ГОСТ 32073-2013. Межгосударственный стандарт. Продукты пищевые. Методы идентификации и определения массовой доли синтетических красителей в алкогольной продукции

(введен в действие Приказом Росстандарта от 29.07.2013 № 467-ст)

ИСТОРИЯ ИЗМЕНЕНИЙ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИХ АКТОВ

flowchart LR
  n0["ГОСТ Р 52470-2005"]:::rst
  click n0 "https://bukva.ai/docs/gost-r-52470-2005" "ГОСТ Р 52470-2005. Национальный стандарт Российской Федерации. Продукты пищевые. Методы идентификации и определения массовой доли синтетических красителей в алкогольной... (утв. и "
  n1["ГОСТ 32073-2013"]:::doc
  click n1 "https://bukva.ai/docs/gost-32073-2013" "ГОСТ 32073-2013. Межгосударственный стандарт. Продукты пищевые. Методы идентификации и определения массовой доли синтетических красителей в алкогольной продукции (введен в действие"
  n0 --> n1
classDef rst fill:#FFEBEB,stroke:#8B0000,color:#000;
classDef doc fill:#EBFFEB,stroke:#006400,color:#000;
classDef notEnt fill:#FFFFEB,stroke:#FF8C00,color:#000;

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ

МЕТОДЫ ИДЕНТИФИКАЦИИ И ОПРЕДЕЛЕНИЯ МАССОВОЙ ДОЛИ СИНТЕТИЧЕСКИХ КРАСИТЕЛЕЙ В АЛКОГОЛЬНОЙ ПРОДУКЦИИ

Food products. Methods for identification and determination of artificial colours mass fraction in alcoholic production

ГОСТ 32073-2013

Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2-2009 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены».

Сведения о стандарте

1. Разработан Государственным научным учреждением Всероссийским научно-исследовательским институтом пищевых ароматизаторов, кислот и красителей Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИПАКК Россельхозакадемии), Федеральным государственным бюджетным учреждением «Научно-исследовательский институт питания» Российской академии медицинских наук (ФГБУ «НИИ питания» РАМН).

2. Внесен Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии (ТК 154).

3. Принят Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (Протокол от 25 марта 2013 г. № 55-П).

За принятие проголосовали:

4. Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 29 июля 2013 г. № 467-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 32073-2013 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 января 2014 г.

5. Введен впервые.

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок — в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет.

1. Область применения

Настоящий стандарт распространяется на алкогольную продукцию (за исключением пива) и устанавливает:

• хроматографический метод качественного определения (идентификации) синтетических красителей (далее — красители) в тонком слое сорбента при содержании красителей не менее 0,001%;
• денситометрический метод определения массовой доли красителей в тонком слое сорбента (диапазон измеряемых массовых долей красителей от 0,0012% до 0,0250%);
• спектрофотометрический метод определения массовой доли красителей (диапазон измеряемых массовых долей красителей от 0,0004% до 0,0015%);
• метод зонального капиллярного электрофореза (диапазон измеряемых концентраций с учетом разбавления от 0,001 до 0,100 г/дм3).

При возникновении разногласий применяют денситометрический метод количественного определения красителей в тонком слое сорбента. Предварительное разделение красителей следует проводить с использованием хроматографического метода качественного определения (идентификации) красителей в тонком слое сорбента (см. раздел 5).

2. Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие межгосударственные стандарты:

ГОСТ 12.0.004-90 Система стандартов безопасности труда. Организация обучения безопасности труда. Общие положения

ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования

ГОСТ 12.1.005-88 Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны

ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.1.019-79 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ 12.2.007.0-75 Система стандартов безопасности труда. Изделия электротехнические. Общие требования безопасности

ГОСТ 12.4.009-83 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание

ГОСТ 12.4.021-75 Система стандартов безопасности труда. Системы вентиляционные. Общие требования

ГОСТ 12.4.103-83 Система стандартов безопасности труда. Одежда специальная защитная, средства индивидуальной защиты ног и рук. Классификация

ГОСТ 61-75 Реактивы. Кислота уксусная. Технические условия

ГОСТ 83-79 Реактивы. Натрий углекислый. Технические условия

ГОСТ 427-75 Линейки измерительные металлические. Технические условия

ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-73, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 3760-79 Реактивы. Аммиак водный. Технические условия

ГОСТ 3769-78 Реактивы. Аммоний сернокислый. Технические условия

ГОСТ 3956-76 Силикагель технический. Технические условия

ГОСТ 4198-75 Реактивы. Калий фосфорнокислый однозамещенный. Технические условия

ГОСТ 4328-77 Реактивы. Натрия гидроокись. Технические условия

ГОСТ 4517-87 Реактивы. Методы приготовления вспомогательных реактивов и растворов, применяемых при анализе

ГОСТ 4828-83 Изделия ликероводочные. Правила приемки и методы испытаний

ГОСТ 5363-93 Водка. Правила приемки и методы анализа

ГОСТ ИСО 5725-2-2003 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений <*>

<*> На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р ИСО 5725-2-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений».

ГОСТ 5830-79 Реактивы. Спирт изоамиловый. Технические условия

ГОСТ 6016-77 Реактивы. Спирт изобутиловый. Технические условия

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 6995-77 Реактивы. Метанол-яд. Технические условия

ГОСТ 9875-88 Диэтиламин технический. Технические условия

ГОСТ 13647-78 Реактивы. Пиридин. Технические условия

ГОСТ 14919-83 Электроплиты, электроплитки и жарочные электрошкафы бытовые. Общие технические условия

ГОСТ 18300-87 Спирт этиловый ректификованный технический. Технические условия

ГОСТ 20015-88 Хлороформ. Технические условия

ГОСТ 21241-89 (СТ СЭВ 5204-85) Пинцеты медицинские. Общие технические требования и методы испытаний

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 29169-91 (ИСО 648-77) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки с одной отметкой

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

ГОСТ 31730-2012 Продукция винодельческая. Правила приемки и методы отбора проб.

Примечание. При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты» за текущий год. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3. Отбор проб

3.1 Отбор проб ликеро-водочных изделий — по ГОСТ 4828.

3.2. Отбор проб продукции винодельческой промышленности — по ГОСТ 31730.

3.3 Отбор проб водки — по ГОСТ 5363.

4. Требования безопасности

4.1. При выполнении анализов необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007 и ГОСТ 12.4.103.

4.2. Помещение, в котором проводят анализы, должно быть оборудовано общей приточно-вытяжной вентиляцией по ГОСТ 12.4.021.

4.3. Электробезопасность при работе с электроустановками — по ГОСТ 12.2.007.0 и по ГОСТ 12.1.019.

4.4. Организация обучения работающих безопасности труда — по ГОСТ 12.0.004.

4.5. Помещение лаборатории должно соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009.

4.6. Содержание вредных веществ в воздухе рабочей зоны не должно превышать норм, установленных ГОСТ 12.1.005.

5. Хроматографический метод качественного определения (идентификации) красителей в тонком слое сорбента

Метод распространяется на алкогольную продукцию и предназначен для установления состава красителей, перечень которых приведен в таблице 1 (см. 5.6.1).

5.1 Сущность метода

Метод основан на сорбции из анализируемой алкогольной продукции твердыми сорбентами, десорбции аммиаком, удалении последнего выпариванием и последующей идентификации красителей хроматографированием в тонком слое сорбента (ТСХ).

