ФС.2.1.0645. Фармакопейная статья. Ванкомицина гидрохлорид. Ванкомицин

(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 № 377)

(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XV издание»)

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Ванкомицина гидрохлорид Ванкомицин Vancomycini hydrochloridum	ФС.2.1.0645
	Вводится впервые

C66H75Cl2N9O24·HCl [1404-93-9]	М.м. 1485,7

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

(1S,2R,18R,19R,22S,25R,28R,40S)-22-(2-Амино-2-оксоэтил)-48-{[2-O-(3-C-амино-2,3,6-тридезокси-3-метил- \alpha -L-ликсо-гексопиранозил)- \beta -D-глюкопиранозил]окси}-2,18,32,35,37-пентагидрокси-19-[(2R)-4-метил-2-(метиламино)пентанамидо]-20,23,26,42,44-пентаоксо-5,15-дихлор-7,13-диокса-21,24,27,41,43-пентаазаоктацикло[26.14.2.23,6.214,17.18,12.129,33.010,25.034,39]пентаконта-3,5,8(48),9,11,14,16,29(45),30,32,34,36,38,46,49-пентадекаен-40-карбоновой кислоты гидрохлорид (1:1).

Содержит не менее 900 мкг/мг ванкомицина C66H75Cl2N9O24 в пересчете на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество.

Вещество, продуцируемое некоторыми штаммами Amycolatopsis orientalis.

СВОЙСТВА

Описание. Белый или почти белый микрокристаллический порошок. <*> Гигроскопичен.

---

<*> Приводится для информации.

Растворимость. Легко растворим в воде, очень мало растворим или практически нерастворим в спирте 96%.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

1. ИК-спектрометрия. (ОФС «Спектрометрия в средней инфракрасной области»). Инфракрасный спектр субстанции в области от 4000 до 400 см-1 по положению полос поглощения должен соответствовать спектру фармакопейного стандартного образца ванкомицина.

2. ВЭЖХ. Время удерживания основного пика на хроматограмме испытуемого раствора Б должно соответствовать времени удерживания основного пика (Ванкомицин В) на хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы (раздел «Ванкомицин В»).

3. Качественная реакция. Раствор субстанции 10% должен давать характерную реакцию А на хлориды (ОФС «Общие реакции на подлинность»).

ИСПЫТАНИЯ

Прозрачность раствора. Раствор 2 г субстанции в 20 мл воды должен быть прозрачным (ОФС «Прозрачность и степень опалесценции (мутности) жидкостей»).

Оптическая плотность. Оптическая плотность раствора, полученного в испытании «Прозрачность раствора», измеренная в максимуме поглощения при длине волны 450 нм в кювете с толщиной слоя 1 см, не должна превышать 0,1 (ОФС «Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях»).

pH раствора. От 2,5 до 4,5 (5% раствор, ОФС «Ионометрия», метод 3).

Приготовление испытуемого раствора. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 1 г субстанции, растворяют в воде, свободной от углерода диоксида, и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Ванкомицин В. Не менее 91,0%. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

Буферный раствор. Растворяют 2 мл триэтиламина в воде и доводят значение pH фосфорной кислотой концентрированной до 3,2, количественно переносят полученный раствор в мерную колбу вместимостью 1000 мл и доводят объем раствора водой до метки.

Подвижная фаза А (ПФА). Тетрагидрофуран — ацетонитрил — буферный раствор 10:70:920.

Подвижная фаза Б (ПФБ). Тетрагидрофуран — ацетонитрил — буферный раствор 10:290:700.

Испытуемый раствор А. В мерную колбу вместимостью 5 мл помещают 10 мг субстанции, растворяют в ПФА и доводят объем раствора ПФА до метки.

Испытуемый раствор Б. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 2,0 мл испытуемого раствора А и доводят объем раствора ПФА до метки.

Раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 30 мг фармакопейного стандартного образца ванкомицина гидрохлорида, растворяют в воде и доводят объем раствора водой до метки. Раствор переносят в коническую колбу с пришлифованной пробкой, нагревают до 65 °C и выдерживают при этой температуре в течение 24 ч, после чего охлаждают до комнатной температуры. Раствор используют в течение 4 ч.

Раствор для проверки чувствительности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 5,0 мл испытуемого раствора Б и доводят объем раствора ПФА до метки.

