ФС.2.1.0526. Фармакопейная статья. Нистатин

(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 № 377)

(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XV издание»)

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Нистатин Нистатин Nystatinum	ФС.2.1.0526
	Взамен ФС 42-1140-98

C47H75NO17 [1400-61-9 (нистатин A1)]	М.м. 926,09

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Полиеновый антибиотик, продуцируемый актиномицетом Streptomyces noursei. (1S,3R,4R,7R,9R,11R,15S,16R,17R,18S,19E,21E,25E,27E,29E,31E,33R,35S,36R,37S)-33-[(3-Амино-3,6-дидезокси- \beta -D-маннопиранозил)окси]-1,3,4,7,9,11,17,37-октагидрокси-15,16,18-триметил-13-оксо-14,39-диоксабицикло[33.3.1]нонатриаконта-19,21,25,27,29,31-гексаен-36-карбоновая кислота (основной компонент — нистатин A1).

Содержит не менее 4400 единиц действия (ЕД) на один миллиграмм нистатина C47H75NO17 в пересчете на сухое вещество. Одна ЕД соответствует одной единице действия Международного стандарта нистатина.

СВОЙСТВА

Описание. Желтого или желто-коричневого цвета порошок.

<*> Гигроскопичен. Неустойчив к воздействию света, кислороду воздуха и нагреванию.

---

<*> Приводится для информации.

Растворимость. Легко растворим в диметилформамиде и диметилсульфоксиде, мало растворим в метаноле, практически нерастворим в воде и спирте 96%.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

1. ИК-спектрометрия (ОФС «Спектрометрия в средней инфракрасной области»). Инфракрасный спектр субстанции в области от 4000 до 400 см-1 по положению полос поглощения должен соответствовать спектру фармакопейного стандартного образца нистатина.

2. Спектрофотометрия (ОФС «Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях»).

Спектр поглощения испытуемого раствора, полученного в разделе «Оптическая плотность», в области длин волн от 220 до 350 нм (в кювете с толщиной слоя 1 см) должен иметь максимумы при 230 нм, 291 нм, 304 нм и 319 нм. Отношение оптических плотностей раствора в максимумах при 291 нм и 319 нм к оптической плотности в максимуме при 305 нм должно быть от 0,61 до 0,73 и от 0,83 до 0,96, соответственно.

Отношение оптической плотности в максимуме при 230 нм к оптической плотности на плече при 280 нм должно быть от 0,83 до 1,25.

3. Качественная реакция с хлористоводородной кислотой концентрированной. К 2,0 мг субстанции прибавляют 0,1 мл хлористоводородной кислоты концентрированной, должно появиться коричневое окрашивание.

4. Качественная реакция с серной кислотой концентрированной. К 2,0 мг субстанции прибавляют 0,1 мл серной кислоты концентрированной, должно появиться коричневое окрашивание. При отстаивании окраска должна измениться на фиолетовую.

ИСПЫТАНИЯ

Оптическая плотность. Оптическая плотность испытуемого раствора, измеренная при длине волны 305 нм в кювете с толщиной слоя 1 см, относительно раствора сравнения, должна быть не менее 0,60 (ОФС «Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях»).

Все растворы используют свежеприготовленными и защищают от света.

Растворитель. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 5,0 мл уксусной кислоты ледяной и доводят объем раствора метанолом до метки.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 0,1 г субстанции, растворяют в растворителе и доводят объем раствора растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора метанолом до метки. Измерение проводят в течение не более 30 мин после приготовления.

Раствор сравнения. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл растворителя и доводят объем раствора метанолом до метки.

Содержание компонентов A1 и AX нистатина. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

Все растворы используют свежеприготовленными и защищают от света.

Буферный раствор. К 1500 мл воды прибавляют 5,78 г аммония ацетата, фильтруют через мембранный фильтр и дегазируют ультразвуком.

Подвижная фаза А (ПФА). Ацетонитрил — Буферный раствор 290:710.

Подвижная фаза Б (ПФБ). Буферный раствор — ацетонитрил 400:600.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 20 мг (точная навеска) субстанции и доводят объем раствора диметилсульфоксидом до метки.

Раствор стандартного образца нистатина. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 20,0 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца нистатина и доводят объем раствора диметилсульфоксидом до метки.

Раствор сравнения. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 20,0 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в 25,0 мл метанола и доводят объем раствора водой до метки. К 10 мл полученного раствора прибавляют 2,0 мл кислоты хлористоводородной разведенной 7,3% и выдерживают при комнатной температуре в течение 1 ч.

Раствор для проверки чувствительности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл раствора стандартного образца нистатина и доводят объем раствора диметилсульфоксидом до метки. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора диметилсульфоксидом до метки.

Хроматографические условия

Колонка	150 x 4,6 мм, эндкепированный октадецилсилил силикагель, деактивированный по отношению к основаниям, 5 мкм;
Температура колонки	30 °C;
Скорость потока	1,0 мл/мин;
Детектор	спектрофотометрический, 305 нм;
Объем пробы	20 мкл;
Время хроматографирования	4-кратное от времени удерживания основного пика.

Режим хроматографирования

Время, мин	ПФА, %	ПФБ, %
0 — 25	100	0
25 — 35	100 \rightarrow 0	0 \rightarrow 100
35 — 45	0	100
45 — 50	0 \rightarrow 100	100 \rightarrow 0

Хроматографируют раствор для проверки чувствительности хроматографической системы, раствор сравнения и испытуемый раствор.

Относительное время удерживания соединений. Нистатин A1 — 1 (около 14 мин). Для идентификации пиков используют относительное время удерживания соединений и хроматограмму раствора сравнения.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора сравнения разрешение (RS) между двумя основными пиками должно быть не менее 3,5 (время удерживания — около 13 мин и 19 мин).

Основного компонента A1 должно быть не менее 85%, любых других компонентов AX — не более 4%.

Не учитывают пики, площадь которых менее площади основного пика компонента A1 на хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы и любые пики, время удерживания которых менее 2 мин.

Потеря в массе при высушивании. Не более 5,0% (ОФС «Потеря в массе при высушивании», способ 3). Сушат 1,0 г (точная навеска) субстанции до постоянной массы при температуре 60 °C в течение 3 ч при остаточном давлении не более 0,1 кПа.

Сульфатная зола. Не более 3,5% (ОФС «Сульфатная зола»). Для определения используют 1,0 г (точная навеска) субстанции.

Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС «Остаточные органические растворители».

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Определение проводят методом диффузии в агар (ОФС «Определение антимикробной активности антибиотиков методом диффузии в агар»).

ХРАНЕНИЕ

В герметично укупоренной упаковке, в защищенном от света месте при температуре не выше 5 °C.

---