ФС.3.3.2.0016.21. Фармакопейная статья. Иммуноглобулин человека против COVID-19, раствор для внутривенного введения
(утв. Приказом Минздрава России от 19.07.2021 № 787)
(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV издание»)
Примечание
В соответствии с Приказом Минздрава России от 19.07.2021 № 787 данный документ введен в действие с 19.07.2021.
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
| Иммуноглобулин человека против COVID-19, раствор для внутривенного введения Immunoglobulinum humanum contra COVID-19, solutio pro injectione intravenosa |
ФС.3.3.2.0016.21 Вводится впервые |
|---|
Настоящая фармакопейная статья распространяется на лекарственный препарат иммуноглобулина человека против COVID-19, раствор для внутривенного введения.
Препарат должен соответствовать требованиям ОФС «Лекарственные формы для парентерального применения», ОФС «Иммуноглобулины человека» и нижеприведенным требованиям.
Действующим веществом препарата являются иммуноглобулины класса G, обладающие активностью антител к SARS-CoV-2.
не менее 95% иммуноглобулина класса G, обладающего активностью антител к SARS-CoV-2;
не менее 160 АКЕ от заявленной активности антител к SARS-CoV-2 в ИФА;
не менее 85,0% и не более 115,0% от заявленного количества глицина.
Препарат не содержит консервантов и антибиотиков.
Для производства иммуноглобулина человека против COVID-19 для внутривенного введения используется:
- карантинизированная плазма крови доноров, содержащая антитела IgG, нейтрализующие вирус SARS-CoV-2, соответствующая требованиям ФС «Плазма человека для фракционирования»;
- некарантинизированная плазма крови доноров, содержащая антитела IgG, нейтрализующие вирус SARS-CoV-2, и соответствующая по показателям качества ФС «Плазма человека для фракционирования», при условии наличия в технологическом процессе производства не менее 4 валидированных стадий удаления и инактивации оболочечных и безоболочечных вирусов. Используется в случаях, обусловленных сложной эпидемической ситуацией, связанной с COVID-19;
- патогенредуцированная плазма крови доноров, содержащая антитела IgG к вирусу SARS-CoV-2, соответствующая по показателям качества ФС «Плазма человека для фракционирования». Используется в случаях, обусловленных сложной эпидемической ситуацией, связанной с COVID-19.
Технологический процесс производства препарата иммуноглобулина человека против COVID-19 включает процедуры инактивации и/или удаления вирусов: фракционирование этанолом на холоде, обработку сольвент/детергентной смесью, выдерживание при pH 4,0 — 4,5 и температуре 37 °C в течение 48 часов, хроматографическую очистку, противовирусную фильтрацию (через фильтр с размером пор 20 нм).
Каждая серия иммуноглобулина производится из пула плазмы доноров, содержащих антитела против SARS-CoV-2, индивидуально проверенных на отсутствие поверхностного антигена вируса гепатита B (HBsAg), антител к вирусу гепатита C, антител к вирусу иммунодефицита человека ВИЧ-1 и ВИЧ-2 и антигена p24 ВИЧ-1, антител к возбудителю сифилиса (Treponema pallidum). Плазма доноров, объединенная в минипулы и производственный пул, дополнительно проверяется на отсутствие РНК вируса гепатита C, РНК вируса иммунодефицита человека и ДНК вируса гепатита B методом полимеразной цепной реакции (ПЦР). В производстве используется плазма только с отрицательными результатами тестирования.
Производство иммуноглобулина человека против COVID-19 для внутривенного введения должно осуществляться с соблюдением требований, указанных в ОФС «Иммуноглобулины человека», ФС «Иммуноглобулин человека нормальный для внутривенного введения» и ОФС «Вирусная безопасность лекарственных препаратов, полученных из плазмы крови человека».
Видоспецифичность подтверждается наличием линии преципитации только с сывороткой против белков сыворотки крови человека. Испытание проводят в соответствии с ОФС «Иммуноэлектрофорезом в агаровом геле». Допустимо проведение испытания методом иммунодиффузии в геле в соответствии с ОФС «Иммунодиффузия в геле».
