ФС.2.1.0355. Фармакопейная статья. Фосфазид

(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 № 377)

(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XV издание»)

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Фосфазид
Фосфазид
Phosphazidum	Взамен ВФС 42-3497-99

C10H13N5NaO6P	М.м. 353,20

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

[ \beta -D-3-Азидо-1-(5-метил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидропиримидин-1-ил)-1,2,3-тридезоксирибофуранозил-5]фосфонат натрия.

Содержит не менее 96,0% и не более 102,0% фосфазида C10H13N5NaO6P в пересчете на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество.

СВОЙСТВА

Описание. Белый или белый с желтоватым оттенком порошок с характерным запахом.

<*> Гигроскопичен.

---

<*> Приводится для информации.

Растворимость. Очень легко растворим в воде, умеренно растворим в спирте 96%, практически нерастворим в хлороформе и гексане.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

1. Спектрофотометрия (ОФС «Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях»).

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 250 мл помещают 5 мг субстанции, растворяют в воде и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Спектр поглощения испытуемого раствора в области длин волн от 220 нм до 350 нм должен иметь максимум поглощения при 266 нм и минимум поглощения при 234 нм. В качестве раствора сравнения используют воду.

2. Качественная реакция. Растворяют 150 мг субстанции в 2 мл воды. Полученный раствор должен давать характерную реакцию А на натрий (ОФС «Общие реакции на подлинность»).

ИСПЫТАНИЯ

Удельное вращение. От +22 до +28 в пересчете на безводное вещество (1% раствор субстанции в воде, ОФС «Оптическое вращение»).

Прозрачность раствора. Раствор 0,1 г субстанции в 10 мл воды должен быть прозрачным (ОФС «Прозрачность и степень опалесценции (мутности) жидкостей»).

Цветность раствора. Раствор, полученный в испытании «Прозрачность раствора», должен выдерживать сравнение с эталоном Y7 (ОФС «Степень окраски жидкостей», метод 2).

pH раствора. От 6,5 до 8,5 (1% раствор, ОФС «Ионометрия», метод 3).

Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»). Все растворы используют свежеприготовленными.

Подвижная фаза А (ПФА). Метанол — аммония ацетата раствор 0,05 М 50:950.

Подвижная фаза Б (ПФБ). Метанол.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 10 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в воде, при необходимости выдерживают на ультразвуковой бане в течение 5 мин, не допуская нагревания, и доводят объем раствора водой до метки.

Раствор стандартного образца фосфазида. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 25 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца фосфазида, растворяют в воде, при необходимости выдерживают на ультразвуковой бане в течение 5 мин, не допуская нагревания, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 2,0 мл полученного раствора, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 10,0 мл полученного раствора, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают.

Раствор для проверки чувствительности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 5,0 мл раствора стандартного образца фосфазида и доводят объем раствора водой до метки.

Хроматографические условия

Предколонка	4 x 3,0 мм, силикагель октадецилсилильный для хроматографии;
Колонка	150 x 4,6 мм, силикагель октадецилсилильный для хроматографии, 5 мкм;
Температура колонки	40 °C;
Скорость потока	1,0 мл/мин;
Детектор	спектрофотометрический, 265 нм;
Объем пробы	20 мкл.

Режим хроматографирования

Время, мин	ПФА, %	ПФБ, %
0 — 5	90	10
5 — 15	90 \rightarrow 70	10 \rightarrow 30
15 — 30	70 \rightarrow 0	30 \rightarrow 100
30 — 35	0	100
35 — 40	0 \rightarrow 90	100 \rightarrow 10
40 — 45	90	10

Хроматографируют раствор для проверки чувствительности хроматографической системы, раствор стандартного образца фосфазида и испытуемый раствор.

<**> Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы отношение сигнал/шум (S/N) для пика фосфазида должно быть не менее 10.

---

<**> Перед проведением испытания должна быть проверена разделительная способность хроматографической системы.

На хроматограмме раствора стандартного образца фосфазида:

• фактор асимметрии пика (AS) фосфазида должен быть не более 1,5;
• относительное стандартное отклонение площади пика фосфазида должно быть не более 2,0% (6 введений).

Содержание каждой из примесей в субстанции в процентах (X) вычисляют по формуле:

X = \frac{S_{1} \cdot \text{а}_{0} \cdot P \cdot 50 \cdot 2 \cdot 10}{S_{0} \cdot \text{а}_{1} \cdot 25 \cdot 100 \cdot 100} ,

где S1 — площадь пика каждой из примесей на хроматограмме испытуемого раствора;

S0 — площадь пика фосфазида на хроматограмме раствора стандартного образца фосфазида;

a0 — навеска фармакопейного стандартного образца фосфазида, мг;

a1 — навеска субстанции, мг;

P — содержание фосфазида в фармакопейном стандартном образце фосфазида, %.

Допустимое содержание примесей:

• любая примесь — не более 1,0%;
• сумма всех примесей — не более 3,0%.

Вода. Не более 2,0% (ОФС «Определение воды», метод 1). Для определения используют 1,0 г (точная навеска) субстанции.

Сульфатная зола. Не более 0,1% (ОФС «Сульфатная зола»). Для определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.

Тяжелые металлы. Не более 0,001%. Определение проводят в соответствии с ОФС «Тяжелые металлы» (метод 3А) в зольном остатке, полученном в испытании «Сульфатная зола», с использованием эталонного раствора 1.

Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС «Остаточные органические растворители».

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Определение проводят методом ВЭЖХ в условиях испытания «Родственные примеси» со следующими изменениями.

Раствор стандартного образца фосфазида. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 10 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца фосфазида, растворяют в воде, при необходимости выдерживают на ультразвуковой бане в течение 5 мин, не допуская нагревания, и доводят объем раствора водой до метки. Раствор используют свежеприготовленным.

На хроматограмме раствора стандартного образца фосфазида относительное стандартное отклонение площади пика фосфазида должно быть не более 2,0% (6 введений).

Содержание фосфазида C10H13N5NaO6P в субстанции в пересчете на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество в процентах (X) вычисляют по формуле:

X = \frac{S_{1} \cdot a_{0} \cdot P \cdot 50 \cdot 100}{S_{0} \cdot a_{1} \cdot 50 \cdot (100 - W)} ,

где S1 — площадь пика фосфазида на хроматограмме испытуемого раствора;

S0 — площадь пика фосфазида на хроматограмме раствора стандартного образца фосфазида;

a1 — навеска субстанции, мг;

a0 — навеска фармакопейного стандартного образца фосфазида, мг;

P — содержание фосфазида в фармакопейном стандартном образце фосфазида, %;

W — суммарное содержание воды и остаточных органических растворителей в субстанции, %.

ХРАНЕНИЕ

В сухом, защищенном от света месте.

---