ОСТ 42-513-99. Устройства комплексные эксфузионные, инфузионные и трансфузионные однократного применения. Требования химической и биологической безопасности. Методы испытаний в условиях предприятий-изготовителей

(утв. Минздравом России 23.03.1999)

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

СТАНДАРТ ОТРАСЛИ

УСТРОЙСТВА КОМПЛЕКСНЫЕ ЭКСФУЗИОННЫЕ, ИНФУЗИОННЫЕ И ТРАНСФУЗИОННЫЕ ОДНОКРАТНОГО ПРИМЕНЕНИЯ

ТРЕБОВАНИЯ ХИМИЧЕСКОЙ И БИОЛОГИЧЕСКОЙ БЕЗОПАСНОСТИ

МЕТОДЫ ИСПЫТАНИЙ В УСЛОВИЯХ ПРЕДПРИЯТИЙ-ИЗГОТОВИТЕЛЕЙ

1. <a id="p100008"></a>РАЗРАБОТАН     Всероссийским научно-исследовательским и
                  испытательным институтом медицинской техники

2. <a id="p100009"></a>ПРЕДСТАВЛЕН    Департаментом государственного контроля
                  качества, эффективности, безопасности
                  лекарственных средств и медицинской техники

3. <a id="p100010"></a>УТВЕРЖДЕН      Министерством здравоохранения Российской
                  Федерации 23 февраля 1999 года

1. Область применения

Настоящий стандарт устанавливает требования химической и биологической безопасности устройств комплектных эксфузионных, инфузионных и трансфузионных однократного применения (далее — устройства) по ГОСТ 25047, предназначенных для взятия крови у донора, для вливания реципиенту растворов и переливания крови и ее компонентов, кровезаменителей и других трансфузионных сред из стеклянных и полимерных емкостей, а также методы испытаний предприятием-изготовителем устройств, стерилизованных газовым и радиационным способом.

2. Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 8.423-81 ГСИ Секундомеры механические. Методы и средства поверки.

ГОСТ 244-76 Натрия тиосульфат кристаллический. Технические условия.

ГОСТ 1770-74 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Технические условия.

ГОСТ 3022-80 Водород технический. Технические условия.

ГОСТ 4204-77 Кислота серная. Технические условия.

ГОСТ 4232-74 Калий йодистый. Технические условия.

ГОСТ 4233-77 Натрий хлористый. Технические условия.

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия.

ГОСТ 7568-88 Этилена окись. Технические условия.

ГОСТ 10163-76 Крахмал растворимый. Технические условия.

ГОСТ 10782-85 Бутылки стеклянные для крови, трансфузионных и инфузионных препаратов. Технические условия.

ГОСТ 15860-84 Баллоны стальные сварные для сжиженных углеводородных газов на давление до 1,6 МПа. Технические условия.

ГОСТ 17433-80 Промышленная чистота. Сжатый воздух. Классы загрязненности.

ГОСТ 20490-75 Калий марганцовокислый. Технические условия.

ГОСТ 23932-90 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Общие технические условия.

ГОСТ 24104-88 Весы лабораторные общего назначения и образцовые. Общие технические условия.

ГОСТ 24297-87 Входной контроль продукции. Основные положения.

ГОСТ 24861-91 Шприцы инъекционные однократного применения.

ГОСТ 25047-87 Устройства комплектные, эксфузионные, инфузионные и трансфузионные однократного применения. Технические условия.

ГОСТ 29227-91 Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуировочные. Часть 1. Общие требования.

ГОСТ 29251-91 Посуда лабораторная стеклянная. Бюретки. Часть 1. Общие требования.

ГОСТ 29329-92 Весы для статического взвешивания. Общие технические требования.

3. Термины и определения

В настоящем стандарте применяют следующие термины и определения:

  3.1. Устройства            - Изделия медицинские однократного

       комплектные             применения, предназначенные для

       эксфузионные,           взятия крови у донора, для вливания

       инфузионные             реципиенту растворов и переливания
       и трансфузионные        крови и ее компонентов, а также

                           кровезаменителей и других
                           трансфузионных сред из стеклянных и
                           полимерных емкостей.

  3.2. Химическая            - Отсутствие вредного действия на
       безопасность            организм химических соединений,

                           которые могут мигрировать из
                           материалов или медицинских изделий,
                           контролируемое с помощью
                           совокупности санитарно-химических и
                           токсикологических показателей.

3.3 Биологическая — Отсутствие в материалах или

   безопасность            медицинских изделиях биологических
                           факторов, таких как живые
                           микроорганизмы, их споры, токсичные
                           продукты их метаболизма,
                           контролируемое с помощью
                           показателей стерильности и
                           пирогенности.

  3.4. Санитарно-            - Испытания, проводимые с целью
       химические испытания    определения суммарного количества

                           мигрирующих в водную вытяжку из
                           полимерных материалов и изделий
                           химических соединений с помощью
                           интегральных показателей, а также
                           индивидуальных потенциально опасных
                           соединений (составляющих полимерных
                           композиций, технологических
                           добавок, стерилизующих агентов,
                           примесей в сырье и т.п.).

3.5 Токсикологические — Испытания, проводимые с целью

   испытания               выявления вредного действия
                           материалов изделия на организм,
                           включающие оценку гемолитического,
                           общетоксического,
                           сенсибилизирующего, раздражающего и
                           цитоксического действия.

  3.6. Контроль              - Проверка отсутствия жизнеспособных
       стерильности            микроорганизмов в рабочих объемах

                           устройств.

  3.7. Контроль              - Проверка допустимых концентраций
       апирогенности           липополисахаридов в рабочих объемах

                           устройств.

3.8 Партия устройств, — Количество устройств,

   стерилизованных         простерилизованных за сутки.
   радиационным способом

3.9 Партия устройств, — Количество устройств,

       стерилизованных         простерилизованных за один цикл
       газовым способом        стерилизации в одном стерилизаторе.

