---
title: "\"МУК 4.2.3250-14. 4.2. Методы контроля. Биологические и микробиологические факторы. Микробиологическое измерение концентрации Azotobacter chroococcum BH-1811 ВКПМ B-9029 в воздухе рабочей зоны. Методические указания\""
number: "МУК 4.2.3250-14"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/muk-4-2-3250-14"
---

## "МУК 4.2.3250-14. 4.2. Методы контроля. Биологические и микробиологические факторы. Микробиологическое измерение концентрации Azotobacter chroococcum BH-1811 ВКПМ B-9029 в воздухе рабочей зоны. Методические указания"

# "МУК 4.2.3250-14. 4.2. Методы контроля. Биологические и микробиологические факторы. Микробиологическое измерение концентрации Azotobacter chroococcum BH-1811 ВКПМ B-9029 в воздухе рабочей зоны. Методические указания"

(утв. Роспотребнадзором 30.12.2014)


<a id="p100001"></a>Утверждаю
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
**А.Ю.ПОПОВА**
30 декабря 2014 года


#### <a id="p100002"></a>4.2 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ.

**БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ**

<a id="p100003"></a>**МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЕ ИЗМЕРЕНИЕ КОНЦЕНТРАЦИИ**
**AZOTOBACTER CHROOCOCCUM BH-1811**
**ВКПМ B-9029 В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ**

<a id="p100004"></a>**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**
**МУК 4.2.3250-14**

1. <a id="p100005"></a>Разработаны и подготовлены ГБОУ ВПО "Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н.И. Пирогова" Минздрава России (д.б.н. Н.И. Шеина).
2. <a id="p100006"></a>Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 6 ноября 2014 г. N 2).
3. <a id="p100007"></a>Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 30 декабря 2014 г.
4. <a id="p100008"></a>Введены впервые.


## <a id="p100009"></a>Введение


<a id="p100010"></a>Сборник методических указаний "Измерение концентраций штаммов микроорганизмов в воздухе рабочей зоны" [(выпуск 2)](https://bukva.ai/docs/muk-4-2-3256-14) разработан с целью обеспечения контроля соответствия фактических концентраций микроорганизмов их предельно допустимым концентрациям (ПДК), что является обязательным при осуществлении санитарно-эпидемиологического контроля.
<a id="p100011"></a>Включенные в данный список методические указания по контролю биотехнологических штаммов в воздухе рабочей зоны разработаны в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 "ССТБ. Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования" и [ГОСТ 8.563-96](https://bukva.ai/docs/postanovlenie-329) ГСИ. "Методики выполнения измерений".
<a id="p100012"></a>Методики выполнены с использованием современных и адекватных микробиологических методов исследования и позволяют контролировать концентрации биотехнологических штаммов на уровне и ниже их ПДК в воздухе рабочей зоны, установленных в гигиенических нормативах.
<a id="p100013"></a>Методические указания по измерению концентраций штаммов микроорганизмов в воздухе рабочей зоны предназначены для лабораторий центров гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, санитарно-микробиологических лабораторий промышленных предприятий, а также для научно-исследовательских институтов и других заинтересованных министерств и ведомств, аккредитованных в установленном порядке на право проведения микробиологических исследований, для осуществления контроля за содержанием штаммов в воздухе рабочей зоны.


## 1. <a id="p100014"></a>Назначение и область применения


<a id="p100015"></a>1.1. Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода микробиологического количественного анализа концентрации Azotobacter chroococcum BH-1811 ВКПМ B-9029 в воздухе рабочей зоны в диапазоне концентраций от 50 до 500 000 клеток в 1 м3 воздуха.

#### <a id="p100016"></a>1.2 Методические указания носят рекомендательный характер.


2. <a id="p100017"></a>Биологическая характеристика штамма Azotobacter
chroococcum BH-1811 ВКПМ B-9029 и его гигиенический
норматив в воздухе рабочей зоны

<a id="p100018"></a>Штамм Azotobacter chroococcum BH-1811 ВКПМ B-9029 выделен из почв Подмосковья, не является генетически модифицированным штаммом. Штамм продуцирует гетероауксин, антибиотики. Предполагается использовать в растениеводстве.
<a id="p100019"></a>На среде Федорова штамм образует крупные, круглые, выпуклые, непрозрачные, гладкие колонии с ровными краями. Через 18 - 20 ч при t 28 - 30 °C можно видеть мелкие полиморфные клетки. Через 48 ч роста наблюдаются мелкие палочки, которые могут располагаться парами.
<a id="p100020"></a>Желатин разжижает, крахмал быстро гидролизует. Восстанавливает лакмусовое молоко. Нитраты восстанавливает до нитритов, каталазоположительный, образует сероводород, вызывает гемолиз.
<a id="p100021"></a>Штамм Azotobacter chroococcum BH-1811 депонирован во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов под номером ВКПМ B-9029.
<a id="p100022"></a>Предельно допустимая концентрация (ПДК) в воздухе рабочей зоны - 50 000 кл/м3.


