ФС.2.1.0399. Фармакопейная статья. Глутатион
(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 № 377)
(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XV издание»)
Примечание
Текст документа приведен в соответствии с публикацией на сайте https://minzdrav.gov.ru/ по состоянию на 18.08.2023. В соответствии с Приказом Минздрава России от 20.07.2023 № 377 данный документ введен в действие с 01.09.2023.
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
| Глутатион | ФС.2.1.0399 |
|---|---|
| Глутатион | |
| Glutathionum | Вводится впервые |
 | |
| C10H17N3O6S [70-18-8] | М.м. 307,33 |
L- \gamma -Глутамил-L-цистеинилглицин.
Содержит не менее 98,0% и не более 101,0% глутатиона C10H17N3O6S в пересчете на сухое вещество.
Описание. Белый или почти белый кристаллический порошок или бесцветные кристаллы.
Растворимость. Легко растворим в воде, очень мало растворим в этаноле 96% и метиленхлориде.
ИК-спектрометрия (ОФС «Спектрометрия в средней инфракрасной области»). Инфракрасный спектр субстанции в области от 4000 до 400 см-1 по положению полос поглощения должен соответствовать спектру фармакопейного стандартного образца глутатиона.
Удельное вращение. От -15,5 до -17,5 в пересчете на сухое вещество (4% раствор субстанции в воде ОФС «Оптическое вращение»).
Прозрачность раствора. Раствор 5,0 г субстанции в 50 мл воды должен быть прозрачным (ОФС «Прозрачность и степень опалесценции (мутности) жидкостей»).
Цветность раствора. Раствор, полученный в испытании «Прозрачность раствора», должен быть бесцветным (ОФС «Степень окраски жидкостей», метод 2).
Родственные примеси. Определение проводят методом капиллярного электрофореза (ОФС «Капиллярный электрофорез»).
Все растворы используют сразу после приготовления.
Ведущий электролит (ВЭ). В мерную колбу вместимостью 250 мл помещают 1,5 г натрия дигидрофосфата безводного, растворяют в 230 мл воды, доводят значение pH фосфорной кислотой концентрированной до 1,8 и доводят объем раствора водой до метки.
Раствор внутреннего стандарта А. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 0,1 г (точная навеска) фенилаланина, растворяют в ВЭ и доводят объем раствора ВЭ до метки.
Раствор внутреннего стандарта Б. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 10,0 мл раствора внутреннего стандарта А и доводят объем раствора ВЭ до метки.
Испытуемый раствор А. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 0,2 г (точная навеска) субстанции, растворяют в ВЭ и доводят объем раствора ВЭ до метки.
Испытуемый раствор Б. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 0,2 г (точная навеска) субстанции, растворяют в растворе внутреннего стандарта Б и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.
Стандартный раствор. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 20 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в растворе внутреннего стандарта А и доводят объем раствора тем же растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора ВЭ до метки.
Раствор для проверки пригодности электрофоретической системы. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают по 5 мг L-цистеина, глутатиона окисленного и L- \gamma -глутамил-L-цистеина, растворяют в ВЭ и доводят объем раствора ВЭ до метки. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 0,2 г субстанции, растворяют в 5 мл ВЭ, прибавляют 1,0 мл раствора внутреннего стандарта А, 2,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора ВЭ до метки.
Примесь A: L-цистеинилглицин [19246-18-5].
Примесь B (L-цистеин): (2R)-2-амино-3-сульфанилпропановая кислота [52-90-4].
Примесь C (глутатион окисленный): (2 \rightarrow 2')-бис(L- \gamma -глутамил-L-цистеинилглицин)дисульфид [27025-41-8].
Примесь D: L- \gamma -глутамил-L-цистеин [636-58-8].
Примесь E: неизвестная структура.
Последовательно анализируют контрольный раствор, раствор для проверки пригодности электрофоретической системы, стандартный раствор, испытуемый раствор А и испытуемый раствор Б.
Относительное время миграции. Внутренний стандарт — 1 (около 14 мин); примесь A — около 0,77; примесь B — около 1,04; примесь E — около 1,2; примесь C — около 1,26; примесь D — около 1,3.
Пригодность электрофоретической системы. На электрофореграмме испытуемого раствора А не должно быть пика, соответствующего по времени миграции пику внутреннего стандарта, при необходимости корректируют площадь внутреннего стандарта.
На электрофореграмме раствора для проверки пригодности электрофоретической системы:
- разрешение (RS) между пиками внутреннего стандарта и примеси B должно быть не менее 1,5, при необходимости увеличивают значение pH натрия гидроксида раствором 8,5%;
- отношение максимум/минимум (p/v) между пиками примеси D и глутатиона должно быть не менее 2,5, при необходимости уменьшают значение pH фосфорной кислотой концентрированной.
