---
title: "\"ГОСТ Р 53886-2010 (ИСО 14669:1999). Национальный стандарт Российской Федерации. Вода. Методы определения токсичности по выживаемости морских ракообразных\""
number: "ГОСТ Р 53886-2010"
issuer: "Федеральное агентство по техническому регулированию и метрологии"
status: утратил силу
canonical: "https://bukva.ai/docs/gost-r-53886-2010"
---

## "ГОСТ Р 53886-2010 (ИСО 14669:1999). Национальный стандарт Российской Федерации. Вода. Методы определения токсичности по выживаемости морских ракообразных"

# "ГОСТ Р 53886-2010 (ИСО 14669:1999). Национальный стандарт Российской Федерации. Вода. Методы определения токсичности по выживаемости морских ракообразных"

(утв. и введен в действие Приказом Росстандарта от 29.09.2010 N 287-ст)

> [!WARNING]
> Документ утратил силу с 15 февраля 2015 года в связи с изданием Приказа Росстандарта от 12.12.2012 N 1898-ст.
> Взамен введен в действие [ГОСТ 31959-2012](https://bukva.ai/docs/gost-31959-2012).
> Документ утратил силу с 15 февраля 2015 года в связи с изданием Приказа Росстандарта от 12.12.2012 N 1898-ст. Взамен введен в действие [ГОСТ 31959-2012](https://bukva.ai/docs/gost-31959-2012).
> Документ [введен](#p100011) в действие с 1 января 2012 года.

> [!NOTE]
> ИСТОРИЯ ИЗМЕНЕНИЙ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИХ АКТОВ

```mermaid
flowchart LR
  n0["ГОСТ Р 53886-2010"]:::rst
  click n0 "https://bukva.ai/docs/gost-r-53886-2010" "ГОСТ Р 53886-2010. Национальный стандарт Российской Федерации. Вода. Методы определения токсичности по выживаемости морских ракообразных (утв. и введен в действие Приказом Росстанд"
  n1["ГОСТ 31959-2012"]:::doc
  click n1 "https://bukva.ai/docs/gost-31959-2012" "ГОСТ 31959-2012. Межгосударственный стандарт. Вода. Методы определения токсичности по выживаемости морских ракообразных (введен в действие Приказом Росстандарта от 12.12.2012 N 189"
  n0 --> n1
classDef rst fill:#FFEBEB,stroke:#8B0000,color:#000;
classDef doc fill:#EBFFEB,stroke:#006400,color:#000;
classDef notEnt fill:#FFFFEB,stroke:#FF8C00,color:#000;
```


<div align="right">

<a id="p100001"></a>Утвержден и введен в действие<br>
Приказом Федерального<br>
агентства по техническому<br>
регулированию и метрологии<br>
от 29 сентября 2010 г. N 287-ст

</div>


<a id="p100002"></a>**НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ**

<a id="p100003"></a>**ВОДА**

<a id="p100004"></a>**МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТОКСИЧНОСТИ**
**ПО ВЫЖИВАЕМОСТИ МОРСКИХ РАКООБРАЗНЫХ**

<a id="p100005"></a>Water.
Methods of determination of toxicity
by survival of marine crustaceans

<a id="p100006"></a>**ISO 14669:1999**
Water quality - Determination of acute lethal
toxicity to marine copepods (Copepoda, Crustacea)
**(MOD)**

<a id="p100007"></a>**ГОСТ Р 53886-2010**
**(ИСО 14669:1999)**

<div align="right">

<a id="p100008"></a>Группа Н08

<a id="p100009"></a>ОКС 13.060.70

<a id="p100010"></a>ОКП 01 3300

<a id="p100011"></a>Дата введения

</div>

1 января 2012 года


### <a id="p100012"></a>Предисловие


<a id="p100013"></a>Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. N 184-ФЗ "О техническом регулировании", а правила применения национальных стандартов Российской Федерации - ГОСТ Р 1.0-2004 "Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения".


### <a id="p100014"></a>Сведения о стандарте


1. <a id="p100015"></a>Разработан ООО "Протектор" и Федеральным государственным унитарным предприятием "Всероссийский научно-исследовательский институт рыбного хозяйства и океанографии" на основе официального аутентичного перевода на русский язык, указанного в [пункте 4](#p100018) стандарта, находящегося в Федеральном информационном фонде.
2. <a id="p100016"></a>Внесен Техническим комитетом по стандартизации ТК 343 "Качество воды".
3. <a id="p100017"></a>Утвержден и введен в действие Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 29 сентября 2010 г. N 287-ст.
4. <a id="p100018"></a>Настоящий стандарт является модифицированным по отношению к международному стандарту ИСО 14669:1999 "Качество воды. Токсикологические испытания по отношению к морским ракообразным (Copepoda, Crustacea)" (ISO 14669:1999 "Water quality - Determination of acute lethal toxicity to marine copepods (Copepoda, Crustacea)") путем:
- <a id="p100019"></a>изменения структуры. Сравнение структуры настоящего стандарта со структурой указанного международного стандарта приведено в дополнительном [Приложении ДА](#p101114);
- <a id="p100020"></a>введения дополнительных положений, фраз и слов в текст настоящего стандарта для учета потребностей национальной экономики Российской Федерации и особенностей российской национальной стандартизации, выделенных в тексте настоящего стандарта курсивом, за исключением наименований тест-организмов.
<a id="p100021"></a>Наименование настоящего стандарта изменено относительно наименования указанного международного стандарта для приведения в соответствие с ГОСТ Р 1.5-2004 (подраздел 3.5).
<a id="p100022"></a>Сведения о соответствии ссылочных национальных и межгосударственных стандартов международным стандартам, использованным в качестве ссылочных в примененном международном стандарте, приведены в дополнительном [Приложении ДБ](#p101328).
5. <a id="p100023"></a>Введен впервые.

<a id="p100024"></a>Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячно издаваемых информационных указателях "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет.


### 1. <a id="p100025"></a>Область применения


<a id="p100026"></a>Настоящий стандарт распространяется на природные морские воды и воды эстуариев, а также сточные воды с &минерализацией& от &6 до 33 г/дм3& и устанавливает методы &лабораторного биологического тестирования& (далее - тестирование) с определением их токсичности по выживаемости морских ракообразных:
- <a id="p100027"></a>&эвригалинного рачка вида Artemia salina& L. (Branchiopoda, Crustacea) &[(метод А)](#p100090)&;
- <a id="p100028"></a>видов &Acartia tonsa& Dana, &Tisbe battagliai& Volkmann-Rocco, &Nitocra spinipes& Boeck (Copepoda, Crustacea) &[(метод Б)](#p100356)&.
<a id="p100029"></a>Методы применяют также для определения токсичности растворимых веществ. &[Метод А](#p100090) применяют также для отработанных буровых растворов, твердых промышленных отходов и морских донных отложений.
<a id="p100030"></a>Методы позволяют определять токсичность исследуемых объектов и следующие их токсикологические показатели:
- <a id="p100031"></a>среднюю летальную кратность разбавления $(\text{ЛКР}_{50})$ пробы, вызывающую гибель 50% морских ракообразных (далее - тест-организмов)&, и безвредную кратность разбавления пробы $(\text{ЛКР}_{10})$ , вызывающую гибель не более 10% тест-организмов за &72 ч (96 ч) тестирования [(метод А)](#p100090)&; за 48 ч тестирования &[(метод Б)](#p100356)&;
- <a id="p100032"></a>среднюю летальную концентрацию $(\text{ЛК}_{50})$ растворов веществ, вызывающую гибель 50% тест-организмов, и безвредную концентрацию $(\text{ЛК}_{10})$ растворов веществ, вызывающую гибель не более 10% тест-организмов за &72 ч тестирования [(метод А)](#p100090) и& за 48 ч тестирования &[(метод Б)](#p100356).
<a id="p100033"></a>Примечание. Продолжительность тестирования 96 ч, указанную для [метода А](#p100090), используют при определении токсичности и токсикологических показателей анализируемых проб отработанных буровых растворов, твердых промышленных отходов и донных отложений&.

<a id="p100034"></a>В помещении лаборатории, где проводят тестирование:
- <a id="p100035"></a>окружающая среда (атмосфера) не должна содержать пара или пыли, токсичных для тест-организмов;
- <a id="p100036"></a>&температура окружающего воздуха должна быть от 19 °C до 24 °C;
- <a id="p100037"></a>относительная влажность воздуха - не более 80%;
- <a id="p100038"></a>атмосферное давление должно быть 84 - 106 кПа (630 - 800 мм рт. ст.).&


### 2. <a id="p100039"></a>Нормативные ссылки


<a id="p100040"></a>&В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:
<a id="p100041"></a>ГОСТ Р ИСО/МЭК 17025-2006 Общие требования к компетентности испытательных и калибровочных лабораторий
<a id="p100042"></a>[ГОСТ Р 51592-2000](https://bukva.ai/docs/standart-gost-r-51592-2000) Вода. Общие требования к отбору проб
<a id="p100043"></a>ГОСТ Р 53228-2008 Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания
<a id="p100044"></a>ГОСТ 17.1.5.05-85 Охрана природы. Гидросфера. Общие требования к отбору проб поверхностных и морских вод, льда и атмосферных осадков
<a id="p100045"></a>[ГОСТ 17.4.4.02-84](https://bukva.ai/docs/gost-17-4-4-02-84) Охрана природы. Почвы. Методы отбора и подготовки проб для химического, бактериологического и гельминтологического анализа
<a id="p100046"></a>[ГОСТ 245-76](https://bukva.ai/docs/gost-245-76) Реактивы. Натрий фосфорнокислый однозамещенный 2-водный. Технические условия
<a id="p100047"></a>[ГОСТ 612-75](https://bukva.ai/docs/postanovlenie-gost-612-75) Реактивы. Марганец (II) хлористый 4-водный. Технические условия
<a id="p100048"></a>[ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74) (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия
<a id="p100049"></a>ГОСТ 3118-77 Реактивы. Кислота соляная. Технические условия
<a id="p100050"></a>[ГОСТ 3765-78](https://bukva.ai/docs/gost-3765-78) Реактивы. Аммоний молибденовокислый. Технические условия
<a id="p100051"></a>[ГОСТ 4147-74](https://bukva.ai/docs/gost-4147-74) Реактивы. Железо (III) хлорид 6-водный. Технические условия
<a id="p100052"></a>[ГОСТ 4166-76](https://bukva.ai/docs/gost-4166-76) Реактивы. Натрий сернокислый. Технические условия
<a id="p100053"></a>[ГОСТ 4168-79](https://bukva.ai/docs/postanovlenie-gost-4168-79) Реактивы. Натрий азотнокислый. Технические условия
<a id="p100054"></a>[ГОСТ 4201-79](https://bukva.ai/docs/gost-4201-79) Реактивы. Натрий углекислый кислый. Технические условия
<a id="p100055"></a>[ГОСТ 4209-77](https://bukva.ai/docs/gost-4209-77) Реактивы. Магний хлористый 6-водный. Технические условия
<a id="p100056"></a>ГОСТ 4220-75 Реактивы. Калий двухромовокислый. Технические условия
<a id="p100057"></a>ГОСТ 4233-77 Реактивы. Натрий хлористый. Технические условия
<a id="p100058"></a>ГОСТ 4234-77 Реактивы. Калий хлористый. Технические условия
<a id="p100059"></a>ГОСТ 4328-77 Реактивы. Натрия гидроокись. Технические условия
<a id="p100060"></a>ГОСТ 4461-77 Реактивы. Кислота азотная. Технические условия
<a id="p100061"></a>[ГОСТ 4525-77](https://bukva.ai/docs/gost-4525-77) Реактивы. Кобальт хлористый 6-водный. Технические условия
<a id="p100062"></a>[ГОСТ 4529-78](https://bukva.ai/docs/postanovlenie-gost-4529-78) Реактивы. Цинк хлористый. Технические условия
<a id="p100063"></a>ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия
<a id="p100064"></a>ГОСТ 9147-80 Посуда и оборудование лабораторные фарфоровые. Технические условия
<a id="p100065"></a>[ГОСТ 9656-75](https://bukva.ai/docs/gost-9656-75) Реактивы. Кислота борная. Технические условия
<a id="p100066"></a>[ГОСТ 10652-73](https://bukva.ai/docs/gost-10652-73) Реактивы. Соль динатриевая этилендиамин-N,N,N',N'-тетрауксусной кислоты 2-водная (трилон Б). Технические условия
<a id="p100067"></a>ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия
<a id="p100068"></a>[ГОСТ 19126-2007](https://bukva.ai/docs/gost-19126-2007) Инструменты медицинские металлические. Общие технические условия
<a id="p100069"></a>ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры
<a id="p100070"></a>[ГОСТ 29227-91](https://bukva.ai/docs/gost-29227-91) (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования&
<a id="p100071"></a>*Примечание.* При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.


### 3. <a id="p100072"></a>Отбор проб


<a id="p100073"></a>3.1. Отбор проб &воды и донных отложений& проводят в соответствии с требованиями [&ГОСТ Р 51592](https://bukva.ai/docs/standart-gost-r-51592-2000), ГОСТ 17.1.5.05, [[1]](#p101443), [[2]](#p101446) и [[3]](#p101449). При этом объем пробы воды должен быть не менее 500 см3; масса пробы донных отложений - не менее 2 кг.
<a id="p100074"></a>*Примечание.* Отбор проб сточных вод проводят до этапа хлорирования.&

<a id="p100075"></a>Рекомендуемый срок хранения проб природной морской воды, воды эстуариев, сточных вод и &донных отложений& при комнатной температуре не более 12 ч после их отбора до проведения тестирования. Допускается хранение проб до проведения их тестирования:
- <a id="p100076"></a>не более 48 ч при температуре от 0 °C до 4 °C;
- <a id="p100077"></a>не более 2 мес при температуре минус 18 °C.
<a id="p100078"></a>&Примечание. Если отобранную пробу воды перед тестированием требуется отстаивать или фильтровать, то отстаивание и фильтрование должны предшествовать ее замораживанию.

<a id="p100079"></a>3.2. Отбор проб отработанных буровых растворов проводят в соответствии с требованиями технической документации предприятия, на котором образуются отработанные буровые растворы, массой не менее 5,0 кг, при этом под крышкой емкости, в которую отобрана проба, должен оставаться слой воздуха высотой 2 см.
<a id="p100080"></a>Отобранные пробы отработанных буровых растворов хранят в емкостях-холодильниках при температуре от 0 °C до 4 °C не более 3 мес.
<a id="p100081"></a>После вскрытия емкостей-холодильников для подготовки проб отработанных буровых растворов к тестированию срок хранения не должен превышать 14 сут.
<a id="p100082"></a>3.3. Отбор проб твердых промышленных отходов проводят в соответствии с требованиями технической документации предприятия, на котором образуется отход, массой не менее 2 кг.
<a id="p100083"></a>Срок хранения отобранных проб твердых промышленных отходов в емкостях с притертой или плотно закрытой крышкой при температуре от 0 °C до 4 °C не более 7 сут.
<a id="p100084"></a>3.4. Отбор проб веществ, условия и сроки их хранения должны соответствовать требованиям стандартов и другой документации на конкретную продукцию (группу однородной продукции).
<a id="p100085"></a>3.5. Для отбора проб природной морской воды, воды эстуариев, отработанных буровых растворов, донных отложений используют емкости из полиэтилена, полиэтилентерефлата или политетрафторэтилена, а при наличии в воде нефтепродуктов, поверхностно-активных веществ (ПАВ) и пестицидов - емкости из темного стекла.
<a id="p100086"></a>Для отбора проб сточных вод, твердых промышленных отходов используют емкости из темного стекла или нержавеющей стали, при этом не допускается использовать емкости с хромовым покрытием.
<a id="p100087"></a>Для отбора проб веществ используют емкости из полиэтилена, полиэтилентерефлата, политетрафторэтилена или темного стекла.
<a id="p100088"></a>3.6. Продолжительность и условия хранения отобранной пробы указывают в протоколе испытаний.

#### <a id="p100089"></a>3.7 Консервацию отобранных проб не проводят.


<div align="center">

4. <a id="p100090"></a>Метод определения токсичности<br>
исследуемых объектов по выживаемости эвригалинного рачка<br>
вида Artemia salina& L. (Branchiopoda, Crustacea)<br>
&(метод А)&

</div>



#### <a id="p100091"></a>4.1 Сущность метода

<a id="p100092"></a>&Сущность метода заключается в регистрации гибели науплиев эвригалинного рачка вида Artemia salina& L. (Branchiopoda, Crustacea) в анализируемой &пробе исследуемого объекта, определении ее токсичности и токсикологических показателей при тестировании в течение 72 ч (96 ч).
<a id="p100093"></a>Продолжительность тестирования 72 ч указана для определения токсичности и токсикологических показателей анализируемых проб природной морской воды, воды эстуариев и сточной воды, а также анализируемых проб веществ.&
<a id="p100094"></a>*Примечание.* Допускается проводить определение средней летальной &кратности разбавления& проб &сточной воды& (концентрации &вещества&), вызывающей гибель 50% тест-организмов при увеличенной продолжительности тестирования до 96 ч [96 ч $\text{ЛКР}_{50}$ (96 ч $\text{ЛК}_{50}$ )].

<a id="p100095"></a>&Продолжительность тестирования 96 ч указана для определения токсичности и токсикологических показателей анализируемых проб отработанных буровых растворов, твердых промышленных отходов и донных отложений.
<a id="p100096"></a>Среднюю летальную кратность разбавления $(\text{ЛКР}_{50})$ за 72 ч тестирования обозначают как 72 ч $\text{ЛКР}_{50}$ , за 96 ч тестирования - соответственно 96 ч $\text{ЛКР}_{50}$ ; среднюю летальную концентрацию $(\text{ЛК}_{50})$ за 72 ч тестирования как 72 ч $\text{ЛК}_{50}$ .&
<a id="p100097"></a>Примечание. &Примеры определения средней летальной кратности разбавления (концентрации) приведены в [Приложении A](#p100439).&


#### <a id="p100098"></a>4.2 Средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы, материалы

<a id="p100099"></a>Климатостат, &оснащенный лампами дневного света, обеспечивающий освещенность 3000 - 10000 лк и поддержание температуры (20 +/- 2) °C.
<a id="p100100"></a>Весы лабораторные по ГОСТ Р 53228 высокого класса точности с ценой деления (дискретностью отсчета) не более 0,01 г, пределом взвешивания не более 210 г.&
<a id="p100101"></a>pH-метр &любого типа, обеспечивающий измерения pH в диапазоне от 3 до 10 единиц pH с допускаемой погрешностью +/- 0,05 единиц pH.
<a id="p100102"></a>Термометр лабораторный с диапазоном измерения от 0 °C до 50 °C, с ценой деления шкалы 0,5 °C.&
<a id="p100103"></a>Оксиметр &любого типа, с допускаемой погрешностью измерения не более $0,5\text{мгО}_{2}/\text{дм}^{3}$ .&
<a id="p100104"></a>Прибор для измерения &минерализации& (солености) &любого типа (например, карманный рефрактометр-солемер с автотермокомпенсацией), с допускаемой погрешностью измерения общей минерализации& (солености) +/- 3,0 &г/дм3& $[ \pm 3 \cdot 10^{- 3}( \pm 3‰)]$ .
<a id="p100105"></a>&Пипетки автоматические - дозаторы любого типа вместимостью 0,1 - 0,2 см3 с допускаемой погрешностью аттестованного значения +/- 1,0%.
<a id="p100106"></a>Пипетки по [ГОСТ 29227](https://bukva.ai/docs/gost-29227-91) вместимостью 1, 2, 5, 10 см3 с ценой деления 0,1 см3.
<a id="p100107"></a>Пипетка Пастера вместимостью 1,5 см3.
<a id="p100108"></a>Микропипетки по [ГОСТ 29227](https://bukva.ai/docs/gost-29227-91) вместимостью 0,1 см3, 0,2 см3 с ценой деления 0,01 см3.
<a id="p100109"></a>Колбы мерные по [ГОСТ 1770](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74), 2-25-2, 2-50-2, 2-100-2.&
<a id="p100110"></a>Микроскоп &биологический типа МБС, обеспечивающий увеличение в 50 - 100 раз.
<a id="p100111"></a>Мешалка магнитная.&
<a id="p100112"></a>Устройство для встряхивания любого типа &(например, орбитальный шейкер, качалка-мешалка).
<a id="p100113"></a>Центрифуга лабораторная медицинская.
<a id="p100114"></a>Сушильный электрический шкаф общелабораторного назначения.
<a id="p100115"></a>Аквариумный микрокомпрессор любого типа, например АЭН-4.
<a id="p100116"></a>Шпатели металлические по [ГОСТ 19126](https://bukva.ai/docs/gost-19126-2007).
<a id="p100117"></a>Холодильник бытовой, обеспечивающий поддержание температуры от минус 18 °C до минус 20 °C и от 2 °C до 4 °C.
<a id="p100118"></a>Ступки и пестики фарфоровые по ГОСТ 9147.
<a id="p100119"></a>Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026.
<a id="p100120"></a>Фильтры обеззоленные "белая лента".
<a id="p100121"></a>Установка для фильтрования любого типа.
<a id="p100122"></a>Фильтры мембранные с диаметром пор 0,45; 3,5 мкм.
<a id="p100123"></a>Эксикаторы по ГОСТ 25336.
<a id="p100124"></a>Пробирки стеклянные по ГОСТ 25336 вместимостью 10 см3.
<a id="p100125"></a>Чашки Петри по ГОСТ 25336 вместимостью 50 см3.
<a id="p100126"></a>Цилиндры по [ГОСТ 1770](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74) вместимостью 25, 50, 100, 1000 см3, второго класса точности.
<a id="p100127"></a>Стаканы стеклянные лабораторные по ГОСТ 25336 вместимостью 50, 100, 500, 1000 см3.
<a id="p100128"></a>Сухие яйца Artemia salina L., коммерческие готовые.&
<a id="p100129"></a>Тест-организмы: &Artemia salina L.&
<a id="p100130"></a>Примечание. &Тест-организмы получают путем замачивания сухих яиц в морской воде в лабораторных условиях и подготавливают выклюнувшихся науплиев к тестированию в соответствии с требованиями, указанными в [Приложении B](#p100919). Жизненный цикл Artemia salina L. состоит из науплиальных стадий (от ортонауплиуса до метанауплиуса - 72 ч; молоди, взрослых особей - 21 сут).& Стадия жизненного цикла тест-организма по состоянию на начало тестирования должна быть указана в протоколе испытаний.

