ФС.3.3.1.0052.18. Фармакопейная статья. Вакцина Ку-лихорадки М-44 живая, лиофилизат для приготовления суспензии для накожного скарификационного нанесения
(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 31.10.2018 № 749)
(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV издание. Том IV»)
Примечание
Текст документа приведен в соответствии с публикацией на сайте http://femb.ru/femb/pharmacopea.php по состоянию на 15.01.2019. В соответствии с Приказом Минздрава России от 31.10.2018 № 749 данный документ введен в действие с 01.12.2018. Взамен ФС 42-3675-98.
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
| Вакцина Ку-лихорадки М-44 живая, лиофилизат для приготовления суспензии для накожного скарификационного нанесения | ФС.3.3.1.0052.18 |
| Взамен ФС 42-3675-98 |
Настоящая фармакопейная статья распространяется на вакцину Ку-лихорадки М-44 живую, лиофилизат для приготовления суспензии для накожного скарификационного нанесения. Препарат представляет собой взвесь живой культуры аттенуированного вакцинного штамма М-44 коксиелл Бернета (Coxiella burnetii), выращенной в желточных мешках развивающихся куриных эмбрионов (РКЭ), лиофилизированную в стерильной сахарозо-молочной смеси.
Вакцина предназначена для специфической профилактики Ку-лихорадки.
Вакцина выпускается в комплекте с растворителем (0,9% раствор натрия хлорида) не содержит консервантов и антибиотиков.
Производство вакцины Ку-лихорадки М-44 должно осуществляться в соответствии с ОФС «Вакцины и анатоксины».
Производственный вакцинный штамм М-44 и тест-штамм для контроля вакцины должны быть аттестованы и депонированы в официальной коллекции микроорганизмов.
Производственный вакцинный штамм и штамм для контроля вакцины, по мере использования, но не реже 1 раза в 5 лет, получают сублимацией с последующей запайкой ампул в вакууме и хранят при температуре не выше минус 40 — 50 °C в соответствии с установленными правилами порядка учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I — IV групп патогенности.
Качество производственных штаммов и периодичность контроля должны быть указаны в нормативной документации.
Описание. Аморфная масса в виде таблетки розового цвета с сероватым, желтоватым или коричневатым оттенком. Определение проводят визуально.
Восстановленная вакцина представляет собой густую гомогенную суспензию розового цвета с сероватым, желтоватым или коричневатым оттенком. Определение проводят визуально.
Подлинность. Должна вызывать специфический иммунитет к коксиеллам Бернета при иммунизации морских свинок, обладать инфекционностью и характерными морфологическими свойствами при культивировании коксиелл в РКЭ. Определение проводят в соответствии с разделом «Специфическая активность».
Время восстановления препарата. Должна восстанавливаться в течение 2 мин при добавлении в ампулу 0,5 мл 0,9% раствора натрия хлорида, используемого в качестве растворителя для приготовления лекарственных форм для инъекций. Испытание проводят в соответствии с ОФС «Иммунобиологические лекарственные препараты».
Время седиментационной устойчивости. Суспензия вакцины после встряхивания не должна расслаиваться в течение не менее 5 мин. Определение проводят в соответствии с ОФС «Лекарственные формы для парентерального применения».
Проходимость через иглу. Гомогенная взвесь, диспергированная путем встряхивания, должна свободно проходить в шприц через иглу 0,8·40, если нет иных указаний в нормативной документации. Определение проводят в соответствии с ОФС «Суспензии».
Потеря в массе при высушивании. Не более 3,0%. Определение проводят в соответствии с ОФС «Определение потери в массе при высушивании».
Стерильность. Не должна быть контаминирована посторонней микрофлорой. Определение проводят в соответствии с ОФС «Стерильность».
Аномальная токсичность. Должна быть нетоксичной. Определение проводят в соответствии с ОФС «Аномальная токсичность».