Поправочные коэффициенты. Для расчета содержания площади пиков следующих примесей умножают на соответствующие поправочные коэффициенты: примесь B — 3,0; примесь D — 1,4.
Содержание любой примеси в субстанции в процентах (X) вычисляют по формуле:
X = \frac{B_{1} \cdot t_{0} \cdot t_{is}^{1} \cdot 100}{B_{0} \cdot t_{i} \cdot t_{is}^{0}} ,
где B1 — отношение площади пика любой примеси к площади пика внутреннего стандарта на электрофореграмме испытуемого раствора (Б);
B0 — отношение площади пика глутатиона к площади пика внутреннего стандарта на электрофореграмме стандартного раствора;
t1 — время миграции соответствующей примеси на электрофореграмме испытуемого раствора (Б), мин;
t0 — время миграции глутатиона на электрофореграмме стандартного раствора, мин;
t_{is}^{1} — время миграции внутреннего стандарта на электрофореграмме испытуемого раствора (Б), мин;
t_{is}^{0} — время миграции внутреннего стандарта на электрофореграмме стандартного раствора, мин.
Допустимое содержание примесей:
- примеси A, B, E — не более 0,5% каждая;
- примесь C — не более 1,5%;
- примесь D — не более 1,0%;
- любая другая примесь — не более 0,2%;
- сумма примесей — не более 2,5%.
Не учитывают примеси, содержание каждой из которых менее 0,05%.
Потеря в массе при высушивании. Не более 0,5% (ОФС «Потеря в массе при высушивании», способ 1). Для определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.
Стандартный раствор аммония. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 74,1 мг (точная навеска) аммония хлорида, растворяют в воде и доводят объем раствора тем же растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 10,0 мл полученного раствора. Раствор готовится непосредственно перед использованием.
Испытуемый раствор. В коническую колбу с притертой пробкой вместимостью 25 мл помещают 50 мг субстанции, растворяют в 1 мл воды, прибавляют 0,3 г магния оксида и перемешивают.
Эталонный раствор. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 0,1 мл стандартного раствора аммония, прибавляют 1 мл воды, 0,3 г магния оксида и перемешивают.
Над реакционными смесями испытуемого и эталонного растворов подвешивают по полоске полиэтилена шириной 1 см с прикрепленными несколькими каплями воды отрезками серебряно-марганцевой бумаги, и закрывают колбы пробками. Содержимое колб перемешивают, не допуская попадания брызг на бумагу, и выдерживают на водяной бане при температуре 40 °C в течение 30 мин. Окраска бумаги, используемой в испытуемом растворе, не должна быть интенсивнее окраски бумаги, используемой в эталонном растворе.
Железо. Не более 0,001% (ОФС «Железо», метод 2).
Испытуемый раствор. В делительную воронку помещают 1 г (точная навеска) субстанции, растворяют в 10 мл хлористоводородной кислоты разведенной 7,3%, экстрагируют тремя порциями метилизобутилкетона по 10 мл, каждый раз встряхивая в течение 3 мин. Объединяют органические извлечения, прибавляют 10 мл воды и встряхивают в течение 3 мин. Используют водный слой.
Сульфаты. Не более 0,03% (ОФС «Сульфаты», метод 2).
Испытуемый раствор. Смешивают 5 мл раствора, полученного в испытании «Прозрачность раствора», и 15 мл воды.
Хлориды. Не более 0,02% (ОФС «Хлориды»).
Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 0,5 г (точная навеска) субстанции, растворяют в азотной кислоте разведенной 12,5% и доводят объем раствора тем же растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 10,0 мл полученного раствора, прибавляют 10 мл водорода пероксида, нагревают на водяной бане в течение 30 мин, охлаждают до комнатной температуры и доводят объем раствора водой до метки.
Сульфатная зола. Не более 0,1% (ОФС «Сульфатная зола»). Для определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.
Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».
Определение проводят методом титриметрии (ОФС «Титриметрия (титриметрические методы анализа)»).
В коническую колбу с притертой пробкой помещают 0,5 г (точная навеска) субстанции, 2,0 г калия йодида растворяют в 50 мл воды, охлаждают на ледяной бане, прибавляют 10,0 мл хлористоводородной кислоты 25%, 20,0 мл йода раствора 0,05 М, закрывают колбу пробкой и выдерживают в темном месте в течение 15 мин, титруют натрия тиосульфата раствором 0,1 М. Индикатор прибавляют ближе к концу титрования (индикатор — 1,0 мл крахмала раствор 1%, содержащий 0,01% ртути (II)).
Параллельно проводят контрольный опыт.
1 мл раствора йода 0,05 М соответствует 30,73 мг глутатиона C10H17N3O6S.