ФС.2.1.0331. Фармакопейная статья. Эфавиренз

Министерство здравоохранения Российской Федерации · № ФС.2.1.0331Действующий акт

(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 20.07.2023 № 377)

(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XV издание»)

Примечание

Текст документа приведен в соответствии с публикацией на сайте https://minzdrav.gov.ru/ по состоянию на 23.08.2023. В соответствии с Приказом Минздрава России от 20.07.2023 № 377 данный документ введен в действие с 01.09.2023.

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Эфавиренз Эфавиренз Efavirenzum	ФС
	Вводится впервые


C₁₄H₉ClF₃NO₂ [154598-52-4]	М.м. 315,67

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

(4S)-4-(Трифторметил)-6-хлор-4-(циклопропилэтинил)-1,4-дигидро-2H-3,1-бензоксазин-2-он.

Содержит не менее 98,0% и не более 102,0% эфавиренза C₁₄H₉ClF₃NO₂ в пересчете на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество.

СВОЙСТВА

Описание. Белый или почти белый порошок.

<*> Проявляет полиморфизм.

<*> Приводится для информации.

Растворимость. Легко растворим в метаноле и дихлорметане, практически не растворим в воде.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

1. ИК-спектрометрия (ОФС «Спектрометрия в средней инфракрасной области»). Инфракрасный спектр предварительно высушенной при 105 °C в течение 30 мин и охлажденной в эксикаторе субстанции в области от 4000 до 400 см-1 по положению полос поглощения должен соответствовать спектру фармакопейного стандартного образца эфавиренза.

2. ВЭЖХ. Время удерживания основного пика на хроматограмме испытуемого раствора должно соответствовать времени удерживания пика эфавиренза на хроматограмме раствора стандартного образца эфавиренза (раздел «Количественное определение»).

ИСПЫТАНИЯ

Температура плавления. От 136 до 142 °C (ОФС «Температура плавления»).

Удельное вращение. От -89 до -100 в пересчете на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество (ОФС «Оптическое вращение»).

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 30 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в метаноле и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Энантиомерная чистота. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

Подвижная фаза (ПФ). Этанол — гексан 30:970.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 50 мг субстанции, растворяют в ПФ и доводят объем раствора ПФ до метки.

Раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 10 мг фармакопейного стандартного образца эфавиренза рацемического, растворяют в ПФ и доводят объем раствора ПФ до метки. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1 мл полученного раствора и доводят объем раствора ПФ до метки.

Примечание

(R)-Энантиомерэфавиренза: (4R)-4-(трифторметил)-6-хлор-4-(циклопропилэтинил)-1,4-дигидро-2H-3,1-бензоксазин-2-он [154801-74-8].

Хроматографические условия

Колонка 1	250 x 4,6 см, силикагель, модифицированный трис-3,5-диметифенилкарбаматом целлюлозы, 10 мкм;
Колонка 2 (соединена последовательно с колонкой 1)	250 x 4,6 см, силикагель нитрильный для хроматографии (1), 5 мкм;
Температура колонки	35 °C;
Скорость потока	1,0 мл/мин;
Детектор	спектрофотометрический, 250 нм;
Объем пробы	20 мкл;
Время хроматографирования	30 мин.

Хроматографируют раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы и испытуемый раствор.

Относительное время удерживания соединений. (S)-Энантиомер эфавиренза — 1; (R)-энантиомер эфавиренза — около 0,88.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы разрешение (RS) между пиками (R)-энантиомера эфавиренза и (S)-энантиомера эфавиренза должно быть не менее 3,0.

Содержание (R)-энантиомера эфавиренза в субстанции в процентах вычисляют согласно методу нормирования.

Допустимое содержание примесей. (R)-Энантиомер эфавиренза — не более 0,5%.

Родственные примеси

Метод 1. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

Все растворы защищают от действия света и используют свежеприготовленными. Используют только свежеоткрытую трифторуксусную кислоту со сроком хранения не более 6 мес. Для приготовления и хранения растворов, содержащих эфавиренз и его примеси, используют посуду из полипропилена.

Подвижная фаза А (ПФА). Трифторуксусная кислота — метанол — вода 0,5:100:900.

Подвижная фаза Б (ПФБ). Трифторуксусная кислота — метанол — вода 0,5:900:100.

