ГОСТ Р 52671-2006. Национальный стандарт Российской Федерации. Продукты пищевые. Методы идентификации и определения массовой доли синтетических красителей в карамели

(утв. и введен в действие Приказом Ростехрегулирования от 27.12.2006 № 442-ст)

ИСТОРИЯ ИЗМЕНЕНИЙ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИХ АКТОВ

flowchart LR
  n0["ГОСТ Р 52671-2006"]:::rst
  click n0 "https://bukva.ai/docs/gost-r-52671-2006" "ГОСТ Р 52671-2006. Национальный стандарт Российской Федерации. Продукты пищевые. Методы идентификации и определения массовой доли синтетических красителей в карамели (утв. и введен"
  n1["ГОСТ 32050-2013"]:::doc
  click n1 "https://bukva.ai/docs/standart-gost-32050-2013" "ГОСТ 32050-2013. Межгосударственный стандарт. Продукты пищевые. Методы идентификации и определения массовой доли синтетических красителей в карамели (введен в действие Приказом Рос"
  n0 --> n1
classDef rst fill:#FFEBEB,stroke:#8B0000,color:#000;
classDef doc fill:#EBFFEB,stroke:#006400,color:#000;
classDef notEnt fill:#FFFFEB,stroke:#FF8C00,color:#000;

от 27 декабря 2006 г. № 442-ст

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ

МЕТОДЫ ИДЕНТИФИКАЦИИ И ОПРЕДЕЛЕНИЯ МАССОВОЙ ДОЛИ СИНТЕТИЧЕСКИХ КРАСИТЕЛЕЙ В КАРАМЕЛИ

Food products. Methods for identification and determination of artificial colours in caramel

1 января 2008 года

Предисловие

Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. № 184-ФЗ «О техническом регулировании», а правила применения национальных стандартов Российской Федерации — ГОСТ Р 1.0-2004 «Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения».

Сведения о стандарте

1. Разработан Государственным учреждением Всероссийским научно-исследовательским институтом пищевых ароматизаторов, кислот и красителей Российской академии сельскохозяйственных наук (ГУ ВНИИПАКК).

2. Внесен Техническим комитетом по стандартизации ТК 154 «Пищевые кислоты, эссенции ароматические пищевые и ароматизаторы, красители пищевые синтетические».

3. Утвержден и введен в действие Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 27 декабря 2006 г. № 442-ст.

4. Введен впервые.

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок — в ежемесячно издаваемых информационных указателях «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет.

1. ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ

Настоящий стандарт распространяется на карамель и устанавливает:

• хроматографический метод качественного определения (идентификации) синтетических красителей в тонком слое сорбента;
• денситометрический метод определения массовой доли синтетических красителей в тонком слое сорбента (диапазон измеряемых массовых долей синтетических красителей от 0,0012% до 0,0250%);
• спектрофотометрический метод определения массовой доли синтетических красителей (диапазон измеряемых массовых долей синтетических красителей от 0,0004% до 0,0015%).

Требования к показателю массовой доли синтетических красителей в карамели, определяемому по настоящему стандарту, установлены по [1].

2. НОРМАТИВНЫЕ ССЫЛКИ

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ Р 51268-99 Ножницы. Общие технические условия

ГОСТ 61-75 Кислота уксусная. Технические условия

ГОСТ 427-75 Линейки измерительные металлические. Технические условия

ГОСТ 1770-74 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 3760-79 Аммиак водный. Технические условия

ГОСТ 3956-76 Силикагель технический. Технические условия

ГОСТ 4517-87 Реактивы. Методы приготовления вспомогательных реактивов и растворов, применяемых при анализе

ГОСТ 5830-79 Спирт изоамиловый. Технические условия

ГОСТ 5904-82 Изделия кондитерские. Правила приемки, методы отбора и подготовки проб

ГОСТ 6016-77 Спирт изобутиловый. Технические условия

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 9875-88 Диэтиламин технический. Технические условия

ГОСТ 13647-78 Пиридин. Технические условия

ГОСТ 14919-83 Электроплиты, электроплитки и жарочные электрошкафы бытовые. Общие технические условия

ГОСТ 18300-87 Спирт этиловый ректификованный технический. Технические условия

ГОСТ 20015-88 Хлороформ. Технические условия

ГОСТ 21241-89 Пинцеты медицинские. Общие технические требования и методы испытаний

ГОСТ 24104-2001 Весы лабораторные. Общие технические требования

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 29169-91 (ИСО 648-77) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки с одной отметкой

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

Примечание. При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться замененным (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3. ОТБОР ПРОБ

Отбор проб карамели — по ГОСТ 5904.

4. ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИЙ МЕТОД КАЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ (ИДЕНТИФИКАЦИИ) СИНТЕТИЧЕСКИХ КРАСИТЕЛЕЙ В ТОНКОМ СЛОЕ СОРБЕНТА

Метод распространяется на карамель и предназначен для идентификации синтетических красителей, перечень которых приведен в Приложении А.

4.1 Сущность метода

Метод основан на сорбции синтетических красителей из раствора анализируемой карамели твердыми сорбентами, десорбции аммиаком, удалении последнего выпариванием и последующей идентификации синтетических красителей хроматографированием в тонком слое сорбента (ТСХ). Идентификацию проводят методом сравнения значений R_{f}\prime (отношение расстояния миграции пятна анализируемого синтетического красителя до линии старта к расстоянию миграции границы элюента до линии старта) каждого синтетического красителя многокомпонентной анализируемой смеси со значениями R_{f} контрольных синтетических красителей (КО).

В качестве КО используют водные растворы стандартных синтетических красителей из числа ожидаемых.

