ФС.2.1.0380. Фармакопейная статья. Атазанавира сульфат. Атазанавир

(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 № 377)

(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XV издание»)

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Атазанавира сульфат	ФС.2.1.0380
Атазанавир
Atazanaviri sulfas	Вводится впервые

C38H52N6O7·H2SO4 [229975-97-7]	М.м. 802,93

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Диметил[(3S,8S,9S,12S)-9-бензил-3,12-ди(трет-бутил)-8-гидрокси-4,11-диоксо-6-{[4-(пиридин-2-ил)фенил]метил}-2,5,6,10,13-пентаазатетрадекандиоата] сульфат (1:1).

Содержит не менее 98,0% и не более 102,0% атазанавира сульфата C38H54N6O11S в пересчете на безводное и свободное от органических растворителей вещество.

СВОЙСТВА

Описание. От белого до светло-желтого цвета кристаллический порошок, может содержать агломераты.

<*> Гигроскопичен.

---

<*> Приводится для информации.

Растворимость. Легко растворим в метаноле и спирте 96%, мало растворим или практически нерастворим в воде.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

1. ИК-спектрометрия (ОФС «Спектрометрия в средней инфракрасной области»). Спектр субстанции, снятый в диске с калия бромидом (3 мг субстанции в 300 мг калия бромида), в области от 4000 до 400 см-1 по положению полос поглощения должен соответствовать спектру фармакопейного стандартного образца атазанавира сульфата.

Если спектры различаются, 20 мг испытуемой субстанции и 20 мг фармакопейного стандартного образца по отдельности растворяют в 4 мл смеси изопропиловый спирт — этилацетат 1:1, нагревают на водяной бане при температуре около 50 °C до растворения, фильтруют, фильтр промывают 3 мл нагретого до той же температуры растворителя. Фильтрат выдерживают в холодильнике при температуре 5 +/- 1 °C в течение 14 ч и выпаривают в вакуумном шкафу при температуре не более 55 °C, выдерживают в эксикаторе в течение 1 ч при комнатной температуре и записывают спектры сухих остатков.

2. ВЭЖХ. Время удерживания основного пика на хроматограмме испытуемого раствора должно соответствовать времени удерживания пика атазанавира на хроматограмме раствора стандартного образца атазанавира сульфата (раздел «Количественное определение»).

3. Качественная реакция. Субстанция должна давать характерную реакцию на сульфаты (ОФС «Общие реакции на подлинность»).

ИСПЫТАНИЯ

Удельное вращение. От 40 до -44 в пересчете на безводное и свободное от органических растворителей вещество (1% раствор субстанции в метаноле, ОФС «Оптическое вращение»).

Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

Буферный раствор. В химический стакан вместимостью 1000 мл помещают 2,73 г калия дигидрофосфата, растворяют в 900 мл воды и доводят значение pH раствора фосфорной кислотой концентрированной до 3,5. Количественно переносят полученный раствор в мерную колбу вместимостью 1000 мл и доводят объем раствора водой до метки.

Растворитель. Буферный раствор — ацетонитрил 50:50.

Подвижная фаза А (ПФА). Ацетонитрил — буферный раствор 250:750.

Подвижная фаза Б (ПФБ). Буферный раствор — ацетонитрил 250:750.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 20 мг (точная навеска) субстанции, прибавляют 40 мл растворителя, обрабатывают ультразвуком до растворения, охлаждают до комнатной температуры и доводят объем раствора растворителем до метки.

Раствор сравнения. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл испытуемого раствора и доводят объем раствора растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора растворителем до метки.

Раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 4 мг фармакопейного стандартного образца атазанавира смеси для проверки пригодности системы (содержит примесь F), прибавляют 8 мл растворителя, обрабатывают ультразвуком до растворения, охлаждают до комнатной температуры и доводят объем раствора растворителем до метки.

Примечание

Примесь A: 4-(пиридин-2-ил)бензойная кислота [4385-62-0].