Наличие специфической активности
Определение антител к SARS-CoV-2 проводят методом ИФА с использованием зарегистрированных наборов реагентов для определения иммуноглобулинов класса G к антигену SARS-CoV-2 (см. раздел специфическая активность).
Прозрачность. Оптическая плотность не более 0,05. Определение проводят в соответствии с требованиями ОФС «Прозрачность и степень мутности» спектрофотометрическим методом в кюветах с толщиной слоя 3 мм при длине волны 540 нм относительно воды.
Цветность. Оптическая плотность не более 0,05. Определение проводят в соответствии с требованиями ОФС «Степень окраски жидкостей» спектрофотометрическим методом в кюветах с толщиной слоя 3 мм при длине волны 440 нм относительно воды.
pH. От 4,5 до 5,5. Испытуемый образец разводят до 1% концентрации раствором натрия хлорида 0,9%. Испытание проводят потенциометрическим методом в соответствии с требованиями ОФС «Ионометрия».
Механические включения. Видимые механические включения: должны соответствовать требованиям ОФС «Видимые механические включения в лекарственных формах для парентерального применения и глазных лекарственных формах».
Извлекаемый объем. Не менее номинального. Определение проводят в соответствии с требованиями ОФС «Извлекаемый объем лекарственных форм для парентерального применения».
Термостабильность. Препарат должен оставаться жидким и не образовывать геля после выдерживания в водяной бане или водяном термостате при температуре (56 +/- 1) °C в течение 4 ч.
Электрофоретическая однородность. Основная фракция иммуноглобулинов IgG должна составлять не менее 95% от общего белка. Испытание проводят в соответствии с требованиями ОФС «Определение однородности лекарственных препаратов из сыворотки крови человека и животных методом электрофореза на пленках из ацетата целлюлозы».
Молекулярные параметры. Содержание мономеров и димеров иммуноглобулина G должно быть не менее 90%, полимеров и агрегатов — не более 3%. Определение проводят методом эксклюзионной высокоэффективной жидкостной хроматографии в соответствии с требованиями ОФС «Определение молекулярных параметров иммуноглобулинов методом ВЭЖХ».
Подвижная фаза (ПФ). Фосфатный буферный раствор с pH 7,0.
Испытуемый раствор. Препарат разводят фосфатным буферным раствором до концентрации белка 2 мг/мл.
Раствор стандартного образца. Иммуноглобулин человеческий BRP или соответствующий стандартный образец иммуноглобулина человека нормального, аттестованный относительно иммуноглобулина человеческого BRP. К 0,1 мл CO иммуноглобулина добавляют 4,9 мл фосфатного буферного раствора, перемешивают.
300 x 7,8 мм, силикагель гидрофильный модифицированный для разделения иммуноглобулинов, средних и крупных белков, 5 мкм;
Сумма площадей пиков мономера и димера должна быть не менее 90,0% от суммы площадей всех пиков на хроматограмме,
- полимеров и агрегатов — не более 3,0%;
- не учитывают пики, площади которых составляют 0,05% и менее от площади пика мономера на хроматограмме испытуемого раствора.
Пригодность хроматографической системы:
- относительное стандартное отклонение площадей всех пиков на хроматограмме, полимеров и агрегатов должно быть не более 3,0%;
- эффективность хроматографической колонки, рассчитанная по пику мономера должна быть не менее 1500 теоретических тарелок;
- разрешение (Rs) между пиками мономера и димера должно быть не менее 1.
Расчет содержания молекулярных параметров в процентах проводят методом внутренней нормализации, используя программное обеспечение хроматографа.
Осмолярность. Не менее 240 мОсм/кг. Определение проводят криоскопическим методом в соответствии с требованиями ОФС «Осмолярность».
