ФС.2.4.0020. Фармакопейная статья. Гесперидин
(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 № 377)
(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XV издание»)
Примечание
Текст документа приведен в соответствии с публикацией на сайте https://minzdrav.gov.ru/ по состоянию на 18.08.2023. В соответствии с Приказом Минздрава России от 20.07.2023 № 377 данный документ введен в действие с 01.09.2023.
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
| Гесперидин Гесперидин Hesperidinum | ФС.2.4.0020 |
| Вводится впервые |
| C28H34O15 [520-26-3] |
М.м. 610,6 |
|---|
ОПРЕДЕЛЕНИЕ
(2S)-5-Гидрокси-2-(3-гидрокси-4-метоксифенил)-7-{[6-O-(6-дезокси- \alpha -L-маннопиранозил)- \beta -D-глюкопиранозил]окси}-2,3-дигидро-4H-1-бензопиран-4-он.
Содержит не менее 90,0% гесперидина C28H34O15 в пересчете на сухое вещество.
СВОЙСТВА
Описание. От светло-коричневого до светло-желтого цвета кристаллический порошок.
Растворимость. Легко растворим в разбавленных растворах щелочей, очень мало растворим в метаноле, практически нерастворим в воде.
ИДЕНТИФИКАЦИЯ
1. ИК-спектрометрия (ОФС «Спектрометрия в средней инфракрасной области»). Инфракрасный спектр субстанции, снятый в диске с калия бромидом, в области от 4000 до 400 см-1 по положению полос поглощения должен соответствовать спектру фармакопейного стандартного образца гесперидина.
2. ВЭЖХ. Время удерживания основного пика на хроматограмме испытуемого раствора должно соответствовать времени удерживания пика гесперидина на хроматограмме раствора стандартного образца гесперидина (раздел «Количественное определение»).
ИСПЫТАНИЯ
Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).
Растворы, содержащие гесперидин, используют свежеприготовленными.
Подвижная фаза (ПФ). Метанол — уксусной кислоты раствор 0,5% 300:700.
Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 50 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в диметилсульфоксиде и доводят объем раствора диметилсульфоксидом до метки.
Раствор стандартного образца гесперидина. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 10 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца гесперидина, растворяют в диметилсульфоксиде и доводят объем раствора тем же растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 5,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора диметилсульфоксидом до метки.
Раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 2 мг фармакопейного стандартного образца гесперидина и 2 мг фармакопейного стандартного образца неогесперидина, растворяют в диметилсульфоксиде и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.
Раствор для проверки чувствительности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 1,0 мл раствора стандартного образца гесперидина и доводят объем раствора диметилсульфоксидом до метки.
Эриоцитрин: (2S)-5-гидрокси-7-{[6-O-(6-дезокси- \alpha -L-маннопиранозил)- \beta -D-глюкопиранозил]окси}-2-(3,4-дигидроксифенил)-2,3-дигидро-4H-1-бензопиран-4-он [13463-28-0].
Изонарингин нарирутин: (2S)-5-гидрокси-2-(4-гидроксифенил)-7-{[6-O-(6-дезокси- \alpha -L-маннопиранозил)- \beta -D-глюкопиранозил]окси}-2,3-дигидро-4H-1-бензопиран-4-он [14259-46-2].
Реогесперидин: (2S)-5-гидрокси-2-(3-гидрокси-4-метоксифенил)-7-{[2-O-(6-дезокси- \alpha -L-маннопиранозил)- \beta -D-глюкопиранозил]окси}-2,3-дигидро-4H-1-бензопиран-4-он [13241-33-3].
Диосмин: 5-гидрокси-2-(3-гидрокси-4-метоксифенил)-7-{[6-O-(6-дезокси- \alpha -L-маннопиранозил)- \beta -D-глюкопиранозил]окси}-4H-1-бензопиран-4-он [520-27-4].
Нарингенин: (2S)-5,7-дигидрокси-2-(4-гидроксифенил)-4H-1-бензопиран-4-он [480-41-1].
Дидимин неопонцирин: (2S)-5-гидрокси-7-{[6-O-(6-дезокси- \alpha -L-маннопиранозил)- \beta -D-глюкопиранозил]окси}-2-(4-метоксифенил)-2,3-дигидро-4H-1-бензопиран-4-он [14259-47-3].