4. Требования химической и биологической безопасности

4.1. Испытаниям на соответствие требованиям настоящего стандарта подлежат устройства на стадии предварительных и приемо-сдаточных испытаний.

4.2. Санитарно-химические испытания устройств проводят на соответствие требованиям настоящего стандарта по следующим показателям:

• определение в вытяжке восстановительных примесей;

• определение ультрафиолетового поглощения;
• определение остаточных количеств окиси этилена при газовой стерилизации устройств;
• определение остаточных количеств циклогексанона и тетрагидрофурана — растворителей, используемых при склеивании деталей и узлов устройств;
• определение содержания металлов.

4.3. Токсикологические испытания устройств проводят на соответствие требованиям настоящего стандарта по следующим показателям:

• острая токсичность на белых мышах;
• раздражающее действие на кожу крыс и слизистую глаза кролика;
• сенсибилизирующий эффект на белых крысах;
• гемолитическая активность;
• индекс токсичности (цитотоксичность) на сперматозоидах быка.

4.4 Испытания устройств на стерильность.

4.4.1. Испытания устройств, стерилизованных радиационным способом, на стерильность.

4.4.2. Испытания устройств, стерилизованных газовым способом, на стерильность.

4.5 Испытания устройств на пирогенность.

4.6. На стадии предварительных испытаний устройства подвергают испытаниям на соответствие требованиям 4.3.-4.6., 4.9.

4.7 На стадии приемо-сдаточных испытаний устройства подвергают испытаниям по следующим показателям:

• определение восстановительных примесей в вытяжке;
• определение изменения величины pH вытяжки;
• определение остаточных количеств циклогексанона и тетрагидрофурана растворителей, используемых при склеивании деталей и узлов устройств;
• определение остаточных количеств окиси этилена при газовой стерилизации устройств;
• определение индекса токсичности на клеточном тест-объекте или острой токсичности на белых мышах;
• испытания на стерильность;
• испытания на пирогенность.

4.7.1. В условиях серийного производства предприятие-изготовитель проводит контроль полимерного сырья, используемого для их изготовления, а также всех функциональных элементов устройств — капельница, трубка, инъекционный узел и др., приобретаемых у сторонних организаций.

4.7.2. Полимерное сырье и функциональные элементы устройств, приобретаемые у сторонних организаций, подвергают контролю в соответствии с требованиями ГОСТ 24297 с привлечением следующих показателей:

• санитарно-химические с определением восстановительных примесей (5.3.1.), изменения величины pH вытяжки (5.3.2.);
• токсикологические с определением индекса токсичности на клеточном тест-объекте (5.4.2.) или острой токсичности на белых мышах (5.4.1.).

4.7.3. В течение двух лет с начала серийного выпуска, каждую партию устройств подвергают санитарно-химическим испытаниям с определением восстановительных примесей (5.3.1.), изменения величины pH вытяжки (5.3.2.), с определением остаточных количеств окиси этилена, циклогексанона и тетрагидрофурана (5.3.3.) и токсикологическим испытаниям с определением индекса токсичности на клеточном тест-объекте (5.4.2.) или острой токсичности на белых мышах (5.4.1.); испытаниям на стерильность (5.4.3.) и пирогенность (5.4.4.).

4.7.4. При отсутствии на предприятии в течение 2-х лет с начала серийного выпуска устройств случаев выбраковки по санитарно-химическим показателям, токсичности и пирогенности контроль по указанным показателям проводят от каждой двадцать пятой партии, но не реже одного раза в месяц.

Контролю на стерильность подвергается каждая партия устройств.

4.7.5. В случае превышения допустимых значений санитарно-химических показателей, выявлении токсичности, выбраковки по пирогенности и нестерильности устройств испытаниям по указанным показателям подвергают десять партий устройств подряд. Выявляют и устраняют причины появления брака. В дальнейшем при отсутствии выбраковки по санитарно-химическим показателям, токсичности и пирогенности контроль проводят от каждой двадцать пятой партии, но не реже одного раза в месяц.

4.8. Допустимые значения санитарно-химических и биологических показателей.

4.8.1. Значения санитарно-химических и токсикологических показателей, а также показателей стерильности и апирогенности должны соответствовать приведенным в таблице 1.

Таблица 1

Значения санитарно-химических, токсикологических показателей, показателей стерильности и апирогенности

5. Методы испытаний

5.1 Средства контроля и вспомогательные устройства.

Средства контроля: испытательное оборудование, химические реактивы и вспомогательные устройства, применяемые для испытаний, приведены в приложении А.

Наименование показателей и методы испытаний

5.2 Порядок подготовки к испытаниям.

5.2.1 Отбор образцов.

5.2.1.1. Для проведения испытаний образцы устройств отбирают из разных мест партии в количестве, указанном в таблице 3.

Таблица 3

Количество образцов устройств,

Обозначения: N — количество изделий в партии. Количество изделий, отобранных для испытания на стерильность, должно быть не менее 3 и не более 40 — при радиационной стерилизации и не менее 3 и не более 13 — при газовой стерилизации.

5.2.2 Приготовление вытяжек из устройств.

5.2.2.1. Все работы по приготовлению вытяжек из устройств выполняют с соблюдением требований асептики.

5.2.2.2. Для проведения санитарно-химических и токсикологических испытаний вытяжки из образцов приготавливают на стенде. Принципиальная схема стенда приведена в приложении Б.

Отобранные для испытаний устройства извлекают из упаковок. Три последовательно соединенных между собой устройства, стеклянная колба, помещенная в термостат, и перистальтический насос образуют замкнутый циркуляционный контур.

Через контур в течение 2-х часов со скоростью потока 1 л/час пропускают 250 мл дистиллированной воды, подогреваемой в колбе с помощью термостата до (37 +/- 1) град. C.