Хроматографические условия

Колонка	250 x 4,6 мм, силикагель октадецилсилильный для хроматографии, 5 мкм;
Температура колонки	30 °C;
Скорость потока	1,0 мл/мин;
Детектор	спектрофотометрический, 280 нм;
Объем пробы	20 мкл.

Режим хроматографирования

Время, мин	ПФА, %	ПФБ, %
0 — 13	100	0
13 — 22	100 \rightarrow 0	0 \rightarrow 100
22 — 27	0	100
27 — 30	0 \rightarrow 100	100 \rightarrow 0

Уравновешивают колонку в течение не менее 30 мин смесью ПФА — ПФБ в соотношении 0:100, уравновешивают колонку в течение 15 мин смесью ПФА — ПФБ в соотношении 100:0.

Хроматографируют раствор для проверки чувствительности хроматографической системы, раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы, испытуемые растворы А и Б.

Время удерживания ванкомицина В — около 11 мин.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы отношение сигнал/шум (S/N) для пика ванкомицина В должно быть не менее 10.

На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы разрешение (RS) между двумя основными пиками должно быть не менее 5,0.

На хроматограмме испытуемого раствора Б:

• фактор асимметрии пика (AS) ванкомицина В должен быть не более 1,6;
• относительное стандартное отклонение площади пика ванкомицина В должно быть не более 2,0% (6 введений);
• эффективность хроматографической колонки (N), рассчитанная по пику ванкомицина В, должна составлять не менее 2000 теоретических тарелок.

Содержание ванкомицина В в субстанции в процентах (X) вычисляют по формуле:

X = \frac{S_{\text{Б}} \cdot 100}{S_{\text{Б}} + \sum S_{\text{А}}25} ,

где SБ — площадь пика ванкомицина В на хроматограмме испытуемого раствора Б;

\sum S_{\text{А}} — сумма площадей пиков всех примесей на хроматограмме испытуемого раствора А;

25 — коэффициент разведения испытуемого раствора А.

Не учитывают пики, площадь которых составляет менее 0,2% от площади основного пика на хроматограмме испытуемого раствора А, а также пики, соответствующие пикам на хроматограмме ПФ.

Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ в условиях испытания «Ванкомицин В».

Содержание каждой из примесей в субстанции в процентах (X) вычисляют по формуле:

X = \frac{(S_{\text{А}}25) \cdot 100}{S_{\text{Б}} + \sum S_{\text{А}}25} ,

где SА — площадь пика любой примеси на хроматограмме испытуемого раствора А;

SБ — площадь пика ванкомицина В на хроматограмме испытуемого раствора Б;

\sum S_{\text{А}} — сумма площадей пиков всех примесей на хроматограмме испытуемого раствора А;

25 — коэффициент разведения испытуемого раствора А.

Допустимое содержание примесей:

• любая примесь — не более 4,0%;
• сумма примесей — не более 9,0%.

Не учитывают пики, площадь которых составляет менее 0,1% от площади основного пика на хроматограмме испытуемого раствора А, а также пики, соответствующие пикам на хроматограмме ПФ.

Вода. Не более 5,0% (ОФС «Определение воды», метод 1). Для определения используют 0,5 г (точная навеска) субстанции.

Сульфатная зола. Не более 1,0% (ОФС «Сульфатная зола»). Для определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.

Тяжелые металлы. Не более 0,003%. Определение проводят в соответствии с ОФС «Тяжелые металлы» (метод 3Б) в зольном остатке, полученном в испытании «Сульфатная зола». Для приготовления эталонного раствора к 3 мл свинец стандартный раствор 10 мкг/мл прибавляют 7 мл воды.

Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС «Остаточные органические растворители».

Аномальная токсичность. Субстанция должна быть нетоксичной (ОФС «Аномальная токсичность»). Тест-доза — 4 мг субстанции, растворенной в 0,5 мл воды для инъекций, на мышь, внутривенно со скоростью 0,1 мл/с. Срок наблюдения — 48 ч.

Бактериальные эндотоксины. Не более 0,25 ЕЭ на 1 мг субстанции (Ванкомицин В) (ОФС «Бактериальные эндотоксины»).

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Определение проводят микробиологическим методом в соответствии с ОФС «Определение антимикробной активности антибиотиков методом диффузии в агар».

ХРАНЕНИЕ

В герметично укупоренной упаковке в защищенном от света месте.

---