## 3. <a id="p100023"></a>Пределы измерений


<a id="p100024"></a>Методика обеспечивает выполнение измерений количества клеток в воздухе рабочей зоны в диапазоне концентраций от 50 до 500 000 клеток в 1 м3 воздуха при доверительной вероятности 0,95.


## 4. <a id="p100025"></a>Методы измерений


<a id="p100026"></a>Прямой метод основан на аспирации из воздуха производственных помещений бактерий на среду Федорова и подсчета количества выросших колоний по типичным культурально-морфологическим признакам.


## 5. <a id="p100027"></a>Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы


<a id="p100028"></a>При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства и материалы, реактивы и питательные среды.


### <a id="p100029"></a>5.1. Средства измерений



| <a id="p100030"></a>Барометр-анероид с диапазоном измерения атмосферного давления 5 - 790 мм рт. ст. и пределом допустимой погрешности +/- 2,5 мм рт. ст. | <a id="p100031"></a>ТУ 2504-1799-75 |
| --- | --- |
| <a id="p100032"></a>Весы лабораторные, аналитические, наибольший предел взвешивания 110 г, предел допустимой погрешности +/- 0,2 мг | <a id="p100033"></a>ГОСТ Р 53228-08 |
| <a id="p100034"></a>Колбы мерные 2-100-2, 2-250-2, 2-1000-2 | <a id="p100035"></a>[ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74) |
| <a id="p100036"></a>Пипетки градуированные 2-го класса точности вместимостью 1,0; 2,0; 5,0; 10 см3 | <a id="p100037"></a>[ГОСТ 29227-91](https://bukva.ai/docs/gost-29227-91) |
| <a id="p100038"></a>Цилиндры мерные 2-го класса точности вместимостью 25 и 50 см3 | <a id="p100039"></a>[ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74) |
| <a id="p100040"></a>Термометр лабораторный шкальный, пределы измерения 0 - 55 °C | <a id="p100041"></a>ТУ 25-2021.003-88 |
| <a id="p100042"></a>Аспирационный аппарат и устройство для отбора проб воздуха |  |


<a id="p100043"></a>*Примечание.* Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.


