ФС.3.3.1.0051.18. Фармакопейная статья. Вакцина герпетическая культуральная инактивированная, лиофилизат для приготовления раствора для внутрикожного введения

(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 31.10.2018 № 749)

(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV издание. Том IV»)

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

Вакцина герпетическая культуральная инактивированная, лиофилизат для приготовления раствора для внутрикожного введения	ФС.3.3.1.0051.18
	Взамен ФС 42-3400-97

Настоящая фармакопейная статья распространяется на вакцину герпетическую культуральную инактивированную, лиофилизат для приготовления раствора для внутрикожного введения. Препарат содержит взвесь инактивированных формальдегидом вирусов простого герпеса типа 1 и типа 2 (ВПГ-1; ВПГ-2), полученных путем репродукции в культуре перевиваемых клеток почек африканской зеленой мартышки (VERO B), и лиофилизированных в сахарозо-желатозной среде. Действующим веществом препарата являются специфические антигены вирусов простого герпеса 1 и 2 типов, стимулирующие клеточные механизмы резистентности организма человека.

Вакцина предназначена для профилактики рецидивов герпетической инфекции, вызванной вирусами герпеса типа 1 и типа 2.

Вакцина содержит инактиватор, стабилизаторы и антибиотик.

Производство вакцины герпетической культуральной инактивированной (далее вакцины герпетической) должно осуществляться в соответствии с требованиями ОФС: «Вакцины и анатоксины», «Требования к клеточным культурам-субстратам производства в биологических лекарственных препаратов», «Вирусная безопасность», «Иммунобиологические лекарственные препараты».

Производственные штаммы ВПГ-1 («УС») и ВПГ-2 («ВН»), используемые в производстве и контроле вакцины должны быть охарактеризованы и депонированы в официальной Государственной коллекции микроорганизмов.

Контроль качества производственных штаммов должен проводиться регулярно, методы определения их качества и периодичность должны быть указаны в нормативной документации.

В процессе производства жидких моновалентных субстанций вакцины до введения стабилизаторов проводят контроля по показателям «Специфическая безопасность», «Общий белок», «Формальдегид», «Герметизация».

Описание. Аморфная масса от светло-желтого до розового цвета, обладающая гигроскопичностью. Испытание проводят визуально.

Восстановленный препарат — опалесцирующая жидкость от розового до розового с желтым оттенком цвета. Испытание проводят визуально.

Подлинность. Должен вызывать образование вируснейтрализующих антител к ВПГ — 1 и ВПГ-2 при иммунизации белых крыс. Определение проводят биологическим методом, по разделу «Специфическая активность».

Время растворения. Не более 1 мин. Определение проводят в соответствии с ОФС «Растворимость».

pH восстановленного препарата. От 6,5 до 7,8. Определение проводят потенциометрическим методом в соответствии с ОФС «Ионометрия».

Механические включения. Должен соответствовать требованиям ОФС «Видимые механические включения в лекарственных формах для парентерального применения и глазных лекарственных формах».

Потеря в массе при высушивании. Не более 2,5%. Определение проводят в соответствии с ОФС «Потеря в массе при высушивании».

Стерильность. Должен быть стерильным. Определение проводят в соответствии с ОФС «Стерильность».

Присутствие микоплазм. Не должен содержать микоплазм. Определение проводят микробиологическим методом в соответствии с ОФС «Испытание на присутствие микоплазм».

Бактериальные эндотоксины. Не более 25 ЕЭ/мл. Определение проводят методом гель-тромб тест в соответствии с ОФС «Бактериальные эндотоксины».

Формальдегид. Не более 200 мкг/мл. Определение проводят колориметрическим методом в соответствии с ОФС «Количественное определение формальдегида в биологических лекарственных препаратах».

Аномальная токсичность. Должен быть нетоксичным. Определение проводят в соответствии с ОФС «Аномальная токсичность». Тест-доза — 1 доза вакцины вводится морским свинкам подкожно, белым мышам — внутрибрюшинно.

Бычий сывороточный альбумин (БСА). Не более 0,5 мкг/мл. Определение проводят методом ракетного иммуноэлектрофореза в соответствии с ОФС «Определение бычьего сывороточного альбумина в биологических лекарственных препаратах методом ракетного иммуноэлектрофореза» или другим валидированным методом, указанным в нормативной документации.

Содержание гентамицина сульфата. Не более 40 мкг/мл. Определение проводят методом диффузии в агар в соответствии с ОФС «Определение антимикробной активности антибиотиков методом диффузии в агар».

Остаточная ДНК культуры клеток VERO B. Не более 100 пкг/мл. Определение проводят методом полимеразной цепной реакции. Принцип метода изложен в ОФС «Полимеразная цепная реакция» методика должна быть, указана в нормативной документации.