4.2 Условия проведения анализа

При подготовке и проведении измерения должны быть соблюдены следующие условия:

температура окружающего воздуха ..................... от 10 °C до 35 °C

относительная влажность воздуха ..................... от 40% до 95% +10%

напряжение в электросети ............................ 220 В -15%

частота тока в электросети .......................... от 49 до 51 Гц.

Помещение, где проводят работы с реактивами, должно быть обеспечено приточно-вытяжной вентиляцией.

Все операции с реактивами следует проводить в вытяжном шкафу.

4.3 Средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы и материалы

Для проведения анализа используют следующие средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы и материалы:

4.3.1. Весы лабораторные по ГОСТ 24104 с пределами допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания +/- 0,1 мг и +/- 100 мг.

4.3.2. Патрон для твердофазной экстракции с сорбентом алюминия оксидом.

4.3.3. Пластина для тонкослойной хроматографии с силикагелем на полимерной подложке размером 10 x 10 см.

4.3.4. Камера хроматографическая размером 12 x 12 x 5 см или 20 x 20 x 10 см.

4.3.5 Шприц медицинский инъекционный вместимостью 10 — 20 см3.

4.3.6. Микрошприц типа МШ-1 или Газохром-101 вместимостью 1,0 мм3 (1 мкл) с ценой деления не более 0,02 мм3 (0,02 мкл).

4.3.7. Пипетки по ГОСТ 29169 с одной меткой вместимостью 1, 5, 25, 50 см3 1-го класса точности.

4.3.8. Пипетки градуированные по ГОСТ 29227 вместимостью 1, 5, 10 см3 1-го класса точности.

4.3.9. Стаканы термостойкие по ГОСТ 25336 вместимостью 50, 200 см3.

4.3.10. Колбы мерные с пришлифованной пробкой вместимостью 10, 50, 100, 500 см3 1-го класса точности по ГОСТ 1770.

4.3.11. Колбы конические термостойкие вместимостью 50, 250 см3 по ГОСТ 25336.

4.3.12 Пробки стеклянные с конусом 29/32 по ГОСТ 1770.

4.3.13 Стаканчик СВ-14/8 по ГОСТ 25336.

4.3.14. Чашка выпарная круглодонная вместимостью 100 см3 по ГОСТ 25336.

4.3.15 Палочка стеклянная с оплавленным концом.

4.3.16 Термостат или водяная баня.

4.3.17. Сушильный шкаф диапазоном температур в рабочей камере от 40 °C до 200 °C и основной погрешностью стабилизации температуры +/- 1 °C.

4.3.18 Эксикатор по ГОСТ 25336.

4.3.19 Электроплитка бытовая по ГОСТ 14919.

4.3.20 Линейка металлическая по ГОСТ 427.

4.3.21 Ножницы по ГОСТ Р 51268.

4.3.22 Пинцет медицинский по ГОСТ 21241.

4.3.23. Красители синтетические стандартные в соответствии с Приложением А.

4.3.24 Пиридин по ГОСТ 13647, ч.д.а.

4.3.25. Кислота уксусная по ГОСТ 61, х.ч., ледяная, раствор массовой концентрации 10 г/дм3, готовят по ГОСТ 4517.

4.3.26. Спирт этиловый ректификованный технический высшего сорта по ГОСТ 18300.

4.3.27 Спирт изоамиловый по ГОСТ 5830, ч.д.а.

4.3.28 Спирт изобутиловый по ГОСТ 6016, ч.д.а.

4.3.29. Аммиак водный по ГОСТ 3760, ч.д.а., раствор массовой концентрации 250 г/дм3.

4.3.30. Алюминия оксид активированный кислый pH = 4,5, зернением 0,05 — 0,15 мм, удельной поверхностью 155 м2/г для колоночной хроматографии.

4.3.31. Силикагель марки КСМГ высшего или 1-го сорта по ГОСТ 3956.

4.3.32 Диэтиламин технический по ГОСТ 9875.

4.3.33 Хлороформ по ГОСТ 20015.

4.3.34 Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Допускается применение других средств измерений и вспомогательного оборудования, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам и обеспечивающих необходимую точность измерения, а также реактивы по качеству не хуже вышеуказанных.

4.4 Приготовление реактивов

4.4.1 Приготовление раствора аммиака (NH_{3}) массовой концентрации 125 г/дм3

В мерную колбу (с пришлифованной пробкой) по ГОСТ 1770 вместимостью 10 см3 вносят пипеткой по ГОСТ 29169 5 см3 водного аммиака по ГОСТ 3760 (4.3.29). Доводят объем раствора аммиака в колбе до метки дистиллированной водой по ГОСТ 6709, закрывают колбу пробкой и тщательно перемешивают. Раствор аммиака хранят в плотно закрытой таре по ГОСТ 3760 при температуре 15 °C — 25 °C не более 1 мес.

4.4.2 Приготовление элюентов

4.4.2.1 Приготовление элюента 1

В коническую колбу по ГОСТ 25336 вместимостью 50 см3 вносят пипетками по ГОСТ 29227, индивидуальными для каждого реактива, 3 см3 пиридина по ГОСТ 13647 (4.3.24), 3 см3 изоамилового спирта по ГОСТ 5830 (4.3.27), 3 см3 изобутилового спирта по ГОСТ 6016 (4.3.28), 4 см3 этилового ректификованного технического спирта по ГОСТ 18300 (4.3.26), 4 см3 водного аммиака по ГОСТ 3760 (4.3.29). Колбу закрывают стеклянной пробкой по ГОСТ 1770 и тщательно перемешивают.