Примесь B: 4-(пиридин-2-ил)бензальдегид [127406-56-8].

Примесь C: диметил[(3S,8S,9S,12S)-9-бензил-3,12-ди(трет-бутил)-8-гидрокси-4,11-диоксо-2,5,6,10,13-пентаазатетрадекандиоат] [1192224-24-0].

Примесь D: (2S,3S)-3-амино-1-[(E)-1-{[4-(пиридин-2-ил)фенил]метил}-2-{[4-(пиридин-2-ил)фенил]метилиден}гидразин-1-ил]-4-фенилбутан-2-ол.

Примесь F (атазанавир R,S,S,S-диастереомер): диметил[(3R,8S,9S,12S)-9-бензил-3,12-ди(трет-бутил)-8-гидрокси-4,11-диоксо-6-{[4-(пиридин-2-ил)фенил]метил}-2,5,6,10,13-пентаазатетрадекандиоат] [1332981-14-2].

Примесь I: метил {[(2S)-1-{[(2S,3S)-3-гидрокси-4-[(E)-1-{[4-(пиридин-2-ил)фенил]метил}-2-{[4-(пиридин-2-ил)фенил]метилиден}гидразин-1-ил]-1-фенилбутан-2-ил]амино}-3,3-диметил-1-оксобутан-2-ил]карбамат}.

Хроматографические условия

Колонка	150 x 4,6 мм, силикагель октадецилсилильный, эндкепированный, для хроматографии, 3 мкм;
Температура	25 °C;
Скорость потока	1,0 мл/мин;
Детектор	спектрофотометрический, 215 нм;
Объем пробы	10 мкл.

Режим хроматографирования

Время, мин	ПФА, %	ПФБ, %
0 — 5	100	0
5 — 45	100 \rightarrow 0	0 \rightarrow 100

Хроматографируют раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы, раствор сравнения и испытуемый раствор.

Относительное время удерживания соединений. Атазанавир — 1 (около 30 мин); примесь A — около 0,3; примесь B — около 0,55; примесь C — около 0,66; примесь D — около 0,76; примесь F — около 0,99; примесь I — около 1,3.

Идентификация примесей. Для идентификации пиков примесей A, B, C, D и I используют относительное время удерживания соединений. Для идентификации пика примеси F используют относительное время удерживания соединений, хроматограмму раствора для проверки разделительной способности системы и хроматограмму, прилагаемую к фармакопейному стандартному образцу атазанавира смеси для проверки пригодности системы.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы разрешение (RS) между пиками атазанавира и пиком примеси F должно быть не менее 1,5.

Поправочные коэффициенты. Для расчета содержания примесей площади пиков следующих примесей умножают на соответствующие поправочные коэффициенты: примесь A — 0,625; примесь B — 0,435; примесь C — 1,695; примесь D — 0,67; примесь I — 0,67.

Содержание любой примеси в субстанции в процентах (X) вычисляют по формуле:

X = \frac{S_{1} \cdot 1 \cdot 1 \cdot P}{S_{0} \cdot 100 \cdot 10} ,

где S1 — площадь пика любой примеси на хроматограмме испытуемого раствора;

S0 — площадь пика атазанавира на хроматограмме раствора сравнения;

P — содержание атазанавира сульфата в фармакопейном стандартном образце атазанавира сульфата, %.

Допустимое содержание примесей:

• любая примесь — не более 0,10%;
• сумма примесей — не более 0,5%.

Не учитывают пики с относительными временами удерживания менее 0,2 и пики, площадь которых менее 0,5 площади пика атазанавира на хроматограмме раствора сравнения (менее 0,05%).

<**> Примесь K. Не более 0,15%. Определение проводят методом ВЭЖХ в условиях испытания «Родственные примеси» со следующими изменениями.

---

<**> Определение проводят в случае, если присутствие примеси обусловлено технологическим процессом производства субстанции.