<a id="p100131"></a>&Вода дистиллированная по ГОСТ 6709 или& деионизированная.
<a id="p100132"></a>&Примечание. Для получения дистиллированной (деионизированной) воды используют аппараты только из стекла или кварца.&

<a id="p100133"></a>Природная или искусственная морская вода &минерализацией 33 г/дм3& (соленостью $33‰$ ) (далее - вода для разбавления).
<a id="p100134"></a>*Примечание.* Если в качестве воды для разбавления используют природную морскую воду, то ее отбирают вдали &от берега с глубины 3 - 5 м&, чтобы избежать поверхностного загрязнения, &и транспортируют в лабораторию в стеклянных или полиэтиленовых емкостях. В лаборатории& воду фильтруют через мембранный фильтр с порами диаметром 0,45 мкм, чтобы удалить находящиеся в ней взвешенные вещества и организмы, &и хранят в темном месте при комнатной температуре.&

<a id="p100135"></a>Модельный токсикант: калий двухромовокислый &по ГОСТ 4220, ч.д.а.
<a id="p100136"></a>Калий хлористый по ГОСТ 4234, х.ч.
<a id="p100137"></a>Натрий хлористый по ГОСТ 4233, х.ч.
<a id="p100138"></a>Натрий сернокислый по [ГОСТ 4166](https://bukva.ai/docs/gost-4166-76), х.ч.
<a id="p100139"></a>Натрий углекислый кислый по [ГОСТ 4201](https://bukva.ai/docs/gost-4201-79), х.ч.
<a id="p100140"></a>Кальций хлористый, х.ч., безводный.
<a id="p100141"></a>Магний хлористый 6-водный по [ГОСТ 4209](https://bukva.ai/docs/gost-4209-77), х.ч.
<a id="p100142"></a>Натрия гидроокись по ГОСТ 4328, х.ч.
<a id="p100143"></a>Кислота азотная по ГОСТ 4461, х.ч.
<a id="p100144"></a>Кислота борная по [ГОСТ 9656](https://bukva.ai/docs/gost-9656-75), х.ч.
<a id="p100145"></a>Кислота соляная по ГОСТ 3118, х.ч.&

#### <a id="p100146"></a>4.3 Подготовка к тестированию

<a id="p100147"></a>&4.3.1. Подготовка посуды
<a id="p100148"></a>4.3.1.1. Емкости для отбора проб и тестирования должны быть химически чистыми.
<a id="p100149"></a>Для проведения тестирования используют только стеклянную посуду.
<a id="p100150"></a>4.3.1.2. Стеклянную посуду для тестирования осторожно промывают 10%-ным раствором азотной кислоты и выдерживают 2 - 3 ч при комнатной температуре, затем тщательно промывают водопроводной водой, обрабатывают раствором натрия углекислого кислого, промывают водопроводной водой, после чего не менее трех - четырех раз ополаскивают дистиллированной водой.
<a id="p100151"></a>При сильном загрязнении посуды, а также новую посуду промывают водопроводной водой, заполняют 10%-ным раствором азотной кислоты и выдерживают в течение суток, после чего обрабатывают раствором натрия углекислого кислого, затем тщательно промывают водопроводной водой и не менее трех - четырех раз ополаскивают дистиллированной водой.
<a id="p100152"></a>4.3.1.3. Емкости для отбора проб и посуду для тестирования сушат на воздухе при комнатной температуре, затем стеклянную посуду, за исключением мерной, помещают в сушильный шкаф и выдерживают в течение 1 ч при температуре 150 °C.
<a id="p100153"></a>Чистую посуду (емкости) закрывают стеклянными притертыми пробками или крышками и хранят в шкафах или на полках.

##### <a id="p100154"></a>4.3.2 Приготовление искусственной морской воды

<a id="p100155"></a>Искусственную морскую воду готовят на дистиллированной воде по ГОСТ 6709 из реактивов, вносимых в количествах, приведенных в таблице 1.

<a id="p100156"></a>Таблица 1


| <a id="p100157"></a>Наименование реактива | <a id="p100158"></a>Масса реактива, вносимая на 1 дм3 дистиллированной воды, г |
| --- | --- |
| <a id="p100159"></a>Натрий хлористый по ГОСТ 4233 (NaCl) | <a id="p100160"></a>22,00 |
| <a id="p100161"></a>Магний хлористый 6-водный по [ГОСТ 4209](https://bukva.ai/docs/gost-4209-77) $(MgCl_{2} \cdot 6H_{2}O)$ | <a id="p100162"></a>9,70 |
| <a id="p100163"></a>Натрий сернокислый по [ГОСТ 4166](https://bukva.ai/docs/gost-4166-76) $(Na_{2}SO_{4})$ , безводный | <a id="p100164"></a>3,70 |
| <a id="p100165"></a>Кальций хлористый $(CaCl_{2})$ , безводный | <a id="p100166"></a>1,00 |
| <a id="p100167"></a>Калий хлористый по ГОСТ 4234 (KCl) | <a id="p100168"></a>0,65 |
| <a id="p100169"></a>Натрий углекислый кислый по [ГОСТ 4201](https://bukva.ai/docs/gost-4201-79) $(NaHCO_{3})$ | <a id="p100170"></a>0,20 |
| <a id="p100171"></a>Борная кислота по [ГОСТ 9656](https://bukva.ai/docs/gost-9656-75) $(H_{3}BO_{3})$ | <a id="p100172"></a>0,023 |


<a id="p100173"></a>Минерализация (соленость) приготовленной из указанных реактивов искусственной морской воды составляет 33 г/дм3 $(33‰)$ . При необходимости, для уменьшения минерализации (солености), искусственную морскую воду разбавляют дистиллированной водой.

<div align="center">

<a id="p100174"></a>Допускается готовить искусственную морскую воду, используя готовую морскую соль (например, марки "Wieqandt").

</div>

<a id="p100175"></a>Приготовленную искусственную морскую воду аэрируют в течение 1 - 2 сут при помощи микрокомпрессора, затем дают отстояться в течение 10 - 14 сут.
<a id="p100176"></a>Искусственная морская вода должна соответствовать следующим требованиям:
- <a id="p100177"></a>значение pH в пределах 8,0 - 8,3;
- <a id="p100178"></a>содержание растворенного кислорода не менее $7\text{мгО}_{2}/\text{дм}^{3}$ ;
- <a id="p100179"></a>температура (20 +/- 2) °C.
<a id="p100180"></a>Искусственную морскую воду хранят в емкости из темного стекла с притертой крышкой (используют емкости до 10 дм3) при комнатной температуре не более года.&

##### <a id="p100181"></a>4.3.3 Проверка физиологической чувствительности тест-организмов

<a id="p100182"></a>Периодически &(не реже одного раза в месяц), а также непосредственно перед тестированием проб&, тест-организмы (&выклюнувшиеся& науплии) проверяют на физиологическую чувствительность.
<a id="p100183"></a>Для этого определяют среднюю летальную концентрацию модельного токсиканта (72 ч $\text{ЛК}_{50}$ ) &для тест-организмов, как указано ниже.
<a id="p100184"></a>4.3.3.1. Готовят исходный раствор модельного токсиканта массовой концентрацией 1 г/дм3 следующим способом: в мерную колбу вместимостью 1000 см3 вносят 1 г двухромовокислого калия, растворяют в небольшом количестве дистиллированной (деионизированной) воды, доводят объем до метки, перемешивают и маркируют.
<a id="p100185"></a>Срок хранения исходного раствора модельного токсиканта - не более 7 сут.
<a id="p100186"></a>4.3.3.2. Готовят анализируемые растворы модельного токсиканта двухромовокислого калия массовой концентрацией от 1,0 до 10 мг/дм3 следующим способом: в пять мерных колб вместимостью 200 см3 вносят исходный раствор двухромовокислого калия массовой концентрацией 1 г/дм3 (см. [4.3.3.1](#p100184)) соответственно в первую колбу - 0,2 см3, во вторую - 0,5 см3, в третью - 1,0 см3, в четвертую - 1,5 см3, в пятую - 2,0 см3, доводят содержимое каждой колбы до метки морской водой (см. [4.2](#p100098) или [4.3.2](#p100154)) и перемешивают. При этом массовая концентрация двухромовокислого калия в каждом растворе составляет соответственно 1,0; 2,0; 5,0; 7,5 и 10,0 мг/дм3.
<a id="p100187"></a>Анализируемые растворы двухромовокислого калия каждой концентрации готовят непосредственно перед определением физиологической чувствительности тест-организмов.
<a id="p100188"></a>В качестве контрольной пробы используют морскую воду (см. [4.2](#p100098) или [4.3.2](#p100154)).
<a id="p100189"></a>4.3.3.3. Проводят тестирование в течение 72 ч по [4.4](#p100259) аналогично тестированию анализируемых проб. При этом используют не менее трех чашек Петри на каждую концентрацию анализируемого раствора (см. [4.3.3.2](#p100186)).
<a id="p100190"></a>4.3.3.4. На основании полученных результатов определяют по [4.5](#p100284) значение 72 ч $\text{ЛК}_{50}$ модельного токсиканта (двухромовокислого калия) для науплиев Artemia salina& L.
<a id="p100191"></a>&При этом:&
- <a id="p100192"></a>если значение &72 ч& $\text{ЛК}_{50}$ указанного модельного токсиканта находится в диапазоне 6,5 - &8,0 мг/дм3&, то используемые тест-организмы пригодны для тестирования;
- <a id="p100193"></a>если значение &72 ч& $\text{ЛК}_{50}$ указанного модельного токсиканта не входит в указанный диапазон, то проверяют соблюдение правильности процедуры тестирования, условия подготовки тест-организмов к тестированию и, при необходимости, повторяют тестирование с использованием новых тест-организмов, &выращенных из новой партии яиц (см. [Приложение B](#p100919))&.
<a id="p100194"></a>*Примечание.* Значение 72 ч $\text{ЛК}_{50}$ модельного токсиканта указывают в протоколе испытаний, имея в виду, что это значение &в установленном диапазоне концентраций& характеризует токсичность модельного токсиканта только &для использованных& тест-организмов, а также характеризует их физиологическую чувствительность, что позволяет проводить тестирование с использованием указанных тест-организмов.

<a id="p100195"></a>4.3.3.5. Если в результате тестирования не удалось получить конкретное значение &72 ч& $\text{ЛК}_{50}$ , то для определения &72 ч& $\text{ЛК}_{50}$ используют пробит-анализ. &Пример приведен в [Приложении A](#p100439)&.

##### <a id="p100196"></a>4.3.4 Подготовка проб

<a id="p100197"></a>&Перед тестированием предварительно охлажденные или замороженные пробы доводят до комнатной температуры (от 19 °C до 24 °C).

###### <a id="p100198"></a>4.3.4.1 Подготовка исходных проб природной морской воды и воды эстуариев

<a id="p100199"></a>Отобранные пробы природной морской воды и воды эстуариев фильтруют через мембранные фильтры с порами диаметром 3,5 мкм или через обеззоленные фильтры "белая лента".
<a id="p100200"></a>*Примечание.* Мембранные фильтры перед применением должны быть промыты и простерилизованы кипячением в дистиллированной воде не менее 10 мин.

<a id="p100201"></a>Не допускается для фильтрования использовать фильтр "синяя лента".
<a id="p100202"></a>*Примечание.* Фильтр "синяя лента" задерживает коллоидные вещества, что занижает результаты тестирования.&

<a id="p100203"></a>Измеряют &минерализацию& (соленость), pH и концентрацию растворенного кислорода &отфильтрованной пробы воды.
<a id="p100204"></a>Пробы природной морской воды и воды эстуариев тестируют без разбавлений (в случаях, когда пробы проявляют высокую токсичность, допускается их разбавление непосредственно перед тестированием).

###### <a id="p100205"></a>4.3.4.2 Подготовка исходных проб сточной воды

<a id="p100206"></a>Отобранные пробы сточной воды непосредственно перед тестированием фильтруют через мембранный фильтр с порами диаметром 3,5 мкм или через обеззоленный фильтр "белая лента".&
<a id="p100207"></a>Измеряют &минерализацию& (соленость), pH и концентрацию растворенного кислорода &отфильтрованной пробы сточной воды.

###### <a id="p100208"></a>4.3.4.3 Подготовка исходных проб отработанных буровых растворов, твердых промышленных отходов и донных отложений

<a id="p100209"></a>Из проб донных отложений, отработанных буровых растворов, твердых промышленных отходов готовят водные вытяжки, затем измеряют минерализацию& (соленость), pH и концентрацию растворенного кислорода &подготовленных водных вытяжек.
<a id="p100210"></a>Подготовка водных вытяжек из проб отработанных буровых растворов
<a id="p100211"></a>Перед приготовлением водной вытяжки из пробы отработанных буровых растворов отобранную пробу тщательно перемешивают в смесителе со скоростью вращения $17c^{- 1}$ (1000 об/мин) в течение 5 мин и определяют pH отработанного бурового раствора. Пробу отработанного бурового раствора считают не пригодной для тестирования, если:
- <a id="p100212"></a>pH пробы отработанного бурового раствора более 9,0;
- <a id="p100213"></a>на стенках сосуда с пробой отработанного бурового раствора появились черные пятна;
- <a id="p100214"></a>проба отработанного бурового раствора имеет неприятный запах.
<a id="p100215"></a>После перемешивания пробу отработанного бурового раствора смешивают с морской водой (см. [4.2](#p100098)) в соотношении соответственно 1:9 по объему и снова перемешивают с применением смесителя со скоростью вращения $17c^{- 1}$ (1000 об/мин) в течение 5 мин.
<a id="p100216"></a>После окончания перемешивания смесь отстаивают при температуре (20 +/- 5) °C в течение 1 ч, затем водную вытяжку над осадком осторожно переливают за один прием в стеклянную емкость и перемешивают в течение 5 мин, после чего используют ее для подготовки анализируемой пробы.
<a id="p100217"></a>Если отстоявшаяся смесь не имеет четкого раздела фаз, то весь объем подготовленной пробы используют для приготовления анализируемой пробы.
<a id="p100218"></a>Не допускается консервация и хранение подготовленных водных вытяжек проб отработанных буровых растворов.
<a id="p100219"></a>Подготовка водных вытяжек из проб твердых промышленных отходов
<a id="p100220"></a>Перед приготовлением водной вытяжки из твердых промышленных отходов отобранную пробу твердых промышленных отходов разрыхляют и тщательно осматривают. В случае обнаружения частиц размером более 10 мм их измельчают с помощью металлического шпателя до размера менее 10 мм. Не допускается измельчать смесь с помощью механизированных устройств.
<a id="p100221"></a>Измельченную пробу отходов высушивают при комнатной температуре до воздушно-сухого состояния в вытяжном шкафу или в хорошо проветриваемом помещении.
<a id="p100222"></a>Водную вытяжку из высушенной пробы твердых промышленных отходов готовят в соотношении твердые промышленные отходы:морская вода соответственно 1:10 следующим способом:
<a id="p100223"></a>В стеклянную емкость вместимостью 1500 см3 вносят 100 г сухой массы пробы твердых промышленных отходов, добавляют 1000 см3 морской воды (см. [4.2](#p100098)) и перемешивают в течение 6 - 7 ч с использованием магнитной мешалки (или орбитального шейкера) с минимальной скоростью перемешивания, при которой проба твердых промышленных отходов поддерживается во взвешенном состоянии.
<a id="p100224"></a>*Примечание.* Для приготовления 900 см3 водной вытяжки обычно требуется 100 г сухой массы пробы твердых промышленных отходов.
<a id="p100225"></a>Не допускается использовать для приготовления водной вытяжки менее 20 г сухой массы пробы твердых промышленных отходов и менее 200 см3 морской воды.