### <a id="p100044"></a>5.2. Вспомогательные устройства и материалы



<table>
<colgroup><col width="65%"><col width="35%"></colgroup>
<tr><td><a id="p100045"></a>Шкаф сушильный стерилизационный, позволяющий поддерживать температуру (160 +/- 5) °C</td><td><a id="p100046"></a>ТУ 9452-010-00141798-02</td></tr>
<tr><td><a id="p100047"></a>Термостаты, позволяющие поддерживать рабочую температуру (28 +/- 2) и (37 +/- 2) °C</td><td><a id="p100048"></a>ТУ 9452-002-00141798-97</td></tr>
<tr><td><a id="p100049"></a>Автоклав электрический</td><td><a id="p100050"></a>ГОСТ 9586-75</td></tr>
<tr><td><a id="p100051"></a>Стерилизаторы паровые медицинские</td><td><a id="p100052"></a><a id="p100053"></a><a href="https://bukva.ai/docs/gost-r-en-13060-2011">ГОСТ Р ЕН 13060-11</a>,<br><a href="https://bukva.ai/docs/gost-r-51935-2002">ГОСТ Р 51935-2002</a></td></tr>
<tr><td><a id="p100054"></a>Дистиллятор</td><td><a id="p100055"></a>ТУ 4952-007-33142130-2000</td></tr>
<tr><td><a id="p100056"></a>Облучатель бактерицидный настенный</td><td><a id="p100057"></a>ТУ 9444-015-03965956-08</td></tr>
<tr><td><a id="p100058"></a>Холодильник бытовой</td><td><a id="p100059"></a>ГОСТ 26678-85</td></tr>
<tr><td><a id="p100060"></a>Микроскоп биологический с иммерсионной системой</td><td></td></tr>
<tr><td><a id="p100061"></a>Лупа с увеличением x 10</td><td><a id="p100062"></a>ГОСТ 25706-83</td></tr>
<tr><td><a id="p100063"></a>Пробирки типов П1, П2</td><td><a id="p100064"></a>ГОСТ 25336-82</td></tr>
<tr><td><a id="p100065"></a>Спиртовки лабораторные стеклянные</td><td><a id="p100066"></a>ГОСТ 23932-90</td></tr>
<tr><td><a id="p100067"></a>Чашки биологические (Петри)</td><td><a id="p100068"></a>ГОСТ 23932-90</td></tr>
<tr><td><a id="p100069"></a>Воронки конусные диаметром 40 - 45 мм</td><td><a id="p100070"></a>ГОСТ 25336-82</td></tr>
<tr><td><a id="p100071"></a>Груша резиновая</td><td><a id="p100072"></a>ТУ 9398-005-0576-9082-03</td></tr>
<tr><td><a id="p100073"></a>Петля бактериологическая</td><td></td></tr>
<tr><td><a id="p100074"></a>Марля медицинская</td><td><a id="p100075"></a>ГОСТ 9412-77</td></tr>
<tr><td colspan="2"><a id="p100076"></a><a id="p100077"></a>Вата медицинская гигроскопическая<br><a href="https://bukva.ai/docs/gost-5556-81">ГОСТ 25556-81</a></td></tr>
<tr><td><a id="p100078"></a>Бумага фильтровальная лабораторная</td><td><a id="p100079"></a>ГОСТ 12026-76</td></tr>
<tr><td></td><td><a id="p100080"></a>Примечание. Допускается применение оборудования и материалов с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.</td></tr>
</table>



<table>
<colgroup><col width="65%"><col width="35%"></colgroup>
<tr><td><a id="p100081"></a>5.3. Реактивы и питательные среды</td><td></td></tr>
<tr><td><a id="p100082"></a>Агар микробиологический</td><td><a id="p100083"></a><a href="https://bukva.ai/docs/postanovlenie-gost-17206-96">ГОСТ 17206-96</a></td></tr>
<tr><td colspan="2"><a id="p100084"></a><a id="p100085"></a>Аммоний молибденово-кислый, хч<br><a href="https://bukva.ai/docs/gost-3765-78">ГОСТ 3765-78</a></td></tr>
<tr><td><a id="p100086"></a>Вода дистиллированная</td><td><a id="p100087"></a>ГОСТ 6709-90</td></tr>
<tr><td><a id="p100088"></a>Железо серно-кислое, хч</td><td><a id="p100089"></a><a href="https://bukva.ai/docs/gost-6981-94">ГОСТ 6981-94</a></td></tr>
<tr><td><a id="p100090"></a>Калий однозамещенный фосфорно-кислый, хч</td><td><a id="p100091"></a><a href="https://bukva.ai/docs/gost-4198-75">ГОСТ 4198-75</a></td></tr>
<tr><td><a id="p100092"></a>Кальций углекислый, хч</td><td><a id="p100093"></a><a href="https://bukva.ai/docs/standart-gost-4530-76">ГОСТ 4530-76</a></td></tr>
<tr><td><a id="p100094"></a>Кислота борная, хч</td><td><a id="p100095"></a><a href="https://bukva.ai/docs/postanovlenie-gost-18704-78">ГОСТ 18704-78</a></td></tr>
<tr><td><a id="p100096"></a>Магний серно-кислый, хч</td><td><a id="p100097"></a><a href="https://bukva.ai/docs/gost-4523-77">ГОСТ 4523-77</a></td></tr>
<tr><td><a id="p100098"></a>Марганец серно-кислый 5-водный, чда</td><td><a id="p100099"></a><a href="https://bukva.ai/docs/gost-435-77">ГОСТ 435-77</a></td></tr>
<tr><td colspan="2"><a id="p100100"></a><a id="p100101"></a>Меласса свекловичная<br><a href="https://bukva.ai/docs/prikaz-3-st">Р 52304-05</a></td></tr>
<tr><td><a id="p100102"></a>Натрий хлористый, хч</td><td><a id="p100103"></a>ГОСТ 4233-77</td></tr>
<tr><td><a id="p100104"></a>Спирт этиловый ректификованный</td><td><a id="p100105"></a><a href="https://bukva.ai/docs/gost-r-51652-2000">ГОСТ Р 51652-2000</a> или</td></tr>
<tr><td><a id="p100106"></a>ГОСТ 18300-87</td><td><a id="p100107"></a><a id="p100108"></a>Спирт этиловый технический<br><a href="https://bukva.ai/docs/gost-17299-78">ГОСТ 17299-78</a></td></tr>
<tr><td></td><td><a id="p100109"></a>Примечание. Допускается использование других питательных сред и диагностических препаратов с аналогичными характеристиками.</td></tr>
</table>