4.4.2.2 Приготовление элюента 2

В коническую колбу вместимостью 50 см3 вносят пипетками, индивидуальными для каждого реактива, 3 см3 пиридина, 3 см3 изоамилового спирта, 3 см3 изобутилового спирта, 4 см3 этилового ректификованного технического спирта, 8 см3 водного аммиака. Колбу закрывают стеклянной пробкой и тщательно перемешивают.

4.4.2.3 Приготовление элюента 3

В коническую колбу вместимостью 50 см3 вносят пипетками, индивидуальными для каждого реактива, 6 см3 диэтиламина по ГОСТ 9875,5 см3 хлороформа по ГОСТ 20015,6 см3 этилового ректификованного технического спирта, 3 см3 раствора аммиака (NH_{3}) массовой концентрации 125 г/дм3, приготовленного по 4.4.1. Колбу закрывают стеклянной пробкой и тщательно перемешивают. Элюенты готовят за 1 ч до начала анализа.

Не допускается повторное использование элюента.

4.5 Подготовка к анализу

4.5.1 Приготовление раствора КО стандартных синтетических красителей

4.5.1.1. В необходимое число стаканов по ГОСТ 25336 вместимостью 50 см3 каждый взвешивают на лабораторных весах по ГОСТ 24104 с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания +/- 0,1 мг навески стандартных синтетических красителей. Результаты взвешиваний записывают до четвертого десятичного знака.

Массу навески стандартного синтетического красителя m, г, рассчитывают с учетом массовой доли основного красящего вещества в навеске по формуле

где 0,25 — масса навески синтетического красителя, при условии содержания в нем 100% основного красящего вещества, г;

100 — коэффициент пересчета, %;

X — массовая доля основного красящего вещества в навеске стандартного синтетического красителя, в соответствии с Приложением Б, %.

4.5.1.2. В каждый стакан с навеской стандартного синтетического красителя, подготовленного по 4.5.1.1, прибавляют 20 см3 дистиллированной воды и перемешивают стеклянной палочкой по 4.3.15 до полного растворения. Для интенсификации растворения допускается нагревание раствора в стакане на водяной бане до температуры не более 90 °C. Затем раствор охлаждают до 20 °C, переносят количественно в мерную колбу (с пришлифованной пробкой) вместимостью 100 см3, доводят объем раствора в колбе до метки дистиллированной водой, закрывают колбу пробкой и тщательно перемешивают.

4.5.1.3. Массовую концентрацию основного красящего вещества полученного раствора КО стандартного синтетического красителя C_{KO},\text{г}/\text{дм}^{3} , определяют по формуле

где 0,25 — масса навески синтетического красителя при условии содержания в нем 100% основного красящего вещества, г;

V_{KO} — объем раствора КО стандартного синтетического красителя, см3, (V_{KO} = 100\text{см}^{3}) ;

10^{- 3} — коэффициент пересчета см3 в дм3.

Раствор КО стандартного синтетического красителя хранят в склянке из темного стекла с завинчивающейся пробкой при комнатной температуре.

Срок хранения растворов КО стандартных синтетических красителей — 6 мес.

4.5.2 Извлечение синтетических красителей из анализируемой карамели методом твердофазной экстракции

4.5.2.1 Приготовление анализируемого раствора карамели

В стакане вместимостью 50 см3 взвешивают на лабораторных весах с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания +/- 100 мг не менее 5 г анализируемой карамели с записью результата взвешивания до первого десятичного знака. Затем в стакан прибавляют дистиллированную воду из расчета не менее 2 см3 на 1 г карамели и перемешивают стеклянной палочкой по 4.3.15 до полного растворения карамели. Для интенсификации растворения карамели допускается нагревание раствора в стакане на водяной бане до температуры не более 90 °C. Раствор анализируемой карамели необходимо охладить до комнатной температуры.

4.5.2.2 Подготовка патрона для твердофазной экстракции

Медицинским шприцем по 4.3.5 набирают 10 — 20 см3 дистиллированной воды, соединяют шприц с патроном для твердофазной экстракции по 4.3.2, заполненным сорбентом (оксидом алюминия по 4.3.30). Патрон промывают со скоростью 10 — 20 капель дистиллированной воды в минуту. Объем пропускаемой через патрон дистиллированной воды должен быть не менее 30 см3. После этого патрон промывают один раз 25 см3 раствора ледяной уксусной кислоты массовой концентрацией 10 г/дм3 по 4.3.25. Затем патрон отсоединяют от шприца.

4.5.2.3 Сорбция синтетических красителей из карамели

Медицинским шприцем набирают 10 — 20 см3 анализируемого раствора карамели, подготовленного по 4.5.2.1, и соединяют шприц с патроном. Пропускают анализируемый раствор карамели через патрон по одной капле со скоростью 10 — 20 капель в минуту. При появлении на выходе из патрона окрашенного анализируемого раствора карамели его пропускают через второй патрон. При необходимости используют 1 — 5 патронов, подготовленных по 4.5.2.2, до достижения полноты сорбции синтетического красителя. После этого промывают каждый патрон с сорбированным синтетическим красителем 25 см3 раствора ледяной уксусной кислоты массовой концентрации 10 г/дм3 по одной капле со скоростью 10 — 20 капель в минуту.

4.5.2.4 Десорбция синтетических красителей из патронов водным аммиаком

Медицинским шприцем набирают 10 — 20 см3 водного аммиака (4.3.29) и соединяют шприц с патроном. Пропускают водный аммиак через патрон по одной капле со скоростью 10 — 20 капель в минуту. При необходимости промывание патрона водным аммиаком повторяют до полного обесцвечивания сорбента (оксида алюминия) в патроне. Элюат (раствор водного аммиака, пропущенный через патрон) собирают в выпарную чашку по 4.3.14 и выпаривают досуха на водяной бане температурой от 80 °C до 90 °C. Сразу после испарения раствора аммиака чашку с сухим остатком (синтетическим красителем) охлаждают. Синтетический краситель растворяют в чашке, добавляя пипеткой по ГОСТ 29227 (4.3.8) от 0,5 до 1,0 см3 дистиллированной воды.