В качестве контрольного раствора используют 250 мл дистиллированной воды, пропущенной через замкнутый циркуляционный контур в тех же условиях, но без присоединения устройств.

По истечении указанного срока, не нарушая герметичности контура, извлекают колбу из термостата, охлаждают до комнатной температуры.

В первую очередь непосредственно из контура производят отбор проб для хроматографического определения окиси этилена, циклогексанона и тетрагидрофурана путем прокола иглой шприца полимерной трубки устройства. Остальную часть вытяжки сливают в стеклянную емкость со шлифом.

5.2.2.3 Приготовление смыва для контроля апирогенности.

5.2.2.3.1. Вводят в устройство стерильный апирогенный физиологический раствор, выдерживают 5 минут, после чего выливают содержимое в стеклянную емкость со шлифом.

Количество раствора берут равным объему устройства.

5.2.2.4 Приготовление смыва для контроля стерильности.

5.2.2.4.1 Приготовление смыва для контроля стерильности проводят по 5.4.3.1.2.

5.2.3. Для проверки сырья на соответствие санитарно-химическим и токсикологическим показателям 300 г полимерного материала помещают в стеклянную емкость со шлифом, заливают 1000 мл дистиллированной воды и выдерживают в термостате при температуре (70 +/- 2) град. C в течение 24 ч.

В качестве контрольного раствора используют дистиллированную воду, помещенную в колбу со шлифом, которая термостатируется в тех же условиях.

По истечении указанного срока колбы с испытуемыми материалами и контрольным раствором извлекают из термостата и охлаждают до комнатной температуры. Вытяжки из материалов сливают в колбы со шлифом.

5.3 Санитарно-химические испытания.

5.3.1. Определение в вытяжке восстановительных примесей (окисляемых веществ).

Определение восстановительных примесей относится к интегральным показателям и позволяет оценивать общее количество мигрирующих из устройств в водную вытяжку веществ восстановительного характера.

5.3.1.1 Методика определения восстановительных примесей.

20 мл исследуемой вытяжки переносят пипеткой в коническую колбу вместимостью 250 мл, снабженную притертой пробкой, прибавляют 20 мл раствора марганцовокислого калия (0,002 н.) и 1 мл серной кислоты (3 н.), закрывают колбу пробкой, осторожно перемешивают содержимое колбы и оставляют стоять на 15 мин. По истечении указанного срока прибавляют 0,1 г йодистого калия и выделившийся йод титруют раствором серноватистокислого натрия (0,02 н.) до светло-желтого цвета. Затем добавляют 0,5 мл раствора крахмала (0,5%) и продолжают титровать до обесцвечивания раствора. Титрование контрольного раствора проводят в тех же условиях. Для этого используют 20 мл контрольного раствора. Определение проводят не менее чем в двух параллельных пробах (из одной и той же вытяжки или контрольного раствора). Расхождение между параллельными пробами не должно превышать 0,05 мл 0,02 н. раствора серноватистокислого натрия.

5.3.1.2 Обработка результатов.

Количество восстановительных примесей выражают в объеме (мл) 0.02 н. раствора серноватистокислого натрия, затраченного на их определение (ДЕЛЬТА V), и рассчитывают по формуле:

ДЕЛЬТА V = Vk -Vb,

где Vk — объем 0,02 н. раствора серноватистокислого натрия, израсходованного на титрование контрольного раствора, мл;

Vb — объем 0,02 н. раствора серноватистокислого натрия, израсходованного на титрование вытяжки, мл.

Результат определения (с доверительной вероятностью 0,95) считается приемлемым, если расхождение между значениями Vb не превышает 0,05 мл, и расхождение между значениями Vk также не превышает 0,05 мл.

За результат испытаний принимают среднее арифметическое двух приемлемых результатов определения, округленное до десятых долей.

5.3.2 Определение изменения величины pH вытяжки.

Величина pH характеризует кислотность или основность вытяжки.

5.3.2.1 Методика измерения.

Испытуемую вытяжку и контрольный раствор помещают в стеклянный стакан и измеряют величину pH вытяжки и контрольного раствора.

5.3.2.2 Обработка результатов.

Изменение величины pH рассчитывают по формуле:

ДЕЛЬТА pH = (рH)b — (рH)k,

где (рH)b — pH вытяжки;

(рH)k — pH контрольного раствора.

(pH) вытяжки и (pH) контрольного раствора рассчитывают как среднее арифметическое трех параллельных определений (с доверительной вероятностью 0,95), которые считают приемлемыми, если расхождение между наибольшим и наименьшим результатом определений не превышает 0,05 ед. pH.

Значение результатов определения pH округляют до десятых долей.

5.3.3 Определение окиси этилена, циклогексанона и тетрагидрофурана.

Определение остаточных количеств окиси этилена, циклогексанона и тетрагидрофурана в вытяжках из устройств проводят методом газо-жидкостной хроматографии.

5.3.3.1. Приготовление стандартных растворов циклогексанона и тетрагидрофурана.

В мерную колбу со шлифом вместимостью 100 мл вносят примерно 10 мл дистиллированной воды. Взвешивают на аналитических весах (до 0,1 мг). Затем в колбы прибавляют около 10 мкл (примерно 9 мг) циклогексанона или тетрагидрофурана соответственно, массу которых определяют взвешиванием (до 0,1 мг). Растворы в колбах доводят до метки дистиллированной водой и тщательно перемешивают. Получают растворы с концентрацией указанных растворителей примерно 200 мг/л. Стандартные растворы с содержанием циклогексанона от 1,0 до 10 мг/л и тетрагидрофурана от 5,0 до 50,0 мг/л готовят объемным методом путем разбавления соответствующих основных растворов дистиллированной водой.

5.3.3.2 Приготовление стандартных растворов окиси этилена.

