ГОСТ 30627.5-98. Межгосударственный стандарт. Продукты молочные для детского питания. Метод измерения массовой доли витамина B1 (тиамина)
(введен в действие Постановлением Госстандарта России от 28.04.1999 № 146)
Примечание
Документ включен в Перечень международных и региональных (межгосударственных) стандартов, а в случае их отсутствия — национальных (государственных) стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимые для применения и исполнения требований технического регламента Таможенного союза «О безопасности пищевой продукции» (ТР ТС 021/2011) и осуществления оценки соответствия объектов технического регулирования (Решение Коллегии Евразийской экономической комиссии от 24.12.2019 № 236). Документ включен в Перечень международных и региональных (межгосударственных) стандартов, а в случае их отсутствия — национальных (государственных) стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимые для применения и исполнения требований технического регламента Таможенного союза «О безопасности отдельных видов специализированной пищевой продукции, в том числе диетического лечебного и диетического профилактического питания» (ТР ТС 027/2012) и осуществления оценки соответствия объектов технического регулирования (Решение Коллегии Евразийской экономической комиссии от 16.10.2018 № 168). Документ включен в Перечень стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимые для применения и исполнения требований технического регламента Таможенного союза «О безопасности молока и молочной продукции» (ТР ТС 033/2013) и осуществления оценки соответствия объектов технического регулирования (Решение Коллегии Евразийской экономической комиссии от 26.05.2014 № 80). Документ включен в Перечень стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимые для применения и исполнения требований технического регламента Таможенного союза «О безопасности отдельных видов специализированной пищевой продукции, в том числе диетического лечебного и диетического профилактического питания» (ТР ТС 027/2012) и осуществления оценки (подтверждения) соответствия продукции (Решение Коллегии Евразийской экономической комиссии от 18.10.2012 № 191). Документ включен в Перечень стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимые для применения и исполнения требований технического регламента «О безопасности пищевой продукции» (ТР ТС 021/2011) и осуществления оценки (подтверждения) соответствия продукции (Решение Комиссии Таможенного союза от 09.12.2011 № 880). Документ включен в Перечень нормативной документации, разрешенной для использования в государственных ветеринарных лабораториях при диагностике болезней животных, рыб, пчел, а также контроля безопасности сырья животного и растительного происхождения (утв. Россельхознадзором 30.07.2009 № 02-03-48/563). Документ включен в Перечень национальных стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимых для применения и исполнения Федерального закона «Технический регламент на молоко и молочную продукцию» и осуществления оценки соответствия (Распоряжение Правительства РФ от 15.12.2008 № 1866-р). С 01.07.2003 до вступления в силу технических регламентов акты федеральных органов исполнительной власти в сфере технического регулирования носят рекомендательный характер и подлежат обязательному исполнению только в части, соответствующей целям, указанным в п. 1 ст. 46 Федерального закона от 27.12.2002 № 184-ФЗ. Документ введен в действие с 01.05.2000.
Введен в действие
Постановлением Государственного
комитета Российской Федерации
по стандартизации и метрологии
от 28 апреля 1999 г. № 146
ПРОДУКТЫ МОЛОЧНЫЕ ДЛЯ ДЕТСКОГО ПИТАНИЯ
МЕТОД ИЗМЕРЕНИЯ МАССОВОЙ ДОЛИ ВИТАМИНА B_{1} (ТИАМИНА)
Infant milk products. Method for determination of mass part of vitamin B_{1} (thiamini)
Предисловие
1. Разработан МТК 186 и Научно-исследовательским институтом детского питания.
2. Принят Межгосударственным Советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол № 14 от 12 ноября 1998 г.).
3. Постановлением Государственного комитета Российской Федерации по стандартизации и метрологии от 28 апреля 1999 г. № 146 межгосударственный стандарт ГОСТ 30627.5-98 введен в действие непосредственно в качестве государственного стандарта Российской Федерации с 1 мая 2000 г.
1. Область применения
Настоящий стандарт распространяется на молочные продукты для детского питания и устанавливает флюорометрический метод измерения массовой доли витамина B_{1} (тиамин).
Метод основан на окислении витамина B_{1} в щелочной среде железосинеродистым калием с образованием сильно флюоресцирующего в ультрафиолетовом свете соединения — тиохрома, интенсивность флюоресценции которого прямо пропорциональна массовой доле витамина B_{1} .
2. Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ 199-78 Натрий уксуснокислый 3-водный. Технические условия
ГОСТ 1770-74 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Технические условия
ГОСТ 3118-77 Кислота соляная. Технические условия
ГОСТ 3145-84 Часы механические с сигнальным устройством. Общие технические условия
ГОСТ 4204-77 Кислота серная. Технические условия
ГОСТ 4206-75 Калий железосинеродистый. Технические условия
ГОСТ 4212-76 Реактивы. Приготовление растворов для колориметрического и нефелометрического анализа
ГОСТ 4328-77 Натрия гидроокись. Технические условия
ГОСТ 4919.1-77 Реактивы и особо чистые вещества. Методы приготовления растворов индикаторов.
ГОСТ 4919.2-77 Реактивы и особо чистые вещества. Методы приготовления буферных растворов
ГОСТ 5789-78 Толуол. Технические условия
ГОСТ 6006-78 Бутанол-1. Технические условия
ГОСТ 6016-77 Спирт изобутиловый. Технические условия
ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия
ГОСТ 9147-80 Посуда и оборудование лабораторные фарфоровые. Технические условия
ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия
ГОСТ 18300-87 Спирт этиловый ректификованный технический. Технические условия
ГОСТ 19881-74 Анализаторы потенциометрические для контроля pH молока и молочных продуктов. Общие технические условия
ГОСТ 24104-88 Весы лабораторные общего назначения и образцовые. Общие технические условия
ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры
ГОСТ 26809-86 Молоко и молочные продукты. Правила приемки, методы отбора и подготовки проб к анализу
ГОСТ 28498-90 Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний
ГОСТ 29227-91 Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования
3. Методы отбора проб
Отбор проб и подготовка их к измерению по ГОСТ 26809.
4. Аппаратура, материалы и реактивы
Анализатор потенциометрический диапазоном измерения от 3,5 до 8 ед. pH ценой деления шкалы 0,05 ед. pH по ГОСТ 19881.
Баня водяная с обогревом, позволяющая поддерживать температуру от 0 до 100 °C с погрешностью +/- 2 °C.
Бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026.
Весы лабораторные общего назначения 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г по ГОСТ 24104.
Весы лабораторные общего назначения 4-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 500 г по ГОСТ 24104.
Воронки стеклянные лабораторные типа В по ГОСТ 25336.
Воронки делительные номинальной вместимостью 250 см3 по ГОСТ 25336.
Колбы мерные исполнения 1 2-го класса точности номинальной вместимостью 25, 100, 500, 1000 см3 по ГОСТ 1770.
Колбы типа Кн исполнения 2 номинальной вместимостью 100, 250 см3 по ГОСТ 25336.
Пипетки исполнений 4, 5, 6, 7 2-го класса точности номинальной вместимостью 1, 2, 5, 25 см3 по ГОСТ 29227.
Секундомер [1].
Стаканы типа В исполнения 1 номинальной вместимостью 50, 600 см3 по ГОСТ 25336.
Стакан фарфоровый номинальной вместимостью 500 см3 по ГОСТ 9147.
Ступка фарфоровая с пестиком по ГОСТ 9147.
Термометр жидкостный (нертутный), диапазон измерения от 0 до 100 °C с ценой деления шкалы 1 °C по ГОСТ 28498.
Термостат, обеспечивающий поддержание заданного температурного режима от 0 до 60 °C с погрешностью +/- 0,8 °C.
Флюорометр любого типа с набором светофильтров.
Цилиндры исполнения 1 вместимостью 50, 250, 500 см3 по ГОСТ 1770.
Часы класса 2 по ГОСТ 3145 или часы песочные.
Шкаф вакуумный сушильный, обеспечивающий поддержание заданного температурного режима в диапазоне от 0 до 200 °C с погрешностью +/- 2 °C.
Эксикатор исполнения 2 по ГОСТ 25336.
Натрия гидроокись ч.д.а. или х.ч. по ГОСТ 4328.
Спирт изобутиловый ч.д.а. по ГОСТ 6016 или спирт бутиловый ч.д.а. по ГОСТ 6006.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
Калий железосинеродистый ч.д.а. по ГОСТ 4206.
Кислота соляная х.ч. по ГОСТ 3118.