<a id="p100226"></a>После окончания перемешивания емкость с полученной смесью ставят в холодильник, где ее выдерживают при температуре от 2 °C до 4 °C в течение 12 - 14 ч, затем жидкость над осадком осторожно переливают в другую емкость, после чего используют ее для подготовки анализируемой пробы.
<a id="p100227"></a>Допускается хранение подготовленных водных вытяжек из твердых промышленных отходов при температуре от 2 °C до 4 °C не более 48 ч.
<a id="p100228"></a>Подготовка водных вытяжек из проб донных отложений
<a id="p100229"></a>Перед приготовлением водной вытяжки из донных отложений отобранную пробу донных отложений высушивают при температуре (20 +/- 5) °C до воздушно-сухого состояния, удаляют остатки растений, камешки и т.п., затем измельчают в ступке и просеивают через сито с диаметром отверстий 1 мм.
<a id="p100230"></a>После просеивания навеску пробы донных отложений вносят в стеклянную емкость и заливают морской водой (см. [4.2](#p100098)) в соотношении соответственно 1:4 по объему, перемешивают с использованием орбитального шейкера (или качалки-мешалки) в течение 2 ч. После окончания перемешивания смесь выдерживают в течение 1 ч при температуре (20 +/- 5) °C, ставят в холодильник и выдерживают при температуре от 2 °C до 4 °C в течение 12 - 14 ч, затем водную вытяжку над осадком осторожно переливают в стеклянную емкость и фильтруют, после чего используют ее для подготовки анализируемой пробы.
<a id="p100231"></a>Допускается хранение подготовленных водных вытяжек донных отложений при температуре от 2 °C до 4 °C не более 72 ч.&

###### <a id="p100232"></a>4.3.4.4 Подготовка исходных растворов веществ

<a id="p100233"></a>Исходные растворы веществ в зависимости от заданной концентрации готовят в стеклянной мерной емкости путем растворения определенного количества пробы вещества в определенном объеме морской воды &(см. [4.2](#p100098)).
<a id="p100234"></a>Исходные растворы веществ& готовят непосредственно перед их тестированием, при этом, если известно, что вещества стабильны в растворе, исходные растворы допускается готовить заранее, но не более &чем& за двое суток до начала &тестирования&.
<a id="p100235"></a>Для веществ, трудно растворимых в воде, при приготовлении их исходных растворов могут быть использованы ультразвуковые или другие устройства (шейкеры) для облегчения растворимости или диспергирования веществ.
<a id="p100236"></a>Допускается также использовать органические растворители, обладающие малой токсичностью в отношении тест-организмов (например, ацетон), при условии, что концентрация растворителя в анализируемой пробе раствора не превышает 0,1 см3/дм3, при этом параллельно с основным тестированием проводят два контрольных тестирования, одно без растворителя и другое с максимальной концентрацией растворителя.
<a id="p100237"></a>Для приготовления исходного раствора вещества заданной концентрации невозможно рекомендовать какую-либо единую методику. &Например, используют следующую процедуру: в стеклянную мерную колбу вместимостью 1000 см3 (или 100, 50, 25 см3) вносят 1 г вещества (или другое его количество, в зависимости от заданной концентрации раствора), затем осторожно добавляют в колбу небольшое количество отфильтрованной морской воды, перемешивают до полного растворения вещества, доводят объем до метки морской водой и снова перемешивают. Приготовленный раствор маркируют и выдерживают перед тестированием при комнатной температуре не менее 2 ч.&
<a id="p100238"></a>Измеряют &минерализацию& (соленость), pH и концентрацию растворенного кислорода в исходном растворе вещества.
<a id="p100239"></a>4.3.4.5. Исходные пробы (см. [4.3.4.1](#p100198) - [4.3.4.3](#p100208)) и исходные растворы веществ (см. [4.3.4.4](#p100232)) должны иметь следующие характеристики:
<a id="p100240"></a>&a) Минерализация от 6 до 33 г/дм3& (соленость &от 6 до $33‰$ )
<a id="p100241"></a>*Примечание.* Приведен диапазон минерализации (солености) в зависимости от исследуемого объекта; минерализация (соленость) исходных проб (растворов) должна входить в указанный диапазон.

<a id="p100242"></a>b)& Значение pH 8,0 - &8,3
<a id="p100243"></a>Если значение pH пробы выходит за указанные пределы, то регулируют pH пробы (добавляют 10%-ный раствор соляной кислоты или 10%-ный раствор гидроокиси натрия) и аэрируют пробу при помощи аквариумного компрессора в течение 10 - 20 мин для стабилизации pH.
<a id="p100244"></a>Для исходных проб водных вытяжек из твердых промышленных отходов регулирование pH не допускается.
<a id="p100245"></a>c)& Концентрация растворенного кислорода должна быть &не ниже $7\text{мгО}_{2}/\text{дм}^{3}$ . Если концентрация растворенного кислорода пробы ниже указанного значения, пробу аэрируют при помощи аквариумного компрессора.&

###### <a id="p100246"></a>4.3.4.6 Подготовка анализируемых проб

<a id="p100247"></a>&Анализируемые пробы природной морской воды и воды эстуариев готовят следующим способом: в пять конических колб вместимостью 150 см3 вносят по 100 см3 отфильтрованной исходной пробы (см. [4.3.4.1](#p100198)). При необходимости, если анализируемая проба природной морской воды при тестировании по [4.4](#p100259) показала высокую токсичность, проводят разбавление ее исходной пробы (см. [4.3.4.1](#p100198)) в два, пять, 10 и более раз искусственной морской водой (см. [4.3.2](#p100154)), соленость которой должна соответствовать солености исходной пробы.
<a id="p100248"></a>Анализируемые пробы сточной воды готовят следующим способом: в пять конических колб вместимостью 150 см3 вносят подготовленную по [4.3.4.2](#p100205) исходную пробу сточной воды и морскую воду (см. [4.2](#p100098)), соленость которой должна соответствовать солености исходной пробы сточной воды в объемах:
- <a id="p100249"></a>100 см3 исходной пробы (проба без разбавления);
- <a id="p100250"></a>50 см3 исходной пробы и 50 см3 морской воды (кратность разбавления: 50%, в два раза);
- <a id="p100251"></a>10 см3 исходной пробы и 90 см3 морской воды (кратность разбавления: 10%, в 10 раз);
- <a id="p100252"></a>1 см3 исходной пробы и 99 см3 морской воды (кратность разбавления: 1%, в 100 раз);
- <a id="p100253"></a>0,1 см3 исходной пробы и 99,9 см3 морской воды (кратность разбавления: 0,1%, в 1000 раз).
<a id="p100254"></a>Анализируемые пробы отработанных буровых растворов, твердых промышленных отходов и донных отложений готовят из водных вытяжек (см. [4.3.4.3](#p100208)) путем их разбавления морской водой (см. [4.2](#p100098)) аналогично подготовке анализируемых проб сточной воды.&
<a id="p100255"></a>Анализируемую пробу раствора вещества готовят &следующим способом: в пять конических колб вместимостью 150 см3 вносят по 100 см3& морской воды (см. [4.2](#p100098)), добавляют &в колбы рассчитанные& объемы исходного раствора вещества &(см. [4.3.4.4](#p100232))& для получения заданных концентраций (см. [4.4.1](#p100261), [4.4.2](#p100267)).
<a id="p100256"></a>&4.3.4.7&. Измеряют и регистрируют &минерализацию (соленость)&, pH и концентрацию растворенного кислорода &в каждой емкости с& анализируемой пробой.
<a id="p100257"></a>&4.3.5. Подготовка тест-организмов к тестированию
<a id="p100258"></a>Подготовку тест-организмов к тестированию проводят в соответствии с требованиями [Приложения B](#p100919) с учетом требований [4.3.4](#p100196).&

#### <a id="p100259"></a>4.4 Проведение тестирования

<a id="p100260"></a>Тестирование проводят в два этапа: предварительное и окончательное.

##### <a id="p100261"></a>4.4.1 Предварительное тестирование

<a id="p100262"></a>&Предварительное тестирование проводят для установления диапазона разбавлений (концентраций) проб, в пределах которого необходимо провести окончательное тестирование для определения значения 72 ч $\text{ЛКР}_{50}$ (96 ч $\text{ЛКР}_{50}$ ) или 72 ч $\text{ЛК}_{50}$ в зависимости от анализируемых проб.
<a id="p100263"></a>При предварительном тестировании& исследуют широкую область разбавлений &(не менее пяти)& сточных вод, &водных вытяжек& и концентрации растворов вещества, выбираемых в геометрической прогрессии, &при этом&, как правило, используют коэффициент 10 между &разбавлениями& (концентрациями).
<a id="p100264"></a>&При предварительном тестировании применяют не менее двух чашек Петри& на &каждое анализируемое разбавление& (концентрацию,) &пробы и используют& не менее 40 тест-организмов.
<a id="p100265"></a>Предварительное тестирование &проводят по [4.4.3](#p100271).
<a id="p100266"></a>Пример проведения предварительного тестирования и установления диапазона концентраций вещества, в пределах которого необходимо проводить окончательное тестирование, приведен в [Приложении A](#p100439).&

##### <a id="p100267"></a>4.4.2 Окончательное тестирование

<a id="p100268"></a>По результатам предварительного тестирования (см. [4.4.1](#p100261)) выбирают диапазон &разбавлений& (концентраций) анализируемых проб для окончательного тестирования. &При этом& используют коэффициент между разбавлениями (концентрациями), как правило, 2,0 &или 2,5&.
<a id="p100269"></a>Окончательное тестирование проводят по [4.4.3](#p100271). При этом &используют не менее пяти разбавлений (концентраций) анализируемых проб, применяют не менее трех чашек Петри для каждого разбавления (концентрации) и не менее 60 тест-организмов.
<a id="p100270"></a>Пример проведения окончательного тестирования и установления значений средней летальной концентрации 72 ч $\text{ЛК}_{50}$ для вещества приведен в [Приложении A](#p100439).&

##### <a id="p100271"></a>4.4.3 Процедура тестирования

<a id="p100272"></a>&4.4.3.1&. Для каждой серии &разбавлений& (концентраций) &анализируемых проб& используют контрольную пробу, содержащую объем морской воды (см. [4.2](#p100098) или [4.3.2](#p100154)), равный объему анализируемого раствора одного из разбавлений (одной из концентраций) пробы.
<a id="p100273"></a>Контрольная проба, &а также вода для замачивания яиц Artemia salina& L. должны соответствовать &минерализации (солености)& анализируемой пробы.
<a id="p100274"></a>&4.4.3.2&. Перед началом тестирования &в емкости вместимостью 200 см3 вносят по 150 см3 анализируемой пробы заданного разбавления (концентрации) (см. [4.3.4.6](#p100246))& и измеряют концентрацию растворенного кислорода и pH. Измеряемые характеристики должны соответствовать указанным в [&4.3.4.5](#p100239). Аналогичную процедуру проводят& для контрольной пробы (см. [4.4.3.1](#p100272)).
<a id="p100275"></a>&Примечание. Объем (150 см3) каждого разбавления (концентрации) пробы достаточен для розлива в три чашки Петри по 40 см3 при проведении тестирования.

<a id="p100276"></a>4.4.3.3&. В каждую &чашку Петри (см. [4.4.1](#p100261) и [4.4.2](#p100267))& вместимостью 50 см3 вносят 40 см3 &анализируемой& пробы &(см. [4.3.4.6](#p100246)), соответствующей требованиям [4.4.3.2](#p100274)&, затем помещают по &20 экземпляров тест-организмов&. Тест-организмы рекомендуется переносить пипеткой с достаточно широким внутренним диаметром (пипеткой Пастера), чтобы не повредить их. Аналогичную процедуру проводят и для контрольных проб (см. [4.4.3.1](#p100272)). &Посадку тест-организмов начинают с контрольных проб. При этом плотность посадки не должна превышать 1 тест-организм на 2,0 см3 раствора.
<a id="p100277"></a>В анализируемые пробы тест-организмы помещают, начиная с меньших концентраций веществ (больших разбавлений проб).
<a id="p100278"></a>После окончания посадки тест-организмов в чашки Петри с анализируемыми пробами каждого разбавления (концентрации) пипетку Пастера промывают морской водой.&
<a id="p100279"></a>Не допускается во время тестирования кормить тест-организмы &и менять растворы.
<a id="p100280"></a>4.4.3.4&. Тестирование проводят &в климатостате (см. [4.2](#p100098))& при температуре (20 +/- 2) °C в течение &3 - 4 сут, имитируя& светлый период - 16 ч и темный период - 8 ч.
<a id="p100281"></a>*Примечание.* &Допускается& проводить тестирование в помещении с регулируемой температурой, инкубаторе или на водяной бане, обеспечивающих указанный режим тестирования.

<a id="p100282"></a>&4.4.3.5. Подсчитывают каждые сутки через& 24, 48, &72 ч (96 ч)& в каждой &чашке Петри& количество живых тест-организмов, &при этом пипеткой удаляют мертвые тест-организмы&. Для подсчета &тест-организмов& используют микроскоп. Мертвыми считают тест-организмы, которые в период подсчета не плавают или не двигают отростками в течение 10 с &после легкого постукивания по чашке Петри. Для каждой анализируемой пробы заданного разбавления (концентрации), в том числе контрольной, регистрируют количество выживших тест-организмов после 24, 48, 72 ч (96 ч) тестирования.& Регистрируют также &любые& отклонения внешнего вида или поведения тест-организмов по сравнению с тест-организмами в контрольной пробе.
<a id="p100283"></a>4.4.3.6. После подсчета выживших тест-организмов измеряют в анализируемых и контрольных пробах концентрацию растворенного кислорода и pH.

#### <a id="p100284"></a>4.5 Обработка результатов

<a id="p100285"></a>&4.5.1. По результатам тестирования для каждой анализируемой пробы заданного разбавления (концентрации), в том числе контрольной, рассчитывают среднеарифметическое значение выживших тест-организмов.

##### <a id="p100286"></a>4.5.2 Степень токсичности A&, %, для каждого анализируемого разбавления (концентрации) пробы &рассчитывают по формуле&


<a id="p100287"></a> $A = \frac{\overline{x_{\text{к}}} - \overline{x_{\text{ан}}}}{\overline{x_{\text{к}}}} 100$ , (1)

<a id="p100288"></a>&где& $\overline{x_{\text{к}}}$ - среднеарифметическое значение &количества выживших тест-организмов в контрольной пробе, шт.&;
<a id="p100289"></a> $\overline{x_{\text{ан}}}$ - &среднеарифметическое значение количества выживших тест-организмов в анализируемой пробе, шт.

<div align="center">

<a id="p100290"></a>4.5.3. Характеристику токсичности проб природной морской воды и воды эстуариев устанавливают в соответствии с таблицей 2.

</div>


<a id="p100291"></a>Таблица 2


<table>
<colgroup><col width="57%"><col width="10%"><col width="7%"><col width="7%"><col width="7%"><col width="13%"></colgroup>
<tr><td><a id="p100292"></a>Характеристика токсичности проб природной морской воды и воды эстуариев</td><td colspan="5"><a id="p100293"></a>Степень токсичности A, %</td></tr>
<tr><td><a id="p100294"></a>Нетоксичная</td><td><a id="p100295"></a>От</td><td><a id="p100296"></a>0</td><td><a id="p100297"></a>до</td><td><a id="p100298"></a>10</td><td><a id="p100299"></a>включ.</td></tr>
<tr><td><a id="p100300"></a>Слаботоксичная</td><td><a id="p100301"></a>"</td><td><a id="p100302"></a>10</td><td><a id="p100303"></a>"</td><td><a id="p100304"></a>25</td><td><a id="p100305"></a>"</td></tr>
<tr><td><a id="p100306"></a>Среднетоксичная</td><td><a id="p100307"></a>"</td><td><a id="p100308"></a>25</td><td><a id="p100309"></a>"</td><td><a id="p100310"></a>35</td><td><a id="p100311"></a>"</td></tr>
<tr><td><a id="p100312"></a>Токсичная</td><td><a id="p100313"></a>"</td><td><a id="p100314"></a>35</td><td><a id="p100315"></a>"</td><td><a id="p100316"></a>50</td><td><a id="p100317"></a>"</td></tr>
<tr><td><a id="p100318"></a>Высокотоксичная</td><td><a id="p100319"></a>"</td><td><a id="p100320"></a>50</td><td><a id="p100321"></a>"</td><td><a id="p100322"></a>100</td><td><a id="p100323"></a>"</td></tr>
</table>


<div align="center">

<a id="p100324"></a>4.5.4. Характеристику токсичности проб сточной воды, веществ, водных вытяжек отработанных буровых растворов, твердых промышленных отходов, донных отложений устанавливают следующим образом:<br>
- <a id="p100325"></a>если A менее 10% включительно, то считают что анализируемая проба не оказывает токсического действия (безвредная кратность разбавления или безвредная концентрация);<br>
- <a id="p100326"></a>если A в пределах от 10% до 50% включительно, то считают, что анализируемая проба оказывает токсическое действие;

</div>

- <a id="p100327"></a>если A более 50%, то считают, что анализируемая проба является высокотоксичной.
<a id="p100328"></a>4.5.5&. По результатам подсчета (см. &[4.4.3.5](#p100282)&) для каждого анализируемого &разбавления& (концентрации) пробы суммируют количество выживших тест-организмов в чашках Петри и рассчитывают процент гибели тест-организмов после &72 ч (96 ч)& тестирования по отношению к общему количеству использованных тест-организмов, затем определяют среднюю летальную &кратность разбавления пробы 72 ч $\text{ЛКР}_{50}$ (96 ч $\text{ЛКР}_{50}$ )&, для растворов веществ - среднюю летальную концентрацию 72 ч $\text{ЛК}_{50}$ .
<a id="p100329"></a>&Примечания.
1. <a id="p100330"></a>Если для расчета процента гибели тест-организмов используют среднеарифметическое значение (см. [4.5.1](#p100285)), то за общее количество использованных тест-организмов принимают количество тест-организмов, внесенных в одну чашку Петри для каждого анализируемого разбавления (концентрации) пробы.
2. <a id="p100331"></a>Если в контрольной пробе не наблюдалась гибель тест-организмов (см. [4.5.7](#p100337)), то допускается для расчета процента гибели тест-организмов использовать [формулу (1)](#p100287).&

<a id="p100332"></a>При необходимости определяют:
- <a id="p100333"></a>минимальную концентрацию пробы, соответствующую 100%-ной смертности тест-организмов, и максимальную концентрацию пробы, соответствующую 0%-ной смертности тест-организмов за 72 ч (96 ч);
- <a id="p100334"></a>&безвредную кратность разбавления (концентрации) пробы, вызывающую гибель не более 10% тест-организмов;&
- <a id="p100335"></a>максимальную концентрацию пробы вещества, при которой проводилось тестирование.
<a id="p100336"></a>&4.5.6. Если по результатам тестирования не удалось определить конкретное значение средней летальной кратности разбавления (концентрации) пробы (см. [4.5.5](#p100328)), вызывающей 50%-ную гибель тест-организмов за 72 ч (96 ч), то для определения этого значения используют пробит-анализ. Пример приведен в [Приложении A](#p100439).&

##### <a id="p100337"></a>4.5.7 Результаты тестирования считают достоверными, если соблюдаются следующие условия:

<a id="p100338"></a>a) &процент& гибели тест-организмов в контрольных пробах не более 10%;
<a id="p100339"></a>b) токсичность модельного токсиканта находится в пределах, указанных в [4.3.3.4](#p100190).

#### <a id="p100340"></a>4.6 Оформление результатов тестирования

<a id="p100341"></a>&4.6.1&. Результаты тестирования регистрируют в протоколе испытаний &в соответствии с требованиями ГОСТ Р ИСО/МЭК 17025, при этом дополнительно указывают& следующую информацию:
<a id="p100342"></a>&a) ссылку на настоящий стандарт с указанием метода определения;&
<a id="p100343"></a>b) данные, необходимые для идентификации пробы или анализируемого вещества, прошедшего испытания;
<a id="p100344"></a>c) методы подготовки проб:
- <a id="p100345"></a>для &природной морской& воды, &воды эстуариев& или сточных вод - условия и продолжительность хранения проб и, при необходимости, условия, в которых проводились отстаивание, фильтрование, а также размораживание &пробы&,
- <a id="p100346"></a>для веществ &и водных вытяжек& - способ приготовления исходных и анализируемых проб (растворов);
<a id="p100347"></a>d) информацию, относящуюся к &тестированию&, включая вид, источник, возраст и стадию жизненного цикла тест-организма, &условия культивирования&, источник и характеристику морской воды;
<a id="p100348"></a>e) результаты окончательного определения &средней летальной кратности разбавления 72 ч $\text{ЛКР}_{50}$ или 96 ч $\text{ЛКР}_{50}$ (средней летальной концентрации 72 ч $\text{ЛК}_{50}$ )&, метод расчета &(при необходимости)&;
<a id="p100349"></a>f) минимальную концентрацию пробы вещества &(минимальную кратность разбавления пробы)&, соответствующую 100%-ной смертности, и максимальную концентрацию &(максимальную кратность разбавления)&, соответствующую 0%-ной смертности тест-организмов за 24, 48, 72 и 96 ч;
<a id="p100350"></a>g) любые отклонения в поведении или внешнем виде тест-организмов в условиях тестирования;
<a id="p100351"></a>h) обстоятельства и условия, не предусмотренные настоящим стандартом, способные повлиять на результат &тестирования&;
<a id="p100352"></a>i) значения pH и концентрацию растворенного кислорода в анализируемых и контрольных пробах в начале и конце тестирования.
<a id="p100353"></a>&4.6.2&. Значения &72 ч $\text{ЛКР}_{50}$ (96 ч $\text{ЛКР}_{50}$ )&, 72 ч $\text{ЛК}_{50}$ и диапазон разбавлений (концентраций) пробы, соответствующий 0%-ной и 100%-ной смертности выражают:
- <a id="p100354"></a>в процентах (%) или &в кратности разбавления (разы) - для природной морской воды, воды эстуариев&, сточных вод и водных вытяжек;
- <a id="p100355"></a>в миллиграммах (или микрограммах) на кубический дециметр - для растворов веществ.