4.5.3 Подготовка хроматографической камеры

В хроматографическую камеру по 4.3.4 вносят элюент 1, приготовленный по 4.4.2.1, в количестве, необходимом для погружения хроматографической пластины на глубину не более 0,5 см от нижнего края пластины. Камеру плотно закрывают и выдерживают в течение 1 ч.

4.5.4 Подготовка пластин для ТСХ анализа

На хроматографическую пластину по 4.3.3 карандашом наносят линию старта на расстоянии 1 см от края пластины и линию границы элюента на расстоянии 7 см от линии старта. На линию старта карандашом наносят точки с интервалом не менее 1 см.

4.5.5 Получение хроматографических карт реперов КО стандартных синтетических красителей

На пластину, подготовленную по 4.5.4, микрошприцем по 4.3.6 наносят на линию старта в несколько приемов с промежуточным подсушиванием на воздухе 0,3 мм3 каждого раствора репера КО стандартных синтетических красителей, полученных по 4.5.1.3. После нанесения раствора пластину подсушивают в течение 3 — 4 мин и затем пинцетом по ГОСТ 21241 погружают в раствор элюента 1 на глубину не более 0,5 см от нижнего края пластины под углом примерно 45°. Камеру плотно закрывают. Элюирование заканчивают при достижении элюентом 1 линии границы элюента. По окончании элюирования пластину вынимают и подсушивают.

Аналогично получают хроматографические карты с использованием элюентов 2 и 3.

Значения R_{f} реперов стандартных синтетических красителей рассчитывают по 4.6.4.

4.6 Проведение анализа

4.6.1 Предварительная идентификация синтетического красителя анализируемой карамели

Пластину, подготовленную по 4.5.4, разрезают на две части на расстоянии от 3,0 до 3,5 см от боковой стороны пластины, перпендикулярно к линии старта.

На подготовленную хроматографическую пластину шириной от 3,0 до 3,5 см микрошприцем по 4.3.6 наносят на линию старта в несколько приемов с промежуточным подсушиванием на воздухе от 0,3 до 1,0 мм3 раствора, полученного по 4.5.2.4. После нанесения раствора пластину подсушивают в течение 3 — 4 мин и затем пинцетом погружают в раствор элюента 1 на глубину не более 0,5 см от нижнего края пластины под углом примерно 45°. Камеру плотно закрывают. Элюирование заканчивают при достижении элюентом 1 линии границы элюента. По окончании элюирования пластину вынимают и подсушивают.

При отсутствии разделения пятен синтетических красителей на хроматограмме анализ повторяют, используя элюент 2 или элюент 3.

Предварительную идентификацию анализируемого синтетического красителя проводят на основе визуальной оценки цвета пятен и сравнением значений R_{f}\prime анализируемых синтетических красителей, рассчитанных по формуле (6) со значениями R_{f} стандартных синтетических красителей, приведенных в таблице 1, или с помощью хроматографических карт, полученных при предварительном хроматографировании растворов КО стандартных синтетических красителей.

Таблица 1

4.6.2 Приготовление растворов КО смесевых стандартных синтетических красителей

4.6.2.1. Растворы КО смесевых стандартных красителей готовят с учетом предварительной идентификации синтетических красителей по 4.6.1.

Примечание. На силикагелевых пластинах синие, фиолетовые и красные красители идентифицируются намного лучше желтых и оранжевых.

4.6.2.2 Приготовление раствора А

В мерную колбу (с пришлифованной пробкой) вместимостью 500 см3 пипеткой вносят по 50 см3 растворов КО стандартных синтетических красителей, присутствие которых наиболее вероятно в анализируемой карамели, доводят объем раствора в колбе до метки дистиллированной водой, закрывают колбу пробкой и тщательно перемешивают.

Массовую концентрацию каждого компонента полученного раствора А, \text{С}_{k},\text{г}/\text{дм}^{3} , определяют по формуле

где C_{KO} — массовая концентрация основного красящего вещества раствора КО стандартного синтетического красителя, г/дм3, приготовленного по 4.5.1.2;

V — объем раствора КО смесевых стандартных синтетических красителей (V = 500 см3), см3;

V_{k} — объем раствора КО стандартного синтетического красителя, взятого для приготовления раствора КО смесевого стандартного красителя (V_{k} = 50\text{см}^{3}) , см3.

4.6.2.3 Приготовление раствора Б

Пипеткой по 4.3.7 отбирают 25 см3 раствора А, приготовленного по 4.6.2.2, и переносят в мерную колбу с пришлифованной пробкой вместимостью 50 см3. Доводят объем раствора в колбе до метки дистиллированной водой, закрывают колбу пробкой и тщательно перемешивают.

Массовую концентрацию каждого компонента полученного раствора Б \text{С}_{k1},\text{г}/\text{дм}^{3} , определяют по формуле

где \text{С}_{k} — массовая концентрация синтетического красителя в растворе А по 4.6.2.2, г/дм3;

2 — коэффициент разведения.

4.6.2.4 Приготовление раствора В

Пипеткой отбирают 25 см3 раствора Б, приготовленного по 4.6.2.3, и переносят в мерную колбу с пришлифованной пробкой вместимостью 50 см3. Доводят объем раствора в колбе до метки дистиллированной водой, колбу закрывают пробкой и тщательно перемешивают.