Растворитель. Ацетонитрил — вода 50:50.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 25 мг (точная навеска) субстанции, прибавляют 65 мл растворителя, выдерживают на ультразвуковой бане в течение 20 мин, охлаждают до комнатной температуры и доводят объем раствора растворителем до метки.

Раствор стандартного образца эфавиренза. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 50 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца эфавиренза, прибавляют 30 мл растворителя, выдерживают на ультразвуковой бане в течение 30 мин, охлаждают до комнатной температуры и доводят объем раствора растворителем до метки.

Раствор стандартного образца примеси 2. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 2,5 мг фармакопейного стандартного образца примеси 2, прибавляют 30 мл растворителя, выдерживают на ультразвуковой бане в течение 30 мин, охлаждают до комнатной температуры и доводят объем раствора растворителем до метки.

Раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 25,0 мл раствора стандартного образца эфавиренза, прибавляют 2,0 мл раствора стандартного образца примеси 2 и доводят объем раствора растворителем до метки.

Стандартный раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 5,0 мл раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы и доводят объем раствора растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора растворителем до метки.

Хроматографические условия

Колонка	150 x 4,6 см, силикагель нитрильный для хроматографии (1), 5 мкм;
Температура колонки	40 °C;
Скорость потока	1,5 мл/мин;
Детектор	спектрофотометрический, 250 нм;
Объем пробы	35 мкл.

Режим хроматографирования

Время, мин	ПФА, %	ПФБ, %
0 — 16	60 \rightarrow 50	40 \rightarrow 50
16 — 23	50 \rightarrow 35	50 \rightarrow 65
23 — 28	35 \rightarrow 30	65 \rightarrow 70
28 — 29	30 \rightarrow 20	70 \rightarrow 80
29 — 31	20	80
31 — 32	20 \rightarrow 60	80 \rightarrow 40
32 — 40	60	40

Хроматографируют раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы, стандартный раствор и испытуемый раствор.

Относительное время удерживания соединений. Относительное время удерживания соединений (RRT) приведено в таблице 1.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы разрешение (RS) между пиками примеси 2 и эфавиренза должно быть не менее 1,2.

На хроматограмме стандартного раствора относительное стандартное отклонение площади пика эфавиренза должно быть не более 5,0% (6 введений).

Фактор отклика. Для расчета содержания площади пиков примесей делятся на соответствующие факторы отклика. Факторы отклика приведены в таблице 1.

