диосгенина, растворяют в 20 мл метанола, доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 2 мг фармакопейного стандартного образца (25R)-спирост-5-ен-3-он [20817-62-3], растворяют в растворе стандартного образца диосгенина, доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Хроматографические условия

Колонка	150 x 4,6 мм, силикагель октадецилсилильный эндкепированный для хроматографии, 5 мкм;
Скорость потока	1,5 мл/мин;
Детектор	спектрофотометрический, 205 нм;
Объем пробы	5 мкл.

Хроматографируют раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы, раствор стандартного образца диосгенина и испытуемый раствор.

Относительное время удерживания соединений. Диосгенин — 1 (около 8 мин); (25R)-спирост-5-ен-3-он — около 1,25.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы разрешение (RS) между пиками диосгенина и (25R)-спирост-5-ен-3-она должно быть не менее 1,9.

Содержание диосгенина в сухом сырье в процентах (X) вычисляют по формуле:

X = \frac{S_{1} \cdot a_{0} \cdot 100 \cdot P \cdot 100}{S_{0} \cdot a_{1} \cdot 25 \cdot (100 - W)} ,

где S1 — площадь пика диосгенина на хроматограмме испытуемого раствора;

S0 — площадь пика диосгенина на хроматограмме раствора стандартного образца диосгенина;

a1 — навеска сырья, г;

a0 — навеска фармакопейного стандартного образца диосгенина, г;

P — содержание диосгенина в фармакопейном стандартном образце диосгенина, %;

W — влажность сырья, %.

УПАКОВКА, МАРКИРОВКА И ПЕРЕВОЗКА

В соответствии с ОФС «Упаковка, маркировка и перевозка лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов».

ХРАНЕНИЕ

В соответствии с ОФС «Хранение лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов».

---