## 6. <a id="p100110"></a>Требования безопасности


<a id="p100111"></a>При выполнении измерений концентрации клеток в воздухе рабочей зоны соблюдают следующие требования.
<a id="p100112"></a>6.1. СП 1.3.2322-08 "Безопасность работы с микроорганизмами III - IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней".
<a id="p100113"></a>6.2. СП 1.3.2518-09. Дополнения и изменения 1 к СП 1.3.2322-08.
<a id="p100114"></a>6.3. Правила техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.005-88.
<a id="p100115"></a>6.4. Электробезопасность при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-79 и инструкции по эксплуатации прибора.
<a id="p100116"></a>6.5. Все виды работ с реактивами проводят только в вытяжном шкафу при работающей вентиляции, работа с биологическим материалом осуществляется в боксе, оборудованном бактерицидными лампами.


## 7. <a id="p100117"></a>Требования к квалификации операторов


<a id="p100118"></a>К выполнению измерений и обработке их результатов допускают лиц с высшим или средним специальным образованием, прошедших соответствующую подготовку и имеющих навыки работы в области микробиологических исследований.


## 8. <a id="p100119"></a>Условия измерений


<a id="p100120"></a>Приготовление сред, подготовку к анализу проводят в следующих условиях:


| <a id="p100121"></a>- температура воздуха | <a id="p100122"></a>(20 +/- 5) °C; |
| --- | --- |
| <a id="p100123"></a>- атмосферное давление | <a id="p100124"></a>(760 +/- 20) мм рт. ст.; |
| <a id="p100125"></a>- влажность воздуха | <a id="p100126"></a>не более 80%. |



## 9. <a id="p100127"></a>Приготовление питательных сред


<a id="p100128"></a>Для приготовления агаризованной среды Федорова смешивают указанные компоненты: калий однозамещенный фосфорно-кислый - 0,5 г; магний серно-кислый - 0,3 г; натрия хлорид - 0,3 г; железо серно-кислое - 0,005 г; марганец серно-кислый - 0,005 г; аммоний молибденово-кислый - 0,005 г; борная кислота - 0,005 г; кальций углекислый - 3,5 г; меласса - 30,0 г; агар-агар - 17,0 г. Сухие компоненты растворяют в 1 000 см3 дистиллированной воды, тщательно перемешивают.
<a id="p100129"></a>Смесь нагревают до растворения агара, стерилизуют автоклавированием при 121 °C в течение 15 мин и охлаждают до 60°. Приготовленную среду разливают в стерильные колбы по 250 - 500 см3 и автоклавируют при 121 °C в течение 15 мин.
<a id="p100130"></a>Готовую среду хранят в защищенных от света условиях при температуре не выше 8 °C в течение 14 дней, не более.


## 10. <a id="p100131"></a>Проведение измерения



### <a id="p100132"></a>10.1. Отбор проб воздуха


<a id="p100133"></a>Отбор проб воздуха проводят с учетом требований ГОСТ 12.1.005-88 с изменением 1 "ССБТ. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны" и [ГОСТ 8.563-96](https://bukva.ai/docs/postanovlenie-329). ГСИ. "Методики выполнения измерений".
<a id="p100134"></a>Для этого воздух аспирируют при помощи пробоотборника на поверхность плотной питательной среды в соответствии с технической документацией (инструкцией) на прибор. Время аспирации и объем отбираемого воздуха зависит от предполагаемой концентрации микроорганизма.
<a id="p100135"></a>Аппарат перед каждым отбором пробы воздуха тщательно протирают 96°-м этиловым спиртом. Особенно тщательно обрабатывают поверхность подвижного диска и внутреннюю стенку прибора; наружную и внутреннюю стенку крышки. На подвижной диск устанавливают подготовленную чашку Петри со средой, одновременно снимая с нее крышку. Прибор закрывают. Соприкосновение крышки прибора со средой недопустимо (количество питательной среды в чашки вносят в соответствии с инструкцией к прибору). После отбора пробы воздуха и остановки диска прибор открывают, быстро снимают чашку Петри и закрывают крышкой от данной чашки. На дне чашки Петри стеклографом отмечают точку контроля, время аспирации и дату отбора пробы.