Белок. От 8,0 до 12,0% (от 80 до 120 мг/мл). Определение проводят колориметрическим методом с биуретовым реактивом в соответствии с ОФС «Количественное определение белка колориметрическим методом с биуретовым реактивом в препаратах крови человека и животных» (метод A).
Фракционный состав. На электрофореграмме испытуемого препарата должна выявляться интенсивная линия преципитации IgG и не более четырех дополнительных линий. Испытуемый образец разводят до 1% концентрации 0,9% раствором натрия хлорида. Определение проводят методом иммуноэлектрофореза в геле с использованием сыворотки против белков сыворотки крови человека в соответствии с ОФС «Иммуноэлектрофорез в агаровом геле».
Содержание иммуноглобулина A. Не более 1,0 мг/мл. Определение проводят методом радиальной иммунодиффузии в геле (РИД) по Манчини в соответствии с ОФС «Количественное определение содержания иммуноглобулинов классов G, M и A в препаратах иммуноглобулина человека».
Аномальная токсичность. Препарат должен быть нетоксичным. Определение проводят в соответствии с ОФС «Аномальная токсичность». Двум морским свинкам массой 250 — 300 г вводят внутрибрюшинно по 5,0 мл препарата, пяти здоровым белым мышам массой 18 — 20 г по 0,5 мл препарата внутривенно. Период наблюдения за животными составляет 7 сут.
Пирогенность. Препарат должен быть апирогенным. Испытание проводят в соответствии с требованиями ОФС «Пирогенность».
Препарат вводят в дозе 500 мг/кг массы тела кролика в объеме не более 10 мл на 1 кг массы тела животного.
Стерильность. Препарат должен быть стерильным. Определение проводят в соответствии с требованиями ОФС «Стерильность».
Поверхностный антиген вируса гепатита B (HBsAg). Препарат не должен содержать поверхностного антигена вируса гепатита B. Определение проводят иммуноферментным методом с использованием тест-систем, разрешенных к применению в практике здравоохранения России и имеющих чувствительность не ниже 0,1 МЕ/мл в соответствии с инструкциями по применению.
Антитела к вирусу гепатита C. Антитела к вирусу гепатита C должны отсутствовать. Определение проводят иммуноферментным методом с использованием тест-систем, разрешенных к применению в практике здравоохранения России и имеющих 100% чувствительность и специфичность в соответствии с инструкциями по применению.
Антитела к вирусу иммунодефицита человека (ВИЧ-1 и ВИЧ-2) и антиген p24 ВИЧ-1. Препарат не должен содержать антител к вирусу иммунодефицита человека (ВИЧ-1 и ВИЧ-2) и антиген p24 ВИЧ-1. Определение проводят иммуноферментным методом с использованием тест-систем, разрешенных к применению в практике здравоохранения России и имеющих 100% чувствительность и специфичность в соответствии с инструкциями по применению.
Антикомплементарная активность. 1 мг белка иммуноглобулина должен связывать не более 1 ед. (CH50/мг белка) комплемента. Определение проводят в соответствии с ОФС «Определение антикомплементарной активности в лекарственных препаратах иммуноглобулинов человека для внутривенного введения».
Анти-A и анти-B гемагглютинины. Агглютинация должна отсутствовать в разведении препарата 1:64. Испытания проводят в соответствии с ОФС «Определение анти-A и анти-B гемагглютининов в лекарственных препаратах иммуноглобулинов человека».
Анти-D антитела. Содержание анти-D антител в препарате должно быть не более, чем в положительном стандартном образце. Испытания проводят в соответствии с ОФС «Испытание на анти-D антитела в лекарственных препаратах иммуноглобулинов человека».
Специфическая активность. Содержание антител IgG к вирусу SARS-CoV-2 должно быть не менее 160 АКЕ/мл. Антиковидная единица (АКЕ) — единица активности препарата иммуноглобулина человека против COVID-19. За 1 единицу АКЕ иммуноглобулина принимается величина, обратная его разведению, обладающему способностью ингибировать появление на монослое культуры клеток Vero цитопатогенного действия (ЦПД) SARS-CoV-2 в 2 из 3 лунок в реакции нейтрализации против 2,0 (+/- 0,3) lg ТЦД50 (БОЕ) SARS-CoV-2.