Идентификацию проводят методом сравнения значений R\prime_{f} [отношение расстояния миграции пятна анализируемого красителя до линии старта к расстоянию миграции границы элюента (проявителя) до линии старта] каждого красителя многокомпонентной анализируемой смеси со значениями R_{f} контрольных красителей (КО).

В качестве КО используют водные растворы стандартных красителей из числа ожидаемых. Массовая доля анализируемого красителя должна находиться внутри диапазона наименьшей и наибольшей массовых долей КО стандартных красителей (диапазон измерения).

5.2 Условия проведения анализа

При подготовке и проведении измерения должны быть соблюдены следующие условия:

Помещение, где проводят работы с реактивами, должно быть обеспечено приточно-вытяжной вентиляцией.

Все операции с реактивами следует проводить в вытяжном шкафу.

5.3 Средства измерений, вспомогательное оборудование, посуда, реактивы и материалы

5.3.1. Весы по нормативным документам, действующим на территории государств, принявших стандарт, со значением среднего квадратического отклонения (СКО), не превышающим 0,03 мг, и с погрешностью от нелинейности не более +/- 0,06 мг.

5.3.2. Весы по нормативным документам, действующим на территории государств, принявших стандарт, с пределами допускаемой абсолютной погрешности не более +/- 0,1 г.

5.3.3. Весы по нормативным документам, действующим на территории государств, принявших стандарт, со значением среднего квадратического отклонения (СКО), не превышающим 0,3 мг, и погрешностью от нелинейности не более +/- 0,6 мг.

5.3.4. Патрон для твердофазной экстракции с сорбентом оксидом алюминия.

5.3.5. Пластина для тонкослойной хроматографии с силикагелем на полимерной подложке размерами 10 x 10 см.

5.3.6. Камера хроматографическая размерами 20 x 20 x 10 или 12 x 12 x 5 см.

5.3.7 Шприц медицинский инъекционный вместимостью 10 — 20 см3.

5.3.8. Микрошприц вместимостью 1,0 мм3 (0,001 см3), ценой деления не более 0,02 мм3.

5.3.9. Пипетки по ГОСТ 29169 с одной меткой, вместимостью 1, 5, 25, 50 см3 1-го класса точности.

5.3.10. Пипетки градуированные по ГОСТ 29227 вместимостью 5, 10 см3 1-го класса точности.

5.3.11. Стаканы термостойкие по ГОСТ 25336 вместимостью 50, 200, 400 см3.

5.3.12. Колбы мерные с пришлифованной пробкой вместимостью 10, 50, 100, 500 см3 1-го класса точности по ГОСТ 1770.

5.3.13. Колбы конические термостойкие вместимостью 50, 250 см3 1-го класса точности по ГОСТ 25336.

5.3.14 Пробки стеклянные с конусом 29/32 по ГОСТ 1770.

5.3.15 Стаканчик СВ-14/8 по ГОСТ 25336.

5.3.16. Чашка выпарная круглодонная вместимостью 100 см3 по ГОСТ 25336.

5.3.17. Колонка хроматографическая стеклянная диаметром 10 мм, длиной 10 см.

5.3.18 Палочка стеклянная с оплавленным концом.

5.3.19 Термостат или водяная баня.

5.3.20. Сушильный шкаф с диапазоном температур в рабочей камере от 40 °C до 200 °C и основной погрешностью стабилизации температуры +/- 1 °C.

5.3.21 Эксикатор по ГОСТ 25336.

5.3.22 Электроплитка бытовая по ГОСТ 14919.

5.3.23 Линейка металлическая по ГОСТ 427.

5.3.24 Ножницы.

5.3.25 Пинцет медицинский по ГОСТ 21241.

5.3.26. Красители стандартные в соответствии с Приложением А, за исключением стандартного красителя Коричневый НТ.

5.3.27 Пиридин по ГОСТ 13647, ч.д.а.

5.3.28. Кислота уксусная по ГОСТ 61, х.ч., ледяная, раствор массовой концентрации 10 г/дм3 готовят по ГОСТ 4517.

5.3.29. Спирт этиловый ректификованный технический высшего сорта по ГОСТ 18300.

5.3.30 Спирт изоамиловый по ГОСТ 5830, ч.д.а.

5.3.31 Спирт изобутиловый по ГОСТ 6016, ч.д.а.

5.3.32. Аммиак водный по ГОСТ 3760, ч.д.а., раствор массовой концентрации 250 г/дм3.

5.3.33. Алюминия оксид активированный кислый, pH = 4,5 +/- 0,5, зернением от 0,05 до 0,15 мм, удельной поверхностью 155 м2/г для колоночной хроматографии.

5.3.34 Метанол по ГОСТ 6995.

5.3.35. Силикагель марки КСМГ высшего или 1-го сорта по ГОСТ 3956.

5.3.36 Целлюлоза микрокристаллическая для хроматографии.

5.3.37. Сульфат аммония по ГОСТ 3769, раствор массовой концентрации 250 г/дм3.

5.3.38 Диэтиламин технический по ГОСТ 9875.

5.3.39 Хлороформ по ГОСТ 20015.

5.3.40 Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Допускается применение других средств измерений и вспомогательного оборудования, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам и обеспечивающих необходимую точность измерения, а также реактивов по качеству не хуже вышеуказанных.

5.4 Приготовление реактивов

5.4.1 Приготовление раствора аммиака (NH_{3}) массовой концентрации 125 г/дм3

В мерную колбу (см. 5.3.12) с пришлифованной пробкой вместимостью 10 см3 вносят пипеткой (см. 5.3.9) 5 см3 водного аммиака (см. 5.3.32). Доводят объем раствора аммиака в колбе до метки дистиллированной водой (см. 5.3.40), закрывают колбу пробкой и тщательно перемешивают.

5.4.2 Приготовление элюентов (проявителей)

5.4.2.1 Приготовление элюента 1

В коническую колбу (см. 5.3.13) вместимостью 50 см3 вносят пипетками (см. 5.3.10), индивидуальными для каждого реактива, 3 см3 пиридина (см. 5.3.27), 3 см3 изоамилового спирта (см. 5.3.30), 3 см3 изобутилового спирта (см. 5.3.31), 4 см3 этилового ректификованного технического спирта (см. 5.3.29), 4 см3 водного аммиака (см. 5.3.32). Колбу закрывают стеклянной пробкой (см. 5.3.14) и тщательно перемешивают.

5.4.2.2 Приготовление элюента 2

В коническую колбу вместимостью 50 см3 вносят пипетками, индивидуальными для каждого реактива, 3 см3 пиридина, 3 см3 изоамилового спирта, 3 см3 изобутилового спирта, 4 см3 этилового ректификованного технического спирта, 8 см3 водного аммиака. Колбу закрывают стеклянной пробкой и тщательно перемешивают.

5.4.2.3 Приготовление элюента 3

В коническую колбу вместимостью 50 см3 вносят пипетками, индивидуальными для каждого реактива, 6 см3 диэтиламина (см. 5.3.38), 5 см3 хлороформа (см. 5.3.39), 6 см3 этилового ректификованного технического спирта, 3 см3 раствора аммиака (NH_{3}) массовой концентрации 125 г/дм3, приготовленного по 5.4.1. Колбу закрывают стеклянной пробкой и тщательно перемешивают.

5.4.2.4 Приготовление элюента 4

В мерную колбу (см. 5.3.12) с пришлифованной пробкой вместимостью 100 см3 пипеткой вносят 5 см3 водного аммиака (см. 5.3.32) и доводят объем раствора до метки метанолом (см. 5.3.34). Колбу закрывают пробкой и тщательно перемешивают.