Таблица 1

Характеристика родственных примесей эфавиренза

Примесь (сокращенное название)	Химическое название по ИЮПАК	CAS	RRT	Фактор отклика
Примесь 1 (аминоспиртэфавиренза)	(₂S)-₂-(2-Амино-5-хлорфенил)-1,1,1-трифтор-4-циклопропилбут-3-ин-2-ол	209414-27-7	Около 0,48	0,26
Примесь 2 (этеновый аналог эфавиренза)	(₄S)-₄-(Трифторметил)-6-хлор-4-[(E)-циклопропилэтенил]-1,4-дигидро-2H-3,1-бензоксазин-2-он	440124-96-9	Около 0,93	0,91
Эфавиренз	-	-	1	-
Примесь 3 (пент-3-ен-1-ин (транс) эфавиренз)	(4S)-4-[(3E)-Пент-3-ен-1-ин-1-ил]-4-(трифторметил)-6-хлор-1,4-дигидро-2H-3,1-бензоксазин-2-он	-	Около 1,16	1,0
Примесь 4 (пент-3-ен-1-ин (цис) эфавиренз)	(4S)-4-[(3Z)-Пент-3-ен-1-ин-1-ил]-4-(трифторметил)-6-хлор-1,4-дигидро-2H-3,1-бензоксазин-2-он	-	Около 1,16	1,0
Примесь 5 (пентенеин эфавиренза)	(4S)-4-(3-Метилбут-3-ен-1-ин-1-ил]-4-(трифторметил)-6-хлор-1,4-дигидро-2H-3,1-бензоксазин-2-он	-	Около 1,16	1,0
Примесь 6 (пентиновый аналог эфавиренза)	(4S)-4-(Пент-1-ин-1-ил)-4-(трифторметил)-6-хлор-1,4-дигидро-2H-3,1-бензоксазин-2-он	205755-86-8	Около 1,2	1,0
Примесь 7 (метилэфавиренз)	4-[(2-Метилциклопропил)этинил]-4-(трифторметил)-6-хлор-1,4-дигидро-2H-3,1-бензоксазин-2-он	353270-76-5	Около 1,28	1,0
Примесь 8 (аминоспиртметилкарбаматэфавиренза)	Метил(N-{[(2S)-2-гидрокси-1,1,1-трифтор-4-циклопропилбут-3-ин-2-ил]-4-хлорфенил}карбамат)	211563-40-5	Около 1,33	0,83
Примесь 9 (аналог хинолина)	4-(Трифторметил)-6-хлор-2-циклопропилхинолин	391860-73-4	Около 1,45	2,0
Примесь 10 (аминоспирт этилкарбамат эфавиренза)	Этил(N-{[(2S)-2-гидрокси-1,1,1-трифтор-4-циклопропилбут-3-ин-2-ил]-4-хлорфенил}карбамат)	211563-41-6	Около 1,53	0,83
Примесь 11	(неизвестная структура)	-	Около 1,60	1,0
Примесь 12 (аминоспирт бис(этоксикарбонил) эфавиренза)	Этил(N-{[(2S)-1,1,1-трифтор-4-циклопропил-2-[(этоксикарбонил)окси]бут-3-ин-2-ил]-4-хлорфенил}карбамат)	-	Около 1,63	0,34
Примесь 13 (N-бензилэфавиренз)	(4S)-1-[(4-Метоксифенил)метил]-4-(трифторметил)-6-хлор-4-(циклопропилэтинил)-1,4-дигидро-2H-3,1-бензоксазин-2-он	174819-21-7	Около 1,8	0,71
Примесь 14 (бензоиламиноспирт эфавиренза)	N-{2-[(2S)-2-Гидрокси-1,1,1-трифтор-4-циклопропилбут-3-ин-2-ил]-4-хлорфенил}-4-метоксибензамид	353270-77-6	Около 1,9	0,56
Примесь 15	(неизвестная структура)	-	Около 2,1	1,0
Примесь 16 (аналог циклобутенилиндола)	Этил[3-(трифторметил)-5-хлор-2-(циклобут-2-ен-1-ил)-1H-индол-1-карбоксилат]	-	Около 2,18	0,48

Содержание каждой из примесей в субстанции в процентах (X) вычисляют по формуле:

X = \frac{S_{1} \cdot a_{0} \cdot 100 \cdot 25 \cdot 5 \cdot 1 \cdot P}{S_{0} \cdot a_{1} \cdot 50 \cdot 100 \cdot 100 \cdot 10} ,

где S1 — площадь пика каждой из примесей на хроматограмме испытуемого раствора;

S0 — площадь пика эфавиренза на хроматограмме стандартного раствора;

a0 — навеска фармакопейного стандартного образца эфавиренза, мг;

a1 — навеска субстанции, мг;

P — содержание эфавиренза в фармакопейном стандартном образце эфавиренза, %.

Допустимое содержание примесей:

примесь 1 — не более 0,15%;
примесь 2 — не более 0,40%;
примесь 3 — не более 0,10%;
примесь 4 — не более 0,10%;
примесь 5 — не более 0,10%;
примесь 6 — не более 0,15%;
примесь 7 — не более 0,10%;
примесь 8 — не более 0,10%;
примесь 9 — не более 0,10%;
примесь 10 — не более 0,10%;
примесь 12 — не более 0,10%;
примесь 13 — не более 0,25%;
примесь 14 — не более 0,15%;
примесь 16 — не более 0,10%;
любая другая примесь — не более 0,10%;
сумма примесей — не более 1,1%.

Не учитывают пики менее 0,05%.

Если содержание примеси(ей) с относительным временем удерживания около 1,16 превышает 0,10%, то выполняют метод 2.

Метод 2. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

Подвижная фаза А (ПФА). Ацетонитрил — трифторуксусная кислота — вода 400:0,5:600.

Подвижная фаза Б (ПФБ). Ацетонитрил — трифторуксусная кислота — вода 800:0,5:200.

Растворитель. Ацетонитрил — трифторуксусная кислота — вода 55:0,05:45.