Гесперетин: (2S)-5-гидрокси-2-(4-метоксифенил)-2,3-дигидро-4H-1-бензопиран-4-он [520-33-2].
Хроматографируют раствор для проверки чувствительности хроматографической системы, раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы, раствор стандартного образца гесперидина и испытуемый раствор.
Относительное время удерживания соединений. Гесперидин — 1 (около 8 мин); эриоцитрин — около 0,4; изонарингин — около 0,7; неогесперидин — около 1,2; диосмин — около 1,5; нарингенин — около 2,6; дидимин — около 3,0; гесперетин — около 3,8.
Пригодность хроматографической системы
На хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы отношение сигнал/шум (S/N) для пика гесперидина должно быть не менее 10.
На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы разрешение (RS) между пиками гесперидина и неогесперидина должно быть не менее 1,9.
На хроматограмме раствора стандартного образца гесперидина:
- фактор асимметрии пика (AS) гесперидина должен быть не более 2,0;
- относительное стандартное отклонение площади пика гесперидина должно быть не более 5,0% (6 введений);
- эффективность хроматографической колонки (N), рассчитанная по пику гесперидина, должна составлять не менее 2000 теоретических тарелок.
Поправочные коэффициенты. Для расчета содержания примесей площади пиков следующих примесей умножают на соответствующие поправочные коэффициенты: диосмин — 1,7; нарингенин — 0,5; гесперетин — 0,5.
Содержание любой примеси в субстанции в процентах (X) вычисляют по формуле:
X = \frac{S_{1} \cdot a_{0} \cdot P \cdot 50 \cdot 5}{S_{0} \cdot a_{1} \cdot 10 \cdot 100} ,
где S1 — площадь пика соответствующей примеси на хроматограмме испытуемого раствора;
S0 — площадь пика гесперидина на хроматограмме раствора стандартного образца гесперидина;
a0 — навеска фармакопейного стандартного образца гесперидина, мг;
P — содержание гесперидина в фармакопейном стандартном образце гесперидина, %.
Допустимое содержание примесей:
- примесь изонарингин нарирутина — не более 4,0%;
- примесь дидимин неопонцирина — не более 3,0%;
- любая единичная примесь — не более 1,0%;
- сумма примесей — не более 3,0%.
Не учитывают пики, площадь которых менее 0,1 площади основного пика на хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы (менее 0,1%).
Потеря в массе при высушивании. Не более 5,0% (ОФС «Потеря в массе при высушивании», способ 1). Для определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.
Сульфатная зола. Не более 0,3% (ОФС «Сульфатная зола»). Для определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.
Тяжелые металлы. Не более 0,002%. Определение проводят в соответствии с ОФС «Тяжелые металлы» (метод 3А или 3Б) в зольном остатке, полученном после сжигания 1,0 г субстанции, с использованием эталонного раствора 2.
Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».
КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ
Определение проводят методом ВЭЖХ в условиях испытания «Родственные примеси» со следующими изменениями.
Раствор стандартного образца гесперидина. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 10 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца гесперидина, растворяют в диметилсульфоксиде и доводят объем раствора диметилсульфоксидом до метки.
| Время хроматографирования | 30 мин. |
|---|
Хроматографируют раствор стандартного образца гесперидина и испытуемый раствор.
Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора стандартного образца гесперидина:
- фактор асимметрии пика (AS) гесперидина должен быть не более 2,0;
- относительное стандартное отклонение площади пика гесперидина должно быть не более 2,0% (6 введений);
- эффективность хроматографической колонки (N), рассчитанная по пику гесперидина, должна составлять не менее 2000 теоретических тарелок.
Содержание гесперидина C28H34O15 в субстанции в пересчете на сухое вещество в процентах (X) вычисляют по формуле:
X = \frac{S_{1} \cdot a_{0} \cdot 50 \cdot P \cdot 100}{S_{0} \cdot a_{1} \cdot 10 \cdot (100 - W)} ,
где S1 — площадь пика гесперидина на хроматограмме испытуемого раствора;
S0 — площадь пика гесперидина на хроматограмме раствора стандартного образца гесперидина;
a0 — навеска фармакопейного стандартного образца гесперидина, мг;
W — потеря в массе при высушивании, %;
P — содержание гесперидина в фармакопейном стандартном образце гесперидина, %.