Элюенты (проявители) готовят за 1 ч до начала анализа.

5.5 Подготовка к анализу

5.5.1 Приготовление КО стандартных красителей

5.5.1.1. В необходимое число стаканов (см. 5.3.11) вместимостью 50 см3 каждый взвешивают на весах (см. 5.3.1) образцы стандартных красителей с записью результата до четвертого десятичного знака.

Массу образца стандартного красителя m, г, рассчитывают с учетом массовой доли основного красящего вещества в образце по формуле

где 0,25 — масса основного красящего вещества, содержащегося в образце стандартного красителя, г;

100 — коэффициент пересчета;

X — массовая доля основного красящего вещества в образце стандартного красителя, %.

Массовую долю основного красящего вещества X в образце стандартного красителя определяют в соответствии с Приложением Б.

5.5.1.2. В каждый стакан с образцом стандартного красителя, приготовленного по 5.5.1.1, прибавляют 20 см3 дистиллированной воды и перемешивают стеклянной палочкой (см. 5.3.18) до полного растворения. Для интенсификации растворения допускается нагревание раствора в стакане на водяной бане до температуры не более 90 °C. Затем раствор охлаждают до температуры 20 °C, переносят в мерную колбу (с пришлифованной пробкой) вместимостью 100 см3, доводят объем раствора в колбе до метки дистиллированной водой, закрывают колбу пробкой и тщательно перемешивают.

5.5.1.3. Полученный раствор КО стандартного красителя имеет массовую концентрацию основного красящего вещества C_{\text{КО}} , г/дм3, определяемую по формуле

где 0,25 — масса основного красящего вещества, содержащегося в образце стандартного красителя, г;

V_{\text{КО}} — объем раствора КО стандартного красителя, см3 (V_{\text{КО}} = 100\text{см}^{3}) ;

10^{- 3} — коэффициент пересчета см3 в дм3.

Раствор КО стандартного красителя хранят в склянке из темного стекла с завинчивающейся пробкой при комнатной температуре.

Срок хранения КО стандартных красителей — 6 мес.

5.5.2 Извлечение красителей из анализируемой алкогольной продукции

5.5.2.1 Извлечение красителей методом твердофазной экстракции

а) Приготовление анализируемого раствора алкогольной продукции

В стакане вместимостью 50 см3 взвешивают на весах 25 г анализируемой алкогольной продукции (см. раздел 3) с точностью +/- 0,1 г. Затем пипеткой (см. 5.3.9) в стакан добавляют 1 см3 ледяной уксусной кислоты (см. 5.3.28). Стакан помещают на водяную баню, предварительно нагретую до температуры (85 +/- 5) °C, и выдерживают в течение 5 — 6 мин.

б) Подготовка патрона для твердофазной экстракции

Медицинским шприцем (см. 5.3.7) набирают 10 — 20 см3 дистиллированной воды, соединяют шприц с патроном для твердофазной экстракции (см. 5.3.4), заполненным сорбентом [оксидом алюминия (см. 5.3.33)]. Патрон промывают со скоростью от 10 до 20 капель дистиллированной воды в минуту. Объем пропускаемой через патрон дистиллированной воды должен быть не менее 30 см3. После этого патрон промывают один раз 25 см3 раствора ледяной уксусной кислоты массовой концентрации 10 г/дм3 (см. 5.3.28). Затем патрон отсоединяют от шприца.

в) Сорбция красителей из анализируемой алкогольной продукции

Медицинским шприцем набирают от 10 до 20 см3 анализируемого раствора алкогольной продукции, подготовленного по перечислению а) 5.5.2.1, и соединяют шприц с патроном. Пропускают анализируемый раствор через патрон по одной капле со скоростью от 10 до 20 капель в минуту. При появлении на выходе из патрона окрашенного анализируемого раствора его пропускают через второй патрон. При необходимости используют от 1 до 5 патронов, подготовленных по 5.5.2.1 б), до достижения полноты сорбции красителя. После этого промывают каждый патрон с сорбированным синтетическим красителем 25 см3 раствора ледяной уксусной кислоты массовой концентрации 10 г/дм3.

г) Десорбция красителей из патронов водным аммиаком

Медицинским шприцем набирают от 10 до 20 см3 водного аммиака (см. 5.3.32) и соединяют шприц с патроном. Пропускают водный аммиак через патрон по одной капле со скоростью от 10 до 20 капель в минуту. При необходимости промывание патрона водным аммиаком повторяют до полного обесцвечивания сорбента (оксида алюминия) в патроне. Элюат (раствор водного аммиака, пропущенный через патрон) собирают в выпарную чашку (см. 5.3.16) и выпаривают досуха на водяной бане с температурой (85 +/- 5) °C. После этого чашку с сухим остатком (красителем) охлаждают. Охлажденный краситель растворяют в чашке от 0,5 до 1,0 см3 с дистиллированной водой.

5.5.2.2 Извлечение красителей методом колоночной хроматографии

а) Подготовка хроматографической колонки

В стакане (см. 5.3.11) вместимостью 400 см3 взвешивают на весах 20 г целлюлозы с точностью +/- 0,1 г. Затем в стакан прибавляют 200 см3 раствора сульфата аммония (см. 5.3.37) и взбалтывают. Дают смеси отстояться и декантируют жидкость (сливают с отстоявшегося осадка). Повторяют промывание целлюлозы с декантацией жидкости от 3 до 5 раз. В стакан с промытой целлюлозой добавляют 100 см3 раствора сульфата аммония и переносят суспензию в хроматографическую колонку (см. 5.3.17). После прохождения жидкости содержимое колонки промывают вторично 100 см3 раствора сульфата аммония.

б) Сорбция красителей из анализируемой алкогольной продукции

В стакане вместимостью 50 см3 взвешивают на весах 25 г анализируемой алкогольной продукции с точностью +/- 0,1 г. Пробу анализируемой алкогольной продукции переносят в хроматографическую колонку порциями по 5 см3 и пропускают через нее со скоростью 2 см3/мин.

в) Десорбция красителей

После прохождения пробы анализируемой алкогольной продукции через хроматографическую колонку по перечислению б) 5.5.2.2, в колонку вносят порциями по 5 см3 элюент 4, приготовленный по 5.4.2.4. Элюент 4 пропускают через колонку со скоростью 2 см3/мин до полного обесцвечивания целлюлозы. Элюат (раствор элюента 4, пропущенный через хроматографическую колонку) собирают в коническую колбу с пришлифованной пробкой вместимостью 250 см3. Элюат переносят в чашку и выпаривают досуха на водяной бане с температурой (85 +/- 5) °C. После этого чашку с сухим остатком (красителем) охлаждают. Охлажденный краситель растворяют в чашке от 0,5 до 1,0 см3 дистиллированной воды.

5.5.3 Подготовка хроматографической камеры

В хроматографическую камеру (см. 5.3.6) вносят элюент 1, приготовленный по 5.4.2.1, в количестве, необходимом для погружения хроматографической пластины в камере на глубину не более 0,5 см от нижнего края пластины. Камеру плотно закрывают.

5.5.4 Подготовка пластин для ТСХ анализа

На линию старта хроматографической пластины (см. 5.3.5), расположенную на расстоянии 1 см от края пластины, карандашом наносят точки с интервалом не менее 1 см.