Все работы, связанные с приготовлением и использованием растворов окиси этилена, проводят с соблюдением условий герметичности. Стеклянный флакон вместимостью 60-65 мл заполняют взвешенным количеством дистиллированной воды (до 0,1 мг) так, чтобы объем незаполненного пространства составлял примерно 1 мл. Флакон герметизируют с помощью резиновой прокладки и пластмассовой крышки с отверстием посередине. Затем из охлажденной до 0 град. C емкости с окисью этилена охлажденным микрошприцем вводят во флакон примерно 10 мкл (около 9 мг) жидкой окиси этилена, массу которой определяют взвешиванием (до 0,1 мг). Получают раствор с концентрацией окиси этилена примерно 150 мг/л, который тщательно перемешивают в течение 15 мин. Стандартные растворы с содержанием окиси этилена от 0,5 до 5 мг/л готовят объемным методом путем разбавления основного раствора дистиллированной водой, используя набор микрошприцев и флаконов, подготовленных аналогично вышеизложенному.

5.3.3.3 Проведение анализа.

1 мкл стандартного раствора или вытяжки вводят в испаритель хроматографа. Для каждого стандартного раствора или вытяжки проводят не менее пяти параллельных определений. Условия и параметры хроматографического анализа приведены в таблице 3.

Таблица 3

Условия и параметры хроматографического

Допускается изменение условий хроматографирования в пределах, обеспечивающих определение окиси этилена, циклогексанона и тетрагидрофурана в соответствии с требованиями методики.

Площади пиков определяют с помощью электронного интегратора. При отсутствии интегратора площади пиков рассчитывают как произведения высоты на ширину пика на половине высоты. Строят калибровочный график в координатах: по оси абсцисс — концентрация определяемого вещества в стандартном растворе Cx, мг/л, по оси ординат — площади соответствующих пиков S, мкB с.

5.3.3.4 Обработка результатов.

Концентрацию определяемого вещества (окиси этилена, циклогексанона и тетрагидрофурана) в анализируемой вытяжке из устройств Cx, мг/л, рассчитывают по формуле:

                          n
                         SUM C
                              i
                         i=1

                        C  = -------,
                         x      n

    где C  - концентрация    определяемого   вещества   в   пробе,

     i

найденная по калибровочному графику, мг/л; n — число проб.

С целью оценки полученных результатов рассчитывают среднее арифметическое и среднее квадратичное отклонение, по которым рассчитывают коэффициент вариации k:

                       сигма

k = ----- x 100%, x

где сигма - среднее квадратическое отклонение;
        x - среднее арифметическое значение.

В случае получения значения коэффициента вариации более 7% для окиси этилена и более 5% для циклогексанона и тетрагидрофурана, определение повторяют. Если значение коэффициента вариации менее или равно 7% для окиси этилена и 5% для циклогексанона и тетрагидрофурана, то результат считают статистически значимым.

5.4 Токсикологические испытания.

5.4.1 Определение острой токсичности на белых мышах.

Вытяжку из устройств испытывают на беспородных белых мышах-самцах массой 18-25 г, прошедших 7-дневный карантин. В опытной и контрольной группах должно быть не менее 8 животных. Водную вытяжку в количестве 50 мл на килограмм массы тела животных вводят однократно внутрибрюшинно. Животным контрольной группы в том же объеме вводят дистиллированную воду.

Состояние животных оценивают по следующим тестам:

• масса тела в граммах — определяют до введения вытяжки и через сутки после введения, натощак;
• общее состояние животных: поведение, подвижность, состояние шерстного покрова сразу после введения, через 4 и 24 часа после введения;
• макроскопическая оценка состояния внутренних органов и тканей на вскрытии. Животных умерщвляют декапитацией через 24 часа после введения вытяжки. Сначала вскрывают контрольную группу, затем — подопытную, обращая внимание на область введения вытяжки, состояние подкожной клетчатки, брюшины, мышц брюшной стенки, региональных лимфоузлов и их протоков, внутренних органов;
• взвешивание внутренних органов: печени, почек, селезенки; определение коэффициентов массы внутренних органов делением массы органа в милиграммах на массу тела в граммах. Полученные цифровые данные подлежат статистической обработке с использованием критерия «t» Стьюдента. В случае получения достоверной разницы между опытной и контрольной группами по двум из исследуемых показателей вытяжка признается токсичной. При обнаружении достоверного отличия по одному из показателей состояния животных испытания следует повторить на удвоенном количестве животных. При повторном обнаружении достоверных различий изделие считают токсичным. В случае гибели 1-2 животных испытание повторяют на удвоенном количестве животных (по 16 мышей в каждой группе). При гибели хотя бы одного подопытного животного при повторном испытании изделие считают токсичным.

5.4.2 Определение индекса токсичности на клеточном тест-объекте.

5.4.2.1. Все растворы в течение эксперимента должны находиться при постоянной температуре (40 +/- 1,5) град. C.

5.4.2.2. Для определения индекса токсичности опытного раствора необходимо сравнить его с контрольным (модельным) раствором. В качестве контрольного раствора выбирают глюкозо-цитратную среду (глюкоза — 4 г, цитрат натрия — 1 г, дистиллированная вода — 100 мл).

Контрольная среда одновременно является разбавителем для оттаивания замороженной спермы. Опытным раствором является вытяжка из изделия, доведенная до изотонии глюкозой и цитратом (глюкоза — 4 г, цитрат — 1 г, вытяжка — 100 мл). Контрольный и опытный растворы по 0,4 мл помещают в пробирки с притертыми пробками и ставят в водяную баню при температуре (40 +/- 1,5) град. C. Контрольный и опытный растворы приготавливают заранее, за час до начала эксперимента.