Определение проводят методом непрямого варианта твердофазного ИФА по отношению к соответствующему стандартному образцу (СОП) в соответствии с инструкциями по применению зарегистрированных в Российской Федерации тест-систем для выявления IgG к SARS-CoV-2, для которых экспериментально установлена корреляция между результатами определения содержания антител в плазме с вируснейтрализующей активностью, определенной в тесте с использованием пермиссивной культуры клеток.
Глицин. Определение проводят методом формольного титрования с потенциометрическим определение конечной точки.
Метод формольного титрования (метод Серенсена).
К точной навеске или точному объему испытуемого образца прибавляют воду до объема 20 мл. При необходимости раствор нейтрализуют потенциометрически до pH 7,0, путем прибавления натрия гидроксида раствора 0,1 М или хлористоводородной кислоты раствора 0,1 М. По окончании нейтрализации прибавляют от 2 до 10 мл формальдегида раствора 35%, нейтрализованного в день анализа натрия гидроксида раствором 10% до pH 7,0, перемешивают и титруют натрия гидроксида раствором 0,1.
Параллельно проводят контрольный опыт.
1 мл натрия гидроксида раствора 0,1 М соответствует 1,4 мг аминного азота.
Испытуемый раствор. Препарат разводят в 4 раза (3 мл препарата помещают в пробирку, прибавляют 9 мл воды и перемешивают). Затем 8 мл полученного раствора переносят в химический стакан вместимостью 50 мл, добавляют 7 мл воды, 5 мл трихлоруксусной кислоты раствора 20% (все операции проводят стеклянной пипеткой). Полученный раствор тщательно перемешивают стеклянной палочкой и фильтруют через бумажный фильтр (синяя лента).
Отбирают 10 мл фильтрата стеклянной пипеткой и помещают в химический стакан вместимостью 50 мл, прибавляют 7 мл воды, перемешивают на магнитной мешалке. Измеряют pH полученного раствора, и, при необходимости, доводят pH раствора до 7,0 добавлением при постоянном перемешивании натрия гидроксида раствора 1 М (около 2,5 мл) и корректируют 0,1 М раствором хлористоводородной кислоты.
Не вынимая электродов из испытуемого раствора и не выключая магнитную мешалку, добавляют 10 мл формалина (pH 7,0) и титруют из бюретки при постоянном перемешивании 0,1 М раствором натрия гидроксида до установления pH 7,6. Вблизи точки эквивалентности титрованный раствор прибавляют по 0,05 мл и после каждого прибавления измеряют pH.
Содержание глицина (X) в мг/мл в препарате вычисляют по формуле:
X = \frac{0,1 \times V \times K_{\text{п}} \times 75 \times 20 \times 4}{10 \times 8} ,
где 0,1 — молярность раствора натрия гидроксида;
V — объем 0,1 М раствора натрия гидроксида, израсходованного на титрование, мл;
Kп — поправочный коэффициент к молярности 0,1 М раствора натрия гидроксида;
75 — молярная масса глицина, г/моль;
20 — общий объем смеси (8 мл раствора иммуноглобулина, 7 мл воды и 5 мл кислоты трихлоруксусной 20%), мл;
8 — объем раствора иммуноглобулина, взятого на осаждение, мл;
За результат принимают среднее значение двух определений.
Три-н-бутилфосфат (ТБФ). Не более 1 мкг/мл. Определение проводят методом газовой хроматографии в соответствии с требованиями ОФС «Газовая хроматография» на стадии производственного контроля.
Полисорбат-80. Не более 5 мкг/мл. Определение проводят методом газовой хроматографии в соответствии с требованиями ОФС «Газовая хроматография» на стадии производственного контроля.
Хранение. При температуре от 2 до 8 °C в соответствии с требованиями ОФС «Хранение лекарственных средств». Замораживание не допускается.