5.5.5 Получение хроматографических карт реперов КО стандартных красителей

На пластину, подготовленную по 5.5.4, микрошприцем (см. 5.3.8) наносят на линию старта в несколько приемов с промежуточным подсушиванием на воздухе 0,3 мм3 каждого раствора репера КО стандартных красителей, полученных по 5.5.1. После нанесения раствора пластину подсушивают в течение 3 — 4 мин и затем пинцетом по ГОСТ 21241 погружают в раствор элюента 1 на глубину не более 0,5 см от нижнего края пластины под углом примерно 45°. Камеру плотно закрывают. Элюирование заканчивают при достижении элюентом 1 линии границы элюента. По окончании элюирования пластину вынимают и подсушивают.

Аналогично получают хроматографические карты с использованием элюентов 2 и 3.

Значения R_{f} реперов стандартных красителей рассчитывают по формуле

где l_{k} — расстояние до линии старта от центра пятна репера стандартного красителя, см;

l_{\text{э}} — расстояние до линии старта от линии границы элюента, см.

5.6 Проведение анализа

5.6.1 Предварительная оценка состава красителя анализируемой алкогольной продукции

Пластину, подготовленную по 5.5.4, разрезают ножницами на две части на расстоянии от 3,0 до 3,5 см от боковой стороны пластины перпендикулярно к линии старта.

На линию старта подготовленной хроматографической пластины шириной от 3,0 до 3,5 см микрошприцем (см. 5.3.8) наносят от 0,3 до 1,0 мм3 раствора, полученного по 5.5.2.1 или 5.5.2.2. Пластину подсушивают в течение 3 — 4 мин и затем пинцетом (см. 5.3.25) погружают в раствор элюента 1 на глубину не более 0,5 см от нижнего края пластины под углом примерно 45°. Камеру плотно закрывают. Элюирование заканчивают при достижении элюентом линии границы элюента 7,0 см от линии старта. По окончании элюирования пластину вынимают и подсушивают.

Предварительную идентификацию анализируемого красителя проводят на основе визуальной оценки цвета пятен и сравнением значений R\prime_{f} анализируемых красителей, рассчитанных по формуле (9), со значениями R_{f} стандартных красителей, рассчитанных по формуле (4) и приведенных в таблице 1, или с помощью хроматографических карт, полученных при предварительном хроматографировании растворов КО стандартных красителей.

5.6.2 Приготовление КО смесевых стандартных красителей

5.6.2.1. КО смесевых стандартных красителей готовят с учетом предварительной оценки состава красителей по 5.6.1.

Примечание. На силикагелевых пластинах синие, фиолетовые и красные красители идентифицируются намного лучше желтых и оранжевых.

5.6.2.2 Приготовление раствора А

В мерную колбу (с пришлифованной пробкой) вместимостью 500 см3 пипеткой вносят по 50 см3 КО стандартных красителей по 5.5.1.2, присутствие которых наиболее вероятно в анализируемой алкогольной продукции, доводят объем раствора в колбе до метки дистиллированной водой, закрывают колбу пробкой и тщательно перемешивают.

Массовую концентрацию каждого компонента полученного раствора А C_{k} , г/дм3, определяют по формуле

C_{k} = 0,25, (6)

где 0,125 — количество основного красящего вещества индивидуального стандартного красителя, содержащегося в 50 см3 КО, приготовленного по 5.5.1.3, г;

V — объем раствора КО смесевых стандартных красителей, см3 (V = 500 см3);

10^{- 3} — коэффициент пересчета см3 в дм3.

5.6.2.3 Приготовление раствора Б

Пипеткой (см. 5.3.9) отбирают 25 см3 раствора А, приготовленного по 5.6.2.2, и переносят в мерную колбу с пришлифованной пробкой вместимостью 50 см3. Доводят объем раствора в колбе до метки дистиллированной водой, закрывают колбу пробкой и тщательно перемешивают.

Массовую концентрацию каждого компонента полученного раствора Б C_{k1} , г/дм3, определяют по формуле

где C_{k} — массовая концентрация красителя в растворе А по 5.6.2.2, г/дм3;

2 — коэффициент разведения.

5.6.2.4 Приготовление раствора В

Пипеткой отбирают 25 см3 раствора Б, приготовленного по 5.6.2.3, и переносят в мерную колбу с пришлифованной пробкой вместимостью 50 см3. Доводят объем раствора в колбе до метки дистиллированной водой, колбу закрывают пробкой и тщательно перемешивают.

Массовую концентрацию каждого компонента полученного раствора В C_{k2} , г/дм3, определяют по формуле

где C_{k1} — массовая концентрация красителя в растворе Б по 5.6.2.3, г/дм3;

2 — коэффициент разведения.

Полученные растворы Б и В используют в качестве реперов (свидетелей).

5.6.3 Идентификация красителя

На хроматографическую пластину, подготовленную по 5.5.4, шириной от 6,5 до 7,0 см, микрошприцем наносят от 0,3 до 1,0 мм3 растворов реперов (раствор Б и раствор В) и анализируемого раствора красителя по 5.5.2.1 или 5.5.2.2. Все растворы наносят на пластину в одинаковой пропорции. Пластину подсушивают в течение 3 — 4 мин и пинцетом помещают в хроматографическую камеру, заполненную элюентом. Элюент выбирают в соответствии с 5.6.1 и таблицей 1. Камеру плотно закрывают. Элюирование заканчивают при достижении границы элюента — высоты 7,0 см от линии старта. По окончании элюирования хроматографическую пластину вынимают и подсушивают.

5.6.4 Обработка результатов

Измеряют линейкой (см. 5.3.23) расстояние от центра каждого пятна анализируемого красителя и границы элюента до линии старта.

Вычисляют значение R\prime_{f} по формуле

где l_{k} — расстояние до линии старта от центра пятна красителя, см;

l_{\text{э}} — расстояние до линии старта от границы элюента (проявителя), см.

При совпадении цвета и положения хотя бы одного из пятен обнаруженных красителей с одним из пятен КО идентифицируют обнаруженные красители, сравнивая значения R\prime_{f} , рассчитанные по формуле (9), со значениями R_{f} КО, рассчитанными по формуле (4) и приведенными в таблице 1.

6. Денситометрический метод количественного определения красителей в тонком слое сорбента

Метод предназначен для количественного определения в алкогольной продукции синтетических красителей (основных красящих веществ): тартразина E102, желтого хинолинового E104, желтого «Солнечный закат» E110, азорубина E122, амаранта E123, понсо 4R E124, эритрозина E127, красного 2G E128, красного очаровательного AC E129, синего патентованного V E131, синего блестящего FCF E133, зеленого прочного FCF E143, черного блестящего PN E151.

6.1 Сущность метода

Метод основан на сорбции красителей из анализируемой алкогольной продукции твердыми сорбентами, десорбции аммиаком, удалении аммиака выпариванием, хроматографировании в тонком слое сорбента и определении массовой доли красителей методом количественной оптической денситометрии.

В качестве реперов (свидетелей) используют КО стандартных красителей (растворы Б и В) по 5.6.2.

6.2 Условия проведения анализа

При подготовке и проведении измерения должны быть соблюдены следующие условия:

Помещение, где проводят работы с реактивами, должно быть обеспечено приточно-вытяжной вентиляцией.

Все операции с реактивами следует проводить в вытяжном шкафу.