Массовую концентрацию каждого компонента полученного раствора В \text{С}_{k2},\text{г}/\text{дм}^{3} , определяют по формуле

\text{С}_{k2} = \frac{\text{С}_{k1}}{2} ,(5)

где \text{С}_{k1} — массовая концентрация синтетического красителя в растворе Б по 4.6.2.3, г/дм3;

Полученные растворы Б и В используют в качестве реперов (свидетелей).

4.6.3 Идентификация синтетического красителя

На хроматографическую пластину, подготовленную по 4.5.4, шириной от 6,5 до 7,0 см, микрошприцем наносят на линию старта в несколько приемов с промежуточным подсушиванием на воздухе от 0,3 до 1,0 мм3 растворов реперов (растворы Б и В) и анализируемого раствора синтетического красителя по 4.5.2.4. Все растворы наносят на пластину в одинаковой пропорции. После нанесения растворов пластину подсушивают в течение 3 — 4 мин и затем пинцетом помещают в хроматографическую камеру, заполненную элюентом. Элюент выбирают в соответствии с 4.6.1 и таблицей 1. Камеру плотно закрывают. Элюирование заканчивают при достижении элюентом линии границы элюента — 7,0 см от линии старта. По окончании элюирования хроматографическую пластину вынимают и подсушивают.

4.6.4 Обработка результатов

Линейкой по ГОСТ 427 (см. 4.3.20) измеряют расстояние от центра каждого пятна анализируемого синтетического красителя и линии границы элюента до линии старта.

R_{f}\prime = \frac{l_{k}}{l_{\text{э}}} ,(6)

где l_{k} — расстояние до линии старта от центра пятна анализируемого синтетического красителя, см;

l_{\text{э}} — расстояние до линии старта от линии границы элюента, см.

Сравнивая цвет пятен и значения R_{f}\prime каждого синтетического красителя анализируемого раствора со значениями R_{f} реперов (свидетелей), идентифицируют синтетические красители, присутствующие в анализируемой карамели.

5. ДЕНСИТОМЕТРИЧЕСКИЙ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ МАССОВОЙ ДОЛИ СИНТЕТИЧЕСКИХ КРАСИТЕЛЕЙ В ТОНКОМ СЛОЕ СОРБЕНТА

Метод предназначен для количественного определения в карамели пищевых красителей (основных красящих веществ): тартразина Е102, хризоина S Е103, желтого хинолинового Е104, желтого «солнечный закат» Е110, азорубина Е122, амаранта Е123, Понсо 4R Е124, эритразина Е127, красного 2G Е128, красного очаровательного AC Е129, синего патентованного V Е131, синего блестящего FCF Е133, зеленого прочного FSF Е143, черного блестящего PN Е151.

5.1 Сущность метода

Метод основан на сорбции синтетических красителей из раствора анализируемой карамели твердыми сорбентами, десорбции аммиаком, удалении аммиака выпариванием, хроматографировании в тонком слое сорбента (ТСХ) и определении массовой доли синтетических красителей методом количественной оптической денситометрии с компьютерной обработкой тонкослойных хроматограмм программой «DENS».

В качестве реперов (свидетелей) используют растворы КО стандартных синтетических красителей (растворы Б и В, приготовленные по 4.6.2.3 и 4.6.2.4).

5.2 Условия проведения анализа

При подготовке и проведении измерения должны быть соблюдены следующие условия:

температура окружающего воздуха ........... от 15 °C до 25 °C

атмосферное давление ...................... от 84,0 до 106,7 кПа

(от 630 до 800 мм рт. ст.)

относительная влажность воздуха ........... от 30% до 80% +10%

напряжение в электросети .................. 220 В -15%

частота тока в электросети ................ от 49 до 51 Гц.

Помещение, где проводят работы с реактивами, должно быть обеспечено приточно-вытяжной вентиляцией.

Все операции с реактивами следует проводить в вытяжном шкафу.

5.3 Средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы и материалы

Для проведения анализа следует использовать средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы и материалы по 4.3, за исключением стандартных синтетических красителей № 10, 13 (см. Приложение А), а также:

• оптический денситометр, работающий в диапазоне длин волн от 400 до 800 нм, с чувствительностью по каждому измеряемому синтетическому красителю в карамели не ниже 0,0012%;
• детектор — черно-белую малогабаритную видеокамеру или аналогичную цветную с чувствительностью не хуже 0,02 лк, с ручной фокусировкой и ручной регулировкой диафрагмы либо цветной сканер с разрешением от 200 d.p.i и выше с интерфейсом, соответствующим TWAIN-стандарту;
• компьютер с операционной системой Microsoft Windows 2000 или Microsoft Windows XP с компьютерной обработкой тонкослойных хроматограмм программой «DENS»;
• блок ввода изображения.

Допускается применение других средств измерений и вспомогательного оборудования, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам и обеспечивающих необходимую точность измерения, а также реактивов по качеству не хуже вышеуказанных.

5.4 Приготовление реактивов

Приготовление реактивов — по 4.4.

5.5 Подготовка к анализу

Подготовка к анализу — по 4.5.

5.6 Проведение анализа

5.6.1. Предварительная идентификация анализируемого синтетического красителя — по 4.6.1.

5.6.2. Приготовление растворов КО смесевых стандартных синтетических красителей — по 4.6.2.

5.6.3 Идентификация синтетического красителя — по 4.6.3.

5.6.4 Проведение измерений

Определение значений R_{f} , R_{f}\prime и массовых долей синтетических красителей проводят на денситометре с помощью компьютерной программы «DENS».

