ФС.2.1.0515. Фармакопейная статья. Натамицин
(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 № 377)
(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XV издание»)
Примечание
Текст документа приведен в соответствии с публикацией на сайте https://minzdrav.gov.ru/ по состоянию на 22.08.2023. В соответствии с Приказом Минздрава России от 20.07.2023 № 377 данный документ введен в действие с 01.09.2023.
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
| Натамицин | ФС.2.1.0515 |
|---|---|
| Натамицин | |
| Natamycinum | Вводится впервые |
 | |
| C33H47NO13 [7681-93-8] | М.м. 665,73 |
(1R,3S,5R,7R,8E,12R,14E,16E,18E,20E,22R,24S,25R,26S)-22-[(3-Амино-3,6-дидезокси- \beta -D-маннопиранозил)окси]-1,3,26-тригидрокси-12-метил-10-оксо-6,11,28-триоксатрицикло[22.3.1.05,7]октакоза-8,14,16,18,20-пентаен-25-карбоновая кислота.
Содержит не менее 90,0% и не более 102,0% натамицина C33H47NO13 в пересчете на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество.
Описание. От белого до белого с желтоватым оттенком цвета кристаллический порошок.
Растворимость. Растворим в диметилформамиде, растворим или мало растворим в уксусной кислоте ледяной, мало растворим в метаноле, практически нерастворим в воде.
1. ВЭЖХ. Время удерживания основного пика на хроматограмме испытуемого раствора должно соответствовать времени удерживания пика натамицина на хроматограмме раствора стандартного образца натамицина (раздел «Количественное определение»).
2. Спектрофотометрия (ОФС «Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях»).
Растворитель. Уксусная кислота ледяная — метанол 1:1000.
Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 200 мл помещают 50 мг субстанции и прибавляют 5 мл воды. Прибавляют 100 мл растворителя, встряхивают в темноте до растворения и доводят объем растворителем до метки. В мерную колбу вместимость 50 мл помещают 1 мл полученного раствора и доводят объем растворителем до метки.
Раствор стандартного образца натамицина. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 25 мг стандартного образца натамицина и прибавляют 2,5 мл воды. Прибавляют 50 мл растворителя, встряхивают в темноте до растворения и доводят объем растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 1 мл полученного раствора и доводят объем растворителем до метки.
Спектры поглощения испытуемого раствора и раствора стандартного образца натамицина в области от 190 до 400 нм должны иметь максимумы и минимумы при одних и тех же длинах волн.
3. Качественная реакция. К 3 мг натамицина прибавляют 1 мл хлористоводородной кислоты концентрированной; должно появиться сине-фиолетовое окрашивание.
Удельное вращение. От +243 до +259 в пересчете на безводное вещество (0,4% раствор субстанции в уксусной кислоте безводной, ОФС «Оптическое вращение»).
pH. От 5,0 до 7,5 (1% суспензия в воде, ОФС «Ионометрия», метод 3).
Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).
Все растворы, содержащие натамицин, используют свежеприготовленными и защищают от света.
Растворитель. Хлористоводородной кислоты раствор 0,1 М — метанол 1:99.
Подвижная фаза (ПФ). В коническую колбу вместимостью 1500 мл помещают 3,0 г аммония ацетата и 1,0 г аммония хлорида, растворяют в 760 мл воды, прибавляют 5,0 мл тетрагидрофурана и 240 мл ацетонитрила. Фильтруют через мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм.
Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 20 мг (точная навеска) субстанции, прибавляют 5 мл тетрагидрофурана и обрабатывают ультразвуком в течение 10 мин. Прибавляют 60 мл метанола, 25 мл воды, перемешивают, охлаждают до комнатной температуры и доводят объем раствора водой до метки. Фильтруют через мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм.
Раствор сравнения. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл испытуемого раствора и доводят объем раствора водой до метки.
Раствор для проверки пригодности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 20 мг субстанции, растворяют в растворителе и выдерживают в течение 2 часов.