5.4.2.3. Оттаивают замороженную сперму. Дозируют в пробирки по 0,3 или 0,4 мл разбавителя и ставят их в водную баню при температуре (40 +/- 1,5) град. C. Охлажденным до температуры жидкого азота анатомическим пинцетом извлекают из сосуда Дьюара гранулу спермы и опускают в нагретый раствор. НЕ ДОПУСКАЕТСЯ ОТТАИВАТЬ НЕСКОЛЬКО ГРАНУЛ В ОДНОЙ ПРОБИРКЕ!

Сразу после размораживания содержимое пробирок сливают в пробирку и тщательно перемешивают. В результате получается маточный раствор спермы.

5.4.2.4. Приготавливают рабочие образцы. В каждую пробирку контрольной и опытной серий помещают по 0,1 мл маточного раствора спермы.

5.4.2.5. Подготавливают пробы к исследованию. Каждый рабочий образец переносят в кювету. Кювету устанавливают в кюветодержатель и помещают в стенд.

5.4.2.6. Накапливают экспериментальные данные. При достижении нулевых значений показателя подвижности во всех кюветах прекращают процесс накопления данных.

5.4.2.7. Проводят обработку экспериментальных данных. Обработку экспериментальных данных осуществляют с помощью компьютера.

Для каждой пробы рассчитывают средневзвешенное время подвижности tcp, в условных единицах.

                                       SUM (m  x i)
                                        i    i
                       t   = In m  x --------------,
                        cp       1        SUM m
                                           i   i

    где m  - i-ое значение показателя подвижности,

     i

     i - текущий номер оценки показателя подвижности.

Для контрольной и опытной выборок образцов вычисляют среднее арифметическое значение и среднее квадратическое отклонение, по которым в свою очередь рассчитывают для каждой выборки коэффициент вариации C, по формуле:

                       дельта

C = ------ x 100%, — x

где дельта - среднее квадратическое отклонение,
         -
         x - среднее арифметическое значение.

В случае получения значения коэффициента вариации более 15% хотя бы для одной из выборок, повторяют эксперимент. Если значение коэффициента вариации для каждой из выборок меньше или равно 15%, то результаты считают статистически значимыми.

Затем рассчитывают величину индекса токсичности it по формуле,

                          _____o
                          t
                           ср

It = -------- x 100% _____k t ср

        ____o    ____k
    где t      и t     - среднее      арифметические      значения
         ср       ср

средневзвешенного времени подвижности, соответственно, для опытной и контрольной выборок образцов.

5.4.2.8 Оценка результатов контроля.

Испытуемую партию устройств считают нетоксичной, если индекс токсичности в пределах от 70 до 120%. Если индекс токсичности не соответствует указанному пределу, следует провести испытания на удвоенном количестве устройств, начиная с п. 5.4.2. Если на удвоенном количестве устройств индекс токсичности не соответствует указанному пределу, партию устройств считают токсичной.

5.4.3. Испытания на стерильность проводят методом прямого смыва или посева или с использованием биотестов.

5.4.3.1 Испытания на стерильность методом прямого смыва или посева.

5.4.3.1.1 Отбор проб.

Количество проб, отбираемых для первичного посева n, составляет:

                                __
                               /

n = 0,4 x /N,

где N — количество изделий в партии.

Максимальное количество проб, отбираемых для первичного посева, 13 при газовом методе стерилизации и 40 при радиационном методе стерилизации.

Кроме устройств, направленных непосредственно на анализ, отбирают также дубликаты в тройном количестве: две части из них используют, в случае необходимости, для повторного контроля, одну часть оставляют для арбитражного хранения.

5.4.3.1.2 Метод и процедура проведения испытания на стерильность.

Испытания на стерильность проводят методом прямого смыва или посева с рабочих поверхностей в тиогликолевую среду.

Под рабочей поверхностью понимают любую поверхность устройства, контактирующую непосредственно или опосредовано с внутренней средой организма пациента.

Посевы помещают в термостат при температуре 32 град. C и выдерживают 8 суток при газовом методе стерилизации или 14 суток при радиационном методе стерилизации, после чего проводят учет результатов. При выявлении проростов повторяют посев удвоенного количества устройств.

Допускается использовать другие питательные среды, рекомендованные Минздравом РФ для устройств, на которые распространяется настоящий стандарт.

5.4.3.2 Испытания на стерильность с использованием биотестов.

5.4.3.2.1. Методика контроля стерильности устройств, стерилизованных газовым методом (окись этилена) с помощью биотестов.

5.4.3.2.1.1 Требования к биотестам.

5.4.3.2.1.1.1. Биотест представляет из себя носитель (шприц инъекционный однократного применения 2А или 5Б ЛУЭР ГОСТ 24861-91), содержащий споры культуры микроорганизмов, обладающих достаточной устойчивостью к действию стерилизующего агента, например, Вас. subtilis Globigii или Вас. subtilis Var. Niger.

5.4.3.2.1.1.2. Биотесты поставляются в комплекте, состоящем из носителей со спорами и индикаторной питательной среды, расфасованной во флаконы. Изготовитель биотестов должен быть аттестован.

5.4.3.2.1.1.3 Каждая партия биотестов сопровождается паспортом с указанием:

• метода стерилизации, для которого предназначен биотест;
• названия культуры микроорганизмов;
• количества микробных клеток;
• номера партии;
• срока годности;
• условий хранения;
• наименования предприятия-изготовителя.

5.4.3.2.1.2 Контроль стерильности.

Для проведения контроля биотесты помещают в коробки (ящики) с устройствами между индивидуальными упаковками. В каждую коробку (ящик) укладывают 5 биотестов. Каждую коробку (ящик), содержащую биотест, маркируют. Коробки (ящики), содержащие биотесты, стерилизуют одновременно с контролируемыми устройствами.

Допускается использовать фантомы, имитирующие стерилизуемую продукцию.

В качестве фантомов могут быть использованы, например, коробки (ящики), заполненные некондиционной продукцией. Для удобства отыскания фантомов коробки (ящики) могут иметь маркировку, например, цветовую.