5. <a id="p100356"></a>Метод определения токсичности &исследуемых
объектов& по выживаемости морских ракообразных
видов &Acartia tonsa& Dana, &Tisbe battagliai&
Volkmann-Rocco, &Nitocra spinipes& Boeck

<div align="center">

(Copepoda, Crustacea) &(метод Б)&

</div>



#### <a id="p100357"></a>5.1 Сущность метода

<div align="center">

<a id="p100358"></a>Сущность метода заключается &в регистрации гибели& морских ракообразных видов &Acartia tonsa& Dana, &Tisbe battagliai& Volkmann-Rocco, &Nitocra spinipes& Boeck (Copepoda, Crustacea) в анализируемой пробе исследуемого объекта, определении ее токсичности &и токсикологических показателей& при тестировании &в течение& 48 ч.<br>
<a id="p100359"></a>&Среднюю летальную кратность разбавления за 48 ч тестирования, вызывающую гибель 50% тест-организмов&, обозначают &48 ч $\text{ЛКР}_{50}$ &; среднюю летальную концентрацию как - 48 ч $\text{ЛК}_{50}$ .

</div>

<a id="p100360"></a>*Примечание.* Допускается проводить определение средней летальной &кратности разбавления& проб &сточной воды& (концентрации &вещества&), вызывающей гибель 50% тест-организмов, за 24 ч [24 ч $\text{ЛКР}_{50}$ (24 ч $\text{ЛК}_{50}$ )], &или& при увеличенной продолжительности тестирования до 96 ч [96 ч $\text{ЛКР}_{50}$ (96 ч $\text{ЛК}_{50}$ )].

<a id="p100361"></a>5.2. Средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы, материалы - по [4.2](#p100098) &со следующими дополнениями&:
<a id="p100362"></a>Контейнеры для &тестирования& из химически инертных материалов например, стеклянные химические стаканы &(или чашки Петри) по [ГОСТ 25336&] и одноразовые чашки &Петри& из твердого полимерного материала &с ячейками для культур организмов&.
<a id="p100363"></a>*Примечание.* Для снижения испарения анализируемых растворов рекомендуется &для контейнеров& использовать &неплотно прилегающие& широкие крышки.
<a id="p100364"></a>Для ранних стадий жизненного цикла тест-организмов могут быть использованы специальные контейнеры, приспособленные для наблюдений с использованием микроскопа.

<a id="p100365"></a>Тест-организмы: &морские ракообразные видов:
- <a id="p100366"></a>Acartia tonsa& Dana;
- <a id="p100367"></a>&Tisbe battagliai& Volkmann-Rocco;
- <a id="p100368"></a>&Nitocra spinipes& Boeck.
<a id="p100369"></a>Примечания.
1. <a id="p100370"></a>Для тестирования используют культуру тест-организмов одного из указанных видов.
2. <a id="p100371"></a>Тест-организмы получают путем их культивирования в лабораторных условиях в соответствии с требованиями [Приложения B](#p100919).
<a id="p100372"></a>После откладывания яиц жизненный цикл тест-организмов состоит из стадий развития науплиев, копеподитов и взрослых особей. Возраст и стадия жизненного цикла тест-организма по состоянию на начало тестирования должны быть указаны в протоколе испытаний следующим образом:
- <a id="p100373"></a>&Acartia tonsa& Dana: крупные копеподиты (стадия 5) или взрослые особи;
- <a id="p100374"></a>&Tisbe battagliai& Volkmann-Rocco: копеподиды в возрасте (6 +/- 2) сут;
- <a id="p100375"></a>&Nitocra spinipes& Boeck: взрослые особи в возрасте от трех до четырех недель.

<a id="p100376"></a>Модельный токсикант: 3,5-дихлорфенол, ч.д.а или по [4.2](#p100098).
<a id="p100377"></a>Морская вода (далее - вода для разбавления) по [4.2](#p100098).
<a id="p100378"></a>Примечания.
1. <a id="p100379"></a>При тестировании &по методу Б& для применяемых тест-организмов недостаточно информации о возможности использования искусственной морской воды.
2. <a id="p100380"></a>Использование &воды для разбавления (природной& морской воды) с более низкой соленостью, что больше подходит для испытаний устьевой (опресненной) или жесткой воды, должно быть отражено в протоколе испытаний.
3. <a id="p100381"></a>&Nitocra spinipes& Boeck допускается использовать при &минерализации& воды менее 1 &г/дм3& (солености менее $1‰$ ), а &Tisbe battagliai& Volkmann-Rocco - &для воды с минерализацией& до 20 &г/дм3& (солености до $20‰$ ).
<a id="p100382"></a>Перед началом тестирования тест-организмы культивируют и выдерживают не менее 7 сут &в природной морской воде& такой же солености (&при допускаемом предельном отклонении& +/- $3‰$ ), что и анализируемые пробы.
4. <a id="p100383"></a>Содержание растворенного кислорода в воде для разбавления должно быть более $7\text{мг О}_{2}/\text{дм}^{3}$ , а значение pH - (8,0 +/- 0,3).
5. <a id="p100384"></a>&Природная& морская вода (вода для разбавления) должна обеспечивать выживание тест-организмов не менее 48 ч и должна быть отобрана из того же источника, что и &природная& морская вода, которая применялась для культивирования тест-организмов на протяжении жизненного цикла не менее двух поколений.

<a id="p100385"></a>&Аммоний молибденовокислый 4-водный $(NH_{4})_{6}Mo_{7}O_{24} \cdot 4H_{2}O$ .
<a id="p100386"></a>Натрий фосфорнокислый однозамещенный 2-водный по [ГОСТ 245](https://bukva.ai/docs/gost-245-76), х.ч.
<a id="p100387"></a>Марганец (II) хлористый 4-водный по [ГОСТ 612](https://bukva.ai/docs/postanovlenie-gost-612-75), х.ч.
<a id="p100388"></a>Железо (III) хлорид 6-водный по [ГОСТ 4147](https://bukva.ai/docs/gost-4147-74), х.ч.
<a id="p100389"></a>Натрий азотнокислый по [ГОСТ 4168](https://bukva.ai/docs/postanovlenie-gost-4168-79), х.ч.
<a id="p100390"></a>Кобальт хлористый 6-водный по [ГОСТ 4525](https://bukva.ai/docs/gost-4525-77), х.ч.
<a id="p100391"></a>Цинк хлористый по [ГОСТ 4529](https://bukva.ai/docs/postanovlenie-gost-4529-78), х.ч.
<a id="p100392"></a>Соль динатриевая этилендиамин-N,N,N',N'-тетрауксусной кислоты 2-водная (трилон Б) по [ГОСТ 10652](https://bukva.ai/docs/gost-10652-73), х.ч.
<a id="p100393"></a>Медь (II) сернокислая 5-водная $(CuSO \cdot 5H_{2}O)$ , х.ч.
<a id="p100394"></a>Витамин $B_{12}$ (цианокобаламин).
<a id="p100395"></a>Витамин $B_{1}$ .&

#### <a id="p100396"></a>5.3 Подготовка к тестированию

<a id="p100397"></a>&5.3.1. Подготовка посуды - по [4.3.1](#p100147), при этом перед тестированием& контейнеры для &тестирования (см. [5.2)&](#p100361) должны быть тщательно вымыты водопроводной водой и ополоснуты сначала &дистиллированной& водой, а затем морской водой (см. [5.2](#p100361)).
<a id="p100398"></a>5.3.2. Подготовка исходных и анализируемых проб - &по [4.3.4&](#p100196). При этом исходные растворы вещества готовят с использованием дистиллированной воды. &Минерализация& (соленость) анализируемых проб должна соответствовать &минерализации& (солености) использованной морской воды (см. [5.2](#p100361)).
<a id="p100399"></a>Рекомендуется, чтобы объем приготовленной анализируемой пробы был достаточным и для определения концентрации растворенного кислорода и pH.

##### <a id="p100400"></a>5.3.3 Проверка физиологической чувствительности тест-организмов

<a id="p100401"></a>Периодически &(не реже одного раза в месяц), а также непосредственно перед тестированием& тест-организмы проверяют &на физиологическую чувствительность&. Для этого определяют &среднюю летальную концентрацию& модельного токсиканта &3,5-дихлорфенола при тестировании в течение 48 ч& (48 ч $\text{ЛК}_{50}$ ).
<a id="p100402"></a>&Анализируемые растворы модельного токсиканта (3,5-дихлорфенола) готовят непосредственно перед определением физиологической чувствительности тест-организмов аналогично растворам модельного токсиканта на основе двухромовокислого калия (см. [4.3.3.1](#p100184) и [4.3.3.2](#p100186)), но для диапазона концентраций 3,5-дихлорфенола, приведенных в [таблице 3](#p100408).
<a id="p100403"></a>Тестирование проводят в соответствии с требованиями [5.4](#p100424) в течение 48 ч.
<a id="p100404"></a>На основании полученных результатов аналогично [4.5.5](#p100328) определяют значение& 48 ч $\text{ЛК}_{50}$ &для модельного токсиканта (3,5-дихлорфенола), при этом&:
- <a id="p100405"></a>если значение 48 ч $\text{ЛК}_{50}$ &модельного токсиканта& находится в диапазоне концентраций &3,5-дихлорфенола&, указанных в [таблице 3](#p100408), то используемые тест-организмы пригодны для тестирования;
- <a id="p100406"></a>если &значение& 48 ч $\text{ЛК}_{50}$ модельного токсиканта &(3,5-дихлорфенола)& не входит в диапазон концентраций, &указанных в& [таблице 3](#p100408), то проверяют соблюдение выполнения условий тестирования, условия культивирования тест-организмов и, при необходимости, используют новую культуру тест-организмов.
<a id="p100407"></a>*Примечание.* Значение 48 ч $\text{ЛК}_{50}$ модельного токсиканта указывают в протоколе испытаний, имея в виду, что это значение &в установленном диапазоне концентраций& характеризует токсичность модельного токсиканта только для использованных тест-организмов, а также характеризует их физиологическую чувствительность, что позволяет проводить тестирование с использованием указанных тест-организмов.

<a id="p100408"></a>&Таблица 3


<table>
<colgroup><col width="47%"><col width="27%"><col width="26%"></colgroup>
<tr><td rowspan="2"><a id="p100409"></a>Тест-организмы</td><td colspan="2"><a id="p100410"></a>&amp;Массовая концентрация раствора модельного токсиканта&amp; (3,5-дихлорфенола), &amp;мг/дм3, соответствующая&amp;</td></tr>
<tr><td><a id="p100411"></a>&amp;50%-ной гибели тест-организмов&amp; (48 ч $\text{ЛК}_{50}$ )</td><td><a id="p100412"></a>(20 - 80)%-ной &amp;гибели тест-организмов&amp;</td></tr>
<tr><td><a id="p100413"></a>&amp;Acartia tonsa&amp; Dana</td><td><a id="p100414"></a>0,5 - 1,5</td><td><a id="p100415"></a>1,0</td></tr>
<tr><td><a id="p100416"></a>&amp;Tisbe battagliai&amp; Volkmann-Rocco</td><td><a id="p100417"></a>1,1 - 3,5</td><td><a id="p100418"></a>2,3</td></tr>
<tr><td><a id="p100419"></a>&amp;Nitocra spinipes&amp; Boeck</td><td><a id="p100420"></a>1,9 - 5,7</td><td><a id="p100421"></a>3,8</td></tr>
<tr><td colspan="3"><a id="p100422"></a>Примечание. Значения 48 ч $\text{ЛК}_{50}$ могут изменяться в зависимости от &amp;минерализации&amp; (солености) среды. Приведенные &amp;в таблице 3 значения&amp; относятся только к среде с &amp;минерализацией&amp; от 29 до 36 &amp;г/дм3&amp; (соленостью от 29 до $36‰$ ).</td></tr>
</table>


<a id="p100423"></a>Допускается проверять &физиологическую& чувствительность тест-организмов путем определения гибели &тест-организмов& в растворе модельного токсиканта при одной концентрации, приведенной в таблице 3, после &тестирования в течение& 48 ч. Если гибель тест-организмов при этом составляет от 20% до 80%, то чувствительность тест-организмов является приемлемой для тестирования. Если гибель &тест-организмов& не попадает в указанный диапазон &их гибели&, то &проверяют соблюдение выполнения условий тестирования, способ культивирования тест-организмов и, при необходимости, используют новую культуру тест-организмов&.

#### <a id="p100424"></a>5.4 Проведение тестирования

<div align="center">

<a id="p100425"></a>5.4.1. Проведение тестирования - &аналогично& [4.4](#p100259), &но& с использованием тест-организмов по [5.2](#p100361) и тестирования в течение 48 ч.

</div>

<a id="p100426"></a>При необходимости определяют 24 ч $\text{ЛК}_{50}$ (24 ч $\text{ЛКР}_{50}$ ), а также концентрации вещества &(разбавлений)&, соответствующие 0%-ной и 100%-ной смертности тест-организмов за 48 ч.
<a id="p100427"></a>Пример проведения предварительного тестирования и установления &диапазона& концентраций &вещества, в пределах которого необходимо проводить окончательное тестирование&, приведен в [Приложении A](#p100439). Для тестирования используют по одному контейнеру для каждой концентрации анализируемого раствора.
<a id="p100428"></a>Пример проведения окончательного тестирования для определения &значения средней летальной концентрации& 48 ч $\text{ЛК}_{50}$ приведен в [Приложении A](#p100439). При проведении тестирования рекомендуется использовать &одинаковые контейнеры (см. [5.2](#p100361))&.
<a id="p100429"></a>Процедура тестирования - по [4.4.3](#p100271) со следующими уточнениями:
<a id="p100430"></a>&5.4.1.1&. В серию &контейнеров& для тестирования (см. [5.2](#p100361)) вносят равные объемы анализируемой пробы (см. [5.3.2](#p100398)). Объем &анализируемой пробы& должен быть таким, чтобы при использовании необходимого количества тест-организмов их плотность не превышала одного организма на 0,5 см3 пробы, &при этом& для &Acartia tonsa& Dana рекомендуемая максимальная плотность посадки - один организм на 5 см3 &анализируемой пробы.
<a id="p100431"></a>5.4.1.2&. Для каждой серии определений подготавливают &контрольную пробу& в контейнере, содержащую объем &воды для разбавления& (см. [5.2](#p100361)), равный объему анализируемого раствора одной из концентраций &вещества (разбавлений сточной воды)&.
<a id="p100432"></a>Если для растворения или диспергирования вещества используют растворитель, то одновременно готовят второй контрольный контейнер с &контрольной пробой& из &воды для разбавления& (см. [5.2](#p100361)), содержащей растворитель в максимальной используемой концентрации.
<a id="p100433"></a>5.4.1.3. Тестирование труднорастворимых веществ проводят по [4.4.3](#p100271) с использованием 20 тест-организмов и только при одной концентрации, которая соответствует массовой концентрации 100 мг/дм3 или более низкой концентрации, являющейся максимальной для растворения данного вещества.
<a id="p100434"></a>5.4.2. После подсчета выживших тест-организмов измеряют в анализируемых и контрольных пробах концентрацию растворенного кислорода и pH.
<a id="p100435"></a>5.5. Обработка результатов - &аналогично& [4.5](#p100284) &с определением токсичности и токсикологических показателей за 48 ч&.
<a id="p100436"></a>Информация о результатах проведенных межлабораторных испытаний приведена в [Приложении C](#p101065).

#### <a id="p100437"></a>5.6 Оформление результатов - &аналогично& [4.6](#p100340).






<a id="p100438"></a>Приложение A
(рекомендуемое)

<a id="p100439"></a>**ПРИМЕРЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ**
**СРЕДНЕЙ ЛЕТАЛЬНОЙ КОНЦЕНТРАЦИИ &(РАЗБАВЛЕНИЯ)**

<a id="p100440"></a>A.1. Пример определения 72 ч $\text{ЛК}_{50}$ модельного токсиканта для [метода А](#p100090)
<a id="p100441"></a>Результаты определения физиологической чувствительности науплиев Artemia salina& L. в растворе &модельного токсиканта (калий двухромовокислый) приведены в таблице A.1.

<a id="p100442"></a>Таблица A.1


<table>
<colgroup><col width="12%"><col width="22%"><col width="10%"><col width="10%"><col width="10%"><col width="20%"><col width="16%"></colgroup>
<tr><td rowspan="2"><a id="p100443"></a>Продолжительность тестирования, ч</td><td rowspan="2"><a id="p100444"></a>Массовая концентрация раствора модельного токсиканта, мг/дм3</td><td colspan="3"><a id="p100445"></a>Количество выживших тест-организмов, шт., в чашках Петри</td><td rowspan="2"><a id="p100446"></a>Среднеарифметическое значение количества выживших тест-организмов, шт.</td><td rowspan="2"><a id="p100447"></a>Процент гибели тест-организмов, %</td></tr>
<tr><td><a id="p100448"></a>N 1</td><td><a id="p100449"></a>N 2</td><td><a id="p100450"></a>N 3</td></tr>
<tr><td rowspan="6"><a id="p100451"></a>72</td><td><a id="p100452"></a>0<br>(контрольная)</td><td><a id="p100453"></a>20</td><td><a id="p100454"></a>20</td><td><a id="p100455"></a>20</td><td><a id="p100456"></a>20</td><td><a id="p100457"></a>0</td></tr>
<tr><td><a id="p100458"></a>1,0</td><td><a id="p100459"></a>20</td><td><a id="p100460"></a>20</td><td><a id="p100461"></a>20</td><td><a id="p100462"></a>20</td><td><a id="p100463"></a>0</td></tr>
<tr><td><a id="p100464"></a>2,0</td><td><a id="p100465"></a>20</td><td><a id="p100466"></a>20</td><td><a id="p100467"></a>20</td><td><a id="p100468"></a>20</td><td><a id="p100469"></a>0</td></tr>
<tr><td><a id="p100470"></a>5,0</td><td><a id="p100471"></a>16</td><td><a id="p100472"></a>17</td><td><a id="p100473"></a>15</td><td><a id="p100474"></a>16</td><td><a id="p100475"></a>20</td></tr>
<tr><td><a id="p100476"></a>7,5</td><td><a id="p100477"></a>9</td><td><a id="p100478"></a>9</td><td><a id="p100479"></a>9</td><td><a id="p100480"></a>9</td><td><a id="p100481"></a>55</td></tr>
<tr><td><a id="p100482"></a>10,0</td><td><a id="p100483"></a>2</td><td><a id="p100484"></a>3</td><td><a id="p100485"></a>1</td><td><a id="p100486"></a>2</td><td><a id="p100487"></a>90</td></tr>
</table>


<div align="center">

<a id="p100488"></a>По результатам тестирования, приведенным в таблице A.1, гибель 50% тест-организмов не зарегистрирована. В этом случае для обработки результатов тестирования применяют пробит-анализ аналогично [A.4](#p100757).<br>
<a id="p100489"></a>Получают значение 72 ч $\text{ЛК}_{50}$ для указанного модельного токсиканта, равное 7,24 мг/дм3, которое входит в диапазон концентраций, указанный в [4.3.3.4](#p100190) настоящего стандарта. Следовательно, использованные тест-организмы пригодны для тестирования.<br>
<a id="p100490"></a>A.2&. Примеры определения средней летальной концентрации вещества при тестировании по &[методу А](#p100090)<br>
<a id="p100491"></a>A.2.1. Пример проведения предварительного тестирования по [4.4.1](#p100261) настоящего стандарта для выбора диапазона концентраций вещества, в пределах которого необходимо провести окончательное тестирование, приведен в таблице A.2.