Раствор для проверки чувствительности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 5,0 мл раствора сравнения и доводят объем раствора водой до метки.
Метиловый эфир натамицина: Метил[(1R,3S,5R,7R,8E,12R,14E,16E,18E,20E,22R,24S,25R,26S)-22-[(3-амино-3,6-дидезокси- \beta -D-маннопиранозил)окси]-1,3,26-тригидрокси-12-метил-10-оксо-6,11,28-триоксатрицикло[22.3.1.05,7]октакоза-8,14,16,18,20-пентаен-25-карбонат].
Хроматографируют раствор для проверки чувствительности хроматографической системы, раствор для проверки пригодности хроматографической системы, раствор сравнения и испытуемый раствор.
Относительное время удерживания соединений. Натамицин — 1 (около 14 мин), метиловый эфир натамицина — около 1,3.
Идентификация примесей. Для идентификации пика метилового эфира натамицина используют относительное время удерживания соединений и хроматограмму раствора для проверки пригодности хроматографической системы.
Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы отношение сигнал/шум (S/N) для пика натамицина должно быть не менее 10.
На хроматограмме раствора для проверки пригодности хроматографической системы:
- разрешение (R) между пиками натамицина и метилового эфира натамицина должно быть не менее 2,5;
- фактор асимметрии пика (AS) натамицина должен быть не более 1,3.
Допустимое содержание примесей. На хроматограмме испытуемого раствора:
- площадь пика метилового эфира натамицина не должна более чем в 2 раза превышать площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 2,0%);
- площадь пика любой другой примеси не должна превышать 0,5 площади основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,5%);
- сумма площадей пиков всех примесей не должна превышать четырехкратную площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 4,0%).
Не учитывают пики, площадь которых менее площади основного пика на хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы (менее 0,05%).
Вода. От 6,0% до 9,0% (ОФС «Определение воды», метод 1). Для определения используют 0,5 г (точная навеска) субстанции.
Сульфатная зола. Не более 0,1% (ОФС «Сульфатная зола»). Для определения используют 1,0 г (точная навеска) субстанции.
Тяжелые металлы. Не более 0,001%. Определение проводят в соответствии с ОФС «Тяжелые металлы» (метод 3А), в зольном остатке, полученном в испытании «Сульфатная зола», с использованием эталонного раствора 1.
Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС «Остаточные органические растворители».
Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».
Определение проводят методом ВЭЖХ в условиях испытания «Родственные примеси» со следующими изменениями.
Раствор стандартного образца натамицина. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 20 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца натамицина, прибавляют 5 мл тетрагидрофурана и обрабатывают ультразвуком в течение 10 мин. Прибавляют 60 мл метанола, 25 мл воды, перемешивают, охлаждают до комнатной температуры и доводят объем раствора водой до метки. Фильтруют через мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм.
Хроматографируют раствор для проверки пригодности хроматографической системы, раствор стандартного образца натамицина и испытуемый раствор.
Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора стандартного образца натамицина:
- фактор асимметрии пика (AS) натамицина должен быть не более 2,0;
- относительное стандартное отклонение площади пика натамицина должно быть не более 2,0% (6 введений).
Содержание натамицина C33H47NO13 в пересчете на безводное и свободное от органических растворителей вещество в процентах (X) вычисляют по формуле:
X = \frac{S_{1} \cdot a_{0} \cdot P \cdot 100 \cdot 100}{S_{0} \cdot a_{1} \cdot 100 \cdot (100 - W)} ,
где S1 — площадь пика натамицина на хроматограмме испытуемого раствора;
S0 — площадь пика натамицина на хроматограмме раствора стандартного образца натамицина;
a0 — навеска фармакопейного стандартного образца натамицина, мг;
P — содержание натамицина в фармакопейном стандартном образце натамицина, %;
W — содержание воды и остаточных органических растворителей в субстанции, %.
В плотно укупоренной упаковке, в защищенном от света месте.