Раствор стандартного образца эфавиренза. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 2,5 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца эфавиренза, прибавляют 65 мл растворителя, выдерживают на ультразвуковой бане в течение 20 мин, охлаждают до комнатной температуры и доводят объем раствора растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора растворителем до метки.

Хроматографические условия

Колонка	250 x 4,6 см, силикагель октадецилсилильный для хроматографии, 5 мкм;
Температура колонки	35 °C;
Скорость потока	1,5 мл/мин;
Детектор	спектрофотометрический, 250 нм;
Объем пробы	20 мкл.

Режим хроматографирования

Время, мин	ПФА, %	ПФБ, %
0 — 40	100 \rightarrow 0	0 \rightarrow 100
40 — 45	0	100
45 — 45,1	0 \rightarrow 100	100 \rightarrow 0
45,1 — 50	100	0

Хроматографируют раствор стандартного образца эфавиренза и испытуемый раствор.

Относительное время удерживания соединений. Эфавиренз — 1; пент-3-ен-1-ин (цис) эфавиренз — около 1,10; пент-3-ен-1-ин (транс) эфавиренз — около 1,13; пентенеин эфавиренза — около 1,14.

Фактор отклика. Для расчета содержания площади пиков примесей делятся на соответствующие факторы отклика: пент-3-ен-1-ин (цис) эфавиренз — 1,1; пент-3-ен-1-ин (транс) эфавиренз — около 1,1; пентенеин эфавиренза — около 1,0.

Содержание каждой из трех примесей в субстанции в процентах (X) вычисляют по формуле:

X = \frac{S_{1} \cdot a_{0} \cdot 100 \cdot 1 \cdot P}{S_{0} \cdot a_{1} \cdot 100 \cdot 20} ,

где Si — площадь пика каждой из примесей на хроматограмме испытуемого раствора;

S0 — площадь пика эфавиренза на хроматограмме стандартного раствора;

a0 — навеска фармакопейного стандартного образца эфавиренза, мг;

a1 — навеска субстанции, мг;

P — содержание эфавиренза в фармакопейном стандартном образце эфавиренза, %.

Допустимое содержание примесей:

примесь 3 — не более 0,10%;
примесь 4 — не более 0,10%;
примесь 5 — не более 0,10%.

Вода. Не более 0,5% (ОФС «Определение воды», метод 1). Для определения используют 0,5 г (точная навеска) субстанции.

Сульфатная зола. Не более 0,2% (ОФС «Сульфатная зола»). Для определения используют 1,0 г (точная навеска) субстанции.

Тяжелые металлы. Не более 0,002%. Определение проводят в соответствии с ОФС «Тяжелые металлы» (метод 3Б) в зольном остатке, полученном в испытании «Сульфатная зола», с использованием эталонного раствора 2.

Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС «Остаточные органические растворители».

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Определение проводят методом ВЭЖХ в условиях испытания «Родственные примеси. Метод 1».

Стандартный раствор. В качестве стандартного раствора используют раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы (раздел «Родственные примеси. Метод 1»).

Хроматографируют стандартный раствор и испытуемый раствор.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме стандартного раствора:

разрешение (RS) между пиками примеси 2 и эфавиренза должно быть не менее 1,2;
фактор асимметрии пика (AS) эфавиренза должен быть не более 1,8;
относительное стандартное отклонение площади пика эфавиренза должно быть не более 1,0% (6 определений).

Содержание эфавиренза C₁₄H₉ClF₃NO₂ в субстанции в процентах (X) в пересчете на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество вычисляют по формуле:

X = \frac{S_{1} \cdot a_{0} \cdot 100 \cdot 25 \cdot P \cdot 100}{S_{0} \cdot a_{1} \cdot 50 \cdot 100 \cdot (100 - W)} ,

где S1 — площадь пика эфавиренза на хроматограмме испытуемого раствора;

S0 — площадь пика эфавиренза на хроматограмме стандартного раствора;

a1 — навеска субстанции, мг;

a0 — навеска фармакопейного стандартного образца эфавиренза, мг;

W — суммарное содержание воды и остаточных органических растворителей в субстанции, %;

P — содержание эфавиренза в стандартном образце эфавиренза, %.

ХРАНЕНИЕ

В защищенном от света месте.