ОФС.1.8.2.0012.18. Общая фармакопейная статья. Количественное определение содержания иммуноглобулинов классов G, M и A в препаратах иммуноглобулина человека

(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 31.10.2018 № 749)

(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV издание. Том II»)

Количественное определение содержания иммуноглобулинов классов G, M и A в препаратах иммуноглобулина человека	ОФС.1.8.2.0012.18
	Вводится впервые

Настоящая общая фармакопейная статья предназначена для количественного определения содержания иммуноглобулинов классов G, M и A в препаратах иммуноглобулина человека методами: кинетической нефелометрии, иммуноферментного анализа и радиальной иммунодиффузии. Испытание проводят любым из приведенных методов. В случае сомнений или разногласий окончательное заключение принимают на основании результатов, полученных при проведении испытания методом кинетической нефелометрии.

Метод A. Метод кинетической нефелометрии

Метод кинетической нефелометрии основан на измерении скорости увеличения светорассеяния реакционного раствора, содержащего латексные частицы с комплексами антиген-антитело.

Для определения содержания иммуноглобулинов классов G, M и A используют наборы реагентов, содержащие латексные частицы с иммобилизованными антителами к иммуноглобулинам соответствующего класса. Для оценки качества препаратов иммуноглобулина человека нормального [IgG+IgM+IgA] содержание иммуноглобулинов классов M и A определяют с использованием наборов с высоким аналитическим диапазоном; для оценки остаточного содержания иммуноглобулинов M и A в иных препаратах иммуноглобулина человека — наборы с низким аналитическим диапазоном. Оценку количественного содержания иммуноглобулинов классов G, M и A в препаратах иммуноглобулина человека проводят с помощью автоматизированных аналитических систем, имеющих калибровочную систему и соответствующие статистические программы расчета. Валидационные исследования проводят с учетом явлений интерференции, указанных производителем конкретного набора реагентов, а также зависящих от наличия в препаратах иммуноглобулина вспомогательных веществ.

Подготовку наборов реагентов осуществляют в соответствии с инструкцией производителя. Обязательно одновременное использование стандартного образца (СО) количественного содержания иммуноглобулинов классов G, A, M.

Критерии приемлемости результатов:

• содержание иммуноглобулинов классов G, A, M должно соответствовать аттестованным величинам
• содержание иммуноглобулинов классов G, A, M в СО должно соответствовать аттестованным величинам.

Примечания

Подготовка испытуемого образца. При необходимости готовят восстановленный раствор препарата (методику восстановления указывают в фармакопейной статье и/или нормативной документации производителя).

Подготовка стандартного образца. Подготовку стандартного образца осуществляют в соответствии с прилагаемой инструкцией по применению.

Метод B. Метод иммуноферментного анализа

Используют один из вариантов иммуноферментного анализа (ИФА) — «сэндвич», основанный на специфическом взаимодействии антигена с антителом с образованием иммунного комплекса и последующей детекции полученного комплекса с помощью метода спектрофотометрии. Оценку количественного содержания иммуноглобулинов классов G, M и A проводят по измерению интенсивности окраски реакционной смеси, зависящей от количества выделившегося хромофора, которая прямо пропорциональна содержанию иммуноглобулинов в исследуемом образце; выявляется измерением интенсивности окраски. Содержание иммуноглобулинов вычисляют в соответствии с инструкцией по применению набора реагентов.

Для определения содержания иммуноглобулинов классов G, M и A используют коммерческие наборы реагентов в соответствии с инструкцией производителя. Допустимо применение иных иммуноферментных систем, указанных в нормативной документации.

Методику проведения иммуноферментного анализа и используемые контрольные сыворотки (контроли) указывают в нормативной документации, их применимость подтверждают валидационными исследованиями.

Для подтверждения правильности методики обязательно использование СО при каждом определении.

Критерии приемлемости результатов:

• содержание иммуноглобулинов классов G, A, M в контролях входящих в состав набора реагентов, должно соответствовать аттестованным величинам.
• содержание иммуноглобулинов классов G, A, M в СО должно соответствовать аттестованным величинам.

Примечания

Подготовка испытуемого образца. При необходимости готовят восстановленный раствор препарата (методику восстановления указывают в фармакопейной статье и/или нормативной документации производителя. Методику разведения испытуемого препарата обосновывают с учетом данных по валидации на основании предполагаемого содержания иммуноглобулинов соответствующего класса и выбранного диапазона значений калибровочной кривой.

Подготовка стандартного образца. Подготовку стандартного образца осуществляют в соответствии с прилагаемой инструкцией по применению.

Метод C. Метод радиальной иммунодиффузии

Метод радиальной иммунодиффузии основан на специфическом взаимодействии антител к соответствующему классу иммуноглобулинов, находящихся в растворе агара и иммуноглобулинов классов G, A и M, которые при нанесении в лунки радиально взаимодействуют с антителами и формируют кольцо преципитации. Диаметр кольца преципитации зависит от количества иммуноглобулина. Содержание иммуноглобулинов вычисляют путем сравнения со стандартным образцом, аттестованным по содержанию иммуноглобулинов классов G, A и M в мг/мл.

Используют наборы реагентов, содержащие антисыворотки к иммуноглобулинам классов G, A и M, в соответствии с инструкцией производителя. Возможно применение планшета с нанесенным агаровым покрытием, содержащим необходимое количество соответствующей антисыворотки.

Примечания

Подготовка испытуемого образца. При необходимости готовят восстановленный раствор препарата (методику восстановления указывают в фармакопейной статье и/или в нормативной документации производителя). Необходимость разведения испытуемого препарата обосновывают с учетом данных по валидации методики на основании предполагаемого содержания иммуноглобулинов соответствующего класса и выбранного диапазона значений калибровочной кривой. Например, для оценки содержания иммуноглобулинов классов A и M препараты иммуноглобулина человека нормального [IgG+IgM+IgA] разводят соответствующим растворителем, указанным в фармакопейной статье и/или в нормативной документации 1:10, иные препараты иммуноглобулинов человека используют без разведения. Для оценки содержания иммуноглобулинов класса G препараты иммуноглобулина человека нормального [IgG+IgM+IgA] разводят 1:10, для иных препаратов иммуноглобулинов человека готовят ряд двукратных разведений с использованием 0,9% раствора натрия хлорида: 1:4, 1:8, 1:16, 1:32 (при содержании белка не более 50 мг/мл) или 1:8, 1:16, 1:32, 1:64 (при содержании белка более 50 мг/мл).

Подготовка стандартного образца. Подготовку стандартного образца осуществляют в соответствии с прилагаемой инструкцией по применению. Готовят ряд двукратных разведений стандартного образца с использованием 0,9% раствора натрия хлорида. Диапазон значений калибровочной кривой должен находиться в интервале, соответствующем ожидаемому содержанию иммуноглобулинов в испытуемом образце (например, неразведенный стандартный образец, разведения 1:2, 1:4, 1:8).

---