Массу каждого синтетического красителя в пятне репера (свидетеля) КО смесевого стандартного синтетического красителя, полученном нанесением на пластину раствора Б, m_{\text{Б}},\text{мкг} , рассчитывают по формуле

m_{\text{Б}} = \text{С}_{k1}V_{\text{Б}},(7)

где \text{С}_{k1} — массовая концентрация каждого синтетического красителя в растворе репера Б (свидетеля) смесевого стандартного синтетического красителя по 4.6.2.3, мкг/мм3;

V_{\text{Б}} — объем раствора репера Б (свидетеля) смесевого синтетического красителя, нанесенного на пластину ТСХ по 4.6.3, мм3.

Массу каждого синтетического красителя в пятне репера (свидетеля) КО смесевого стандартного синтетического красителя, полученном нанесением на пластину раствора В, m_{\text{В}},\text{мкг} , рассчитывают по формуле

m_{\text{В}} = \text{С}_{k2}V_{\text{В}},(8)

где \text{С}_{k2} — массовая концентрация каждого синтетического красителя раствора репера В (свидетеля) смесевого стандартного синтетического красителя по 4.6.2.4, мкг/мм3;

V_{\text{В}} — объем раствора репера В (свидетеля) смесевого синтетического красителя, нанесенного на пластину ТСХ по 4.6.3, мм3.

Значения массы каждого синтетического красителя в пятне репера (свидетеля) КО смесевого стандартного синтетического красителя вводят в программу компьютерной обработки «DENS», а массу анализируемого синтетического красителя обозначают X.

Получают результат измерения — массу анализируемого красителя, нанесенного на пластину, в мкг.

Пример количественного определения синтетического красителя приведен в Приложении В.

5.7 Обработка результатов

5.7.1 Массовую долю синтетического красителя в анализируемой карамели \text{С}_{1},\% , рассчитывают по формуле

\text{С}_{1} = \frac{\text{М}_{\text{вых}}10^{- 6}V_{1}}{V_{2}10^{- 3}m_{1}10^{- 3} \cdot 10} ,(9)

\text{С}_{1} = \frac{\text{М}_{\text{вых}}V_{1}}{m_{1}V_{2}10} ,(10)

где \text{М}_{\text{вых}} — масса анализируемого синтетического красителя в пятне пластины ТСХ, мкг;

10^{- 6} — коэффициент пересчета мкг в г;

V_{1} — объем анализируемого раствора синтетического красителя, полученного по 4.5.2.4, см3;

V_{2} — объем анализируемого раствора синтетического красителя, нанесенного на пластину ТСХ по 4.6.3, мм3;

10^{- 3} — коэффициент пересчета мм3 в см3;

m_{1} — масса пробы анализируемой карамели, взятой для анализа, г;

10^{- 3} — коэффициент пересчета г в кг;

10 — коэффициент пересчета в %.

Вычисления проводят с записью результата до пятого десятичного знака.

Окончательный результат записывают с точностью до четвертого десятичного знака.

5.7.2. За окончательный результат определения принимают среднеарифметическое значение C_{\text{ср}},\% , двух параллельных определений, если выполняется условие приемлемости

где \text{С}_{11} , \text{С}_{12} — результаты анализов двух параллельных измерений массовой доли синтетического красителя, %;

C_{\text{ср}} — среднее значение двух параллельных измерений массовой доли синтетического красителя, %;

r — значение предела повторяемости, приведенное в таблице 2.

Таблица 2

красителей

где C_{\text{ср}} — среднеарифметическое значение результатов двух определений, признанных приемлемыми, %;

\delta — границы относительной погрешности измерений, %.

Предел повторяемости r и воспроизводимости R, а также показатель точности, \delta , измерений массовой доли синтетического красителя в карамели приведены в таблице 2.

6. СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКИЙ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ МАССОВОЙ ДОЛИ СИНТЕТИЧЕСКИХ КРАСИТЕЛЕЙ

Метод предназначен для количественного определения в карамели индивидуальных синтетических красителей (основных красящих веществ) в соответствии с таблицей 3 и смесевых синтетических красителей, в состав которых входят два индивидуальных синтетических красителя, максимумы поглощения которых находятся в диапазонах длин волн 400 — 450 нм и 590 — 640 нм.

Таблица 3

6.1 Сущность метода

Метод основан на сорбции синтетических красителей из раствора анализируемой карамели твердыми сорбентами, десорбции аммиаком, удалении аммиака выпариванием и определении массовой доли синтетических красителей по интенсивности окраски полученного раствора методом спектрофотометрии при характеристической длине волны.

6.2 Условия проведения анализа

При подготовке и проведении измерения должны быть соблюдены условия в соответствии с 4.2.

6.3 Средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы и материалы

Для проведения анализа следует использовать средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы и материалы по 4.3, а также:

• спектрофотометр с диапазоном измерения в диапазоне длин волн от 210 до 700 нм, допустимой абсолютной погрешностью коэффициента пропускания не более 1%, спектральной шириной не более 1 нм;
• кюветы кварцевые толщиной поглощающего слоя 1 см.

6.4 Подготовка к анализу

Извлеченный по 4.5.2 из анализируемой карамели раствор синтетического красителя переносят количественно в мерную колбу с пришлифованной пробкой вместимостью 10 см3. Доводят объем раствора в колбе до метки растворителем в соответствии с требованиями таблицы 3, закрывают колбу пробкой и тщательно перемешивают.

6.5 Проведение анализа

Кювету спектрофотометра заполняют приготовленным по 6.4 раствором анализируемого синтетического красителя и измеряют оптическую плотность при длине волны, соответствующей максимуму светопоглощения в соответствии с таблицей 3, относительно оптической плотности растворителя.