Кислота серная ч.д.а. или х.ч. по ГОСТ 4204.
Натрий уксуснокислый 3-водный ч.д.а. или х.ч. по ГОСТ 199.
Спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 18300.
Тиамина хлорид (витамин B_{1} ) [2].
Толуол ч.д.а. по ГОСТ 5789.
Ферментный препарат амилоризин [3] или пектофоэтидин П10Х [4].
Допускается применение других средств измерения с метрологическими характеристиками и оборудования с техническими характеристиками не хуже, а также реактивов и материалов по качеству не ниже вышеуказанных.
Хранение растворов по ГОСТ 4212.
Хранение реактивов и особо чистых веществ по ГОСТ 4919.1 и ГОСТ 4919.2.
5. Подготовка к выполнению измерения
5.1 Приготовление водного раствора железосинеродистого калия массовой концентрации 0,01 г/см3
Взвешивают (1,00 +/- 0,04) г железосинеродистого калия на весах 4-го класса точности и растворяют в 20 — 30 см3 дистиллированной воды в мерной колбе вместимостью 100 см3, доводят объем дистиллированной водой до метки и перемешивают.
5.2 Приготовление водного раствора гидроокиси натрия массовой концентрации 0,3 г/см3
(30,00 +/- 0,04) г гидроокиси натрия, взвешенного на весах 4-го класса точности, растворяют в 30 — 50 см3 дистиллированной воды в фарфоровом стакане, охлаждают до (20 +/- 5) °C, переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3, доводят объем дистиллированной водой до метки и перемешивают.
5.3 Приготовление окислительной смеси
К 2 см3 водного раствора железосинеродистого калия массовой концентрации 0,01 г/см3 прибавляют 10 см3 водного раствора гидроокиси натрия массовой концентрации 0,3 г/см3 и перемешивают.
5.4 Приготовление основного стандартного раствора тиамина массовой концентрации 0,1 мг/см3
Взвешивают (0,100 +/- 0,001) г тиамина хлорида на весах 2-го класса точности, высушенного в эксикаторе над серной кислотой в течение 10 сут или 1 — 2 ч в вакуумном сушильном шкафу при (60 +/- 5) °C, растворяют в 200 — 300 см3 дистиллированной воды в мерной колбе вместимостью 1000 см3, доводят объем дистиллированной водой до метки и перемешивают.
Раствор хранят при (6 +/- 2) °C в темном месте не более 2 мес.
5.5 Приготовление рабочего раствора тиамина массовой концентрации 1 мкг/см3
1 см3 основного стандартного раствора тиамина массовой концентрации 0,1 мг/см3, приготовленного по 5.4, переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3, доводят до метки дистиллированной водой и тщательно перемешивают.
Рабочий раствор готовят в день проведения измерения.
5.6 Приготовление водного раствора соляной кислоты молярной концентрации c(HCl) = 0,1 моль/дм3
8,3 см3 концентрированной соляной кислоты плотностью 1,185 г/см3 растворяют в 300 — 500 см3 дистиллированной воды в мерной колбе вместимостью 1000 см3, доводят дистиллированной водой до метки и перемешивают.
5.7 Приготовление насыщенного раствора уксуснокислого натрия
Взвешивают (200,0 +/- 0,4) г уксуснокислого натрия на весах 4-го класса точности и растворяют в 100 — 200 см3 дистиллированной воды в мерной колбе вместимостью 500 см3, доводят объем дистиллированной водой до метки и перемешивают.
5.8 Очистка бутилового и изобутилового спиртов
Перед проведением анализа спирты проверяют на отсутствие флюоресценции (измеряют флюоресценцию используемых в работе спиртов в сравнении с дистиллированной водой).
В случае наличия флюоресценции спирт очищают. К 1 дм3 спирта прибавляют 15 — 20 г активированного угля, встряхивают 30 мин и оставляют на сутки, затем декантируют, фильтруют через бумажный фильтр и перегоняют: бутиловый и изобутиловый спирты — на глицериновой или песочной бане, этиловый спирт — на водяной бане.
5.9 Гидролиз
Взвешивают (6,00 +/- 0,04) г продукта на весах 4-го класса точности, помещают в коническую колбу вместимостью 250 см3, приливают 150 см3 водного раствора соляной кислоты молярной концентрации c(HCl) = 0,1 моль/дм3 и кипятят на водяной бане (40 +/- 1) мин.