<a id="p100492"></a>Таблица A.2

</div>



<table>
<colgroup><col width="14%"><col width="21%"><col width="11%"><col width="11%"><col width="24%"><col width="18%"></colgroup>
<tr><td rowspan="2"><a id="p100493"></a>Продолжительность тестирования, ч</td><td rowspan="2"><a id="p100494"></a>Массовая концентрация вещества, мг/дм3</td><td colspan="2"><a id="p100495"></a>Количество выживших тест-организмов в чашках Петри, шт.</td><td rowspan="2"><a id="p100496"></a>Среднеарифметическое значение количества выживших тест-организмов, шт.</td><td rowspan="2"><a id="p100497"></a>Процент гибели тест-организмов, %</td></tr>
<tr><td><a id="p100498"></a>N 1</td><td><a id="p100499"></a>N 2</td></tr>
<tr><td rowspan="6"><a id="p100500"></a>72</td><td><a id="p100501"></a>0<br>(контрольная проба)</td><td><a id="p100502"></a>20</td><td><a id="p100503"></a>20</td><td><a id="p100504"></a>20</td><td><a id="p100505"></a>0</td></tr>
<tr><td><a id="p100506"></a>0,1</td><td><a id="p100507"></a>20</td><td><a id="p100508"></a>20</td><td><a id="p100509"></a>20</td><td><a id="p100510"></a>0</td></tr>
<tr><td><a id="p100511"></a>1,0</td><td><a id="p100512"></a>20</td><td><a id="p100513"></a>20</td><td><a id="p100514"></a>20</td><td><a id="p100515"></a>0</td></tr>
<tr><td><a id="p100516"></a>10,0</td><td><a id="p100517"></a>11</td><td><a id="p100518"></a>9</td><td><a id="p100519"></a>10</td><td><a id="p100520"></a>50</td></tr>
<tr><td><a id="p100521"></a>100,0</td><td><a id="p100522"></a>3</td><td><a id="p100523"></a>3</td><td><a id="p100524"></a>3</td><td><a id="p100525"></a>85</td></tr>
<tr><td><a id="p100526"></a>1000,0</td><td><a id="p100527"></a>0</td><td><a id="p100528"></a>0</td><td><a id="p100529"></a>0</td><td><a id="p100530"></a>100</td></tr>
</table>


<div align="center">

<a id="p100531"></a>Из данных таблицы A.2 следует, что диапазон концентраций вещества, в пределах которого необходимо проводить окончательное тестирование, составляет от 1,0 до 100 мг/дм3.<br>
<a id="p100532"></a>A.2.2 Пример проведения окончательного тестирования по [4.4.2](#p100267) настоящего стандарта приведен в таблице A.3.

<a id="p100533"></a>Таблица A.3

</div>



<table>
<colgroup><col width="13%"><col width="21%"><col width="10%"><col width="10%"><col width="10%"><col width="21%"><col width="15%"></colgroup>
<tr><td rowspan="2"><a id="p100534"></a>Продолжительность тестирования, ч</td><td rowspan="2"><a id="p100535"></a>Массовая концентрация вещества, мг/дм3</td><td colspan="3"><a id="p100536"></a>Количество выживших тест-организмов в чашках Петри, шт.</td><td rowspan="2"><a id="p100537"></a>Среднеарифметическое значение количества выживших тест-организмов, шт.</td><td rowspan="2"><a id="p100538"></a>Процент гибели тест-организмов, %</td></tr>
<tr><td><a id="p100539"></a>N 1</td><td><a id="p100540"></a>N 2</td><td><a id="p100541"></a>N 3</td></tr>
<tr><td rowspan="6"><a id="p100542"></a>72</td><td><a id="p100543"></a>0<br>(контрольная проба)</td><td><a id="p100544"></a>20</td><td><a id="p100545"></a>20</td><td><a id="p100546"></a>20</td><td><a id="p100547"></a>20</td><td><a id="p100548"></a>0</td></tr>
<tr><td><a id="p100549"></a>1,0</td><td><a id="p100550"></a>20</td><td><a id="p100551"></a>20</td><td><a id="p100552"></a>20</td><td><a id="p100553"></a>20</td><td><a id="p100554"></a>0</td></tr>
<tr><td><a id="p100555"></a>2,5</td><td><a id="p100556"></a>17</td><td><a id="p100557"></a>19</td><td><a id="p100558"></a>18</td><td><a id="p100559"></a>18</td><td><a id="p100560"></a>10</td></tr>
<tr><td><a id="p100561"></a>5,0</td><td><a id="p100562"></a>16</td><td><a id="p100563"></a>14</td><td><a id="p100564"></a>15</td><td><a id="p100565"></a>15</td><td><a id="p100566"></a>25</td></tr>
<tr><td><a id="p100567"></a>10,0</td><td><a id="p100568"></a>11</td><td><a id="p100569"></a>10</td><td><a id="p100570"></a>9</td><td><a id="p100571"></a>10</td><td><a id="p100572"></a>50</td></tr>
<tr><td><a id="p100573"></a>100,0</td><td><a id="p100574"></a>4</td><td><a id="p100575"></a>3</td><td><a id="p100576"></a>2</td><td><a id="p100577"></a>3</td><td><a id="p100578"></a>85</td></tr>
</table>


<div align="center">

<a id="p100579"></a>Из данных таблицы A.3 видно, что 50%-ной гибели тест-организмов соответствует массовая концентрация вещества, равная 10 мг/дм3 при тестировании в течение 72 ч (72 ч $\text{ЛК}_{50}$ ).<br>
<a id="p100580"></a>Если значение массовой концентрации вещества, которое соответствует 50%-ной гибели тест-организмов при тестировании в течение 72 ч, не зарегистрировано (см. таблицу A.4), то его определяют, используя для обработки результатов тестирования пробит-анализ аналогично [A.4](#p100757).

<a id="p100581"></a>Таблица A.4

</div>



<table>
<colgroup><col width="14%"><col width="20%"><col width="10%"><col width="10%"><col width="10%"><col width="20%"><col width="17%"></colgroup>
<tr><td rowspan="2"><a id="p100582"></a>Продолжительность тестирования, ч</td><td rowspan="2"><a id="p100583"></a>Массовая концентрация вещества, мг/дм3</td><td colspan="3"><a id="p100584"></a>Количество выживших тест-организмов в чашках Петри, шт.</td><td rowspan="2"><a id="p100585"></a>Среднеарифметическое значение количества выживших тест-организмов, шт.</td><td rowspan="2"><a id="p100586"></a>Процент гибели тест-организмов, %</td></tr>
<tr><td><a id="p100587"></a>N 1</td><td><a id="p100588"></a>N 2</td><td><a id="p100589"></a>N 3</td></tr>
<tr><td rowspan="6"><a id="p100590"></a>72</td><td><a id="p100591"></a>0<br>(контрольная проба)</td><td><a id="p100592"></a>20</td><td><a id="p100593"></a>20</td><td><a id="p100594"></a>20</td><td><a id="p100595"></a>20</td><td><a id="p100596"></a>0</td></tr>
<tr><td><a id="p100597"></a>1,0</td><td><a id="p100598"></a>20</td><td><a id="p100599"></a>20</td><td><a id="p100600"></a>20</td><td><a id="p100601"></a>20</td><td><a id="p100602"></a>0</td></tr>
<tr><td><a id="p100603"></a>2,5</td><td><a id="p100604"></a>17</td><td><a id="p100605"></a>16</td><td><a id="p100606"></a>15</td><td><a id="p100607"></a>16</td><td><a id="p100608"></a>20</td></tr>
<tr><td><a id="p100609"></a>5,0</td><td><a id="p100610"></a>12</td><td><a id="p100611"></a>13</td><td><a id="p100612"></a>14</td><td><a id="p100613"></a>13</td><td><a id="p100614"></a>35</td></tr>
<tr><td><a id="p100615"></a>10,0</td><td><a id="p100616"></a>9</td><td><a id="p100617"></a>8</td><td><a id="p100618"></a>7</td><td><a id="p100619"></a>8</td><td><a id="p100620"></a>60</td></tr>
<tr><td><a id="p100621"></a>100,0</td><td><a id="p100622"></a>1</td><td><a id="p100623"></a>0</td><td><a id="p100624"></a>2</td><td><a id="p100625"></a>1</td><td><a id="p100626"></a>95&amp;</td></tr>
</table>


<div align="center">

<a id="p100627"></a>A.3. Примеры определения средней летальной концентрации вещества при тестировании &по [методу Б](#p100356)&<br>
<a id="p100628"></a>A.3.1. Пример проведения предварительного тестирования по [5.4](#p100424) для выбора диапазона концентраций &вещества&, в пределах которого необходимо провести окончательное тестирование, приведен в таблице A.5.

<a id="p100629"></a>&Таблица A.5&

</div>



<table>
<colgroup><col width="33%"><col width="33%"><col width="33%"></colgroup>
<tr><td rowspan="2"><a id="p100630"></a>&amp;Массовая&amp; концентрация &amp;вещества&amp;, мг/дм3</td><td colspan="2"><a id="p100631"></a>Количество выживших тест-организмов, &amp;шт., после тестирования в течение&amp;</td></tr>
<tr><td><a id="p100632"></a>24 ч</td><td><a id="p100633"></a>48 ч</td></tr>
<tr><td><a id="p100634"></a>0<br>(контрольная &amp;проба&amp;)</td><td><a id="p100635"></a>5</td><td><a id="p100636"></a>5</td></tr>
<tr><td><a id="p100637"></a>0,10</td><td><a id="p100638"></a>5</td><td><a id="p100639"></a>5</td></tr>
<tr><td><a id="p100640"></a>0,32</td><td><a id="p100641"></a>5</td><td><a id="p100642"></a>5</td></tr>
<tr><td><a id="p100643"></a>1,0</td><td><a id="p100644"></a>5</td><td><a id="p100645"></a>5</td></tr>
<tr><td><a id="p100646"></a>3,2</td><td><a id="p100647"></a>5</td><td><a id="p100648"></a>3</td></tr>
<tr><td><a id="p100649"></a>10</td><td><a id="p100650"></a>0</td><td><a id="p100651"></a>0</td></tr>
<tr><td><a id="p100652"></a>32</td><td><a id="p100653"></a>0</td><td><a id="p100654"></a>0</td></tr>
<tr><td><a id="p100655"></a>100</td><td><a id="p100656"></a>0</td><td><a id="p100657"></a>0</td></tr>
</table>


<div align="center">

<a id="p100658"></a>&Из данных таблицы A.5& следует, что диапазон концентраций &вещества&, в пределах которого необходимо провести окончательное тестирование, составляет от 1,0 до 10 мг/дм3.<br>
<a id="p100659"></a>A.3.2. Пример проведения окончательного тестирования приведен в таблице A.6.

<a id="p100660"></a>&Таблица A.6&

</div>



<table>
<colgroup><col width="12%"><col width="20%"><col width="10%"><col width="10%"><col width="10%"><col width="11%"><col width="14%"><col width="13%"></colgroup>
<tr><td rowspan="2"><a id="p100661"></a>Продолжительность &amp;тестирования&amp;, ч</td><td rowspan="2"><a id="p100662"></a>&amp;Массовая&amp; концентрация &amp;вещества&amp;, мг/дм3</td><td colspan="4"><a id="p100663"></a>&amp;Количество выживших тест-организмов в контейнерах, шт.&amp;</td><td rowspan="2"><a id="p100664"></a>Общее количество выживших тест-организмов, &amp;шт.&amp;</td><td rowspan="2"><a id="p100665"></a>&amp;Процент гибели тест-организмов, %&amp;</td></tr>
<tr><td><a id="p100666"></a>&amp;N&amp; 1</td><td><a id="p100667"></a>&amp;N&amp; 2</td><td><a id="p100668"></a>&amp;N&amp; 3</td><td><a id="p100669"></a>&amp;N&amp; 4</td></tr>
<tr><td rowspan="6"><a id="p100670"></a>24</td><td><a id="p100671"></a>0<br>(контрольная &amp;проба&amp;)</td><td><a id="p100672"></a>5</td><td><a id="p100673"></a>5</td><td><a id="p100674"></a>5</td><td><a id="p100675"></a>5</td><td><a id="p100676"></a>20</td><td><a id="p100677"></a>0</td></tr>
<tr><td><a id="p100678"></a>1,0</td><td><a id="p100679"></a>5</td><td><a id="p100680"></a>5</td><td><a id="p100681"></a>5</td><td><a id="p100682"></a>5</td><td><a id="p100683"></a>20</td><td><a id="p100684"></a>0</td></tr>
<tr><td><a id="p100685"></a>1,8</td><td><a id="p100686"></a>5</td><td><a id="p100687"></a>5</td><td><a id="p100688"></a>5</td><td><a id="p100689"></a>5</td><td><a id="p100690"></a>20</td><td><a id="p100691"></a>0</td></tr>
<tr><td><a id="p100692"></a>3,2</td><td><a id="p100693"></a>4</td><td><a id="p100694"></a>5</td><td><a id="p100695"></a>4</td><td><a id="p100696"></a>5</td><td><a id="p100697"></a>18</td><td><a id="p100698"></a>10</td></tr>
<tr><td><a id="p100699"></a>5,6</td><td><a id="p100700"></a>2</td><td><a id="p100701"></a>3</td><td><a id="p100702"></a>1</td><td><a id="p100703"></a>2</td><td><a id="p100704"></a>8</td><td><a id="p100705"></a>60</td></tr>
<tr><td><a id="p100706"></a>10</td><td><a id="p100707"></a>0</td><td><a id="p100708"></a>1</td><td><a id="p100709"></a>0</td><td><a id="p100710"></a>1</td><td><a id="p100711"></a>2</td><td><a id="p100712"></a>90</td></tr>
<tr><td rowspan="6"><a id="p100713"></a>48</td><td><a id="p100714"></a>0<br>(контрольная &amp;проба&amp;)</td><td><a id="p100715"></a>5</td><td><a id="p100716"></a>5</td><td><a id="p100717"></a>5</td><td><a id="p100718"></a>5</td><td><a id="p100719"></a>20</td><td><a id="p100720"></a>0</td></tr>
<tr><td><a id="p100721"></a>1,0</td><td><a id="p100722"></a>5</td><td><a id="p100723"></a>5</td><td><a id="p100724"></a>5</td><td><a id="p100725"></a>5</td><td><a id="p100726"></a>20</td><td><a id="p100727"></a>0</td></tr>
<tr><td><a id="p100728"></a>1,8</td><td><a id="p100729"></a>5</td><td><a id="p100730"></a>4</td><td><a id="p100731"></a>5</td><td><a id="p100732"></a>3</td><td><a id="p100733"></a>17</td><td><a id="p100734"></a>15</td></tr>
<tr><td><a id="p100735"></a>3,2</td><td><a id="p100736"></a>3</td><td><a id="p100737"></a>1</td><td><a id="p100738"></a>1</td><td><a id="p100739"></a>2</td><td><a id="p100740"></a>7</td><td><a id="p100741"></a>65</td></tr>
<tr><td><a id="p100742"></a>5,6</td><td><a id="p100743"></a>0</td><td><a id="p100744"></a>0</td><td><a id="p100745"></a>1</td><td><a id="p100746"></a>1</td><td><a id="p100747"></a>2</td><td><a id="p100748"></a>90</td></tr>
<tr><td><a id="p100749"></a>10</td><td><a id="p100750"></a>0</td><td><a id="p100751"></a>0</td><td><a id="p100752"></a>0</td><td><a id="p100753"></a>0</td><td><a id="p100754"></a>0</td><td><a id="p100755"></a>100</td></tr>
</table>


<div align="center">

<a id="p100756"></a>&A.3.3&. По результатам тестирования в течение 24 и 48 ч, приведенным в [таблице A.6](#p100660), 50%-ная гибель тест-организмов не зарегистрирована. В этом случае для обработки результатов тестирования применяют пробит-анализ аналогично [A.4](#p100757) и получают следующие значения: средняя летальная концентрация пробы вещества при тестировании в течение 24 ч (24 ч $\text{ЛК}_{50}$ ) равна 5,4 мг/дм3; средняя летальная концентрация пробы вещества при тестировании в течение 48 ч (48 ч $\text{ЛК}_{50}$ ) равна 2,9 мг/дм3.<br>
<a id="p100757"></a>&A.4. Примеры обработки результатов тестирования с использованием пробит-анализа<br>
<a id="p100758"></a>A.4.1. Если в результате тестирования не зарегистрировано конкретное значение средней летальной кратности разбавления (концентрации) пробы, то результаты тестирования обрабатывают с применением метода математической статистики - пробит-анализа. Значения пробитов, соответствующие гибели тест-организмов в диапазоне от 0% до 99%, приведены в таблице A.7.

<a id="p100759"></a>Таблица A.7

</div>



| <a id="p100760"></a>Процент гибели тест-организмов, % | <a id="p100761"></a>0 | <a id="p100762"></a>1 | <a id="p100763"></a>2 | <a id="p100764"></a>3 | <a id="p100765"></a>4 | <a id="p100766"></a>5 | <a id="p100767"></a>6 | <a id="p100768"></a>1 | <a id="p100769"></a>8 | <a id="p100770"></a>9 |
| --- | --- | --- | --- | --- | --- | --- | --- | --- | --- | --- |
| <a id="p100771"></a>0 | <a id="p100772"></a>- | <a id="p100773"></a>2,67 | <a id="p100774"></a>2,95 | <a id="p100775"></a>3,12 | <a id="p100776"></a>3,25 | <a id="p100777"></a>3,35 | <a id="p100778"></a>3,45 | <a id="p100779"></a>3,52 | <a id="p100780"></a>3,59 | <a id="p100781"></a>3,66 |
| <a id="p100782"></a>10 | <a id="p100783"></a>3,72 | <a id="p100784"></a>3,77 | <a id="p100785"></a>3,82 | <a id="p100786"></a>3,83 | <a id="p100787"></a>3,92 | <a id="p100788"></a>3,96 | <a id="p100789"></a>4,01 | <a id="p100790"></a>4,05 | <a id="p100791"></a>4,08 | <a id="p100792"></a>4,12 |
| <a id="p100793"></a>20 | <a id="p100794"></a>4,16 | <a id="p100795"></a>4,19 | <a id="p100796"></a>4,23 | <a id="p100797"></a>4,26 | <a id="p100798"></a>4,29 | <a id="p100799"></a>4,33 | <a id="p100800"></a>4,36 | <a id="p100801"></a>4,39 | <a id="p100802"></a>4,42 | <a id="p100803"></a>4,45 |
| <a id="p100804"></a>30 | <a id="p100805"></a>4,48 | <a id="p100806"></a>4,50 | <a id="p100807"></a>4,53 | <a id="p100808"></a>4,56 | <a id="p100809"></a>4,59 | <a id="p100810"></a>4,61 | <a id="p100811"></a>4,64 | <a id="p100812"></a>4,67 | <a id="p100813"></a>4,69 | <a id="p100814"></a>4,72 |
| <a id="p100815"></a>40 | <a id="p100816"></a>4,75 | <a id="p100817"></a>4,77 | <a id="p100818"></a>4,80 | <a id="p100819"></a>4,82 | <a id="p100820"></a>4,85 | <a id="p100821"></a>4,87 | <a id="p100822"></a>4,90 | <a id="p100823"></a>4,92 | <a id="p100824"></a>4,95 | <a id="p100825"></a>4,97 |
| <a id="p100826"></a>50 | <a id="p100827"></a>5,00 | <a id="p100828"></a>5,03 | <a id="p100829"></a>5,05 | <a id="p100830"></a>5,08 | <a id="p100831"></a>5,10 | <a id="p100832"></a>5,13 | <a id="p100833"></a>5,15 | <a id="p100834"></a>5,18 | <a id="p100835"></a>5,20 | <a id="p100836"></a>5,23 |
| <a id="p100837"></a>60 | <a id="p100838"></a>5,25 | <a id="p100839"></a>5,28 | <a id="p100840"></a>5,31 | <a id="p100841"></a>5,33 | <a id="p100842"></a>5,36 | <a id="p100843"></a>5,39 | <a id="p100844"></a>5,4 | <a id="p100845"></a>5,44 | <a id="p100846"></a>5,47 | <a id="p100847"></a>5,50 |
| <a id="p100848"></a>70 | <a id="p100849"></a>5,52 | <a id="p100850"></a>5,55 | <a id="p100851"></a>5,58 | <a id="p100852"></a>5,61 | <a id="p100853"></a>5,64 | <a id="p100854"></a>5,67 | <a id="p100855"></a>5,71 | <a id="p100856"></a>5,74 | <a id="p100857"></a>5,77 | <a id="p100858"></a>5,81 |
| <a id="p100859"></a>80 | <a id="p100860"></a>5,84 | <a id="p100861"></a>5,88 | <a id="p100862"></a>5,92 | <a id="p100863"></a>5,95 | <a id="p100864"></a>5,99 | <a id="p100865"></a>6,04 | <a id="p100866"></a>6,08 | <a id="p100867"></a>6,13 | <a id="p100868"></a>6,18 | <a id="p100869"></a>6,23 |
| <a id="p100870"></a>90 | <a id="p100871"></a>6,28 | <a id="p100872"></a>6,34 | <a id="p100873"></a>6,41 | <a id="p100874"></a>6,48 | <a id="p100875"></a>6,55 | <a id="p100876"></a>6,64 | <a id="p100877"></a>6,75 | <a id="p100878"></a>6,88 | <a id="p100879"></a>7,05 | <a id="p100880"></a>7,33 |


<div align="center">

<a id="p100881"></a>A.4.2. Результаты тестирования по определению средней летальной кратности разбавления пробы на примере сточной воды приведены в таблице A.8.