5.4.3.2.1.2.2. На каждый цикл необходимо 3 коробки (ящика) с биотестами, или не менее 5 биотестов, размещаемых равномерно в камере стерилизатора по схеме, разработанной индивидуально для каждого вида продукции и стерилизатора.

5.4.3.2.1.2.3. На предприятиях, осуществляющих стерилизацию на собственной базе, по результатам оценки санитарно-гигиенического состояния производства, технологии стерилизации и вида стерилизуемой продукции условия стерилизации могут быть изменены в соответствии с инструкцией для данного предприятия, утвержденной Минздравом РФ.

5.4.3.2.1.2.4 Методика и техника исследования биотестов.

5.4.3.2.1.2.4.1. После проведения стерилизации партии устройств биотесты извлекаются работником службы контроля качества предприятия из коробок (ящиков) и собираются в полиэтиленовый пакет, где они хранятся не менее 24 ч. до проведения контроля стерильности.

5.4.3.2.1.2.4.2. Для определения жизнеспособности популяции микроорганизмов носители (шприцы) вынимают из защитной упаковки (до исследования шприцы можно хранить в защитной упаковке 2 недели в холодильнике), снимают колпачок с иглы, прокалывают иглой резиновую пробку флакона с индикаторной питательной средой и набирают в цилиндр 1 мл питательной среды. Колпачок вновь надевают на иглу, а шприц с питательной средой возвращают в пакет и устанавливают в термостате при соответствующей температуре. Пакет помещают таким образом, чтобы шприц оказался иглой вниз. Биотесты помещают в термостат и оставляют в термостате на 48 ч. Для биотестов, стерилизованных окисью этилена, используют температуру термостатирования (37 + 1) град. C 1.

5.4.3.2.1.2.5 Учет результатов.

5.4.3.2.1.2.5.1. Учет результатов исследования биотестов проводят после термостатирования в течение 48 ч. Предварительную обработку результатов проводят через 24 ч.

5.4.3.2.1.2.5.2. О гибели микроорганизмов в шприце-биотесте в процессе стерилизации свидетельствует неизменный цвет питательной среды (зеленый). При сохранении цвета питательной среды во всех шприцах-биотестах делается вывод об эффективности процесса стерилизации и о стерильности данной партии устройств.

5.4.3.2.1.2.5.3. Если цвет питательной среды в шприце в процессе термостатирования изменился на желтый, это свидетельствует о наличии жизнеспособных микроорганизмов. В этом случае проводят бактериологический анализ выросших микроорганизмов. При выявлении роста тест-культуры, делается вывод о неэффективности процесса стерилизации и о нестерильности данной партии устройств.

5.4.3.2.2. Методика контроля стерильности устройств, стерилизованных радиационным методом с помощью биотестов.

5.4.3.2.2.1 Требования к биотесту.

5.4.3.2.2.1.1. Биотест представляет носитель (шприц инъекционный однократного применения 2А или 5Б Луер по ГОСТ 24861-91), содержащий споры культуры микроорганизмов с радиорезистентностью не менее 2,1 кГр, например (Bac. Subtilis JSY 228).

5.4.3.2.2.1.2. Биотесты поставляются в комплекте, состоящем из носителей со спорами и индикаторной питательной средой, расфасованной во флаконы. Изготовитель биотестов должен быть аттестован.

5.4.3.2.2.1.3 Каждая партия биотестов сопровождается паспортом с указанием:

• метода стерилизации, для которого предназначен биотест;
• стерилизующей дозы, на которую рассчитан биотест;
• названия культуры микроорганизмов;
• количества микробных клеток;
• радиорезистентности культуры микроорганизмов;
• номера партии;
• срока годности;
• условий хранения;
• наименования предприятия-изготовителя.

5.4.3.2.2.2 Контроль стерильности.

5.4.3.2.2.2.1. Для проведения контроля биотесты помещают в коробки (ящики) с устройствами между индивидуальными упаковками. В каждую коробку (ящик) укладывают 5 биотестов. Каждую коробку (ящик), содержащую биотест, маркируют. Коробки (ящики), содержащие биотесты, облучают одновременно с контролируемыми устройствами. Допускается использовать фантомы, имитирующие облучаемую продукцию (см. п. 5.4.3.2.1.2.).

5.4.3.2.2.2.2. Для гамма-установок с периодическим технологическим циклом на каждый цикл необходимо 3 коробки (ящика) с биотестами, размещаемые в местах поля гамма-установок с наименьшей мощностью дозы. Для гамма-установок с непрерывным технологическим циклом коробку (ящик) с биотестами помещают на транспортное устройство через каждые два часа работы установки, но не менее 3 на партию устройств. Для ускорителей электронов, работающих в циклическом режиме на каждый цикл используют одну коробку (ящик) с биотестами. Для ускорителей электронов, работающих в непрерывном режиме, — одну коробку через каждые 2 ч. работы, но не менее 3 коробок на партию продукции.

5.4.3.2.2.2.3. На предприятиях, осуществляющих стерилизацию на собственной базе, по результатам оценки санитарно-гигиенического состояния производства, технологии стерилизации и вида стерилизуемой продукции условия стерилизации могут быть изменены в соответствии с инструкцией, утвержденной Минздравом РФ для данного предприятия.

5.4.3.2.2.2.4 Методика и техника исследования биотестов

5.4.3.2.2.2.4.1. После проведения облучения партии устройств биотесты извлекаются работником службы контроля качества предприятия из коробок (ящиков) и собираются в полиэтиленовый пакет, где они хранятся не менее 24 ч. до проведения контроля стерильности.