Содержимое 1 ампулы растворяют в 5,0 мл 0,9% раствора натрия хлорида для инъекций и вводят по 0,5 мл каждому животному: 5 мышам массой 17 — 20 г. внутрибрюшинно и 2 морским свинкам массой 250 — 300 г подкожно. Период наблюдения за животными составляет 7 сут.
Специфическая безопасность. Должна быть безопасной. Определение проводят биологическим методом на 18 морских свинках массой 350 — 400 г без учета пола, которым подкожно в объеме 1,0 мл вводят образцы препарата в дозах, содержащихся в разведениях 10-5, 10-6 и 10-7. Одновременно должна быть сформирована контрольная группа из 18 интактных морских свинок той же весовой категории без учета пола и для последующего их использования в качестве контрольной группы при испытании вакцины по показателю «Специфическая активность. Иммуногенность». Предварительно, до иммунизации, проводят термометрию животных. В опыте используются морские свинки, ректальная температура которых в течение предшествующих 3 сут не превышала 39,5 °C.
Для иммунизации животных используют две ампулы вакцины. Содержимое каждой ампулы восстанавливают в 2,5 мл стерильного фосфатного забуференного физиологического раствора pH (7,0 +/- 0,2), после чего содержимое ампул объединяют, получая при этом разведение -10-1 (учитывается доза розлива вакцины 0,5 мл и ее исходное разведение по возбудителю в среде высушивания 1:2). Далее методом последовательных десятикратных разведений с 10-2 до 10-7 проводят разведение вакцины, соблюдая правила асептики. Каждой дозой вакцины в рабочих разведениях от 10-5 до 10-7 вакцинируют по 6 морских свинок подкожно в левую паховую область в объеме 1,0 мл. Наблюдение за иммунизированными животными (температурная и местная реакция) проводят в течение 15 сут после вакцинации. У животных, вакцинированных вакциной в разведениях 10-6 и 10-7, не должно быть циклически протекающей лихорадки (повышение ректальной температуры выше 39,5 °C) и местной реакции в виде геморрагического воспаления. Допускается подъем температуры выше 39,5 °C в течение 1 — 2 сут и инфильтрат в месте введения не более 10 мм в диаметре не более чем у 2 морских свинок, вакцинированных аттенуированным штаммом М-44 коксиелл Бернета в разведении 10-5.
Приготовление фосфатного забуференного физиологического раствора pH (6.8 — 7.2). В мерную колбу вместимостью 1000 мл вносят 0,56 г динатрия гидрофосфата (предварительно высушенного), 0,08 г калия дигидрофосфата, 8,3 г натрия хлорида и растворяют в воде, доводят объем раствора тем же растворителем до метки, перемешивают и проводят измерение pH потенциометрически. При необходимости, проводят корректировку pH до 6,8 — 7,2 насыщенными растворами солей динатрия гидрофосфата или калия дигидрофосфата. Полученный раствор стерилизуют при избыточном давлении пара 0,1 МПа, температуре 120 — 122 °C в течение 15 мин однократно. Приготовленный раствор хранят при температуре 2 — 8 °C не более 1 мес.
После завершения испытания на специфическую безопасность иммунизированных морских свинок и контрольную группу животных используют для испытания вакцины по показателю «Специфическая активность. Иммуногенность».
Специфическая активность. Определяется по иммуногенности и минимальной инфицирующей дозе для куриных эмбрионов (МИДэ).
