ФС.2.5.0112. Фармакопейная статья. Амми зубной плоды

(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 13.03.2024 № 120)

(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XV издание»)

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Амми зубной плоды	ФС.2.5.0112
Ammi visnagae fructus	Взамен ФС 42-2098-83

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Собранные в период массового созревания и высушенные плоды культивируемого, двулетнего растения амми зубной — Ammi visnaga L., сем. сельдерейных (зонтичных) — Apiaceae (Umbelliferae).

Содержит не менее 0,8% суммы фурокумаринов в пересчете на келлин в сухом сырье.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

Внешние признаки. Определение проводят в соответствии с ОФС «Плоды».

Цельное сырье. Плод — вислоплодник яйцевидной формы, голый, гладкий, распадающийся на два полуплодика (мерикарпия), с брюшной стороны плоских, со спинной — выпуклых, с одного конца заостренных, с пятью продольными нитевидными ребрами. Длина зрелого полуплодика около 2 мм, толщина — около 1 мм. Цвет зрелых плодов светло-коричневый или коричневый, ребра более светлые, цвет недозрелых плодов зеленоватый.

Запах слабый, характерный.

Микроскопические признаки. Цельное сырье. На поперечном срезе зрелый полуплодик имеет округло-пятиугольную форму с пятью ребрами. На выпуклой стороне полуплодика видны 5 крупных секреторных каналов, расположенных в ребрах под проводящими пучками, 4 ложбиночных мелких канала, на плоской стороне — 2 мелких канала. Реберные каналы с крупной овальной полостью и 12 — 14 секреторными, частично спавшимися клетками. Ложбиночные каналы снаружи окружены веерообразно расположенными клетками. На границе с эндокарпием расположен ряд клеток темно-коричневого цвета с неравномерно утолщенной внутренней оболочкой и крупными порами, благодаря чему они имеют зубчатый вид. Клетки эндосперма с толстыми стенками заполнены алейроновыми зернами, каплями жирного масла и мельчайшими друзами оксалата кальция.

Незрелый плод на поперечном разрезе имеет почти пятиугольную форму. В реберных и ложбиночных каналах хорошо видны секреторные клетки, окружающие полость. Наружная часть мезофилла занята хлоренхимой, внутренняя — крахмалоносной паренхимой.

Зрелые плоды амми зубной отличаются от амми большой плодов наличием реберных секреторных каналов, отсутствием друз в экзокарпии, более мелкими ложбиночными каналами, темно-коричневой окраской семенной оболочки и наличием «зубчатых клеток» на границе с эндокарпием. У незрелых плодов два последних признака отсутствуют.

Рисунок 1 — Амми зубной плоды

1 — поперечный срез плода; 2 — фрагмент поперечного среза: а — эпидермис, б — паренхима, в — секреторный каналец, г — проводящий пучок, д — утолщенные клетки, е — внутренний эпидермис околоплодника, ж — семенная кожура, з — эндосперм

Определение основных групп биологически активных веществ

Тонкослойная хроматография. Определение проводят методом ТСХ (ОФС «Тонкослойная хроматография»).

Пластинка. ТСХ пластинка со слоем силикагеля F254.

Подвижная фаза (ПФ). Этилацетат — спирт 96% 9:1.

Испытуемый раствор. Аналитическую пробу сырья измельчают до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 1 мм.

К 0,5 г сырья, измельченного до отсутствия цельных плодов, прибавляют 10,0 мл спирта 60%, экстрагируют с использованием механического шейкера в течение 30 мин. Полученное извлечение фильтруют через беззольный фильтр, затем упаривают на водяной бане досуха. Сухой остаток растворяют в 5,0 мл спирта 60%.

Раствор стандартного образца келлина. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 0,05 мг стандартного образца келлина, растворяют в спирте 60% и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

На линию старта хроматографической пластинки со слоем силикагеля с флуоресцентным индикатором наносят 20 мкл испытуемого раствора и 10 мкл раствора стандартного образца келлина. Пластинку с нанесенными пробами помещают в хроматографическую камеру, предварительно насыщенную в течение не менее 1 ч смесью растворителей и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт растворителей пройдет 80 — 90% длины пластинки от линии старта, пластинку вынимают, сушат до удаления следов растворителей и просматривают в УФ-свете при длине волны 254 нм.

Результат. На хроматограмме раствора стандартного образца келлина должна обнаруживаться зона адсорбции фиолетового цвета.

На хроматограмме испытуемого раствора должны обнаруживаться зоны адсорбции выше и ниже зоны адсорбции стандартного образца келлина фиолетового цвета (фурокумарины).

Затем хроматограмму просматривают в УФ-свете при длине волны 365 нм.

На хроматограмме раствора стандартного образца келлина должна обнаруживаться зона адсорбции с флуоресценцией серовато-оранжевого цвета.