### <a id="p100136"></a>10.2. Выполнение анализа


<a id="p100137"></a>При выполнении анализа воздуха прямым методом стерильную агаризованную среду (среда Федорова) расплавляют, остужают до 50 - 60 °C и разливают в чашки Петри.
<a id="p100138"></a>Контроль чистоты розлива проводят в соответствии с [п. 7.1.1](https://bukva.ai/docs/muk-4-2-2316-08#p100342) МУК 4.2.2316-08. Для этого чашки с застывшей средой помещают в термостат при температуре 37 °C не менее, чем на 18 ч. Проросшие чашки бракуют, стерильные чашки используют для контроля воздуха. Разлитую в чашки питательную среду хранят при температуре (2 - 8)° C не более 10 дней.
<a id="p100139"></a>После отбора проб воздуха чашки Петри помещают в термостат с температурой (28 +/- 2) °C. Через 1 - 2 суток производят подсчет выросших колоний по культурально-морфологическим признакам.
<a id="p100140"></a>Ростовые свойства используемой питательной среды должны быть проверены до проведения анализа воздуха в соответствии с требованиями к ростовым свойствам питательных сред (МУК 4.2.2316-08). Для этого эталонный музейный штамм Azotobacter chroococcum BH-1811 ВКПМ B-9029 высевается на 2 - 3 чашки используемой среды.
<a id="p100141"></a>Лиофилизованную культуру музейного штамма необходимо использовать 2 - 3 пассажа во избежание потери им заданных ростовых свойств.


## 11. <a id="p100142"></a>Вычисление результатов измерения


<a id="p100143"></a>Расчет концентрации клеток производят по формуле:

<a id="p100144"></a>К = (П x 1000)/С x Т, кл/м3, где

<a id="p100145"></a>К - концентрация Azotobacter chroococcum BH-1811 ВКПМ B-9029 в воздухе, кл/м3;
<a id="p100146"></a>П - количество типичных колоний, выросших на чашке Петри;
<a id="p100147"></a>1 000 - коэффициент пересчета на 1 м3 воздуха;
<a id="p100148"></a>С - скорость аспирации воздуха, л/мин;
<a id="p100149"></a>Т - время аспирации, мин.


## 12. <a id="p100150"></a>Оформление результатов измерений


<a id="p100151"></a>Результаты измерений оформляют протоколом по нижеприведенной форме.

<a id="p100152"></a>                                Протокол N
                количественного микробиологического анализа
                Azotobacter chroococcum BH-1811 ВКПМ B-9029
                          в воздухе рабочей зоны

    1. <a id="p100153"></a>Дата проведения анализа ____________________________________________
    2. <a id="p100154"></a>Рабочее место (профессия работающего) ______________________________
    3. <a id="p100155"></a>Место  отбора  пробы  (название и адрес  организации,  производство,
технологическая стадия, точка отбора пробы) _______________________________
    3. <a id="p100156"></a>Вид пробоотборника _________________________________________________
    4. <a id="p100157"></a>Дата  последней  метрологической  поверки  оборудования  для  отбора
проб ______________________________________________________________________
    5. <a id="p100158"></a>Питательная среда, время инкубации _________________________________
    6. <a id="p100159"></a>Результаты испытания ростовых свойств питательной среды ____________
    7. <a id="p100160"></a>Количественная  и  качественная  характеристика   выросших   колоний
(количество типичных колоний) _____________________________________________
    8. <a id="p100161"></a>Результаты  идентификации  микроорганизмов  Azotobacter  chroococcum
BH-1811 ВКПМ B-9029 (морфологические признаки) ____________________________
    9. <a id="p100162"></a>Результаты расчета концентрации штамма _____________________________
    10. <a id="p100163"></a>Соотношение полученных результатов с уровнем ПДК     ______________
                                                        р.з.
    11. <a id="p100164"></a>Отбор пробы произведен (Ф.И.О., должность, дата, подпись) _________
___________________________________________________________________________
    12. <a id="p100165"></a>Идентификация  штамма  и  расчет концентрации  произведены (Ф.И.О.,
должность, дата, подпись) _________________________________________________
___________________________________________________________________________



<a id="p100166"></a>

---