Иммуногенность. Вакцина должна быть иммуногенной. Определение проводят на группах морских свинок, ранее иммунизированных вакциной в разведениях 10-5, 10-6, 10-7, после завершения испытаний специфической безопасности. Напряженность иммунитета у животных проверяют через 45 — 55 сут после иммунизации путем введения вирулентной культуры штамма Грита коксиелл Бернета, содержащей не менее 10000 инфицирующих доз возбудителя, что соответствует разведению 10-5 вирулентной культуры, используемой непосредственно из лиофилизированного состояния (при ИД равной разведению 10-9). Такой же дозой вирулентной культуры одновременно заражают 6 морских свинок из контрольной группы. Для подтверждения правильности использования величины заражающей дозы другой группе контрольных животных вводят культуру коксиелл штамма Грита в разведениях 10-8, 10-9, 10-10 (по 4 морских свинки на каждое разведение)
Оценку иммунитета у иммунизированных вакциной животных проводят на основании наблюдения за температурной реакцией в течение 19 сут после заражения и результатов вскрытия, проводимого по истечении этого срока, для определения характера и выраженности местной реакции. У иммунизированных морских свинок введение вирулентной культуры не должно вызвать развития заболевания в связи с приобретением специфического иммунитета.
У всех контрольных животных, зараженных вирулентной культурой в разведении 10-5, должно развиться заболевание, характеризующееся лихорадочной реакцией продолжительностью не менее 4 сут и резко выраженной местной реакцией.
При ИД, равной разведению 10-9, хотя бы у одного контрольного животного, зараженного вирулентной культурой в этом разведении, должна развиться укороченная лихорадка до 3 сут и местная реакция в виде точечных кровоизлияний в мышцы.
МИДэ (минимальная инфицирующая доза для куриных эмбрионов). Должна соответствовать разведению вакцины 10-9 — 10-11 (от 5·107 до 5·109 МИДэ в 1 прививочной дозе (0,05 мл)). Определяют биологическим и бактериоскопическим методом.
Определение проводят на 6 — 7 суточных РКЭ со скорлупой белого цвета. Для испытания используют 2 ампулы с вакциной, восстановленной в 5 мл фосфатного забуференного физиологического раствора pH (7,0 +/- 0,2). Полученная суспензия содержит живой компонент вакцины в разведении 10-1 (учитывается доза розлива вакцины 0,5 мл и ее исходное разведение по возбудителю в среде высушивания 1:2). Далее готовят ряд последовательных десятикратных разведений вакцины от 10-2 до 10-11. Разведения вакцины 10-7 — 10-11, являющиеся рабочими для данного испытания, вводят в полость желточного мешка РКЭ в объеме 0,5 мл. На каждое разведение вакцины используют по 10 куриных эмбрионов, которые после введения вакцины инкубируют при температуре 35 — 37 °C и относительной влажности воздуха 40 — 60% в течение 13 сут. Эмбрионы, погибшие с 5 по 13 сут, вскрывают в день гибели, оставшиеся живыми — на 13 сут. С помощью стерильных анатомических пинцетов из каждого эмбриона извлекают кусочек оболочки желточного мешка, который после промывания в фосфатном забуференном физиологическом растворе (pH 7,0 +/- 0,2) тщательно растирают на хорошо обезжиренном предметном стекле. Мазки высушивают на воздухе, фиксируют смесью Никифорова, состоящей из равных объемов спирта этилового и эфира диэтилового и окрашивают по методу Романовского-Гимзы.
Окраска по методу Романовского-Гимзы.
Приготовление фосфатно-буферного раствора (ФБС): ФБС готовят в соответствии с инструкцией по применению красителя Азур — Эозин по Романовскому (в растворе). Для приготовления ФБС допускается использование готовых наборов «Фосфатный буфер» с pH 6,8 — 7,2. Полученный раствор используют для разведения красителя и промывки стекол. Фосфатный буферный раствор хранят в плотно закрытом флаконе при температуре 2 — 8 °C в течение 3 мес, при комнатной температуре — не более 1 мес.
Приготовление рабочего раствора красителя. Смешивают краситель Азур — Эозин с буферным раствором в соотношении 1:5 — 1:10 и фильтруют через двойной бумажный фильтр. Степень разбавления красителя устанавливают опытным путем. Рабочий раствор красителя готовят непосредственно перед окраской мазков, хранят при комнатной температуре в течение 6 — 8 ч.