<a id="p100882"></a>Таблица A.8

</div>



<table>
<colgroup><col width="25%"><col width="25%"><col width="25%"><col width="25%"></colgroup>
<tr><td><a id="p100883"></a>Кратность разбавления анализируемой пробы сточной воды C, %</td><td><a id="p100884"></a>Десятичный логарифм кратности разбавления<br>(lg C)</td><td><a id="p100885"></a>Процент гибели тест-организмов, %</td><td><a id="p100886"></a>Значения пробитов по <a href="#p100759">таблице A.7</a></td></tr>
<tr><td><a id="p100887"></a>3,12</td><td><a id="p100888"></a>0,494</td><td><a id="p100889"></a>0</td><td><a id="p100890"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p100891"></a>6,25</td><td><a id="p100892"></a>0,796</td><td><a id="p100893"></a>0</td><td><a id="p100894"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p100895"></a>12,50</td><td><a id="p100896"></a>1,097</td><td><a id="p100897"></a>10</td><td><a id="p100898"></a>3,72</td></tr>
<tr><td><a id="p100899"></a>25,00</td><td><a id="p100900"></a>1,398</td><td><a id="p100901"></a>40</td><td><a id="p100902"></a>4,75</td></tr>
<tr><td><a id="p100903"></a>50,00</td><td><a id="p100904"></a>1,699</td><td><a id="p100905"></a>80</td><td><a id="p100906"></a>5,84</td></tr>
<tr><td><a id="p100907"></a>100,00</td><td><a id="p100908"></a>2,000</td><td><a id="p100909"></a>95</td><td><a id="p100910"></a>6,64</td></tr>
<tr><td colspan="4"><a id="p100911"></a>Примечание. Данные, приведенные в таблице A.8, получены в результате тестирования анализируемой пробы сточной воды по <a href="#p100090">методу А</a> в течение 72 ч.</td></tr>
</table>


<div align="center">

<a id="p100912"></a>A.4.3. По значениям пробитов и десятичных логарифмов кратности разбавлений (см. таблицу A.8) строят график линейной зависимости, откладывая по оси абсцисс значения логарифмов кратности разбавлений анализируемой пробы, по оси ординат - значения пробитов.&<br>
<a id="p100913"></a>*Пример* построения графика линейной зависимости значений пробитов от &десятичного& логарифма кратности разбавлений (lg C) &на примере сточной воды& приведен на &рисунке A.1&.

</div>


<a id="p100914"></a> ![3. Отбор проб](https://i.bukva.ai/LS3EZrlz/img_0.png) 

<div align="center">

<a id="p100915"></a>Рисунок A.1. График линейной зависимости<br>
значений пробитов от десятичного логарифма кратности<br>
разбавлений анализируемой &пробы& сточной воды

<a id="p100916"></a>&A.4.4. На графике (см. рисунок A.1) на оси ординат из точки, соответствующей значению пробита пять, что определяет 50%-ную гибель тест-организмов, проводят прямую параллельно оси абсцисс до пересечения с графиком. Из точки пересечения прямой с графиком (M) опускают перпендикуляр на ось абсцисс и получают значение lg C, равное 1,46, соответствующее 72 ч $\text{ЛКР}_{50}$ .

</div>

<a id="p100917"></a>Используя таблицу антилогарифмов, определяют значение кратности разбавления 72 ч $\text{ЛКР}_{50}$ , соответствующее 50%-ной гибели тест-организмов за 72 ч, которое равно 28,84%.&





<a id="p100918"></a>Приложение B
(обязательное)

<div align="center">

<a id="p100919"></a>**МЕТОДЫ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ТЕСТ-ОРГАНИЗМОВ**

<a id="p100920"></a>B.1. Условия культивирования тест-организмов<br>
<a id="p100921"></a>&B.1.1. Исходный материал для культивирования тест-организмов получают в лабораториях, занимающихся тестированием, имеющих культуру требуемой видовой принадлежности. Чувствительность культур к модельному токсиканту должна соответствовать установленному в настоящем стандарте диапазону $\text{ЛК}_{50}$ за 48 ч [(метод Б)](#p100356) или $\text{ЛК}_{50}$ за 72 ч [(метод А)](#p100090).&<br>
<a id="p100922"></a>Тест-организмы культивируют и содержат в климатостате, в инкубаторе, на водяной бане или в помещении с регулируемой температурой (20 +/- 2) °C.<br>
<a id="p100923"></a>При этом обеспечивают естественное или &искусственное& освещение так, чтобы соблюдались следующие периоды выдержки: 16 ч - воздействие света при освещенности 500 - 1000 лк, 8 ч - без воздействия света (в темноте).

</div>

<a id="p100924"></a>&Nitocra spinipes& Boeck и &Tisbe battagliai& Volkmann-Rocco необходимо защищать от воздействия прямого света. &Acartia tonsa& Dana может чувствовать себя лучше при освещенности среды с культурой тест-организмов до 2200 лк.
<a id="p100925"></a>Тест-организмы и морская вода, в которой происходит их культивирование, должны содержаться в емкостях только из стекла или полимерного материала, изготовленного без использования пластификатора.
<a id="p100926"></a>&Примечания. 1&. Морские копеподы &Acartia tonsa& Dana, &Tisbe battagliai& Volkmann-Rocco и &Nitocra spinipes& Boeck имеют широкое географическое распространение, обладают коротким жизненным циклом и требуют минимум пространства и оборудования для культивирования и проведения тестирования. Организмы могут культивироваться постоянно в лабораторных условиях.
2. <a id="p100927"></a>Развитие копепод (веслоногих раков) проходит через шесть науплиальных стадий и пять стадий копеподитов, после чего наступает взрослая стадия. При температуре 20 °C развитие только что вылупившихся науплиев до взрослой стадии проходит за 10 - 14 сут. Науплии выпускаются непосредственно из яйцевого мешка женской особью &Tisbe battagliai& Volkmann-Rocco и &Nitocra spinipes& Boeck в течение 3 - 4 сут, &Acartia tonsa& Dana выпускает яйца в течение 2 - 3 сут.
<a id="p100928"></a>&3&. Приведенная в данном Приложении информация предназначена для использования только в качестве общего руководства.

<a id="p100929"></a>B.1.2. Вода для культивирования тест-организмов &по [4.2](#p100098) и [5.2](#p100361) (далее - морская вода) в зависимости от метода тестирования&; при необходимости корректируют &минерализацию& (соленость) воды в соответствии с условиями тестирования.

<div align="right">

<a id="p100930"></a>B.1.3. Емкости, применяемые для культивирования тест-организмов, должны быть оснащены свободными или перфорированными крышками, чтобы уменьшить испарение, но обеспечить газообмен. Потеря морской воды из-за испарения должна возмещаться путем добавления дистиллированной или деионизированной воды.<br>
<a id="p100931"></a>&B.1.4. Емкости тщательно моют при каждой замене морской воды.

</div>

<a id="p100932"></a>B.1.5. В качестве корма используют культуру морских одноклеточных водорослей (десятисуточную).

<div align="center">

<a id="p100933"></a>B.2. Условия подготовки к тестированию Artemia salina& L.

</div>

<a id="p100934"></a>&B.2.1. Оборудование и процедура получения науплиев
<a id="p100935"></a>Для тестирования используют науплиев Artemia salina& L. &в возрасте одних суток (синхронизированная культура), которые получают в лаборатории из яиц.
<a id="p100936"></a>Яйца хранят в холодильнике.
<a id="p100937"></a>Каждую новую партию яиц проверяют на выклев. Используют яйца при выклеве не ниже 80%, что определяет в дальнейшем физиологическую чувствительность тест-организмов односуточных науплиев Artemia salina& L.
<a id="p100938"></a>&Тест-организмы для тестирования получают следующим способом:
- <a id="p100939"></a>в стакан вместимостью 500 см3 помещают 0,1 г сухих яиц Artemia salina& L., &заливают водопроводной питьевой водой и выдерживают 30 мин.
<a id="p100940"></a>*Примечание.* Водопроводную питьевую воду предварительно отстаивают и аэрируют в течение одних суток;

- <a id="p100941"></a>через 30 мин, не взбалтывая содержимого стакана, сливают слой воды над яйцами, которые осели на дно стакана, удаляя таким образом всплывшие погибшие яйца и пустые оболочки. Процедуру повторяют не менее трех раз (заполняют стакан водой и сливают воду);
- <a id="p100942"></a>отмытые яйца от пустых оболочек заливают морской водой (см. [B.1.2](#p100929)) необходимой минерализации (солености), значением pH 8,0 - 8,3 и содержанием кислорода не менее $7\text{мгО}_{2}/\text{дм}^{3}$ и при слабой аэрации выдерживают до выклева.
<a id="p100943"></a>Выклев науплиев из яиц происходит через:
- <a id="p100944"></a>48 ч при температуре 20 °C;
- <a id="p100945"></a>24 ч при температуре 25 °C.
<a id="p100946"></a>B.2.2. Регулирование плотности популяции&
<a id="p100947"></a>Как правило, нет необходимости регулировать плотность популяции тест-организмов при подготовке науплиев к тестированию.
<a id="p100948"></a>&Первых выклюнувшихся науплиев тщательно отбирают из стакана пипеткой Пастера, концентрируя их возле одной из стенок направленным источником света (новорожденные науплии имеют положительный фототаксис).
<a id="p100949"></a>В течение одного часа в стакане накапливаются новые науплии, их также переносят пипеткой в отдельный сосуд с морской водой и используют для тестирования.
<a id="p100950"></a>Предварительную адаптацию науплиев Artemia salina& L. &к воде нужной минерализации (солености) не проводят, так как рачок эвригалинный и может переносить минерализацию (соленость) в широком диапазоне.
<a id="p100951"></a>Вода для замачивания яиц Artemia salina& L. &должна быть той же минерализации (солености), что и анализируемая проба.
<a id="p100952"></a>B.2.3. Кормление
<a id="p100953"></a>Науплии Artemia salina& L. &в течение 3 - 4 сут после выклева из яиц не нуждаются в кормлении в связи с эндогенным питанием, поэтому при тестировании их не кормят.&
<a id="p100954"></a>B.3. Условия культивирования &Acartia tonsa Dana&
<a id="p100955"></a>B.3.1. Оборудование и процедура культивирования
<a id="p100956"></a>Базовые культуры &Acartia tonsa& Dana &культивируют& в емкости с объемом &морской& воды (см. [5.2](#p100361)), равным 10 - 12 дм3. Аэрацию обеспечивают централизованно через отверстие возле дна емкости диаметром около 1,5 мм, со скоростью приблизительно один пузырек воздуха в секунду. Это обеспечивает мягкую циркуляцию &морской& воды, помогая поддерживать водоросли, являющиеся пищей, во взвешенном состоянии; при этом удобно использовать сферические емкости или емкости с плоским дном. Использование нескольких емкостей позволяет разделять культуры по возрастам.
<a id="p100957"></a>Морскую воду обновляют, по меньшей мере, один раз в неделю. Использованную &морскую& воду пропускают через несколько нейлоновых сит с ячейками различного размера, в зависимости оттого, организмы какого возраста необходимо сохранить или отделить, в порядке, приведенном в таблице B.1.

<a id="p100958"></a>&Таблица B.1&


| <a id="p100959"></a>Размер ячейки &сита&, мкм | <a id="p100960"></a>&Характеристика стадии удерживаемого организма& |
| --- | --- |
| <a id="p100961"></a>60 | <a id="p100962"></a>Удерживает все стадии |
| <a id="p100963"></a>100 | <a id="p100964"></a>Удерживает все стадии, кроме яиц и науплиев в возрасте 2 сут |
| <a id="p100965"></a>140 | <a id="p100966"></a>Удерживает копеподитов и взрослых особей |
| <a id="p100967"></a>180 | <a id="p100968"></a>Удерживает только взрослых особей |


<a id="p100969"></a>Тест-организмы, которые необходимо сохранить для возобновления данной культуры, переносят из сита в свежую &морскую& воду (см. [B.1.2](#p100929)). Невылупившиеся яйца собираются на дне емкости и их удаляют путем откачивания &морской& воды со дна емкости. Однако их трудно отделить от молодых науплиев, которые могут там находиться, так как на дне емкости собирается также осадок, включая остатки пищи, который &систематически удаляют&.
<a id="p100970"></a>Обычно новые культуры возобновляют, используя молодь или взрослых особей, отделяя их во время еженедельной замены &морской& воды, с применением сит размером ячеек 180 и 60 мкм. Допускается проводить отделение молоди с меньшими интервалами времени, что позволяет получить более близкие возрастные группы, в том случае, если, например, особей выращивают для использования при тестировании. Другим способом отделения взрослых особей от молоди является перенос взрослых особей в специальную клетку, которая позволяет яйцам падать сквозь ячейки сита в контейнер с водой.
<a id="p100971"></a>B.3.2. Регулирование плотности популяции

<div align="right">

<a id="p100972"></a>Как правило, нет необходимости регулировать плотность популяции, которая была начата особями в возрасте менее семи суток, до конца первой недели, когда плотность популяции обычно не превышает 25 - 50 особей на 1 дм3. Когда копеподы достигают взрослой стадии, плотность, при необходимости, должна быть снижена до 25 особей на 1 дм3. Рекомендуется избавляться от взрослых особей в возрасте 5 - 6 недель.

</div>

<div align="center">

<a id="p100973"></a>B.3.3. Кормление<br>
<a id="p100974"></a>Тест-организмы &Acartia tonsa Dana& питаются двумя видами одноклеточных водорослей, выращиваемых в лабораторных условиях, &Isochrysis galbana и Rhodomonas reticulata&. Эти водоросли выращивают с использованием асептической технологии, чтобы исключить заражение культуры бактериями, водорослями и простейшими организмами. Для выращивания водорослей &Isochrysis galbana& и &Rhodomonas reticulata& используют следующие питательные растворы:<br>
<a id="p100975"></a>a) Раствор A, &состав которого приведен в таблице B.2&. Раствор A хранят в холодильнике при температуре около 4 °C &не более года&.

<a id="p100976"></a>&Таблица B.2&

</div>



| <a id="p100977"></a>&Состав раствора& | <a id="p100978"></a>&Количество компонента& |
| --- | --- |
| <a id="p100979"></a>&Азотнокислый натрий по [ГОСТ 4168](https://bukva.ai/docs/postanovlenie-gost-4168-79) $(NaNO_{3})$ | <a id="p100980"></a>100,00 г |
| <a id="p100981"></a>Натрий фосфорнокислый однозамещенный одноводный $(NaH_{2}PO_{4} \cdot H_{2}O)$ | <a id="p100982"></a>20,00 г |
| <a id="p100983"></a>Хлорид железа 6-водный по [ГОСТ 4147](https://bukva.ai/docs/gost-4147-74) $(FeCl_{3} \cdot 6H_{2}O)$ | <a id="p100984"></a>1,30 г |
| <a id="p100985"></a>Марганец (II) хлористый 4-водный по [ГОСТ 612](https://bukva.ai/docs/postanovlenie-gost-612-75) $(MnCl_{2} \cdot 4H_{2}O)$ | <a id="p100986"></a>0,36 г |
| <a id="p100987"></a>Борная кислота по [ГОСТ 9656](https://bukva.ai/docs/gost-9656-75) $(H_{3}BO_{3})$ | <a id="p100988"></a>33,60 г |
| <a id="p100989"></a>Соль динатриевая этилендиамин-N,N,N',N'-тетрауксусной кислоты 2-водная (трилон Б) по [ГОСТ 10652](https://bukva.ai/docs/gost-10652-73) | <a id="p100990"></a>45,00 г |
| <a id="p100991"></a>Раствор B (см. [таблицу B.4](#p101006)) | <a id="p100992"></a>1,00 см3 |
| <a id="p100993"></a>Дистиллированная вода по ГОСТ 6709& | <a id="p100994"></a>1 дм3 |


<a id="p100995"></a>b) Раствор B, &состав которого приведен в таблице B.3&. Раствор B хранят в холодильнике при температуре около 4 °C &не более года&.

<div align="center">

<a id="p100996"></a>&Таблица B.3&

</div>



| <a id="p100997"></a>Состав раствора | <a id="p100998"></a>&Количество компонента& |
| --- | --- |
| <a id="p100999"></a>Витамин $B_{12}$ | <a id="p101000"></a>0,02 г |
| <a id="p101001"></a>Витамин $B_{1}$ (тиамин) | <a id="p101002"></a>0,40 г |
| <a id="p101003"></a>Дистиллированная вода &по ГОСТ 6709& | <a id="p101004"></a>1 дм3 |


<a id="p101005"></a>c) Раствор C, состав которого &приведен в таблице B.4, используют& для приготовления раствора A. &Раствор C хранят в холодильнике при температуре около 4 °C не более года.&

<a id="p101006"></a>&Таблица B.4&


<table>
<colgroup><col width="77%"><col width="23%"></colgroup>
<tr><td><a id="p101007"></a>Состав раствора</td><td><a id="p101008"></a>&amp;Количество компонента&amp;</td></tr>
<tr><td><a id="p101009"></a>&amp;Цинк хлористый по <a href="https://bukva.ai/docs/postanovlenie-gost-4529-78">ГОСТ 4529</a> $(ZnCl_{2})$</td><td><a id="p101010"></a>2,1 г</td></tr>
<tr><td><a id="p101011"></a>Кобальт хлористый 6-водный по <a href="https://bukva.ai/docs/gost-4525-77">ГОСТ 4525</a> $(CoCl_{2} \cdot 6H_{2}O)$</td><td><a id="p101012"></a>2,00 г</td></tr>
<tr><td><a id="p101013"></a>Аммоний молибденовокислый 4-водный $(NH_{4})_{6}Mo_{7}O_{24} \cdot 4H_{2}O)$</td><td><a id="p101014"></a>0,90 г</td></tr>
<tr><td><a id="p101015"></a>Медь (II) сернокислая 5-водная $(CuSO_{4} \cdot 5H_{2}O)$</td><td><a id="p101016"></a>2,00 г</td></tr>
<tr><td><a id="p101017"></a>Дистиллированная вода по ГОСТ 6709&amp;</td><td><a id="p101018"></a>100 см3</td></tr>
<tr><td colspan="2"><a id="p101019"></a>Примечание. &amp;В приготовленный раствор&amp; добавляют &amp;соляную&amp; кислоту &amp;молярной концентрации&amp; 0,1 моль/дм3 до тех пор, пока раствор не станет прозрачным.</td></tr>
</table>


<div align="center">

<a id="p101020"></a>Питательную среду для выращивания водорослей готовят следующим способом:

</div>

<a id="p101021"></a>Морскую воду фильтруют через сито с ячейкой размером 1,0 мкм и обрабатывают в автоклаве в течение 15 мин при температуре 120 °C.

<div align="center">

<a id="p101022"></a>В колбу, содержащую 1 дм3 отфильтрованной и обработанной в автоклаве морской воды, добавляют 1,0 см3 раствора A и 0,05 см3 раствора B. Питательные вещества (растворы A и B) добавляют в морскую воду через стерилизующий фильтр.