Значение оптической плотности раствора должно находиться в диапазоне от 0,2 до 0,8.

В случае превышения значения оптической плотности раствора 0,8 необходимо разбавить раствор, и значение массовой доли синтетического красителя, рассчитанной по формуле (13), умножить на коэффициент разбавления.

6.6 Обработка результатов

6.6.1 Массовую долю синтетического красителя в анализируемой карамели \text{С}_{2},\% , рассчитывают по формуле

\text{С}_{2} = \frac{A \cdot V_{1}}{E_{1\text{см}}^{1\%} \cdot d \cdot m_{2}} ,(13)

где A — оптическая плотность раствора анализируемого синтетического красителя по 6.4 при длине волны, указанной в таблице 3;

\frac{\text{С}_{21} - \text{С}_{22}}{C_{\text{ср}}} 100 \leq r,(14)

где \text{С}_{21} , \text{С}_{22} — результаты анализов двух параллельных измерений массовой доли синтетического красителя, %;

C_{\text{ср}} — среднее значение двух параллельных измерений массовой доли синтетического красителя, %;

r — значение предела повторяемости, приведенное в таблице 4.

Нормативы оперативного контроля стандартных синтетических красителей

6.6.3 Результат анализа представляют в виде:

где C_{\text{ср}} — среднеарифметическое значение результатов двух определений, признанных приемлемыми, %;

\delta — границы относительной погрешности измерений, %.

Предел повторяемости r и воспроизводимости R, а также показатель точности \delta измерений массовой доли синтетического красителя в карамели приведены в таблице 4.

Приложение Б (обязательное)

ОПРЕДЕЛЕНИЕ МАССОВОЙ ДОЛИ ОСНОВНОГО КРАСЯЩЕГО ВЕЩЕСТВА В СТАНДАРТНЫХ СИНТЕТИЧЕСКИХ КРАСИТЕЛЯХ СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКИМ МЕТОДОМ

Метод предназначен для определения массовой доли основного красящего вещества в стандартных синтетических красителях.

Б.1. Сущность метода

Метод основан на определении массовой доли основного красящего вещества по интенсивности окраски полученного раствора методом спектрофотометрии при характеристической длине волны.

Б.2. Условия анализа

При подготовке и проведении анализа должны быть соблюдены следующие условия:

температура окружающего воздуха ............ от 10 °C до 35 °C

атмосферное давление ....................... от 84,0 до 106,7 кПа (от 630 до 800 мм рт. ст.)

относительная влажность воздуха ............ от 40% до 95% +10%

напряжение в сети .......................... 220 В -15%

частота тока в электросети ................. от 49 до 51 Гц.

Помещение, где проводят работы с реактивами, должно быть обеспечено приточно-вытяжной вентиляцией.

Все операции с реактивами следует проводить в вытяжном шкафу.

Б.3. Средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы и материалы

Спектрофотометр с диапазоном измерения в диапазоне длин волн от 210 до 700 нм, допустимой абсолютной погрешностью коэффициента пропускания не более 1%, спектральной шириной не более 1 нм.

Кюветы кварцевые толщиной поглощающего слоя 1 см.

Весы лабораторные по ГОСТ 24104 с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания +/- 0,1 мг.

Пипетка градуированная по ГОСТ 29227 вместимостью 10 см3 1 класса точности.

Колба мерная с пришлифованной пробкой по ГОСТ 1770 вместимостью 100 см3 1 класса точности.

Стаканчик СВ-14/8 по ГОСТ 25336.

Стакан термостойкий по ГОСТ 25336 вместимостью 50 см3.

Баня водяная.

Силикагель по ГОСТ 3956.

Красители стандартные синтетические в соответствии с Приложением А.

Шкаф сушильный диапазоном температур в рабочей камере от 40 °C до 200 °C и основной погрешностью стабилизации температуры +/- 1 °C.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Допускается применение других средств измерений, материалов и реактивов, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам и обеспечивающих необходимую точность анализа, а также реактивов по качеству не хуже вышеуказанных.

Б.4. Подготовка к анализу

Б.4.1. Подготовка стандартных синтетических красителей

В необходимое число стаканчиков типа СВ по ГОСТ 25336 взвешивают на лабораторных весах по ГОСТ 24104 с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания +/- 0,1 мг навески стандартных синтетических красителей массой 0,2 — 0,5 г, результат взвешивания записывают в граммах до четвертого десятичного знака и доводят до постоянной массы высушиванием при температуре 105 °C в сушильном шкафу. Навески подготовленных стандартных синтетических красителей хранят в эксикаторе с силикагелем. Навески стандартных синтетических красителей для приготовления растворов готовят не позднее, чем за 1 ч до начала анализа.

Б.4.2. Приготовление КО стандартных синтетических красителей

В стакан по ГОСТ 25336 вместимостью 50 см3 взвешивают на лабораторных весах с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания +/- 0,1 мг навеску 0,01 г подготовленного по Б.4.1 стандартного синтетического красителя с записью результата взвешивания до четвертого десятичного знака. Растворяют навеску в небольшом количестве растворителя в соответствии с таблицей 3 и количественно переносят в мерную колбу с пришлифованной пробкой вместимостью 100 см3. При температуре раствора 20 °C доводят объем раствора в колбе до метки растворителем в соответствии с таблицей 3, закрывают колбу пробкой и тщательно перемешивают.

Примечание. Для интенсификации процесса растворения допускается нагревание стаканчика с растворенным синтетическим красителем до температуры не более 90 °C.

Пипеткой отбирают 10 см3 КО стандартного синтетического красителя и переносят в мерную колбу (с пришлифованной пробкой) вместимостью 100 см3. Доводят объем раствора в колбе до метки растворителем, закрывают колбу пробкой и тщательно перемешивают.