5.4.3.2.2.2.4.2. Для определения жизнеспособности популяции микроорганизмов носители (шприцы) вынимают из защитной упаковки (до исследования шприцы можно хранить в защитной упаковке 2 недели в холодильнике), снимают колпачок с иглы, прокалывают иглой обработанную спиртом резиновую пробку флакона с индикаторной питательной средой и, не освобождая цилиндр от воздуха, набирают в цилиндр 1 см питательной среды. Колпачок вновь надевают на иглу, а шприц с питательной средой возвращают в пакет и устанавливают в термостате (37 + 1) град. C. Пакет помещают таким образом, чтобы шприц оказался иглой вниз. Биотесты помещают в термостат и оставляют в термостате на 48 ч.

5.4.3.2.2.2.5 Обработка результатов.

5.4.3.2.2.2.5.1. Обработка результатов исследования биотестов проводят после термостатирования в течение 48 ч. Предварительную обработку результатов проводят через 24 ч.

5.4.3.2.2.2.5.2. О гибели микроорганизмов в шприце-биотесте в процессе стерилизации свидетельствует неизменный цвет питательной среды (зеленый). При сохранении цвета питательной среды во всех шприцах-биотестах делается вывод о эффективности процесса стерилизации и о стерильности данной партии устройств.

5.4.3.2.2.2.5.3. Если цвет питательной среды в шприце в процессе термостатирования изменился на желтый, это свидетельствует о наличии жизнеспособных микроорганизмов. В этом случае проводят бактериологический анализ выросших микроорганизмов. При выявлении роста тест-культуры, делаются вывод о неэффективности процесса стерилизации и о нестерильности данной партии устройств.

5.4.4 Испытания на пирогенность.

5.4.4.1 Испытание на пирогенность на кроликах.

Отбор, содержание, подготовку животных к испытаниям, повторность их использования проводят по Государственной Фармакопее XI издания.

Тест-доза — 10 мл на килограмм веса кролика. Вытяжку вводят в ушную вену.

Испытуемую партию устройств считают апирогенной, если после введения вытяжки ни у одного из подопытных кроликов ни при одном из трех измерений не наблюдалось повышение температуры больше, чем на 0,6 град. C по сравнению с исходной температурой и в сумме повышение температуры при каждом измерении у 3 кроликов не превышало 1,4 град. C.

Если у одного или двух кроликов температура повысилась более, чем на 0,6 град. C и в сумме при каждом измерении у 3 кроликов повышение температуры составило более 1,4 град. C, испытание повторяют дополнительно на 5 кроликах.

Партию устройств считают апирогенной, если не более чем у 3 из 8 кроликов наблюдалось индивидуальное повышение температуры на 0,6 град. C и более и общая сумма повышений температуры у всех 8 кроликов не превышала 3,7 град. C.

Допускается максимальное понижение температуры на 0,6 град. C. В случае понижения температуры у одного кролика более чем на 0,6 град. C, испытание повторяют на 5 кроликах.

Партию устройств считают апирогенной, если после повторного исследования ни у одного из 5 кроликов максимальное понижение температуры не превысило 0,6 град. C и не более, чем у 2-х кроликов из 5 температура понизилась на 0,6 град. C по сравнению с исходной. В противном случае партию устройств бракуют.

5.4.4.2. Испытания на пирогенность методом реакции связывания комплемента.

5.4.4.2.1 Приготовление раствора антител.

Для этого берут длинным анатомическим пинцетом замороженную гранулу антител из сосуда Дьюара и помещают в сухую пробирку.

5.4.4.2.2. Приготовление раствора антигена с концентрацией 50 минимальных пирогенных доз в 1 куб. см. Для этого вскрывают ампулу с липополисахаридом, содержащую 500 минимальных пирогенных доз в 1 куб. см. 0,1 куб. см этого препарата переливают в пробирку с 0,9 куб. см апирогенного раствора хлорида натрия. Приготовленный раствор тщательно перемешивают, при этом концентрация антигена в нем будет составляет 50 минимальных пирогенных доз в куб. см.

5.4.4.2.3. Приготовление раствора комплемента. Для этого берут длинным анатомическим пинцетом гранулу замороженного комплемента и помещают в сухую пробирку.

5.4.4.2.4. Приготовление опытного образца. Для этого в пробирку с притертой пробкой наливают 1 куб. см испытуемого образца вытяжки, а также антитела и комплемент согласно паспорту. Содержимое пробирки перемешивают встряхиванием.

5.4.4.2.5. Приготовление контрольного образца с отрицательной реакцией. Для этого в пробирку с притертой пробкой наливают 1 куб. см раствора хлорида натрия, а также антитела и комплемент согласно паспорту. Содержимое пробирки перемешивают встряхиванием.

5.4.4.2.6. Приготовление контрольного образца с положительной реакцией. Для этого в пробирку с притертой пробкой наливают 1 куб. см раствора хлорида натрия, добавляют 0,02 куб. см раствора антигена по 5.4.4.2.2. и добавляют антитела и комплемент согласно паспорту. Содержимое пробирки перемешивают встряхиванием.

5.4.4.2.7. Опытный и контрольные образцы помещают в термостат. Проводят инкубацию в течение 18-24 ч. при температуре (27 + 2) град. C в термостате или при температуре (5 + 2) град. C в холодильнике. Рекомендуемый температурный режим указан в паспорте.

5.4.4.2.8. Приготовление биосенсорной системы. Для этого помещают пипеткой в пробирки объем разбавителя, указанный в паспорте, и ставят их в водяную баню при температуре (40 + 1,5) град. C. В каждую пробирку добавляют объем антител, указанный в паспорте, тщательно перемешивают встряхиванием. Охлажденным до температуры жидкого азота длинным анатомическим пинцетом извлекают из сосуда Дьюара гранулу спермы и опускают в нагретый раствор. После оттаивания гранулы содержимое пробирки перемешивают и выдерживают 10 мин. НЕ ДОПУСКАЕТСЯ ОТТАИВАТЬ НЕСКОЛЬКО ГРАНУЛ В ОДНОЙ ПРОБИРКЕ! Содержимое пробирок сливают в одну и перемешивают встряхиванием. Получается маточный раствор спермы.