6.3 Средства измерений, вспомогательное оборудование, посуда, реактивы и материалы

Для выполнения анализа используют средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы и материалы по 5.3, за исключением стандартных красителей Желтый 2G, Индигокармин и Зеленый S (см. Приложение А), а также:

• оптический денситометр, работающий в диапазоне длин волн от 400 до 800 нм, с чувствительностью по каждому измеряемому красителю в алкогольной продукции не ниже 0,012‰ (0,0012%);
• детектор — черно-белая малогабаритная видеокамера или аналогичная цветная с чувствительностью не хуже 0,02 лк, с ручной фокусировкой и ручной регулировкой диафрагмы либо цветной сканер разрешением от 200 dpi и выше с графическим интерфейсом, функциями управления сканером, связи и передачи данных в программное приложение компьютера;
• компьютер с операционной системой, совместимой с программным обеспечением сканера и специальным программным обеспечением по обработке тонкослойных хроматограмм;
• блок ввода изображения.

Допускается применение других средств измерений и вспомогательного оборудования, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам и обеспечивающих необходимую точность измерения.

6.4 Приготовление реактивов

Приготовление реактивов — по 5.4.

6.5 Подготовка к анализу

Подготовка к анализу — по 5.5.

6.6 Проведение анализа

6.6.1. Предварительная оценка состава исследуемого красителя — по 5.6.1.

6.6.2. Приготовление КО смесевых стандартных красителей — по 5.6.2.

6.6.3 Определение состава красителя — по 5.6.3.

6.6.4 Проведение измерений

Определение значений R_{f} , R\prime_{f} и массовых долей красителей проводят на денситометре.

Массу каждого красителя в пятне репера (свидетеля) КО смесевого стандартного красителя, полученном нанесением на пластину раствора Б, m_{\text{Б}} , мкг, рассчитывают по формуле

где C_{k1} — массовая концентрация каждого красителя в растворе репера Б (свидетеля) смесевого стандартного красителя по 5.6.2.3, мкг/мм3;

V_{\text{Б}} — объем раствора репера Б (свидетеля) смесевого красителя, нанесенного на пластину ТСХ по 5.6.3, мм3.

Массу каждого красителя в пятне репера (свидетеля) КО смесевого стандартного красителя, полученном нанесением на пластину раствора В, m_{\text{В}} , мкг, рассчитывают по формуле

где C_{k2} — массовая концентрация каждого красителя раствора репера В (свидетеля) смесевого стандартного красителя по 5.6.2.4, мкг/мм3;

V_{\text{В}} — объем раствора репера В (свидетеля) смесевого красителя, нанесенного на пластину ТСХ по 5.6.3, мм3.

Значения массы каждого красителя в пятне репера (свидетеля) КО смесевого стандартного красителя вводят в программу компьютерной обработки, а массу анализируемого красителя обозначают X.

Получают результат измерения — массу анализируемого красителя, нанесенного на пластину, в мкг.

В случае если массовая доля красителя в анализируемом растворе превысит диапазон измерения от 0,0012% до 0,0250%, необходимо разбавить раствор до концентрации, соответствующей указанному диапазону, и значение массовой доли красителя, рассчитанной по формуле (12), умножить на коэффициент разбавления.

Пример количественного определения красителя приведен в Приложении В.

6.7 Обработка результатов

Массовую долю красителя в анализируемой алкогольной продукции C_{1} , %, рассчитывают по формуле

C_{1} = \frac{M_{\text{вых}}V_{1}}{250V_{2}} , (13)

где M_{\text{вых}} — количество анализируемого красителя в пятне пластины ТСХ (выходной сигнал денситометра), мкг;

10^{- 6} — коэффициент пересчета, мкг в г;

V_{1} — объем анализируемого раствора красителя, полученного по перечислению г) 5.5.2.1 или перечислению в) 5.5.2.2, см3;

V_{2} — объем анализируемого раствора красителя, нанесенного на пластину ТСХ по 5.6.3, мм3;

10^{- 3} — коэффициент пересчета мм3 в см3;

m_{1} — масса пробы анализируемой алкогольной продукции, взятой для анализа по перечислению а) 5.5.2.1 или перечислению б) 5.5.2.2, г (m_{1} = 25\text{г}) ;

100 — коэффициент пересчета, %.

Вычисления проводят с записью результата до пятого десятичного знака.

Окончательный результат записывают с точностью до четвертого десятичного знака.

6.7.2. За окончательный результат определения принимают среднеарифметическое значение двух параллельных определений C_{\text{ср}} , %, если выполняется условие приемлемости

где C_{11} , C_{12} — результаты анализов двух параллельных измерений массовой доли красителя, выполненных в условиях повторяемости, %;

C_{\text{ср}} — среднее значение двух параллельных измерений массовой доли красителя, выполненных в условиях повторяемости, %;

r — значение предела повторяемости, %, приведенное в таблице 2.

Результат анализа представляют в виде

где C_{\text{ср}} — среднеарифметическое значение результатов двух определений, признанных приемлемыми, %;

\delta — границы относительной погрешности измерений, %.

Предел повторяемости r и воспроизводимости R, а также показатель точности \delta измерений массовой доли красителя в алкогольной продукции приведены в таблице 2.

7. Спектрофотометрический метод количественного определения красителей

Метод предназначен для количественного определения в алкогольной продукции индивидуальных красителей (основных красящих веществ) в соответствии с таблицей 3 и смесевых красителей, в состав которых входят два индивидуальных красителя, максимумы светопоглощения которых находятся в диапазонах длин волн 400 — 450 нм и 590 — 640 нм.

7.1 Сущность метода

Метод основан на сорбции красителей из анализируемой алкогольной продукции твердыми сорбентами, десорбции аммиаком, удалении аммиака выпариванием и определении массовой доли красителей по интенсивности окраски полученного раствора методом спектрофотометрии при характеристической длине волны.

7.2 Условия анализа

Подготовка и проведение анализа — в соответствии с 5.2.

7.3 Средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы и материалы

Для проведения анализа используют средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы и материалы по 5.3, а также:

• спектрофотометр с диапазоном измерения в интервале длин волн от 210 до 700 нм допустимой абсолютной погрешностью коэффициента пропускания не более 1%, спектральной шириной не более 1 нм;
• кюветы кварцевые толщиной поглощающего слоя 1 см.

7.4 Подготовка к анализу

Извлеченный по 5.5.2 из анализируемой алкогольной продукции раствор красителя переносят количественно в мерную колбу с пришлифованной пробкой вместимостью 25 см3. Доводят объем раствора в колбе до метки дистиллированной водой, закрывают колбу пробкой и перемешивают переворачиванием.

7.5 Проведение анализа

Кювету спектрофотометра заполняют приготовленным по 7.4 раствором анализируемого красителя и измеряют оптическую плотность при длине волны, соответствующей максимуму светопоглощения в соответствии с таблицей 3, относительно оптической плотности растворителя.

При совпадении максимумов светопоглощения растворов анализируемых красителей с максимумами светопоглощения красителей Желтый хинолиновый и Зеленый прочный FCF (см. таблицу 3) проводят повторный анализ извлеченного по 5.5.2 из анализируемой карамели раствора красителя, используя для его растворения растворитель в соответствии с таблицей 3.

Значения оптической плотности раствора должно находиться в диапазоне от 0,2 до 0,8. В случае превышения значения оптической плотности раствора 0,8 необходимо разбавить раствор и значение массовой доли красителя, рассчитанное по формуле (13), умножить на коэффициент разбавления.