Б.5. Проведение анализа

Приготовленный раствор дозируют пипеткой по ГОСТ 29227 в кювету спектрофотометра и измеряют оптическую плотность при длине волны, указанной в таблице 3, относительно оптической плотности растворителя.

Б.6. Обработка результатов

Массовую долю основного красящего вещества в стандартном синтетическом красителе C, %, рассчитывают по формуле

\text{С } = \frac{A \cdot V_{1} \cdot V_{3}}{E_{1\text{см}}^{1\%} \cdot d \cdot m \cdot V_{2}} ,(\text{Б}.1)

\text{С } = \frac{\text{А} \cdot 10^{3}}{E_{1\text{см}}^{1\%} \cdot m} ,(\text{Б}.2)

где A — оптическая плотность при характеристической длине волны;

V_{1} — объем разведения, см3 (V_{1} = 100\text{см}^{3}) ;

V_{3} — объем разведения, см3 (V_{3} = 100\text{см}^{3}) ;

E_{1\text{см}}^{1\%} — удельный коэффициент светопоглощения в соответствии с таблицей 3;

d — толщина поглощающего слоя, см (d = 1 см);

m — масса навески эталонного синтетического красителя, г;

V_{2} — объем раствора синтетического красителя, взятого на разведение по Б.4.2, см3 (V_{2} = 10\text{см}^{3}) .

Вычисления проводят с записью результата до третьего десятичного знака.

Окончательный результат записывают с точностью до второго десятичного знака.

За окончательный результат анализа принимают среднеарифметическое значение C_{\text{ср}},\% , двух параллельных определений, выполненных в условиях повторяемости, если выполняется условие приемлемости

\frac{\text{С}_{1} - \text{С}_{2}}{C_{\text{ср}}} 100 \leq 10,(\text{Б}.3)

где \text{С}_{1} , \text{С}_{2} — массовая доля основного красящего вещества двух параллельных измерений, выполненных в условиях повторяемости, %;

C_{\text{ср}} — среднее значение массовой доли основного красящего вещества, %;

10 — норматив контроля предела повторяемости, %.

Контроль повторяемости результатов анализа проводят при каждом анализе сравнением результатов двух параллельных определений массовой доли основного красящего вещества в одном и том же стандартном синтетическом красителе, выполненных по Б.5 одним и тем же исполнителем на одном и том же приборе. Результат контроля считают удовлетворительным, если выполняется условие (Б.3).

Если условие (Б.3) не выполняется, контроль повторяют. При повторном неудовлетворительном результате выясняют и устраняют его причины.

Б.7. Контроль воспроизводимости результатов анализа

Контроль воспроизводимости результатов анализа проводят, сравнивая результаты двух определений массовой доли основного красящего вещества в одной и той же пробе, выполненные по Б.5 разными исполнителями или одним и тем же исполнителем, но с использованием разного оборудования.

Результат контроля считают удовлетворительным, если выполняется условие

где \text{С}_{1} , \text{С}_{2} — массовая доля основного красящего вещества двух параллельных измерений, выполненных в условиях воспроизводимости, %;

Приложение В (рекомендуемое)

ПРИМЕР КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОНСО 4R В СМЕСИ СИНТЕТИЧЕСКИХ КРАСИТЕЛЕЙ С ПОМОЩЬЮ ВИДЕОДЕНСИТОМЕТРА «ДЕНСКАН» И ПРОГРАММЫ «DENS»

В.1. Средства измерений и вспомогательное оборудование

Видеоденситометр «Денскан», производства НПО «Ленхром», работающий в диапазоне длин волн от 400 до 800 нм, с чувствительностью по каждому измеряемому синтетическому красителю в карамели не ниже 0,0012%.

Детектор — черно-белая малогабаритная видеокамера WV-BP330.

Компьютер с операционной системой Microsoft Windows XP и специальным программным обеспечением по обработке тонкослойных хроматограмм «DENS».

Блок ввода изображения видеобластер Aver TV 203.

В.2. Приготовление реактивов

Приготовление реактивов — по 4.4.

В.3. Подготовка к анализу

Подготовка к анализу — по 4.5.

В.4. Проведение анализа

Проводят извлечение синтетических красителей из карамели по 4.5.2. Растворы КО смесевых стандартных красителей готовят по 4.6.2.

Хроматографическое разделение смеси синтетических красителей, содержащей в качестве одного из компонентов Понсо 4R, в полученном по 4.5.2.4 растворе проводят по 4.6.3.

В.5.2. Вводят файл с изображением хроматограммы в компьютерную программу «DENS».

В.5.3. Редактируют изображение средствами программы «DENS», устанавливая линии старта и границы элюента (рисунок В.1).

В.5.4. Проводят расчет значения R_{f} синтетического красителя Понсо 4R.

В.5.5. Выделяют анализируемую область на изображении хроматограммы для последующей обработки (см. рисунок В.2).

В.5.6. Выделяют на изображении хроматограммы границы обрабатываемых пятен синтетического красителя Понсо 4R (см. рисунок В.3).

В.5.7. Проводят измерение пятен синтетического красителя в выделенных хроматографических зонах (см. рисунок В.4).

В.5.8. По полученным данным строят калибровочный график. Массу анализируемого синтетического красителя Понсо 4R (мкг) в пятне определяют по калибровочному графику (см. рисунок В.5). Полученные данные представляют в виде отчета.

В.5.9. Обработка результатов измерений — по 5.8.

БИБЛИОГРАФИЯ

[1] СанПиН 2.3.2.1293-2003 Гигиенические требования по применению пищевых добавок