Раствор стандартного образца примеси K. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 2 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца примеси K, прибавляют 9 мл растворителя, обрабатывают ультразвуком до растворения, охлаждают до комнатной температуры и доводят объем раствора растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 5,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 3,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора растворителем до метки.

Примечание

Примесь K: (2S)-2-[(метоксикарбонил)амино]-3,3-диметилбутановая кислота [162537-11-3].

Хроматографические условия

Объем пробы	20 мкл.

Режим хроматографирования

Время, мин	ПФА, %	ПФБ, %
0 — 5	95	5
5 — 8	95 \rightarrow 0	5 \rightarrow 100
8 — 14	0	100

Хроматографируют раствор стандартного образца примеси K и испытуемый раствор.

Относительное время удерживания соединений. Атазанавир — 1 (около 10 мин); примесь K — около 0,4.

Для идентификации пика примеси K используют относительное время удерживания соединений и хроматограмму раствора стандартного образца примеси K.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора стандартного образца примеси K относительное стандартное отклонение площади примеси K должно быть не более 5,0% (6 введений).

Содержание примеси K в субстанции в процентах (X) вычисляют по формуле:

X = \frac{S_{1} \cdot a_{0} \cdot 100 \cdot 50 \cdot 5 \cdot 3}{S_{0} \cdot a_{1} \cdot 10 \cdot 100 \cdot 20} ,

где S1 — площадь пика примеси K на хроматограмме испытуемого раствора;

S0 — площадь пика примеси K на хроматограмме раствора стандартного образца примеси K;

a0 — навеска фармакопейного стандартного образца примеси K, мг;

a1 — навеска субстанции, мг.

Вода. Не более 1,0% (ОФС «Определение воды», метод 1). Для определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.

Сульфатная зола. Не более 0,1% (ОФС «Сульфатная зола»). Для определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.

Тяжелые металлы. Не более 0,002% (ОФС «Тяжелые металлы», метод 3Б). Определение проводят в зольном остатке, полученном в испытании «Сульфатная зола», с использованием эталонного раствора 2.

Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС «Остаточные органические растворители».

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Определение проводят методом ВЭЖХ в условиях испытания «Родственные примеси» со следующими изменениями.

Подвижная фаза (ПФ). Ацетонитрил — буферный раствор 500:500.

Раствор стандартного образца атазанавира сульфата. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 20 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца атазанавира сульфата, прибавляют 40 мл растворителя, обрабатывают ультразвуком до растворения, охлаждают до комнатной температуры и доводят объем раствора растворителем до метки.

Хроматографические условия

Объем пробы	25 мкл;
Время хроматографирования	1,6-кратное от времени удерживания пика атазанавира.

Хроматографируют раствор для проверки разделительной способности системы, раствор стандартного образца атазанавира сульфата и испытуемый раствор.

Относительное время удерживания соединений. Атазанавир — 1 (около 9,5 мин); примесь F — около 0,94.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора стандартного образца атазанавира сульфата:

• фактор асимметрии пика (AS) атазанавира должен быть не более 1,5.

Содержание атазанавира сульфата C38H52N6O7·H2SO4 в субстанции в пересчете на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество в процентах (X) вычисляют по формуле:

X = \frac{S_{1} \cdot a_{0} \cdot 50 \cdot 5 \cdot 50 \cdot P \cdot 100}{S_{0} \cdot a_{1} \cdot 50 \cdot 5 \cdot 50 \cdot (100 - W)} ,

где S1 — площадь пика атазанавира на хроматограмме испытуемого раствора;

S0 — площадь пика атазанавира на хроматограмме раствора стандартного образца атазанавира сульфата;

a0 — навеска фармакопейного стандартного образца атазанавира сульфата, мг;

a1 — навеска субстанции, мг;

P — содержание атазанавира сульфата в фармакопейном стандартном образце атазанавира сульфата, %;

W — содержание воды и остаточных органических растворителей в субстанции, %.

ХРАНЕНИЕ

В защищенном от света месте.

---