7.6 Обработка результатов

7.6.1 Массовую долю красителя в анализируемой алкогольной продукции C_{2} , %, рассчитывают по формуле

C_{2} = \frac{10A}{E_{1\text{см}}^{1\%}} , (17)

где A — оптическая плотность анализируемого раствора по 7.4 при длине волны, указанной в таблице 3;

V_{1} — объем разведения по 7.4, см3 (V_{1} = 25\text{см}^{3}) ;

10 — коэффициент пересчета результата анализа, г/кг;

E_{1\text{см}}^{1\%} — удельный коэффициент светопоглощения, численно равный оптической плотности раствора с массовой долей красителя, равной 1%, при толщине поглощающего слоя 1 см, \%^{- 1} \cdot \text{см}^{- 1} ;

d — толщина поглощаемого слоя, см (d = 1 см);

m_{2} — масса пробы анализируемой алкогольной продукции, взятой на анализ по перечислению а) 5.5.2.1 или перечислению б) 5.5.2, г (m_{2} = 25\text{г}) .

Вычисления проводят с записью результата до пятого десятичного знака.

Окончательный результат записывают с точностью до четвертого десятичного знака.

7.6.2. За окончательный результат определения принимают среднеарифметическое значение C_{\text{ср}} , %, двух параллельных определений, если выполняется условие приемлемости

где C_{21} , C_{22} — результаты анализов двух параллельных измерений массовой доли красителя, %;

C_{\text{ср}} — среднее значение двух параллельных измерений массовой доли красителя, %;

r — значение предела повторяемости, приведенное в таблице 4.

7.6.3 Результат анализа представляют в виде

где C_{\text{ср}} — среднеарифметическое значение результатов двух определений, признанных приемлемыми, %;

\delta — границы относительной погрешности измерений, %.

Предел повторяемости r и воспроизводимости R, а также показатель точности \delta измерений массовой доли красителя в алкогольной продукции приведены в таблице 4.

8. Определение массовой доли красителей методом зонального капиллярного электрофореза

Метод предназначен для количественного определения в алкогольной продукции синтетических красителей (основных красящих веществ) в соответствии с таблицей 5.

8.1 Сущность метода

Метод капиллярного электрофореза для определения массовой доли пищевых красителей основан на разделении компонентов в кварцевом капилляре под действием приложенного электрического поля. Капиллярный зональный электрофорез (английское сокращение CZE образовано от слов capillary zone electrophoresis) является простейшим видом капиллярного электрофореза, когда разделение обеспечивается за счет миграции растворенных веществ в зонах, движущихся с разной скоростью, и электроосмотического потока.

Идентификацию и количественное определение анализируемых красителей проводят, регистрируя поглощение при длинах волн 254, 450, 520 и 599 нм (а также снятием спектра в диапазоне от 200 до 600 нм) и времена миграции красителей.

В капиллярном электрофорезе разделение проводят с использованием кварцевых капилляров, имеющих внешнее полимерное покрытие, обычно полиимидное, улучшающее их механическую прочность, и значительно реже полимерные капилляры, например из тефлона. Внутренний диаметр капилляров колеблется в пределах от 25 до 200 микрон, а длина капилляра в зависимости от поставленной задачи — от нескольких сантиметров до 1 м.

Диапазон определяемой массовой доли (содержания) с учетом разбавления от 1 до 100\text{млн}^{- 1} (мг/кг).

8.2 Средства измерений, вспомогательное оборудование, посуда и реактивы

Весы по нормативным документам, действующим на территории государств, принявших стандарт, со значением среднего квадратического отклонения (СКО), не превышающим 0,3 мг, и погрешностью от нелинейности не более +/- 0,6 мг.

Весы по нормативным документам, действующим на территории государств, принявших стандарт, с пределами допускаемой абсолютной погрешности не более +/- 0,01 г.

Система капиллярного электрофореза с диодно-матричным детектором кварцевым капилляром L_{\text{эфф}}/L_{\text{общ}} = 56/64\text{см} , ID = 50 мкм. Детектирование проводят на длинах волн 254, 450, 520 и 599 нм.

Технические характеристики системы капиллярного электрофореза: диапазон напряжений: от 0 до +30 кВ, значение тока: от 0 до 300 мкА, значение мощности: от 0 до 6 Вт, гидродинамическое введение образца, регистрация детектором с диодной матрицей в диапазоне длин волн от 190 до 600 нм (с шагом 1 нм); продолжительность периода сканирования: 0,1 с, автоматический пробоотборник, термостатирование капилляра: от температуры на 10 °C ниже комнатной до 60 °C (шаг указания температуры: 0,1 °C).

Спектрофотометр, позволяющий измерять оптическую плотность раствора, с диапазоном измерения длин волн от 400 до 700 нм.

УЗ-ванна с частотой ультразвука 43 — 45 кГц, рабочее время сессии 99 с, мощность 90 Вт.

Центрифуга с ротором для пробирок из полимерных материалов вместимостью 1,5 см3 с частотой вращения не менее 14680 об/мин (20000g).

Шейкер с рабочим диапазоном оборотов 50 — 350 об/мин (шаг 10 об/мин) и таймером от 1 мин до 96 ч.

pH-метр с диапазоном измерений -1,99... +19,99, пределом погрешности измерения pH не более +/- 0,1.

Кювета кварцевая, длина оптического пути 1 см.

Пипетки градуированные вместимостью 0,5; 1,0; 2,0; 5,0; 10,0 см3 по ГОСТ 29227.

Колбы мерные 2-250-2, 2-100-2, 2-50-2, 2-25-2 по ГОСТ 1770.

Стаканы химические по ГОСТ 25336 объемом 100 см3.

Цилиндры мерные лабораторные с носиком, 2-го класса точности, объемом 25 см3 по ГОСТ 1770.

Пробирки центрифужные одноразовые из полимерных материалов вместимостью 1,5 см3.

Флаконы (виалы), соответствующие пробоотборнику (автосэмплеру) прибора.

Мембранный фильтр целлюлозный диаметром 47 мм, размер пор 0,45 мкм.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Калий фосфорнокислый однозамещенный по ГОСТ 4198, ч.д.а.

Натрий углекислый по ГОСТ 83, ч.д.а.

Натрия гидроокись по ГОСТ 4328, ч.д.а.

Ацетонитрил, ос.ч.

Красители стандартные в соответствии с Приложением А, за исключением стандартных красителей Амарант, Желтый 2G, Зеленый S, Зеленый прочный FCF.

Допускается применение других реактивов и средств измерения с характеристиками не хуже указанных.

8.3 Приготовление градуировочных растворов

8.3.1 Приготовление исходных растворов красителей

В необходимое число стеклянных стаканов отбирают по 0,1 г стандартных образцов красителей, взвешенных с точностью до 0,001 г. В каждый стакан прибавляют около 50 см3 дистиллированной воды и перемешивают до полного растворения образцов, при необходимости подвергая ультразвуковому воздействию в УЗ-ванне. Полученные растворы количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3, доводят объем раствора в колбе до метки дистиллированной водой, закрывают колбу пробкой и тщательно перемешивают. Массовую долю полученных исходных растворов красителей определяют спектрофотометрическим методом в соответствии с Приложением Б.

8.3.2 Приготовление градуировочных растворов красителей

Градуировочные растворы с массовой долей на уровне 0,005; 0,01; 0,02 и 0,05 г/дм3 (точное содержание зависит от определенной концентрации красителя в исходном растворе) готовят из исходных растворов красителей. Для этого в мерные колбы вместимостью 100 см3 вносят по 0,5; 1,0; 2,0 и 5,0 см3 исходного раствора и доводят объем до метки дистиллированной водой. Колбы укупоривают пробками и тщательно перемешивают.