Специфическая безопасность. Не должна содержать живых ВПГ — 1 и ВПГ-2. Определение проводят биологическим методом по выявлению цитопатического действия (ЦПД) на культуре клеток VERO B и на 12 — 14-дневных беспородных белых мышах

Испытание проводят с деформалинизированными субстанциями.

Определение ЦПД на культуре клеток VERO B в двух пассажах. В 4 матраса емкостью 250 мл вносят по 25 мл культуры клеток VERO B (посевная концентрация 100 000 клеток в 1 мл ростовой среды Игла с добавлением 8% эмбриональной телячьей сыворотки), инкубируют до образования монослоя при температуре 37 °C в течение 24 — 48 ч. Затем сливают ростовую среду и дважды промывают раствором Хэнкса (40 — 50 мл на промывку одного матраса). Раствор сливают.

Проведение первого пассажа. В два матраса вносят испытуемый образец по 10% от объема среды, в оставшиеся два матраса — ростовую среду Игла с добавлением 8% эмбриональной телячьей сыворотки. Матрасы инкубируют при температуре 37 °C в течение 5 сут, с ежедневным микроскопированием с целью выявления возможного ЦПД. Затем матрасы с содержимым подвергают однократному замораживанию при температуре -20 °C оттаиванию при комнатной температуре, затем выдерживают при температуре 6 — 8 °C в течение 20 — 24 ч. Образовавшиеся надосадочные жидкости из матрасов сливают и объединяют в трех отдельных емкостях, по одной на каждый штамм ВПГ — 1, ВПГ-2 и контроль.

Проведение второго пассажа. Из каждой емкости с объединенным материалом первого пассажа отбирают пробу по 10% от объема ростовой среды и проводят второй пассаж при тех же условиях.

Учет результатов проводят путем микроскопии монослоя клеток (окуляр x10, объектив x20). В контрольных пробах клетки VERO B должны образовывать монослой, иметь прозрачную цитоплазму, дифференцированные ядра и четко выраженные признаки контактной ингибиции. Клеточный монослой в матрасах с испытуемыми пробами 1 и 2 пассажей не должен отличаться от монослоя в контроле.

Определение ЦПД проводят на белых мышах массой 8 — 10 г.

Первый пассаж. После замораживания, оттаивания и осаждения монослоя клеток, отделяют надосадочную культуральную жидкость и по 0,03 мл вводят интрацеребрально 10-ти животным опытной группы.

Десяти мышам контрольной группы интрацеребрально вводят по 0,03 мл ростовой среды Игла с 8% эмбриональной телячьей сыворотки.

Второй пассаж. Из опытной и контрольной групп забивают по пять мышей. Из мозга мышей каждой группы готовят 10% суспензии на среде Игла с 8% эмбриональной телячьей сыворотки, которые вводят интрацеребрально мышам опытной и контрольной групп, соответственно (по 10 животных в каждой).

Учет результатов. В опытной и контрольной группах, при первом и втором пассажах не должно наблюдаться заболевания и/или гибели ни одной мыши. Гибель животных, наступившую в течение первых трех сут после заражения, считают травматической и не учитывают. В случае если, заболевание и/или гибель мышей выявляется в период наблюдения свыше 3 сут, проводят повторный контроль на удвоенном количестве животных. При повторном выявлении заболевания и/или гибели мышей серию субстанции бракуют.

Примечания

Приготовление деформалинизированной субстанции вакцины. На каждые 100 мл инактивированной формальдегидом вируссодержащей культуральной жидкости добавляют по 2,2 мл 2,2% раствора натрия пиросернистокислого.

Приготовление 2,2% раствора натрия пиросернистокислого. В мерной колбе вместимостью 25 мл в воде очищенной растворяют 0,55 г натрия пиросернистокислого, доводят объем раствора тем же растворителем до метки и перемешивают. Полученный раствор стерилизуют автоклавированием при температуре 120 — 122 °C под давлением 110 кПа в течение 40 — 43 мин. Раствор хранят при комнатной температуре не более 2 сут.

Специфическая активность (иммуногенность). Показатель индекса нейтрализации не менее 2,0 lg для штамма «УС» (ВПГ — 1) и не менее 1,5 lg для штамма «ВН» (ВПГ — 2). Определение проводят биологическим методом в реакции нейтрализации (РН) с иммунными сыворотками крыс на культуре клеток VERO B. Методика определения должна быть указана в нормативной документации.

Упаковка и маркировка. В соответствии с ОФС «Упаковка, маркировка и транспортирование лекарственных средств», ОФС «Лекарственные формы» и ОФС «Иммунобиологические лекарственные препараты».

Транспортирование и хранение. В соответствии с ОФС «Упаковка, маркировка и транспортирование лекарственных средств» и «Хранение лекарственных средств» при температуре от 2 до 8 °C. Допускается транспортирование при температуре от 9 до 18 °C не более трех сут. Замораживание не допускается.

---