Краситель Азур-Эозин по Романовскому (сухой). При отсутствии готового красителя Азур — Эозин по Романовскому в растворе, допускается приготовление раствора красителя из Азур — Эозин по Романовскому сухого (далее — красящая смесь): раствор красителя готовят из расчета 800 мг на 100 мл растворителя. Берут навески красящей смеси массой 300 мг и 500 мг. Навеску массой 300 мг помещают в фарфоровую ступку и добавляют 100 мл растворителя (смесь равных объемов спирта этилового 100% и глицерина). Растирают навеску с растворителем и далее, помешивая, добавляют навеску красящей смеси массой 500 мг до получения однородной смеси. Приготовленный раствор красителя хранят в сухом прохладном месте в плотно закрытом сосуде темного стекла в течение 1 мес.
Приготовление рабочего раствора красителя: к 1 мл раствора красителя добавляют 2 мл основного буферного раствора, 47 мл воды очищенной и перемешивают. Рабочий раствор красителя хранят при комнатной температуре в течение 6 — 8 ч.
Фиксированные мазки окрашивают согласно инструкции по применению красителя Азур — Эозин по Романовскому (в растворе). Время окраски составляет 20 — 40 минут (устанавливается опытным путем). По окончании окрашивания мазки промываются фосфатным буферным раствором (pH 6,8 — 7,2). Допускается использование для промывки препаратов водопроводной воды, воды очищенной с pH 6,8 +/- 0,3 (при этом необходимо избегать длительного контакта препарата с водой).
В мазках из оболочек желточных мешков куриных эмбрионов, зараженных разведениями вакцины 10-7 — 10-8, коксиеллы должны обнаруживаться микроскопически. В мазках из оболочек желточных мешков куриных эмбрионов, зараженных разведениями вакцины 10-9 — 10-11, можно не получить микроскопически подтверждаемого накопления коксиелл. В этом случае необходимо проведение субпассажа.
Приготовленные мазки просматривают в световом биологическом микроскопе (масляные иммерсионные объективы 90x (1,25), 100x (1,3) и окуляры 7x и 10x). Коксиеллы должны иметь фиолетовую окраску и быть представлены преимущественно мелкими кокковидными формами «a», допускается наличие палочковидных форм «b» и нитевидных форм «d». Учет проводят на основании оценки накопления коксиелл по условной «трехкрестной» системе. <*>
<> За МИДэ принимают наибольшее разведение вакцины, которое в пассаже (или субпассаже) вызывает микроскопически подтверждаемое накопление коксиелл («+») хотя бы у одного из зараженных эмбрионов (КЭ).
Оценку количества коксиелл проводят по условной «трехкрестной» системе (микроскопирование мазков из желточных мешков РКЭ, окрашенных по Романовскому — Гимза):
«+» — единичные коксиеллы хотя бы в одном поле зрения микроскопа;
«++» — 20 — 50 коксиелл в поле зрения;
«+++» — неподсчитываемое количество коксиелл в поле зрения.
Расчет в 1 прививочной дозе: 1,0 мл вакцины должен содержать 10 9 — 10 11 МИДэ; 0,05 мл вакцины 1 прививочной дозы — соответственно 5·10 7 — 5·10 9 МИДэ.
Растворители, выпускаемые в комплекте с препаратом. Стерильный 0,9% раствор натрия хлорида — растворитель, используемый для приготовления лекарственных форм для инъекций. Требования к качеству растворителя должны быть установлены в нормативной документации.
Упаковка и маркировка. В соответствии с ОФС «Упаковка, маркировка и транспортирование лекарственных средств», ОФС «Лекарственные формы» и ОФС «Иммунобиологические лекарственные препараты».
Транспортирование и хранение. В соответствии с ОФС «Упаковка, маркировка и транспортирование лекарственных средств» и ОФС «Хранение лекарственных средств» при температуре от 2 до 8 °C. Замораживание не допускается.