Срок хранения исходных градуировочных растворов при температуре от 6 °C до 22 °C не более 1 мес. Срок хранения градуировочных растворов при температуре от 2 °C до 6 °C не более 3 мес.

8.4 Подготовка проб

1 г исследуемого образца помещают в мерную колбу вместимостью 100 см3, доводят объем до метки дистиллированной водой. Колбу укупоривают пробкой и тщательно перемешивают. В случае исследования сильногазированных напитков предварительно проводят дегазирование образца в УЗ-ванне.

Полученные пробы исследуют в течение суток.

8.5 Приготовление растворов гидроокиси натрия

8.5.1 Приготовление концентрированного раствора

Гидроокись натрия массой 4,0 г помещают в стеклянный стакан, добавляют около 50 см3 дистиллированной воды и перемешивают до полного растворения. Полученный раствор количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3, доводят объем до метки дистиллированной водой. Колбу укупоривают пробкой и тщательно перемешивают.

8.5.2 Приготовление разбавленного раствора

Гидроокись натрия массой 0,40 г помещают в стеклянный стакан, добавляют около 50 см3 дистиллированной воды и перемешивают до полного растворения. Полученный раствор количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3, доводят объем до метки дистиллированной водой. Колбу укупоривают пробкой и тщательно перемешивают.

Полученные растворы фильтруют через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

Срок хранения раствора при температуре от 2 °C до 6 °C не более 1 мес.

8.6 Приготовление буферного раствора

Фосфорнокислый однозамещенный калий массой 0,136 г и углекислый натрий массой 0,106 г помещают в стеклянный стакан, затем добавляют 50 см3 дистиллированной воды и перемешивают до полного растворения, при необходимости озвучивая в УЗ-ванне. Затем концентрированным раствором гидроокиси натрия доводят значение pH буферного раствора до 10,0 ед. pH (контроль по pH-метру). В случае нагрева растворов их охлаждают до комнатной температуры. Полученный раствор количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3. После этого мерным цилиндром в колбу добавляют 20 см3 ацетонитрила, перемешивают и доводят объем до метки дистиллированной водой, колбу укупоривают пробкой и перемешивают. При наблюдении явления контракции объем снова доводят до метки дистиллированной водой и повторно перемешивают.

Полученный буферный раствор фильтруют через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

Срок хранения буферного раствора при температуре от 2 °C до 6 °C не более 1 мес.

Перед анализом буферный раствор переносят в соответствующие флаконы (виалы).

8.7 Подготовка прибора

Прибор подготавливают к работе в соответствии с руководством (инструкцией) по эксплуатации и устанавливают следующие рабочие параметры:

• дозирование пробы — гидродинамическое при 30 мбар в течение 10 с;
• напряжение: 0 мин — 0 кВ, далее с 0 мин до 1,0 мин напряжение поднимают до 20 кВ, от 1,0 мин до 1,5 мин напряжение поднимают до 30 кВ;
• кварцевый капилляр общей длиной 64 см, расстояние до детектора (эффективная длина) 56 см, внутренний диаметр 50 мкм.

Термостатирование капилляра при температуре 25 °C.

Детектирование: аналитические длины волн с шириной окна 20 нм: 254, 450, 520 и 590 нм (см. таблицу 5), снятие спектра в диапазоне от 200 до 600 нм; аналитическая длина волны используется для градуировки и количественного определения.

Время анализа 25 мин.

Перед началом работы капилляр в течение 5 мин промывают концентрированным раствором гидроокиси натрия, затем в течение 10 мин дистиллированной водой и буферным раствором в течение 5 мин.

Между анализами капилляр в течение 3 мин промывают дистиллированной водой, затем 2 мин разбавленным раствором гидроокиси натрия, снова дистиллированной водой в течение 3 мин и в конце в течение 1 мин буферным раствором.

Первое измерение, проведенное на новой порции буфера, отбрасывают. Содержимое одного флакона (виалы) с буферным раствором рекомендуется использовать для выполнения не более 5 измерений.

8.8 Градуировка прибора

По 1 см3 приготовленных градуировочных растворов помещают в центрифужную одноразовую пробирку и центрифугируют 2 мин. Не менее 0,5 см3 супернатанта переносят в виалу и устанавливают в лоток прибора, после чего проводят измерение.

На основании полученных данных строят градуировочный график и определяют формулу, описывающую его (например, методом наименьших квадратов). Также определяют коэффициент корреляции: градуировка признается удовлетворительной, если коэффициент корреляции, рассчитанный программой, будет не менее 0,99.

Допускается проведение расчетов по градуировке автоматически с помощью программного обеспечения прибора.

8.9 Проведение анализа

1 см3 приготовленного раствора образца помещают в пробирку центрифужную и центрифугируют 2 мин при 20000g. Не менее 0,5 см3 супернатанта переносят в виалу и устанавливают в лоток прибора, после чего проводят измерение.

При проведении определения следует ориентироваться на аналитические длины волн и времена миграции, приведенные в таблице 5.

8.10 Обработка и оформление результатов измерений

Идентификация красителей осуществляется исходя из сравнения времен миграции и спектров анализируемых образцов со стандартными растворами пищевых красителей. Таким образом, в случае наблюдения пика вещества или пиков веществ в зоне выхода соответствующих красителей необходимо предварительно сравнить спектр каждого пика с предполагаемым красителем и после установления тождественности этих двух спектров проводить количественное определение. Следует отметить, что совпадение спектров красителей имеет приоритет перед временем миграции и является определяющим при установлении вида красителя в образце. В случае несовпадения времени миграции, но тождественности спектров, пик принимают за соответствующий краситель.

Концентрацию красителя в пробе определяют согласно градуировочному графику.

Массовую долю (содержание) соответствующих красителей X, \text{млн}^{- 1} (мг/кг), в исследуемом образце вычисляют по формуле

где C — массовая доля красителя, найденная по градуировочной таблице или с помощью внешнего стандарта, мг/см3;

V — объем мерной колбы, см3;

1000 — коэффициент пересчета;

m — масса образца по 8.4, г.

За окончательный результат определения принимают среднеарифметическое значение X_{\text{ср}} , \text{млн}^{- 1} (мг/кг), двух параллельных определений массовой концентрации красителя, полученных в условиях повторяемости, если выполняется условие приемлемости

где X_{1} , X_{2} — результаты двух параллельных измерений массовой доли (содержания) красителя в образце, \text{млн}^{- 1} (мг/кг);

X_{\text{ср}} — среднее значение двух параллельных измерений массовой доли (содержания) красителя в пробе, \text{млн}^{- 1} (мг/кг);

r — значение предела повторяемости, %.

Результаты анализа представляют в виде

где X_{\text{ср}} — среднеарифметическое значение двух определений массовой доли (содержания) красителя в пробе, \text{млн}^{- 1} (мг/кг), признанных приемлемыми;

\Delta — границы абсолютной погрешности определения, \text{млн}^{- 1} (мг/кг), при доверительной вероятности P = 0,95.

Границы абсолютной погрешности \Delta вычисляют по формуле

где \delta — границы относительной погрешности измерения, %;

X — среднеарифметическое значение двух определений массовой доли (содержания) красителей в исследуемой пробе, \text{млн}^{- 1} (мг/кг).

Показатели прецизионности метода определены в соответствии с ГОСТ ИСО 5725-2 и представлены в таблице 6.