</div>

<a id="p101023"></a>Культивирование водорослей проводят в стеклянных колбах вместимостью 3 дм3 при температуре (20 +/- 2) °C с аэрацией среды. Естественное освещение имитируют, используя лампы дневного света, обеспечивающие освещенность от 3000 до 10000 лк, при соблюдении &следующего режима&: 16 ч - воздействие света, 8 ч - без воздействия света (в темноте).
<a id="p101024"></a>Культивирование водорослей проводят следующим способом:
<a id="p101025"></a>В колбу с питательной средой добавляют 15 см3 суспензии водорослей из маточной культуры и выращивают водоросли в течение десяти суток. Через 10 сут, когда плотность клеток обычно достигает максимума ( $10^{7}\text{клеток}/\text{см}^{3}$ - для &Isochrysis& galbana и $5 \cdot 10^{6}\text{клеток }/\text{см}^{3}$ - для &Rhodomonas reticulata), культуры водорослей сгущают& (концентрируют) с помощью центрифуги и размешивают до состояния суспензии, разбавляя морской водой. Таким способом получают суспензию водорослей, предназначенную для корма тест-организмов, плотность которой достигает примерно $5 \cdot 10^{7}\text{клеток}/\text{см}^{3}$ для &Isochrysis galbana и& $3 \cdot 10^{7}\text{клеток}/\text{см}^{3}$ для &Rhodomonas reticulata&. Суспензии водорослей хранят в холодильнике &при температуре от 0 °C до 4 °C& в течение 7 сут.

<div align="right">

<a id="p101026"></a>В емкости для культивирования тест-организмов вносят корм: по 0,25 см3 суспензии каждого вида водорослей на 1 дм3 морской воды, что обеспечивает плотность клеток $2 \cdot 10^{7}\text{клеток}/\text{дм}^{3}$ ( $1,25 \cdot 10^{7}\text{клеток}/\text{дм}^{3}$ для &Isochrysis& galbana и $0,75 \cdot 10^{7}\text{клеток}/\text{дм}^{3}$ для &Rhodomonas reticulata&). Тест-организмы кормят каждый день в одинаковом объеме при условии, что пища, заданная в предыдущий день, съедена полностью.

</div>

<a id="p101027"></a>Существует альтернативный режим, когда корм из смешанных водорослей применяют только на науплиальных стадиях, на более поздних стадиях тест-организмы кормят только водорослями &Rhodomonas reticulata&.

<div align="center">

<a id="p101028"></a>B.4. Условия культивирования &Tisbe battagliai& Volkmann-Rocco<br>
<a id="p101029"></a>B.4.1. Оборудование и процедура культивирования

</div>

<a id="p101030"></a>&Tisbe battagliai& Volkmann-Rocco культивируют в емкостях, содержащих от 2 до 5 дм3 морской воды (см. [5.2](#p100361)), без аэрации. Используют, как минимум, четыре емкости, чтобы можно было разделить тест-организмы по возрасту и обеспечить постоянное возобновление тест-организмов для тестирования.

<div align="center">

<a id="p101031"></a>Морскую воду, в которой выращивают тест-организмы, обновляют один раз в неделю: использованную морскую воду с тест-организмами пропускают через несколько нейлоновых сит с ячейками различного размера в зависимости от того, какого возраста тест-организмы должны быть отделены, в порядке, приведенном в таблице B.5.

</div>


<a id="p101032"></a>&Таблица B.5&


| <a id="p101033"></a>Размер ячейки сита, мкм | <a id="p101034"></a>&Характеристика стадии удерживаемого организма& |
| --- | --- |
| <a id="p101035"></a>60 | <a id="p101036"></a>Удерживает все стадии |
| <a id="p101037"></a>100 | <a id="p101038"></a>Удерживает все стадии, кроме науплиев в возрасте 0 - 2 сут |
| <a id="p101039"></a>140 | <a id="p101040"></a>Удерживает копеподитов старше 5 сут и взрослых особей |
| <a id="p101041"></a>180 | <a id="p101042"></a>Удерживает поздних копеподитов и взрослых &особей& |
| <a id="p101043"></a>250 | <a id="p101044"></a>Удерживает большую часть взрослых &особей& |


<a id="p101045"></a>Тест-организмы, которые необходимо сохранить для возобновления данной культуры, переносят из сита в свежую морскую воду (см. [B.1.2](#p100929)). Следует отметить, что копеподиты и взрослые особи прилипают к стенкам емкости, но их можно смыть на сито с помощью струи морской воды из пипетки или бутыли.
<a id="p101046"></a>Для обычных целей новые культуры возобновляют путем отделения молоди от взрослых особей во время еженедельной замены морской воды с использованием сит с ячейками размером 180 и 60 мкм. Последующие отделения особей по стадиям жизненного цикла с более короткими интервалами используют для отделения тест-организмов с меньшей разницей в возрасте, если, например, эти тест-организмы выращивают для дальнейшего использования при тестировании.
<a id="p101047"></a>B.4.2. Регулирование плотности популяции
<a id="p101048"></a>Как правило, нет необходимости регулировать плотность популяции, которая была начата особями в возрасте менее семи суток, до конца первой недели, когда плотность популяции обычно не превышает 100 особей на 1 дм3. Рекомендуется избавляться от взрослых особей в возрасте 4 - 5 недель.
<a id="p101049"></a>B.4.3. Кормление
<a id="p101050"></a>&Tisbe battagliai& Volkmann-Rocco питаются морскими водорослями. Успешно зарекомендовала себя одна из водорослей, &Isochrysis galbana&, хотя смесь этой водоросли с &Rhodomonas reticulata& лучше усваивается тест-организмами. Культивирование водорослей и подготовка культур - в соответствии с требованиями [B.3.3](#p100973).
<a id="p101051"></a>Если для корма используют только водоросли &Isochrysis galbana&, то на 1 дм3 свежей морской воды вносят 5 см3 суспензии водорослей (плотность $5 \cdot 10^{7}\text{клеток}/\text{см}^{3}$ ) (см. [B.1.2](#p100929)), чтобы обеспечить плотность водорослей, равную $2,5 \cdot 10^{8}\text{клеток}/\text{дм}^{3}$ . Если используют оба вида водорослей, то на 1 дм3 воды вносят 3 см3 суспензии водоросли &Isochrysis galbana& и 2 см3 &Rhodomonas reticulata& (плотность $3 \cdot 10^{7}\text{клеток}/\text{см}^{3}$ ) (что обеспечивает плотность $1,5 \cdot 10^{8}\text{клеток}/\text{дм}^{3}$ водоросли &Isochrysis galbana& и $0,6 \cdot 10^{8}\text{клеток}/\text{дм}^{3}$ водоросли &Rhodomonas reticulata&).
<a id="p101052"></a>&Обычно тест-организмы при культивировании кормят ежедневно.& При содержании взрослых тест-организмов с более высокой плотностью популяции требуется соответственно и дополнительное питание в таком же объеме (указанном выше) один или два раза в неделю, но при условии, что предыдущая порция пищи съедена. Тест-организмы, состоящие из науплиев в возрасте одной недели и копеподитов ранних стадий, обычно не требуют дополнительного питания.
<a id="p101053"></a>B.5. Условия культивирования &Nitocra spinipes& Boeck

<div align="right">

<a id="p101054"></a>B.5.1. Оборудование и процедура культивирования

</div>

<div align="center">

<a id="p101055"></a>&Nitocra spinipes& Boeck культивируют в емкостях, например в кристаллизаторах вместимостью 150 см3, содержащих по 100 см3 морской воды (см. [5.2](#p100361)), без аэрации. Для обеспечения отделения культур по возрастам и обеспечения постоянного возобновления тест-организмов для тестирования требуется примерно 15 таких емкостей.<br>
<a id="p101056"></a>Каждую неделю необходимо обновлять культуру тест-организмов путем переноса 10 - 15 женских особей с видимыми яйцевыми мешками в кристаллизаторы, содержащие по 100 см3 свежей морской воды. Для обновленных культур необходимо заменять 50% морской воды через две недели. После этого заменяют 50% морской воды не реже одного раза в неделю.<br>
<a id="p101057"></a>Для тестирования необходимо отбирать взрослых копепод без яичных мешков в возрасте 3 - 4 недели.<br>
<a id="p101058"></a>B.5.2. Регулирование плотности популяции

</div>

<a id="p101059"></a>Как правило, нет необходимости регулировать плотность популяции тест-организмов при культивировании указанной культуры.

<div align="center">

<a id="p101060"></a>Рекомендуется избавляться от взрослых особей в возрасте 4 - 6 недель.

</div>

<a id="p101061"></a>B.5.3. Кормление

<div align="center">

<a id="p101062"></a>&Tisbe battagliai& Volkmann-Rocco питаются молотым кормом для лосося, который приобретают в &готовом виде&. Шарики корма для молодых лососей диаметром около 1 мм высушивают при 50 °C в течение 24 ч. После остывания &шарики& корма измельчают в ступке, затем помещают в пробирки с завинчивающимися крышками. Пробирки с кормом стерилизуют при 120 °C в течение 24 ч. Хранят подготовленный корм также, как корм для лосося, в морозильнике.

</div>

<a id="p101063"></a>Для кормления тест-организмов возобновленной культуры в емкости с водой для культивирования объемом 100 см3 вносят около 20 мг корма одновременно с 1 см3 донных отложений из воды старой культуры. После этого кормление продолжают, внося по 10 мг корма три раза в неделю. Следует добавлять не слишком много корма, поскольку может произойти уменьшение содержания кислорода, что может вызвать ухудшение условий выращивания тест-организмов.





<div align="center">

<a id="p101064"></a>Приложение C

</div>

(справочное)

<div align="center">

<a id="p101065"></a>**ИНФОРМАЦИЯ О РЕЗУЛЬТАТАХ**

</div>

**ПРОВЕДЕННЫХ МЕЖЛАБОРАТОРНЫХ ИСПЫТАНИЙ &ДЛЯ МЕТОДА Б&**

<a id="p101066"></a>C.1. Результаты тестирования, проведенные в 1991 году при межлабораторных испытаниях, приведены в таблице C.1.

<a id="p101067"></a>Таблица C.1


<table>
<colgroup><col width="28%"><col width="9%"><col width="11%"><col width="11%"><col width="10%"><col width="10%"><col width="11%"><col width="10%"></colgroup>
<tr><td rowspan="3"><a id="p101068"></a>Вещества и тест-организмы</td><td rowspan="3"><a id="p101069"></a>Количество лабораторий</td><td rowspan="3"><a id="p101070"></a>Количество использованных результатов</td><td rowspan="3"><a id="p101071"></a>Среднеарифметическое значение $\text{ЛК}_{50}$ , мг/дм</td><td colspan="4"><a id="p101072"></a>Стандартное отклонение</td></tr>
<tr><td colspan="2"><a id="p101073"></a>&amp;в условиях&amp; повторяемости</td><td colspan="2"><a id="p101074"></a>&amp;в условиях&amp; воспроизводимости</td></tr>
<tr><td><a id="p101075"></a>абсолютное, мг/дм3</td><td><a id="p101076"></a>относительное, %</td><td><a id="p101077"></a>абсолютное, мг/дм3</td><td><a id="p101078"></a>относительное, %</td></tr>
<tr><td><a id="p101079"></a>3,5-дихлорфенол &amp;Acartia tonsa&amp;</td><td><a id="p101080"></a>7</td><td><a id="p101081"></a>14</td><td><a id="p101082"></a>0,95</td><td><a id="p101083"></a>0,22</td><td><a id="p101084"></a>23</td><td><a id="p101085"></a>0,55</td><td><a id="p101086"></a>58</td></tr>
<tr><td><a id="p101087"></a>&amp;Tisbe battagliai&amp;</td><td><a id="p101088"></a>4</td><td><a id="p101089"></a>16</td><td><a id="p101090"></a>2,25</td><td><a id="p101091"></a>0,82</td><td><a id="p101092"></a>36</td><td><a id="p101093"></a>1,07</td><td><a id="p101094"></a>48</td></tr>
<tr><td><a id="p101095"></a>Двухромовокислый калий &amp;Nitocra spinipes при минерализации&amp; (солености):</td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr>
<tr><td><a id="p101096"></a>&amp;7 - 9 мг/дм3&amp;<br>$(7 - 9‰)$</td><td><a id="p101097"></a>11</td><td><a id="p101098"></a>61</td><td><a id="p101099"></a>18,7</td><td><a id="p101100"></a>4,38</td><td><a id="p101101"></a>23</td><td><a id="p101102"></a>7,85</td><td><a id="p101103"></a>42</td></tr>
<tr><td><a id="p101104"></a>15 - 29 мг/дм3<br>$(15 - 29‰)$</td><td><a id="p101105"></a>4</td><td><a id="p101106"></a>23</td><td><a id="p101107"></a>34,6</td><td><a id="p101108"></a>7,61</td><td><a id="p101109"></a>22</td><td><a id="p101110"></a>16,2</td><td><a id="p101111"></a>47</td></tr>
<tr><td colspan="8"><a id="p101112"></a>Примечание. Данные &amp;для Acartia tonsa&amp; и &amp;Tisbe battagliai&amp; приведены для &amp;тестирования&amp; в течение 48 ч; данные для &amp;Nitocra spinipes&amp; - для 96 ч.</td></tr>
</table>






<div align="center">

<a id="p101113"></a>Приложение ДА<br>
(справочное)

<a id="p101114"></a>**СОПОСТАВЛЕНИЕ СТРУКТУРЫ НАСТОЯЩЕГО СТАНДАРТА**<br>
**СО СТРУКТУРОЙ ПРИМЕНЕННОГО В НЕМ МЕЖДУНАРОДНОГО СТАНДАРТА**

<a id="p101115"></a>ДА.1. Сопоставление структуры настоящего стандарта со структурой примененного в нем международного стандарта ИСО 14669:1999 приведено в таблице ДА.1. Указанное в таблице ДА.1 изменение структуры национального стандарта Российской Федерации относительно структуры примененного международного стандарта обусловлено приведением в соответствие требований, установленных в ГОСТ Р 1.7, и включением дополнительного к ИСО 14669:1999 метода определения токсичности для учета потребностей национальной экономики Российской Федерации.