5.4.4.2.9. Приготовление рабочих образцов. Для этого в каждую пробирку контрольной и опытной серий добавляют по 0,2 куб. см маточного раствора спермы.

5.4.4.2.10. Подготовка пробы к исследованию на стенде. Для этого каждый рабочий образец переносят в кювету. Затем кювету устанавливают в кюветодержатель стенда.

5.4.4.2.11. Проведение накопления экспериментальных данных. Начинают процесс накопления данных. При достижении нулевых значений показателя подвижности во всех кюветах или по желанию оператора прекращают процесс накопления данных.

5.4.4.2.12 Обработка экспериментальных данных. Для каждого образца выживаемость S рассчитывают по формуле:

                       S = SUM  m ,
                            i    i

    где m  - i-oe значение показателя подвижности;

     i

    i - текущий номер оценки показателя подвижности.

5.4.4.2.13 Оценка результатов контроля.

5.4.4.2.13.1. Для контрольных образцов с положительной и отрицательной реакцией проверяют соотношение.

                        -кп    -ко
                       S    > S   ,

         -кп    -ко
    где S    и S    - среднее арифметическое значение выживаемости
выборок     образцов    контроля    положительного    и   контроля

отрицательного.

                                                         -кп   -ко
    Результаты  считают  статистически   значимыми, если S   и S

отличаются друг от друга по t-критерию при уровне значимости 0,05. В этом случае оценивают результаты по п. 5.4.4.2.13.2. В любом другом случае испытания повторяют, начиная с п. 5.4.4.2. Если при повторных испытаниях результат будет таким же, повторяют испытания с новым набором реактивов и посуды.

5.4.4.2.13.2 Оценка результатов испытаний образца вытяжки

          -кп    -о
    Если S    > S , то образец считают апирогенным.

          -о    -кп
    Если S   > S   , то образец признают пирогенным.

      -о
(где S   - среднее    арифметическое   значение   выживаемости

выборки образцов опыта).

При обнаружении пирогенности испытания по п. 5.4.4.2. необходимо повторить.

При этом вытяжку приготавливают из удвоенного количества вновь отобранных устройств. При получении такого же результата вытяжку признают пирогенной, а партию устройств бракуют.

5.5 Оформление результатов испытаний.

Результаты испытаний устройств на соответствие требованиям настоящего стандарта на стадии предварительных испытаний оформляют заключением, а на стадии приемо-сдаточных испытаний оформляют протоколами и заносят в паспорт на устройство.

Приложение А (обязательное)

Таблица А.1

Приложение Б (обязательное)

Б.1.1. Стенд предназначен для приготовления вытяжек из устройств, которые используют в санитарно-химических и токсикологических испытаниях.

Б.2. Описание стенда.

Б.2.1. Функциональная схема стенда должна соответствовать приведенной на рисунке Б.1. (не приводится).

Приложение В

В.1. Назначение стенда для определения индекса токсичности и испытаний на пирогенность (далее стенд).

В.1.1. Стенд предназначен для проверки вытяжек из устройств с целью определения индекса токсичности и контроля пирогенности.

В.2. Технические характеристики стенда.

В.2.1. Длина волны лазерного излучения — 0,63 мкм.

В.2.2. Мощность лазерного излучения не менее 1 мВт.

В.2.3. Время одного анализа от 10 до 300 с. с шагом 10 с.

В.2.4. Время перемещения капилляра с образцом не более 2 с.

В.2.5. Время обратного хода каретки не более 15 с.

В.2.6. Температура проб и рабочих образцов в диапазоне от 35 до 45 град. C с шагом 1 град. C. Отклонение температуры от установленного значения +0,5 град. C.

В.2.7. Основные размеры капилляра должны соответствовать приведенным на рисунке В.1. (не приводится).

В.3. Краткое техническое описание стенда.

В.3.1. Функциональная схема стенда приведена на рисунке В.2. (не приводится).

Конструктивное исполнение стенда обеспечивает одновременную оценку подвижности суспензии рабочего образца и визуальное наблюдение за клетками суспензии.

В.3.2. Проведение испытаний.

Включают стенд. С помощью компьютера 14 задают контроллеру 13 необходимые значения температуры каретки и блока подготовки проб, время одного анализа, количество используемых в данном эксперименте капилляров. После получения на мониторе информации о достижении заданных значений температуры готовят рабочие образцы в соответствии с п.п. 5.4.5.4. и 5.4.7.2.9. настоящего стандарта. Переносят рабочие образцы в капилляры.

Помещают капилляры 1 с рабочими образцами на каретку 2 и устанавливают в привод 3. С помощью компьютера 14 проводят идентификацию капилляров и запускают процесс накопления экспериментальных данных. При достижении нулевых значений показателя подвижности во всех капиллярах останавливают процесс накопления экспериментальных данных и проводят их математическую обработку по алгоритмам, приведенным в разделах 5.4.5.7. и 5.4.7.2.12. настоящего стандарта. Результаты расчетов распечатывают на принтере 15 и записывают в базу данных. При необходимости, происходящее в капиллярах с рабочими образцами наблюдают визуально на экране 9. Поддержание необходимой температуры каретки и на блоке подготовки проб, а также перемещение каретки осуществляют автоматически с помощью контроллера 13 и компьютера 14.

[1.] ИСО 10993-92 Оценка биологического действия медицинских изделий.

[2.] Сборник руководящих методических материалов по токсиколого-гигиеническим исследованиям полимерных материалов и изделий на их основе медицинского назначения, Москва, 1987 г.

[3.] Сборник методических рекомендаций по оценке биосовместимых свойств искусственных материалов, контактирующих с кровью, Москва, 1991 г.

[4.] Методические указания по санитарно-гигиенической оценке резиновых и латексных изделий медицинского назначения, Москва, 1988 г.