На хроматограмме испытуемого раствора должны обнаруживаться: зона адсорбции с флуоресценцией серовато-оранжевого цвета на уровне зоны адсорбции стандартного образца келлина, зоны адсорбции с флуоресценцией яркого светло-голубого и голубого цвета; допускается обнаружение других зон адсорбции.

2. Качественная реакция

Помещают 0,5 г сырья, измельченного до отсутствия цельных плодов в пробирку, прибавляют 4,0 мл метанола, энергично встряхивают в течение 1 мин и фильтруют. Затем к фильтрату прибавляют 0,2 мл серной кислоты концентрированной; должно наблюдаться желтое окрашивание (в случае наличия плодов амми зубной может наблюдаться только мутное зеленовато-коричневое окрашивание).

ИСПЫТАНИЯ

Влажность. Не более 12,0% (ОФС «Определение влажности лекарственного растительного сырья и лекарственных средств растительного происхождения»).

Зола общая. Не более 10,0% (ОФС «Зола общая»).

Зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте. Не более 6,0% (ОФС «Зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте»).

Допустимые примеси. Определение проводят в соответствии с ОФС «Определение подлинности, измельченности и содержания примесей в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Органическая примесь. Не более 2,0%.

Минеральная примесь. Не более 1,5%.

Частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,2 мм — не более 1,0%.

Тяжелые металлы и мышьяк. В соответствии с ОФС «Определение содержания тяжелых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Радионуклиды. В соответствии с ОФС «Определение содержания радионуклидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Остаточные количества пестицидов. В соответствии с ОФС «Определение содержания остаточных пестицидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Зараженность вредителями запасов. Испытание проводят в соответствии с ОФС «Определение степени зараженности лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов вредителями запасов».

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Определение проводят методом спектрофотометрии (ОФС «Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях»).

Испытуемый раствор. Аналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,2 мм. Помещают 0,25 г сырья (точная навеска) в колбу вместимостью 250 мл, прибавляют 50 мл воды и кипятят с обратным холодильником в течение 30 мин. К кипящей смеси прибавляют 2,0 мл свинца(II) ацетата раствора 10% и продолжают кипятить еще 3 мин. Горячую смесь фильтруют на воронке Бюхнера под вакуумом. Колбу и сырье на фильтре промывают трижды по 30 мл кипящей воды. Фильтрат количественно переносят в стакан вместимостью 250 мл, прибавляют 1 г натрия дигидрофосфата безводного и кипятят еще 3 мин. Горячее извлечение фильтруют непосредственно в делительную воронку. Стакан и фильтр промывают трижды по 30 мл кипящей воды и охлаждают до комнатной температуры. Водное извлечение встряхивают с хлороформом 4 раза по 25 мл. Объединенные хлороформные извлечения промывают 5 мл воды, отделяя воду, фильтруют в колбу вместимостью 200 мл через беззольный фильтр, содержащий 2 г натрия сульфата безводного, предварительно смоченного хлороформом. Фильтр промывают трижды по 10 мл хлороформа, собирая фильтрат в ту же колбу. Хлороформ отгоняют на водяной бане досуха. К сухому остатку прибавляют 80 мл серной кислоты раствора 5 М, растворяют его при осторожном нагревании, затем раствор охлаждают. Раствор количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, объем раствора доводят водой до метки, перемешивают и оставляют на 5 — 10 мин. Небольшую часть раствора фильтруют через стеклянный фильтр ПОР 40.

Раствор стандартного образца келлина. В мерную колбу вместимостью 500 мл помещают 22 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца келлина, растворяют в серной кислоты растворе 5 М, объем раствора доводят тем же растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 20,0 мл полученного раствора, прибавляют 30 мл серной кислоты раствора 5 М. Растворы используют свежеприготовленными.

Измеряют оптическую плотность испытуемого раствора на спектрофотометре при длине волны 465 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм относительно раствора сравнения. В качестве раствора сравнения применяют воду. Параллельно измеряют оптическую плотность раствора стандартного образца келлина в тех же условиях.

Содержание суммы фурокумаринов в пересчете на келлин в абсолютно сухом сырье в процентах (X) вычисляют по формуле:

X = \frac{A \cdot a_{0} \cdot 20 \cdot 100 \cdot 100}{A_{0} \cdot 500 \cdot 50 \cdot a \cdot (100 - W)} ,

где A — оптическая плотность испытуемого раствора;

A0 — оптическая плотность раствора фармакопейного стандартного образца келлина;

a — навеска сырья, г;

a0 — навеска фармакопейного стандартного образца ксантотоксина, г;

W — влажность сырья, %.

УПАКОВКА, МАРКИРОВКА И ПЕРЕВОЗКА

В соответствии с ОФС «Упаковка, маркировка и перевозка лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов».

ХРАНЕНИЕ

В соответствии с ОФС «Хранение лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов».

---