<a id="p101116"></a>Таблица ДА.1

</div>



<table>
<colgroup><col width="19%"><col width="15%"><col width="17%"><col width="15%"><col width="15%"><col width="19%"></colgroup>
<tr><td colspan="3"><a id="p101117"></a>Структура международного стандарта ИСО 14669:1999</td><td colspan="3"><a id="p101118"></a>Структура настоящего национального стандарта</td></tr>
<tr><td colspan="3"><a id="p101119"></a>Раздел 1</td><td colspan="3"><a id="p101120"></a><a href="#p100025">Раздел 1</a></td></tr>
<tr><td colspan="3"><a id="p101121"></a>Раздел 2</td><td colspan="3"><a id="p101122"></a><a href="#p100039">Раздел 2</a></td></tr>
<tr><td colspan="3"><a id="p101123"></a>Раздел 3</td><td colspan="3"><a id="p101124"></a><a href="#p100090">Разделы 4</a>; <a href="#p100356">5</a></td></tr>
<tr><td colspan="3"><a id="p101125"></a>Раздел 4</td><td colspan="3"><a id="p101126"></a><a href="#p100029">Раздел 1 (4-й абзац)</a></td></tr>
<tr><td colspan="3"><a id="p101127"></a>Раздел 5</td><td colspan="3"><a id="p101128"></a><a href="#p100098">Подразделы 4.2</a>; <a href="#p100361">5.2</a></td></tr>
<tr><td><a id="p101129"></a>Подразделы</td><td><a id="p101130"></a>Пункты</td><td><a id="p101131"></a>Подпункты</td><td><a id="p101132"></a>Разделы</td><td><a id="p101133"></a>Пункты</td><td><a id="p101134"></a>Подпункты</td></tr>
<tr><td><a id="p101135"></a>5.1</td><td><a id="p101136"></a>-</td><td><a id="p101137"></a>-</td><td><a id="p101138"></a><a href="#p100090">4</a>; <a href="#p100356">5</a></td><td><a id="p101139"></a><a href="#p100098">4.2</a>; <a href="#p100361">5.2</a></td><td><a id="p101140"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p101141"></a>5.2</td><td><a id="p101142"></a>-</td><td><a id="p101143"></a>-</td><td><a id="p101144"></a><a href="#p100090">4</a></td><td><a id="p101145"></a><a href="#p100098">4.2</a></td><td><a id="p101146"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p101147"></a>5.3</td><td><a id="p101148"></a>-</td><td><a id="p101149"></a>-</td><td><a id="p101150"></a><a href="#p100090">4</a>; <a href="#p100356">5</a></td><td><a id="p101151"></a><a href="#p100098">4.2</a>; <a href="#p100361">5.2</a></td><td><a id="p101152"></a>-</td></tr>
<tr><td colspan="3"><a id="p101153"></a>Раздел 6</td><td colspan="3"><a id="p101154"></a><a href="#p100098">Подразделы 4.2</a>; <a href="#p100361">5.2</a></td></tr>
<tr><td><a id="p101155"></a>Подразделы</td><td><a id="p101156"></a>Пункты</td><td><a id="p101157"></a>Подпункты</td><td><a id="p101158"></a>Разделы</td><td><a id="p101159"></a>Пункты</td><td><a id="p101160"></a>Подпункты</td></tr>
<tr><td><a id="p101161"></a>6.1</td><td><a id="p101162"></a>-</td><td><a id="p101163"></a>-</td><td rowspan="3"><a id="p101164"></a><a href="#p100090">4</a></td><td><a id="p101165"></a><a href="#p100098">4.2</a></td><td><a id="p101166"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p101167"></a>6.2</td><td><a id="p101168"></a>-</td><td><a id="p101169"></a>-</td><td><a id="p101170"></a><a href="#p100098">4.2</a></td><td><a id="p101171"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p101172"></a>6.3</td><td><a id="p101173"></a>-</td><td><a id="p101174"></a>-</td><td><a id="p101175"></a><a href="#p100098">4.2</a></td><td><a id="p101176"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p101177"></a>6.4</td><td><a id="p101178"></a>-</td><td><a id="p101179"></a>-</td><td><a id="p101180"></a><a href="#p100356">5</a></td><td><a id="p101181"></a><a href="#p100361">5.2</a></td><td><a id="p101182"></a>-</td></tr>
<tr><td colspan="3"><a id="p101183"></a>Раздел 7</td><td colspan="3"><a id="p101184"></a><a href="#p100072">Разделы 3</a>; <a href="#p100090">4</a>; <a href="#p100356">5</a></td></tr>
<tr><td><a id="p101185"></a>Подразделы</td><td><a id="p101186"></a>Пункты</td><td><a id="p101187"></a>Подпункты</td><td><a id="p101188"></a>Разделы</td><td><a id="p101189"></a>Пункты</td><td><a id="p101190"></a>Подпункты</td></tr>
<tr><td><a id="p101191"></a>7.1</td><td><a id="p101192"></a>-</td><td><a id="p101193"></a>-</td><td><a id="p101194"></a><a href="#p100072">3</a></td><td><a id="p101195"></a><a href="#p100073">3.1</a></td><td><a id="p101196"></a>-</td></tr>
<tr><td rowspan="2"><a id="p101197"></a>7.2</td><td rowspan="2"><a id="p101198"></a>-</td><td rowspan="2"><a id="p101199"></a>-</td><td><a id="p101200"></a><a href="#p100090">4</a></td><td><a id="p101201"></a><a href="#p100146">4.3</a></td><td><a id="p101202"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p101203"></a><a href="#p100356">5</a></td><td><a id="p101204"></a>-</td><td><a id="p101205"></a><a href="#p100398">5.3.2</a></td></tr>
<tr><td><a id="p101206"></a>-</td><td><a id="p101207"></a>7.2.1</td><td><a id="p101208"></a>-</td><td rowspan="2"><a id="p101209"></a><a href="#p100090">4</a></td><td><a id="p101210"></a><a href="#p100196">4.3.4</a></td><td><a id="p101211"></a><a href="#p100232">4.3.4.4</a></td></tr>
<tr><td><a id="p101212"></a>-</td><td><a id="p101213"></a>7.2.2</td><td><a id="p101214"></a>-</td><td><a id="p101215"></a>-</td><td><a id="p101216"></a><a href="#p100246">4.3.4.6</a></td></tr>
<tr><td colspan="3"><a id="p101217"></a>Раздел 8</td><td colspan="3"><a id="p101218"></a><a href="#p100259">Подразделы 4.4</a>; <a href="#p100424">5.4</a></td></tr>
<tr><td><a id="p101219"></a>Подразделы</td><td><a id="p101220"></a>Пункты</td><td><a id="p101221"></a>Подпункты</td><td><a id="p101222"></a>Разделы</td><td><a id="p101223"></a>Пункты</td><td><a id="p101224"></a>Подпункты</td></tr>
<tr><td><a id="p101225"></a>8.1</td><td><a id="p101226"></a>-</td><td><a id="p101227"></a>-</td><td rowspan="3"><a id="p101228"></a><a href="#p100090">4</a></td><td></td><td><a id="p101229"></a><a href="#p100261">4.4.1</a></td></tr>
<tr><td><a id="p101230"></a>8.2</td><td><a id="p101231"></a>-</td><td><a id="p101232"></a>-</td><td></td><td><a id="p101233"></a><a href="#p100267">4.4.2</a></td></tr>
<tr><td><a id="p101234"></a>8.3</td><td><a id="p101235"></a>-</td><td><a id="p101236"></a>-</td><td></td><td><a id="p101237"></a><a href="#p100271">4.4.3</a></td></tr>
<tr><td><a id="p101238"></a>8.4</td><td><a id="p101239"></a>-</td><td><a id="p101240"></a>-</td><td><a id="p101241"></a><a href="#p100356">5</a></td><td></td><td><a id="p101242"></a><a href="#p100433">5.4.1.3</a></td></tr>
<tr><td><a id="p101243"></a>8.5</td><td><a id="p101244"></a>-</td><td><a id="p101245"></a>-</td><td><a id="p101246"></a><a href="#p100090">4</a>; <a href="#p100356">5</a></td><td></td><td><a id="p101247"></a><a href="#p100181">4.3.3</a>; <a href="#p100400">5.3.3</a></td></tr>
<tr><td colspan="3"><a id="p101248"></a>Раздел 9</td><td colspan="3"><a id="p101249"></a><a href="#p100284">Подраздел 4.5</a></td></tr>
<tr><td><a id="p101250"></a>Подразделы</td><td><a id="p101251"></a>Пункты</td><td><a id="p101252"></a>Подпункты</td><td><a id="p101253"></a>Разделы</td><td><a id="p101254"></a>Пункты</td><td><a id="p101255"></a>Подпункты</td></tr>
<tr><td><a id="p101256"></a>9.1</td><td><a id="p101257"></a>-</td><td><a id="p101258"></a>-</td><td rowspan="3"></td><td></td><td><a id="p101259"></a><a href="#p100328">4.5.5</a></td></tr>
<tr><td><a id="p101260"></a>9.2</td><td><a id="p101261"></a>-</td><td><a id="p101262"></a>-</td><td></td><td><a id="p101263"></a><a href="#p100337">4.5.7</a></td></tr>
<tr><td><a id="p101264"></a>9.3</td><td><a id="p101265"></a>-</td><td><a id="p101266"></a>-</td><td></td><td><a id="p101267"></a><a href="#p100353">4.6.2</a></td></tr>
<tr><td colspan="3"><a id="p101268"></a>Раздел 10</td><td colspan="3"><a id="p101269"></a><a href="#p100435">Подраздел 5.5</a></td></tr>
<tr><td colspan="3"><a id="p101270"></a>Раздел 11</td><td colspan="3"><a id="p101271"></a><a href="#p100340">Подраздел 4.6</a></td></tr>
<tr><td colspan="2" rowspan="4"><a id="p101272"></a>Приложение A</td><td><a id="p101273"></a>A.1</td><td colspan="2" rowspan="4"><a id="p101274"></a><a href="#p100439">Приложение A</a></td><td><a id="p101275"></a><a href="#p100628">A.3.1</a></td></tr>
<tr><td><a id="p101276"></a>A.2</td><td><a id="p101277"></a><a href="#p100659">A.3.2</a></td></tr>
<tr><td><a id="p101278"></a>A.2.1</td><td><a id="p101279"></a><a href="#p100659">A.3.2</a></td></tr>
<tr><td><a id="p101280"></a>A.2.2</td><td><a id="p101281"></a><a href="#p100757">A.4</a></td></tr>
<tr><td colspan="2" rowspan="17"><a id="p101282"></a>Приложение B</td><td><a id="p101283"></a>B.1</td><td colspan="2" rowspan="17"><a id="p101284"></a><a href="#p100919">Приложение B</a></td><td><a id="p101285"></a><a href="#p100920">B.1</a></td></tr>
<tr><td><a id="p101286"></a>B.2</td><td><a id="p101287"></a><a href="#p100929">B.1.2</a></td></tr>
<tr><td><a id="p101288"></a>B.3</td><td><a id="p101289"></a><a href="#p100921">B.1.1</a></td></tr>
<tr><td><a id="p101290"></a>B.4</td><td><a id="p101291"></a><a href="#p100920">B.1</a></td></tr>
<tr><td><a id="p101292"></a>B.4.1</td><td><a id="p101293"></a><a href="#p100921">B.1.1</a></td></tr>
<tr><td><a id="p101294"></a>B.4.2</td><td><a id="p101295"></a><a href="#p100954">B.3</a></td></tr>
<tr><td><a id="p101296"></a>B.4.2.1</td><td><a id="p101297"></a><a href="#p100955">B.3.1</a></td></tr>
<tr><td><a id="p101298"></a>B.4.2.2</td><td><a id="p101299"></a><a href="#p100971">B.3.2</a></td></tr>
<tr><td><a id="p101300"></a>B.4.2.3</td><td><a id="p101301"></a><a href="#p100973">B.3.3</a></td></tr>
<tr><td><a id="p101302"></a>B.4.3</td><td><a id="p101303"></a><a href="#p101028">B.4</a></td></tr>
<tr><td><a id="p101304"></a>B.4.3.1</td><td><a id="p101305"></a><a href="#p101029">B.4.1</a></td></tr>
<tr><td><a id="p101306"></a>B.4.3.2</td><td><a id="p101307"></a><a href="#p101047">B.4.2</a></td></tr>
<tr><td><a id="p101308"></a>B.4.3.3</td><td><a id="p101309"></a><a href="#p101049">B.4.3</a></td></tr>
<tr><td><a id="p101310"></a>B.4.4</td><td><a id="p101311"></a><a href="#p101053">B.5</a></td></tr>
<tr><td><a id="p101312"></a>B.4.4.1</td><td><a id="p101313"></a><a href="#p101054">B.5.1</a></td></tr>
<tr><td><a id="p101314"></a>B.4.4.2</td><td><a id="p101315"></a><a href="#p101058">B.5.2</a></td></tr>
<tr><td><a id="p101316"></a>B.4.4.3</td><td><a id="p101317"></a><a href="#p101061">B.5.3</a></td></tr>
<tr><td colspan="2"><a id="p101318"></a>Приложение C</td><td><a id="p101319"></a>-</td><td colspan="2"><a id="p101320"></a><a href="#p101065">Приложение C</a></td><td><a id="p101321"></a><a href="#p101067">C.1</a></td></tr>
<tr><td colspan="3"><a id="p101322"></a>-</td><td colspan="3"><a id="p101323"></a><a href="#p101114">Приложение ДА</a></td></tr>
<tr><td colspan="3"><a id="p101324"></a>-</td><td colspan="3"><a id="p101325"></a><a href="#p101328">Приложение ДБ</a></td></tr>
<tr><td colspan="6"><a id="p101326"></a>Примечание. Раздел 3, подразделы 5.2, 8.3 международного стандарта состоят из значительного количества абзацев, которые в настоящем стандарте размещены в соответствующих подразделах, указанных в данной таблице.</td></tr>
</table>






<div align="center">

<a id="p101327"></a>Приложение ДБ<br>
(справочное)

<a id="p101328"></a>**СВЕДЕНИЯ О СООТВЕТСТВИИ ССЫЛОЧНЫХ НАЦИОНАЛЬНЫХ**<br>
**И МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫХ СТАНДАРТОВ МЕЖДУНАРОДНЫМ СТАНДАРТАМ,**<br>
**ИСПОЛЬЗОВАННЫМ В КАЧЕСТВЕ ССЫЛОЧНЫХ В ПРИМЕНЕННОМ**<br>
**МЕЖДУНАРОДНОМ СТАНДАРТЕ**

<a id="p101329"></a>Таблица ДБ.1

</div>



<table>
<colgroup><col width="34%"><col width="12%"><col width="53%"></colgroup>
<tr><td><a id="p101330"></a>Обозначение ссылочного национального, межгосударственного стандарта</td><td><a id="p101331"></a>Степень соответствия</td><td><a id="p101332"></a>Обозначение и наименование ссылочного международного стандарта</td></tr>
<tr><td><a id="p101333"></a>ГОСТ Р ИСО/МЭК 17025-2006</td><td><a id="p101334"></a>IDT</td><td><a id="p101335"></a>ИСО/МЭК 17025-2005 "Общие требования к компетентности испытательных и калибровочных лабораторий"</td></tr>
<tr><td rowspan="3"><a id="p101336"></a><a href="https://bukva.ai/docs/standart-gost-r-51592-2000">ГОСТ Р 51592-2000</a></td><td rowspan="3"><a id="p101337"></a>NEQ</td><td><a id="p101338"></a>ИСО 5667-1:1982 "Качество воды. Отбор проб. Часть 1. Руководство по составлению программы отбора проб" <a href="#p101436">&lt;1&gt;</a></td></tr>
<tr><td><a id="p101339"></a>ИСО 5667-2:1991 "Качество воды. Отбор проб. Часть 2. Руководство по методам отбора проб" <a href="#p101436">&lt;1&gt;</a></td></tr>
<tr><td><a id="p101340"></a>ИСО 5667-3:1994 "Качество воды. Отбор проб. Часть 3. Руководство по хранению и обращению с пробами" <a href="#p101437">&lt;2&gt;</a></td></tr>
<tr><td><a id="p101341"></a>ГОСТ Р 53228-2008</td><td><a id="p101342"></a>-</td><td><a id="p101343"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p101344"></a>ГОСТ 17.1.5.05-85</td><td><a id="p101345"></a>-</td><td><a id="p101346"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p101347"></a><a href="https://bukva.ai/docs/gost-17-4-4-02-84">ГОСТ 17.4.4.02-84</a></td><td><a id="p101348"></a>-</td><td><a id="p101349"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p101350"></a><a href="https://bukva.ai/docs/gost-245-76">ГОСТ 245-76</a></td><td><a id="p101351"></a>-</td><td><a id="p101352"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p101353"></a><a href="https://bukva.ai/docs/postanovlenie-gost-612-75">ГОСТ 612-75</a></td><td><a id="p101354"></a>-</td><td><a id="p101355"></a>-</td></tr>
<tr><td rowspan="2"><a id="p101356"></a><a href="https://bukva.ai/docs/gost-1770-74">ГОСТ 1770-74</a></td><td rowspan="2"><a id="p101357"></a>IDT</td><td><a id="p101358"></a>ИСО 1042:1998 "Посуда лабораторная стеклянная. Мерные колбы с одной меткой"</td></tr>
<tr><td><a id="p101359"></a>ИСО 4788:1980 "Посуда лабораторная стеклянная. Градуированные мерные цилиндры" <a href="#p101438">&lt;3&gt;</a></td></tr>
<tr><td><a id="p101360"></a>ГОСТ 3118-77</td><td><a id="p101361"></a>-</td><td><a id="p101362"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p101363"></a><a href="https://bukva.ai/docs/gost-3765-78">ГОСТ 3765-78</a></td><td><a id="p101364"></a>-</td><td><a id="p101365"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p101366"></a><a href="https://bukva.ai/docs/gost-4147-74">ГОСТ 4147-74</a></td><td><a id="p101367"></a>-</td><td><a id="p101368"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p101369"></a><a href="https://bukva.ai/docs/gost-4166-76">ГОСТ 4166-76</a></td><td><a id="p101370"></a>-</td><td><a id="p101371"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p101372"></a><a href="https://bukva.ai/docs/postanovlenie-gost-4168-79">ГОСТ 4168-79</a></td><td><a id="p101373"></a>NEQ</td><td><a id="p101374"></a>ИСО 6353-3:1987 "Реактивы для химического анализа. Часть 3. Технические условия. Вторая серия"</td></tr>
<tr><td><a id="p101375"></a><a href="https://bukva.ai/docs/gost-4201-79">ГОСТ 4201-79</a></td><td><a id="p101376"></a>NEQ</td><td><a id="p101377"></a>ИСО 6353-3:1987 "Реактивы для химического анализа. Часть 3. Технические условия. Вторая серия"</td></tr>
<tr><td rowspan="2"><a id="p101378"></a><a href="https://bukva.ai/docs/gost-4209-77">ГОСТ 4209-77</a></td><td rowspan="2"><a id="p101379"></a>NEQ</td><td><a id="p101380"></a>ИСО 6353-1:1982 "Реактивы для химического анализа. Часть 1. Общие методы испытаний"</td></tr>
<tr><td><a id="p101381"></a>ИСО 6353-2:1983 "Реактивы для химического анализа. Часть 2. Технические условия. Первая серия"</td></tr>
<tr><td><a id="p101382"></a>ГОСТ 4220-75</td><td><a id="p101383"></a>-</td><td><a id="p101384"></a>-</td></tr>
<tr><td rowspan="2"><a id="p101385"></a>ГОСТ 4233-77</td><td rowspan="2"><a id="p101386"></a>NEQ</td><td><a id="p101387"></a>ИСО 6353-1:1982 "Реактивы для химического анализа. Часть 1. Общие методы испытаний"</td></tr>
<tr><td><a id="p101388"></a>ИСО 6353-2:1983 "Реактивы для химического анализа. Часть 2. Технические условия. Первая серия"</td></tr>
<tr><td rowspan="2"><a id="p101389"></a>ГОСТ 4234-77</td><td rowspan="2"><a id="p101390"></a>NEQ</td><td><a id="p101391"></a>ИСО 6353-1:1982 "Реактивы для химического анализа. Часть 1. Общие методы испытаний"</td></tr>
<tr><td><a id="p101392"></a>ИСО 6353-3:1987 "Реактивы для химического анализа. Часть 3. Технические условия. Вторая серия"</td></tr>
<tr><td><a id="p101393"></a>ГОСТ 4328-77</td><td><a id="p101394"></a>-</td><td><a id="p101395"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p101396"></a>ГОСТ 4461-77</td><td><a id="p101397"></a>NEQ</td><td><a id="p101398"></a>ИСО 6353-2:1983 "Реактивы для химического анализа. Часть 2. Технические условия. Первая серия"</td></tr>
<tr><td rowspan="2"><a id="p101399"></a><a href="https://bukva.ai/docs/gost-4525-77">ГОСТ 4525-77</a></td><td rowspan="2"><a id="p101400"></a>NEQ</td><td><a id="p101401"></a>ИСО 6353-1:1982 "Реактивы для химического анализа. Часть 1. Общие методы испытаний"</td></tr>
<tr><td><a id="p101402"></a>ИСО 6353-3:1987 "Реактивы для химического анализа. Часть 3. Технические условия. Вторая серия"</td></tr>
<tr><td><a id="p101403"></a><a href="https://bukva.ai/docs/postanovlenie-gost-4529-78">ГОСТ 4529-78</a></td><td><a id="p101404"></a>-</td><td><a id="p101405"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p101406"></a>ГОСТ 6709-72</td><td><a id="p101407"></a>-</td><td><a id="p101408"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p101409"></a>ГОСТ 9147-80</td><td><a id="p101410"></a>-</td><td><a id="p101411"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p101412"></a><a href="https://bukva.ai/docs/gost-9656-75">ГОСТ 9656-75</a></td><td><a id="p101413"></a>-</td><td><a id="p101414"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p101415"></a><a href="https://bukva.ai/docs/gost-10652-73">ГОСТ 10652-73</a></td><td><a id="p101416"></a>NEQ</td><td><a id="p101417"></a>ИСО 6353-2:1983 "Реактивы для химического анализа. Часть 2. Технические условия. Первая серия"</td></tr>
<tr><td><a id="p101418"></a>ГОСТ 12026-76</td><td><a id="p101419"></a>-</td><td><a id="p101420"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p101421"></a><a href="https://bukva.ai/docs/gost-19126-2007">ГОСТ 19126-2007</a></td><td><a id="p101422"></a>-</td><td><a id="p101423"></a>-</td></tr>
<tr><td rowspan="3"><a id="p101424"></a>ГОСТ 25336-82</td><td rowspan="3"><a id="p101425"></a>IDT</td><td><a id="p101426"></a>ИСО 1773:1976 "Посуда лабораторная стеклянная. Узкогорлые колбы для кипячения" <a href="#p101439">&lt;4&gt;</a></td></tr>
<tr><td><a id="p101427"></a>ИСО 3819:1985 "Посуда лабораторная стеклянная. Стаканы"</td></tr>
<tr><td><a id="p101428"></a>ИСО 4797:1981 "Посуда лабораторная стеклянная. Колбы с коническими шлифами" <a href="#p101440">&lt;5&gt;</a></td></tr>
<tr><td><a id="p101429"></a><a href="https://bukva.ai/docs/gost-29227-91">ГОСТ 29227-91</a></td><td><a id="p101430"></a>IDT</td><td><a id="p101431"></a>ИСО 835-1-81 "Посуда лабораторная стеклянная. Мерные пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования" <a href="#p101441">&lt;6&gt;</a></td></tr>
<tr><td colspan="3"><a id="p101432"></a><a id="p101433"></a><a id="p101434"></a>Примечание. В настоящей таблице использованы следующие условные обозначения степени соответствия стандартов:<br>- IDT - идентичные стандарты;<br>- NEQ - неэквивалентные стандарты.</td></tr>
</table>



<a id="p101435"></a>

---

<a id="p101436"></a><1> Заменен на ИСО 5667-1:2006.
<a id="p101437"></a><2> Заменен на ИСО 5667-3:2003.
<a id="p101438"></a><3> Заменен на ИСО 4788:2005.
<a id="p101439"></a><4> Заменен на ИСО 1773:1997.
<a id="p101440"></a><5> Заменен на ИСО 4797:2004.
<a id="p101441"></a><6> Заменен на ИСО 835:2007.





<div align="center">

<a id="p101442"></a>&Библиография

</div>



| <a id="p101443"></a>[1] | <a id="p101444"></a>[ПНД Ф 12.1:2:2.2:2.3.2-03](https://bukva.ai/docs/pnd-f-12-122-22-3-2-03) [<*>](#p101453) | <a id="p101445"></a>"Отбор проб почв, грунтов, осадков биологических очистных сооружений, шламов промышленных сточных вод, донных отложений искусственно созданных водоемов, прудов-накопителей и гидротехнических сооружений". Экологический Центр аналитического контроля, М., 2003 |
| --- | --- | --- |
| <a id="p101446"></a>[2] | <a id="p101447"></a>ПНД Ф 12.15.1-08 [<*>](#p101453) | <a id="p101448"></a>"Методические указания по отбору проб для анализа сточных вод". Утверждены ФГУ "Федеральный центр анализа и оценки техногенного воздействия" Ростехнадзора, от 18 апреля 2008 г. |
| <a id="p101449"></a>[3] | <a id="p101450"></a>[НВН 33-5.3.01-85](https://bukva.ai/docs/instruktsiya-nvn-33-5-3-01-85) [<*>](#p101453) | <a id="p101451"></a>"Инструкция по отбору проб для анализа сточных вод". Утверждена приказом Минводхоза СССР от 13 июля 1985 г.& |



<a id="p101452"></a>

---

<div align="center">

<a id="p101453"></a><*> Действует до утверждения аналогичного национального стандарта.

</div>




<a id="p101454"></a>

---