А.1. Стандартные красители и их характеристики приведены в таблице А.1.

Метод предназначен для определения массовой доли основного красящего вещества в стандартных красителях.

Б.1. Сущность метода

Метод основан на определении массовой доли основного красящего вещества по интенсивности окраски полученного раствора методом спектрофотометрии при характеристической длине волны.

Б.2. Условия анализа

При подготовке и проведении анализа должны быть соблюдены следующие условия:

Помещение, где проводят работы с реактивами, должно быть обеспечено приточно-вытяжной вентиляцией.

Все операции с реактивами следует проводить в вытяжном шкафу.

Б.3. Средства измерений, вспомогательное оборудование, посуда, реактивы и материалы

Спектрофотометр с диапазоном измерения в диапазоне длин волн от 210 до 700 нм, допустимой абсолютной погрешностью коэффициента пропускания не более 1%, спектральной шириной не более 1 нм.

Весы по нормативным, действующим на территории государств, принявших стандарт, со значением СКО, не превышающим 0,03 мг, и погрешностью от нелинейности не более +/- 0,06 мг.

Кюветы кварцевые толщиной поглощающего слоя 1 см.

Пипетка градуированная по ГОСТ 29227 вместимостью 10 см3 1-го класса точности.

Колба мерная с пришлифованной пробкой по ГОСТ 1770 вместимостью 100 см3 1-го класса точности.

Стаканчик СВ-14/8 по ГОСТ 25336.

Стакан термостойкий по ГОСТ 25336 вместимостью 50 см3.

Баня водяная.

Электроплитка бытовая по ГОСТ 14919.

Силикагель по ГОСТ 3956.

Красители стандартные в соответствии с Приложением А.

Шкаф сушильный с диапазоном температур в рабочей камере от 40 °C до 200 °C и основной погрешностью стабилизации температуры +/- 1 °C.

Эксикатор по ГОСТ 25336.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Допускается применение других средств измерений, материалов и реактивов, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам и обеспечивающих необходимую точность анализа.

Б.4. Подготовка к анализу

Б.4.1. Подготовка стандартных красителей

В необходимом числе стаканчиков типа СВ с конусом 14/8 по ГОСТ 25336 взвешивают на лабораторных весах образцы стандартных красителей массой от 0,2 г до 0,5 г, с записью результата взвешивания до четвертого десятичного знака и доводят до постоянной массы высушиванием при температуре 105 °C в сушильном шкафу. Образцы подготовленных стандартных красителей хранят в эксикаторе с силикагелем.

Готовят образцы стандартных красителей для приготовления растворов не позднее чем за 1 ч до начала анализа.

Б.4.2. Приготовление КО стандартных красителей

В стакане по ГОСТ 25336 вместимостью 50 см3 взвешивают на весах 0,01 г подготовленного по Б.4.1 образца стандартного красителя с записью результата до четвертого десятичного знака. Растворяют образец в небольшом количестве растворителя в соответствии с таблицей 3 и количественно переносят в мерную колбу с пришлифованной пробкой вместимостью 100 см3. Доводят объем раствора в колбе до метки растворителем в соответствии с таблицей 3, закрывают колбу пробкой и тщательно перемешивают.

Примечание. Для интенсификации процесса растворения допускается нагревание стаканчика с растворенным красителем до температуры не более 90 °C.

Пипеткой отбирают 10 см3 КО стандартного красителя и переносят в мерную колбу с пришлифованной пробкой вместимостью 100 см3. Доводят объем раствора в колбе до метки растворителем, закрывают колбу пробкой и тщательно перемешивают.

Б.5. Проведение анализа

Дозируют приготовленный раствор в кювету спектрофотометра и измеряют оптическую плотность при длине волны, указанной в таблице 3, относительно оптической плотности растворителя.

Б.6. Обработка результатов

Массовую долю основного красящего вещества в стандартном красителе C, %, рассчитывают по формуле

C = \frac{AV_{1}V_{3}}{E_{1\text{см}}^{1\%}dmV_{2}} (Б.1)

или

где A — оптическая плотность при характеристической длине волны;

V_{1} — объем разведения, см3 (V_{1} = 100\text{см}^{3}) ;

V_{3} — объем разведения, см3 (V_{3} = 100\text{см}^{3}) ;

E_{1\text{см}}^{1\%} — удельный коэффициент светопоглощения, численно равный оптической плотности раствора с массовой долей красителя, равной 1%, при толщине поглощающего слоя 1 см, \%^{- 1} \cdot \text{см}^{- 1} ;

d — толщина поглощающего слоя, см (d = 1 см);

m — масса образца эталонного красителя, г;

V_{2} — объем раствора красителя, взятого на разведение по Б.4.2, см3 (V_{2} = 10\text{см}^{3}) .

Вычисления проводят с записью результата до пятого десятичного знака.

Окончательный результат записывают с точностью до четвертого десятичного знака.

За окончательный результат определения принимают среднеарифметическое значение C_{\text{ср}} , %, двух параллельных определений, если выполняется условие приемлемости

где C_{21} , C_{22} — результаты анализов двух параллельных измерений массовой доли красителя, %;

C_{\text{ср}} — среднее значение двух параллельных измерений массовой доли красителя, %;

r — значение предела повторяемости, %, приведенное в таблице Б.1.

Результат анализа представляют в виде

где C_{\text{ср}} — среднеарифметическое значение результатов двух определений, признанных приемлемыми, %;

\delta — границы относительной погрешности измерений, %.

Предел повторяемости r и воспроизводимости R, а также показатель точности \delta измерений массовой доли красителя в алкогольной продукции приведены в таблице Б.1.

В.1. Средства измерений и вспомогательное оборудование

Видеоденситометр, работающий в диапазоне длин волн от 400 до 800 нм, с чувствительностью по каждому измеряемому красителю в алкогольной продукции не ниже 0,012 г/дм3.

Детектор — черно-белая малогабаритная видеокамера с чувствительностью не хуже 0,02 лк, с ручной фокусировкой и ручной регулировкой диафрагмы.

Компьютер с операционной системой, совместимой с программным обеспечением сканера и специальным программным обеспечением по обработке тонкослойных хроматограмм.

Блок ввода изображения.

В.2. Приготовление реактивов

Приготовление реактивов — по 5.4.

В.3. Подготовка к анализу

Подготовка к анализу — по 5.5.

В.4. Проведение анализа

Проводят разделение смеси красителей, содержащей в качестве одного из компонентов Понсо 4R, по 5.6.1 - 5.6.3.

В.5. Обработка и оформление результатов измерений

В.5.1. Вводят данные изображения хроматограммы в компьютерную программу.

В.5.2. Редактируют изображение средствами программы, устанавливая линии старта и границы элюента (см. рисунок В.1).

В.5.3. Проводят расчет R_{f} красителя Понсо 4R.

В.5.4. Выделяют рабочую область на изображении хроматограммы для последующей обработки (см. рисунок В.2).

В.5.5. Выделяют на изображении хроматограммы границы обрабатываемых пятен красителя Понсо 4R (см. рисунок В.3).

В.5.6. Проводят измерение пятен красителя в выделенных хроматографических зонах (см. рисунок В.4).

В.5.7. По полученным данным строят калибровочный график. Массовую долю красителя Понсо 4R в смеси определяют по калибровочному графику (см. рисунок В.5). Полученные данные представляют в виде отчета.

В.5.8. Обработка и оформление результатов измерений — по 6.7.