Затем гидролизат охлаждают до (20 +/- 5) °C, доводят активную кислотность до pH = 4,5 с помощью насыщенного раствора уксуснокислого натрия (5 — 7 см3), добавляют (0,100 +/- 0,001) г амилоризина или пектофоэтидина, взвешенного на весах 2-го класса точности, 0,5 см3 толуола, помещают в термостат и выдерживают 14 — 16 ч при (37 +/- 1) °C.
Затем гидролизат охлаждают до (25 +/- 5) °C, переносят в мерную колбу вместимостью 250 см3, доводят объем до метки дистиллированной водой и фильтруют.
Если необходимо прервать измерение на 1 — 2 дня, то перед доведением объема до 250 см3 гидролизат кипятят 5 мин на водяной бане.
До проведения измерения фильтрат хранят в плотно закрытой колбе в темном месте при (6 +/- 2) °C.
5.10 Очистка фильтрата
Смешивают 25 см3 фильтрата, полученного по 5.9 и 25 см3 изобутилового спирта, встряхивают 5 мин и разделяют слои с помощью делительной воронки. Нижний слой сливают в мерную колбу вместимостью 25 см3 и доводят объем до метки дистиллированной водой. Верхний спиртовой слой отбрасывают. Количество проб фильтрата и стандартного раствора для проведения измерений берут с учетом двух параллельных измерений.
5.11 Окисление тиамина в тиохром
По 5 см3 фильтрата отбирают в четыре колбы вместимостью 100 см3, добавляют по 2 см3 этилового спирта и встряхивают 1 мин.
В две колбы добавляют по 1,2 см3 окислительной смеси, в две другие — по 1,2 см3 водного раствора гидроокиси натрия массовой концентрации 0,3 г/см3 (холостая проба), встряхивают 2 мин.
Во все четыре колбы добавляют по 13 см3 изобутилового спирта, встряхивают 3 мин, ставят в темное место на 10 мин и разделяют слои в делительной воронке.
Нижний слой отбрасывают, к верхнему приливают 2 см3 этилового спирта для осветления и переносят в конические колбы.
Окисление тиамина в тиохром проводят и в рабочем растворе витамина B_{1} (стандарт). В четыре колбы отбирают по 1 см3 рабочего раствора витамина B_{1} , добавляют по 4 см3 дистиллированной воды и далее повторяют операции, как при окислении фильтрата.
6. Проведение измерения
Интенсивность флюоресценции тиохрома измеряют на флюорометре со светофильтрами, используемыми для витамина B_{1} , имеющими максимум пропускания в области от 320 до 390 нм (B_{1} - \text{первичный}) и от 400 до 580 нм (B_{1} - \text{вторичный}) , начиная с проб стандартного раствора.
Интервал определяемых концентраций тиамина составляет от 0,1 до 0,4 мкг/см3 раствора, поступающего на измерение флюоресценции.
7. Обработка результатов измерения
Массовую долю витамина B_{1} (тиамина) X, \text{млн}^{- 1} , вычисляют по формуле
X = \frac{(A - A_{1})mVV_{2}}{(A_{2} - A_{3})m_{1}V_{1}V_{3}} ,
A_{1} — среднее арифметическое значение из показаний флюорометра для холостой пробы к анализируемому образцу;
m — масса тиамина в 1 см3 рабочего раствора, мкг;
V — общий объем гидролизата, см3;
A_{2} — среднее арифметическое значение из показаний флюорометра для стандартного раствора тиамина;
A_{3} — среднее арифметическое значение из показаний флюорометра для холостой пробы к стандартному образцу;
m_{1} — масса продукта, взятая для анализа, г;
V_{1} — объем анализируемого раствора, взятый для окисления тиамина в тиохром, см3;
V_{3} — объем после стадии очистки фильтрата, см3.
За окончательный результат измерения принимают среднее арифметическое значение результатов двух параллельных измерений. Вычисления проводят до второго десятичного знака и округляют до первого десятичного знака.
Относительная погрешность измерения массовой доли витамина B_{1} — +/- 30% при доверительной вероятности P = 0,95.
Расхождение между результатами двух параллельных определений не должно превышать 30% среднего арифметического значения результатов измерений.
Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать 30% среднего арифметического значения результатов измерений.